206-5467 Itf

INFORME TCNICO FINAL
"Desarrollo de un producto biorremediador para ser aplicado en los

fondos acucolas de las etapas productivas del salmn"
CDIGO PROYECTO: 206-5467
BENEFICIARIO:
LABORA TOR/OS RECALC/HE S.A.
FECHA DE PREPARACiN:
Enero 2010

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
/ND/CE
A. RESUMEN EJECUTIVO ............
6
B. EXPOSICIN DEL PROBLEMA ..
B.1. PROBLEMA A RESOLVER QUE JUSTIFIC LA EJECUCiN DEL PROYECTO ............ 8

B.2. OBJETIVOS TCNICOS DEL PROYECTO Y LOS RESULTADOS
PERSEGUIDOS
12
OBJETIVO GENERAL
12
OBJETIVOS ESPECIFICOS
13
B.3. PRODUCTO DESARROLLADO
C. METODOLOGA,
......................................................................................
15
PLAN DE TRABAJO Y RESULTADOS OBTENIDOS 18
ACTIVIDAD 1.1: AISLAMIENTO, IDENTIFICACiN Y CULTIVO DE BACTERIAS

NITRIFICANTES Y DENITRIFICANTES DESDE SEDIMENTOS MARINOS Y LACUSTRES .19
1.1.1. MUESTREO PARA AISLAMIENTO DE CONSORCIOS
19
1.1.2. AISLAMIENTO, IDENTIFICACIN Y CULTIVO DE BACTERIAS NlTRIFICANTES y
DENITRIFICANTES
20
1.1.3. RESULTADOS DEL AISLAMIENTO

1.2.1. MATERIALES
1.2.2. PROCEDIMIENTO
Y CULTIVO DE BACTERIAS
22
26
I Etapa: Adaptacin Cepas
27
27
II Etapa: Biorremediacin
28
1.2.3. RESULTADOS
1.2.3.1.- Concentracin celular
1.2.3.2.- Temperatura
1.2.3.3.- Evolucin pH de los ensayos
1.2.3.4.- Oxgeno disuelto
1.2.3.5.- Potencial Redox
1.2.3.6.- Evolucin concentracin especies contaminantes
AMONIO
NITRITO
NITRATO
1.2.4. CONSTRASTACION
31
31
33
34
36
37
38
38
39
MEDICIONES LABORATORIO
EXTERNO
40
.41
ACTIVIDAD 1.3. FORMULACiN DEL PRODUCTO ........................................................... 42

1.3.1. DEFINICIN DE CRITERIOS GENERALES DE DISEO
43
1.3.2. DETERMINACIN DE LAS CONDICIONES FISICO-QUIMICAS DEL PRINCIPIO ACTIVO
.43
1.3.3. SELECCIN PRELIMINAR DE EXCIPIENTES
44
1.3.4. FORMULACIN PRELIMINAR DE LOS COMPRIMIDOS
45
1.3.5. CONFECCIN DE PROTOTIPOS
46
-Pgina 2 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
1.3.6. PRUEBAS Y ENSAYOS Fls/COS REALIZADOS A LOS PROTOTlPOS
.49
1.3.7. RESUL TADOS
50
ACTIVIDAD
1.4. DEFINICiN DE LA DOSIS DEL PRODUCTO ....................................... 51
ACTIVIDAD
1.5. CARACTERIZACiN
DE SEDIMENTOS .....................................................
52
1.5.1. MUESTREO EN TERRENO
52
1.5.2. ANALIS/S EN LABORATORIO
54
1.5.3. RESULTADOS
54
C.2. ETAPA 2, DISEO DEL PROCESO PRODUCTIVO, PRODUCCiN PROTOTIPO Y

EVALUACiN EN CONDICIONES REALES .......................................................................
ACTIVIDAD 2.1: DISEO DEL PROCESO, DEFINICiN DE EQUIPOS Y ADQUISICiN
2.1.1. CALCULOS DE DISEO
2.1.1.1. Volumen y dimensiones del equipo
2.1.1.2. Aireacin
2.2.2.3. Potencias de agitacin
2.1.1.4. Transferencia de calor
2.1.1.5. Esterilizacin
2.1.2. LA Y-OUT DE PROCESOS
58
.... 59
60
60
61
62
63
64
65
2.1.3. SISTEMAS AUXILIARES
65
Sistemas de refrigeracin
65
Sistema de esterilizacin
65
Sistema de control del Ph
66
Sistema de aireacin
66
2.1.4. PLANOS CONSTRUCTIVOS

2.1.5. INSTRUMENTACIN Y CONTROL
67
2.1.6. ADQUIS/CION
69
ACTIVIDAD
68
DE EQUIPOS PARA LA PLANTA
2.2. PRODUCCION PILOTO ........................................................................
2.2.1. PUESTA EN FUNCIONAMIENTO
DE LA PLANTA PILOTO
72
2.2.2. OPERACIN DE LA PLANTA BIOMASA

2.2.3. PRODUCCIN
75
PROTOTIPO
2.2.3.1. PRODUCCiN
77
DE UNIDADES BIORREMEDIADORAS
PARA SEDIMENTOS
LACUSTRES
.............................................................................................................................................................................
2.2.3.2. PRODUCCiN
2.2.4. OBTENCiN DE PERMISOS DE LA SUBSECRETARIA
ACTIVIDAD 2.3: EVALUACiN
72
PARA SEDIMENTOS
DE PESCA
IN SITU DEL PRODUCTO BIORREMEDIADOR
2.3.1. PRUEBAS DE EFICACIA EN AGUA DE MAR
2.3.1.1. Mtodo de estudio

rea de Estudio
77
MARINOS ..78
79
80
80
80
81
-Pgina 3 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
Diseo del muestreo
82
Muestreo de sedimento
84
2.3.1.2. Resultados
87
Contenido de Materia Orgnica
87
Cambios en el ORP del sedimento
89
Cambios en el pH del sedimento
9O
Cambios en la macrofauna bentnica
91
Cambios en parmetros fisico-quimicos
91
AMONIO, NH4 ...............................................................................................................................
93
NITRATO, N03
94
........................................................................................................................
SULFUROS, S04
96
2.3.1.3. Conclusiones
97
2.3.2. PRUEBAS DE EFICACIA EN AGUA DULCE
99
99
rea de estudio
100
Diseo Muestreal
100
y agua
103
2.3.2.2. Resultados
Caracterizacin
107
del sedimento
107
Contenido de Materia Orgnica
108
Caracterizacin
112
del Oxigeno Disuelto {OD)
Macrofauna bentnica
113
114
ACTIVIDAD 2.4: ESTUDIO DE VIDA UTIL DEL PRODUCTO BIORREMEDIADOR
115
2.4.1. PRUEBAS A T" VARIABLE
115
2.4.2. PRUEBAS A HUMEDAD VARIABLE
116
2.4.3. PRUEBAS A TIEMPO VARIABLE
117
C.3. ETAPA 3, ESTUDIO DEL MERCADO, DIFUSiN Y PROTECCiN INTELECTUAL

PRODUCTO
ACTIVIDAD.3.1.
DESARROLLO
ACTIVIDAD 3.2. ESTABLECER
DEL
118
DEL PLAN DE NEGOCIO ....................................................
119
INVERSiN Y COSTOS DE PRODUCCIN ................... 121
ACTIVIDAD 3.3. SEMINARIOS Y PUBLICACIONES
..............................................................
122
Dentro del plan de difusin del proyecto se realizaron diferentes actividades:
122
ACTIVIDAD 3.4. PROTECCiN DEL PRODUCTO ...............................................................
124
D. RESUMEN Y CONCLUSIONES ......
-Pgina 4 de 130-
125

PRO YECTO N 206-5467
Enero 2010
E. BIBLIOGRAFA ...................................................................................................................
127
F. ANEXOS
129
2. INSTRUCTIVO MONTAJE DE EQUIPOS (slo en OVO)
129
3. PROTOCOLO OPERACiN PLANTA BIOMASA (slo en OVO) ...................................... 129

4. OVD 1
129
5. OVO 2- Filmacin submarina LAGO ......................................................... 129

6. OVO 3- Filmacin submarina MAR
129
7. CARTA GANTT COMPLETA
130
-Pgina 5 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
A. RESUMEN EJECUTIVO
En el marco del proyecto Innova Chile W 206-5467 de Titulo: Desarrollo de un producto Biorremediador
para ser aplicado en los Fondos Acuicolas en las etapas productivas del salmn, la Corporacin
Farmacutica Recalcine, empresa dedicada a la produccin de productos farmacuticos humanos y
veterinarios, mediante el presente informe tiene como objetivo la presentacin del proyecto de Innovacin
empresarial llevado a cabo durante 2 aos y 3 meses (Septiembre 2007-Enero 2010).
Recalcine, ha sido pionero entre los laboratorios farmacuticos nacionales, en la creacin de un
departamento de 1&0 propio y en la introduccin de nuevas formas farmacuticas, cuya formulacin
garantiza una mejor farmacocintica y una mejor seguridad en el cumplimiento del tratamiento del paciente.
Sus especialidades mdicas las ha agrupado en divisiones que constituyen la Corporacin farmacutica
Recalcine. Asimismo, a travs de su linea veterinaria FAV, la Corporacin entrega productos veterinarios
desde 1.994. En 1.997 da comienzo a la investigacin y desarrollo de productos biolgicos, que le permiti
entregar la primera vacuna contra la pisclrickettsia salmones, una de las principales enfermedades que
causa prdidas en esta industria y la vacuna contra el virus ISA en 2009.
Recalcine inici sus exportaciones en el ao 1.994 desarrollando mercado en Bolivia, Colombia, Ecuador,
Paraguay, Per, Venezuela y Centro Amrica. Posee una dotacin de 1.013 trabajadores.
Actualmente, desarrolla en U.S.A. proyectos en el campo de la biotecnologia
asociada con prestigiosas compaas norteamericanas.
y de la ingeniera gentica,
En el mercado nacional compite en las lineas farmacuticas de pediatra, ginecologa, dermatologa,

gstrica, dental, antiinfecciosas, oncologa, entre otras, y desarrollamos productos para la mujer en los
distintos ciclos de la vida. As! tambin, cuidamos la salud animal de diversos reas tales como la ganaderla
y acuicultura (salmones y camarones).
Este proyecto consisti en desarrollar un producto microbiolgicamente
el fin de disminuir el impacto de la produccin de peces bajo cultivo.
activo para los fondos aculcolas con
El objetivo general consisti en desarrollar un nuevo producto biorremediador que fuera capaz de reducir la
materia orgnica de los fondos acucolas (mares y lagos), dejndola en condiciones adecuadas y que
cumplan con la normativa vigente. Los objetivos especlficos se orientaron al diseno del producto, diseo del
proceso de fabricacin del producto, produccin de prototipos, evaluacin de una produccin piloto, difusin,
capacitacin y el sondeo de mercado, todo junto la proteccin intelectual del producto.
El proceso consisti en el aislamiento de bacterias nitrificantes y denitrificantes de los sedimentos bajo las
balsas-jaulas donde se desarrolla la produccin aculcola, multiplicacin de dichas bacterias en condiciones
controladas de laboratorio, su incorporacin a un excipiente y su aplicacin a los fondos acu!colas bajo
condiciones controladas. Se procedi a observar su evolucin en terreno y luego a medir los resultados de
la aplicacin.
El resultado final del proyecto fue la obtencin de un nuevo producto biorremediador especfico para los
fondos aculcolas de lago y mar, cuya principal caracterstica es que est formulado a base de bacterias
autctonas de los propios fondos donde se desarrolla el cultivo del salmn en Chile.
Los resultados parciales son los que a continuacin se mencionan y que se explican detalladamente
punto C del presente informe:
~
Aislamiento de los consorcios bacterianos desde los sedimentos aculcolas
-Pgina 6 de 130-
en el

PROYECTO N 206-5467
);>
Evaluacin de la actividad de degradacin a nivel laboratorio
);>
Formulacin del producto
);>
Diseo del proceso de produccin ,adquisicin de equipos y montaje
);>
Produccin prototipo
);>
Pruebas en condiciones reales en fondos acucolas
);>
Correlacionar frecuencia y dosis
);>
Patentamiento y certificaciones
Enero 2010
para validacin del producto
Tras el anlisis de parmetros ambientales monitoreados bajo las balsas-jaulas posterior a la siembra de
unidades biorremediadoras, el bentos experiment cambios atribuidos al efecto biorremediador. Variables
utilizadas por la autoridad para Gestin Ambiental, y que en la actualidad son exigidas por las normas de
acuicultura nacional, tales como oxigeno disuelto, potencial redox, materia orgnica y Macrofauna
bentnica, experimentaron una respuesta positiva y beneficiosa desde la perspectiva ecolgica, lo cual
permite la recuperacin del sedimento bajo las balsas-jaula de un centro de cultivo aculcola.
El nuevo producto desarrollado tendr gran impacto econmico y medioambiental
para la industria
salmonera, ya que aporta una solucin al problema ambiental ligado al cultivo del salmn, otorgando la
posibilidad de lograr una armonla entre el crecimiento econmico de la industria y el mantenimiento del
equilibrio del medio ambiente.
-Pgina 7 de 130

PROYECTO N 206-5467
B. EXPOSICiN
Enero 2010
DEL PROBLEMA
B.1. PROBLEMA
A RESOLVER QUE JUSTIFIC LA EJECUCiN
DEL PROYECTO
La salmonicultura es una de las actividades productivas ms relevantes en Chile. Las prcticas actuales
de cultivo pueden impactar el medio ambiente a travs de varias formas. Una de ellas es la alimentacin
de los peces, la que interviene, tanto en la columna de agua como en el fondo acutico, a travs del
alimento no consumido que es altamente proteico, y a travs de los desechos eliminados por los peces. Lo
anterior genera un aumento en la cantidad de nitrgeno y fsforo del sistema, lo que disminuye el oxigeno
disponible, genera eutrofizacin, estimula la aparicin de algunos organismos y la ausencia de otros y
adems, altera gravemente el medio por la acumulacin de materia orgnica compuesta por los restos de
alimento y las mismas materias fecales de los organismos en cultivo (ver Figura N 1).
'''''.1110
An~DIOl:co,
Pa:gcno,
E.c~
NitrOgono
Pillgono.
Antlbltlcos
Alimcnto
NoCOMUmlo
.---.------Figura N 1: representacin
- -----esquemtica del problema
Las jaulas de salmn llegan a unos 15 m de profundidad (12-20 m). Existe un aumento drstico en las
tasas de sedimentacin a partir de la salmonicultura en jaulas luego de alimentar a los peces. Los restos
de alimentos y las fecas se depositan relativamente rpido y afectan el lugar inmediato a la zona, pero las
partculas formadas por la produccin primaria se depositan ms lejos del lugar ya que entre la liberacin
del nutriente inorgnico y la captacin y aumento de la biomasa fitoplanctnica transcurren entre 3 y 7
das. Una gran cantidad de sedimentacin de produccin primaria es un indicador que el ecosistema
planctnico marino ya no es capaz de asimilar los aportes mejorados de nutrientes del cultivo de salmn
en jaulas.
-Pgina 8 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
Se produce as una serie de efectos ambientales en la columna de agua. Esto se debe, principalmente, a
que un 70%- 80% del nitrgeno liberado por los peces queda disuelto en ella, adems del fsforo que se
deposita en los fondos. La presencia de estos nutrientes genera eutrofizacin, lo que quiere decir que la
productividad primaria aumenta como consecuencia de una mayor disponibilidad de alimento para otros
organismos como invertebrados y peces, pero tambin con la posibilidad de disminuciones estacionales
de los niveles de oxgeno y de la biodiversidad propia del lugar (Beveridge, 1996).
Los principales tres factores que determinan el impacto de la salmonicultura
columna de agua, en la calidad del agua y en los ecosistemas pelgicos son:
en los nutrientes
de la
1. Tasa de carga de nutrientes inorgnicos, especialmente el nitrgeno en el caso de los sistemas marinos
y el fsforo en sistemas de agua dulce, la hidrodinmica y la profundidad de los lugares donde se instalan
las jaulas.
2. Morfometrra y topografa (grado de "exposicin") de las bahas y de zonas costeras.
3. Densidad del stock de peces.
A su vez, la acumulacin de materia orgnica depende de varios factores, entre otros de la especie en
cultivo, la calidad del alimento, el tipo de manejo, las corrientes y la profundidad (hidrodinamia). Las heces
y restos de alimento tienen mayores contenidos de carbono (C), nitrgeno (N) y fsforo (P) que los
sedimentos naturales, ello produce que los fondos, bajo los sistemas de cultivo, puedan tener muy alto
contenido de materia orgnica y nutrientes. La materia orgnica acumulada estimula la produccin
bacteriana, cambiando la composicin qulmica, la estructura y funciones de los sedimentos. Ello puede
explicar la disminucin significativa de la biodiversidad en las zonas utilizadas por la acuicultura. La
abundancia de fitoplancton disminuye, as como el nmero de especies en sitios de cultivo pese a existir
ms nutrientes.
La importancia y distribucin del nitrgeno en el mar es muy similar a la del fsforo y, dentro de las
diferentes concentraciones en que aparecen en las aguas marinas, existe un gran paralelismo entre dichas
concentraciones y sus variaciones. El nitrgeno aparece en el mar, bsicamente, en forma de nitratos,
nitritos y amoniaco (N03-N02-NH3), aunque suelen aparecer en mayor cantidad los nitratos.
En cultivos de salmones, cuando se registra un aumento de las concentraciones
de amonio y
disminuciones de las concentraciones de oxigeno, se pueden alterar los ciclos normales de nutrientes,
afectando la abundancia del fitoplancton, zooplancton y peces, fenmenos que han sido detectados en
diferentes cuerpos de agua utilizados por prcticas de acuicultura.
De aqu la importancia en el manejo de los ecosistemas y los nutrientes presentes en los cuerpos de agua,
ya que con la implementacin de buenas prcticas, adicionado a la aplicacin de tcnicas nuevas
utilizando bioproductos que no alteren el ecosistema, se podr alcanzar un desarrollo sustentable de
industria acufcola en Chile.
As nace el proyecto de BIORREMEDIACIN
DE FONDOS,
basado en el fundamento
de
nitrificacin/denitrificacin,
reacciones de oxido-reduccin biolgicas necesarias para descomponer los
compuestos contaminantes, mediante la intervencin de bacterias autctonas del ecosistema acutico. La
tcnica considera el suministro de microorganismos remediadores nativos para ser utilizados en procesos
de remediacin in situ. En este caso, tiene por objetivo reactivar el proceso de biodegradacin natural de
la materia orgnica acumulada, transformndola en elementos no contaminantes e inocuos para el medio
ambiente.
-Pgina 9 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
Para lograr el objetivo descrito se elabor6 un producto biorremediador compuesto por bacterias liofilizadas
nitrificantes y denitrificantes,
denominado UNIDAD BIORREMEDIADORA
que est diseado para
regenerar los equilibrios disminuyendo la materia orgnica de los fondos acuicolas (lagos y mar), a niveles
aceptados por la normativa vigente.
Producto de la contaminaci6n por compuestos nitrogenados, existe una serie de alteraciones que se
generan en paralelo: fisicas (apariencia, olor), quimicas (variaci6n de niveles de compuesto nitrogenados
inorgnicos), fisicoquimicas (variaciones del pH, potencial redox), y biol6gicas (alteraci6n de las cadenas
tr6ficas, aparici6n de microorganismos patgenos, algas, parsitos etc.).
El fundamento biol6gico de la tecnologia desarrollada es el llamado CICLO DEL NITRGENO,
la eliminaci6n del N se lleva a cabo por el proceso de nitrificaci6n-denitrificaci6n.
La nitrificacin es la principal ruta por la que el amonio es aer6bicamente

sta la realizan las bacterias Nitrificantes.
en el que
oxidado a nitrato.
En forma esquemtica la nitrificaci6n ocurre de la siguiente forma:
Nitrobacter
Nitrosomonas
NH4----------------~
N02
Amonio
--------------~
nitrito
N03
nitrato
La denitrificacin por el contrario es un proceso por el que ciertas bacterias en condiciones

anaer6bicas reducen el nitrato hasta N2 gas. Este proceso tiene lugar en varias etapas en
las que aparecen distintos productos intermedios.
Esquemticamente,
N03
Nitrato
--.
N02
nitrito
ocurre as:
__
--.
NO
xido nftrico
N20
xido nitroso
El CICLO DEL NITRGENO es un ciclo natural de nutrientes

continuamente bajo distintas formas entre distintos compartimentos
aire, el agua, el suelo y los organismos (ver Figura Ir 2).
-Pgina 10 de 130-
......N2 gas
nitrgeno
en el que los elementos circulan

del medioambiente, por ejemplo el

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
RJACllC BfClRMUfllllCA
(tormentas)
L,LUVIA
ACIDA
FIJACUl
IIDISTRIAI.
(amorrieco. 8b0n08)
I Productares
fllEllTO
Consumidores
RESTOS HANICOS
ABSIRUl
EXCRECION
NR"RIFlCACIN
CICLO
DEL
NITRGENO
Figura N 2: Representacin esquemtica del ciclo del nitrgeno
El N2 atmosfrico, gas que forma el 78% del aire, no puede ser usado en forma normal por los seres vivos,
sino que tiene que ser transformado en compuestos absorbibles. El N2 del aire slo puede ser usado
directamente a travs de bacterias que viven en el suelo.
Los compuestos nitrogenados que se acumulan en mares y ros procedentes de la descomposicin, as
como de los restos de alimentos y desechos de los peces de cultivo, slo pueden ser descompuestos con
la intervencin de bacterias hasta N2 gas, que retornar a la atmsfera para reiniciar el ciclo o lo usarn
las propias bacterias para su metabolismo.
-Pgina 11 de 130-

B.2. OBJETIVOS
TCNICOS DEL PROYECTO
Y LOS RESULTADOS
Enero 2010
PERSEGUIDOS
OBJETIVO GENERAL
El objetivo general del proyecto consisti en desarrollar un nuevo producto biorremediador, para reducir
la materia orgnica de los fondos acuicolas (lagos y mar), dejndola a niveles aceptados por las
normativas vigentes, a partir de microorganismos autctonos del ecosistema acutico donde se
desarrolla la produccin de salmn.
Para ello se desarroll un producto consistente en una tableta a base de microorganismos liofilizados
que se deposita en el medio acuicola y empieza a reaccionar bacteriolgicamente actuando sobre los
residuos no deseados y transformndolos en elementos no contaminantes. El mecanismo de accin
bsico est basado en la actividad metablica de los microorganismos, que se adaptan al medio y
comienzan el restablecimiento de microorganismos nativos o autctonos del medio y descomponen la
materia orgnica.
As mismo, se desarrollaron los procesos de fabricacin necesarios para escalar una produccin
prototipo y los protocolos para validar la efectividad del nuevo producto como biorremediador.
-Pgina 12 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
OBJETIVOS ESPECFICOS
Para conseguir el objetivo general se plantearon los siguientes
siguientes resultados esperados de cada uno de ellos:
OBJETIVO
objetivos
especficos
con los
RESULTADO
PERSEGUIDO
DESCRIPCiN
Obtencin de consorcios
nitrificantes
y
las bacterias
Aislamiento
de
aislados activos de
medio
ambiente
natural
desde
denitrificantes
nitrificantes y
(fondos acucolas). Se obtendrn consorcios DN y N
denitrificantes para lagos y
de fondos marinos y lacustres
mar.
Diseo de las
caractersticas
del
nuevo producto
biorremediador
Evaluacin de la actividad bacteriana nitrificante y

denitrificante de los consorcios aislados desde los
fondos acufcolas
Determinar la eficiencia de
degradacin de materia
orgnica de los
sedimentos
Definicin de dosis y frecuencia de uso del producto

en base a la degradacin de la materia orgnica
Dosis y frecuencia de uso

establecidas
Producto de fcil
aplicacin que no se
desintegre o disuelva
antes de llegar al fondo
Formulacin del producto
Caracterizacin
del
medio ambiente
donde se va a
aplicar el producto
Diseo e ingeniera
del proceso para la
adquisicin de
equipos y
produccin
prototipo
Puesta en marcha
de la linea y
Produccin
prototipo
Evaluacin
produccin
Disponer informacin real

del grado de
contaminacin
Caracterizacin qumica y biolgica del sedimento

aculcola impactado
Disponer de las
Ingeniera bsica, planos y establecimiento de los capacidades instaladas de
requerimientos
de servicio e ingenierra para el los servicios como agua,
montaje.
gas, energa elctrica y
otros
Determinacin de las etapas de produccin
producto y de los equipos para su adquisicin
funcionamiento
la
Poner
en
satisfaciendo las normas vigentes.
planta
del
piloto,
de la
Pruebas en condiciones reales en centros de cultivo
piloto en de salmn: agua dulce y mar.
-Pgina 13 de 130-
Disponer de una planta

piloto para la fabricacin
Fabricacin de tabletas
necesarias para evaluar la
eficiencia del producto en
condiciones reales
Determinar el grado de
eficacia en condiciones

PROYECTO N 206-5467
condiciones reales
in-situ
Estudios de eficacia por degradacin de materia

y
ffsico-qumicos
orgnica y otros parmetros
biolgicos de inters
Enero 2010
reales del producto

desarrollado
Correlacionar frecuencia y dosis en funcin a los

parmetros del medio acutico
Vida til y
condiciones de
manejo
Evaluar el comportamiento del producto en

almacenamiento y con diferentes condiciones de
temperatura y humedad.
Establecimiento de la vida
til de los componentes
del producto para su uso y
almacenamiento correcto
Certificacin del
nuevo producto
Obtencin de las certificaciones necesarias para

validar el producto desde el punto de vista comercial
(uso masivo)
En fase de obtencin de la
Autorizacin para su uso
masivo (comercial) por
para de la Subsecretara
de Pesca.
Plan de negocio
Se establece la estrategia de marketing para

ingresar al mercado
Proteccin
intelectual del nuevo
producto
Obtener la patente del producto biorremediador
-Pgina 14 de 130-
Plan diseado
Presentacin de patente

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
B.3. PRODUCTO DESARROLLADO
A travs del proyecto que se describe en el presente informe se ha desarrollado un nuevo producto que es
un elemento slido conformado por microorganismos liofilizados nitrificantes (N) y denitrificantes (DN)
capaces de descomponer los compuestos nitrogenados as como de modificar beneficiosamente otros
parmetros ambientales.
Los requerimientos
especficos que se establecieron para el diseno del producto son:
Debe poseer una forma tal que evite su ingestin por parte de los peces u otra biota presente
en la zona de aplicacin de la forma farmacutica.
Debe ser capaz de viajar al fondo marino o lacustre sin romperse o desintegrarse
trayecto ni en el momento de contacto con el fondo.
Su forma debe ser amigable en presentacin

posterior transporte.
Los elementos componentes empleados (excipientes) debern en lo posible ser de naturaleza

amigable con el medio ambiente, estndar o comercial, de manera de conseguir un producto
final que sea viable tanto desde el punto de vista ambiental, tcnico y econmico.
Las condiciones consideradas
y debe facilitar su fabricacin,
para el desarrollo son:
Solvente: agua salada yagua dulce
Rango de temperatura entre 5C y 15C
Rango de profundidad de aplicacin entre 15m y 60 m.
En las figura N 3 Y N 4 puede verse un esquema del objetivo perseguido.
-Pgina 15 de 130-
durante su
manipulacin

PROYECTO N 206-5467
APLICACiN
DEL
Enero 2010
SUPERFICIE lAGO/MAR
TRATAMIENTO
BAlSAJAUlACOH
PECESENCUlnvO
MATERIA
Fig. N 3: representacin
de la aplicacin del producto sobre el sedimento
DESPUS DEL
SUPERFIOE
TRATAMIENTO
lAGO/MAR
MATERIA
ORGANICA
/
Fig. ND 4: representacin
Obsrvese
ACUMUlADA
del efecto del producto despus de 1 mes de uso
la disminucin de la materia orgnica del sedimento bajo la balsa-jaula.
En base a los requerimientos planteados se defini que la fonna fannacutica ms adecuada para cumplir
con los objetivos esperados era un elemento comprimido del tipo tableta que deberla ser capaz de
transportar al fondo el principio activo que se encargar de realizar la biorremediacin requerida, ya que as
se pueden lograr densidades adecuadas y tiempos esperados de desintegracin.
-Pgina 16 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
El producto se desarroll en dos versiones:

o
Una para agua dulce (lagos), formulada a base de bacterias nitrificantes

aisladas de los sedimentos lacustres.
Otra para agua salada (mar), que contiene como principio activo consorcios
nitrificantes y denitrificantes aisladas de los sedimentos marinos.
Este nuevo producto biorremediador es una tableta denominada

principales caractersticas son (ver figura N 5):
y denitrificantes
de bacterias
UNIDAD BIORREMEDIADORA
cuyas
-Color blanco oscuro

-Dimensiones aproximadas: 2 cm espesor X 10 cm de dimetro
-Peso de 100 gr / unidad aprox.
-Densidad 1,81 gr/cm3
-Presin de compactacin:
12 toneladas
-Buena friabilidad, capaz de resistir el roce sin desmoronarse

-Tiempo de desintegracin
en agua bueno: mayor a 24 horas
y su composicin es:10 % principio activo (liofilizado de bacterias nitrificantes

diluyente; 39% aglutinante; 1% lubricante
Figura N 5: Unidad Biorremediadora
-Pagina
17 de 130
y denitrificantes);
50%

PROYECTO N 206-5467
C. METODOLOGA,
PLAN DE TRABAJO
Enero 2010
Y RESULTADOS
OBTENIDOS
A raiz del transcurrir del proyecto, se hicieron algunos ajustes de la carta Gantt y que representan la realidad
del proyecto. La Carta Gantt original fue levemente modificada por necesidad durante el desarrollo del mismo,
puesto que actividades que inicialmente se suponfan que iban a llevar ms tiempo, llevaron menos tiempo y
viceversa. Asf como otras que se han ido haciendo simultneamente para poder lograr los hitos de cada
actividad.
Previamente, se solicit a Corfo la Modificacin de la Carta Gantt para ajustarla a la realidad de cada actividad
programada. Dichos cambios fueron aprobados por Corfo mediante la Resolucin N 1160 con fecha
17/11/2008.
Como anexo nO 1 se encuentra la Carta Gantt del proyecto completo, mientras que a continuacin
representan las Cartas Gantt por etapas 1, 2 Y 3 Y las actividades realizadas durante las mismas.
se
Todas las actividades del proyecto se han ceido al mximo posible a la Carta Gantt. No obstante, se puede
observar alguna desviacin en cuanto a la duracin de las actividades as como de las fechas de inicio/fin de
las mismas respecto de la Carta Gantt, puesto que se adaptaron al dia a dla del proyecto.
C.1. ETAPA 1, DISEO DEL PRODUCTO
A continuacin la Carta Gantt correspondiente a esta primera etapa. Las actividades contempladas
esta primera fase, correspondieron casi en su totalidad a trabajo de laboratorio.
oct-07 nov-07
dic-07
ene-08 feb-08 mar-08 abr-08 may-08 jun-08
tES1 tES2
tES3
tES4
tES5 tES6
Etapa 1.1hctm:ia11e1llO
Disear 1-----+---+---+el
producto IcoOanillldos
-Pgina 18 de 130-
tES7
tES8
jul-08
ago-08 sep-08 oct-08
en
nov-08
tESt tES10 tES11 tES12 tES13 MES 14

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
ACTIVIDAD
1.1: AISLAMIENTO,
IDENTIFICACiN
Y CULTIVO
DENITRIFICANTES DESDE SEDIMENTOS MARINOS Y LACUSTRES
Fecha de Ejecucin:
DE BACTERIAS
NITRIFICANTES
Mes 1 y 2 (Octubre y Noviembre 2007)
1.1.1. MUESTREO PARA AISLAMIENTO
DE CONSORCIOS
Objetivo:
Obtener muestras representativas
Descripcin
y desarrollo
de sedimentos marinos y lacustres de centros de cultivo
de salmn.
del muestreo:
El muestreo se realiz mediante la extraccin de sedimento con draga. Las muestras se colocaron en
envases preparados adecuadamente para ello y se dispusieron al destino
final (laboratorio) mediante
vla area, con el fin de hacerlo de la forma ms rpida y
asegurar que las muestras sufrieran el
menor cambio en su traslado.
Dicho proceso se hizo asegurando en todo momento la trazabilidad de las muestras desde
muestreo, hasta la recepcin de las mismas en laboratorio.
el minuto del
Los centros de cultivo de los que se obtuvieron las muestras (tabla N' 6) de sedimento pertenecen a la
empresa Marine Harvest Chile S.A.
Tabla N 6: Caracterlsticas
MUESTRA
de las muestras de sedimentos lacustres y marinos extra Idos
PROFUNDIDAD
TEMPERATURA
(OC)
pH
OXIGENO
DISUELTO
(mg OiL)
LLC
32
12
7,8-8,0
LLP
32
12
7,8-
LMC
15
11,9
7,23
33
11,5
7,23
LMP
LLC: Lodo Lacustre Control; LLP: Lodo Lacustre Problema;

LMC: Lodo Marino Control; LMP: Lodo Marino Problema
-Pgina 19 de 130-
8,0

PROYECTO N 206-5467
1.1.2.
AISLAMIENTO,
DENITRIFICA N TES
IDENTIFICACiN
Enero 2010
CULTIVO
DE
BACTERIAS
NITRIFICA N TES
Objetivo:
Obtener y aislar consorcios bacterianos aerbicos
marinos con actividad nitrificante V denitrificante.
y cepas bacterianas
aerbicas
desde sedimentos
Descripcin:
- Obtencin de muestras: Las muestras extra idas (actividad 1.1) fueron recepcionadas y analizadas
inmediatamente. Para pruebas posteriores las muestras fueron conservadas a 5C.
- Preparacin de medios de cultivo: los medios de cultivo que se usaron en el aislamiento de consorcios
bacterianos con potencial nitrificante v denitrificante fueron:
Minimal medium for denitrifying bacteria: composicin por litro:

~nhI~in A
980 mi
Solucin B
10 mi
Solucin e
10 mi
Solucin A: (gil)
5g
4a
1g
0,87 a
O,54g
KN03
Fuente de Carbono
(NH4)2S04
K2HP04 x 3H20
KH2P04
Solucin B: (gil)
1
MgS04 x 7 H20
12,
O9
Solucin C: (gil)
CaCI2 x2 H20
FeS04x7
H20
MnS04xH20
CuS04x 5 H20
NaMo04 x 2 H20
HCI (0,1 N solucin)
Winogradsky's
0,29
0,1 g
0,05 g
0,01 9
0,01 9
100 mi
mdium modified (Nytrifying B): (gil)

CaC03
lNH4)2S04
K2HP04
NaCI
MgS04x7
H20
FeS04
-Pgina 20 de 130-
5,0
1,0
1,0
1.0
0,5
0,4
9
9
9
9
9
9

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
- Cultivo de consorcios:
El aislamiento de consorcios bacterianos con posible actividad nitrificante se llev a cabo en
matraces de 100 mi de capacidad con 50 mi de medio de cultivo. Se agreg a cada matraz un
inculo de la muestra original de 1 g de sedimento en condiciones aspticas. Cada muestra se
incub a las mismas condiciones de temperatura y salinidad en las que se tomaron las muestras
originales.
Para la mantencin de los consorcios bacterianos se ajust pH peridicamente, y se agreg medio
de cultivo nuevo para asegurar el ingreso de fuentes de enerqa.
- Determinacin de actividad Nitrificante:
Se realiz mediante la utilizacin de indicadores de viraje de pH, en este caso se utiliz el
indicador rojo de metilo, ya que este vira de rojo a amarillo cuando el medio se hace cido
(indicando presencia de N02 y N03).
- Determinacin de la actividad Denitrificante:
Se realiz mediante la utilizacin de indicadores de viraje de pH, en este caso se utiliz el
indicador azul de bromotimol, ya que este vira de amarillo a azul cuando el pH del medio se hace
bsico( indicando la presencia de NH3).
- Liofilizacin de cepas con actividad:
Se us crioprotector (skim milk), se esteriliz mediante autoclave a 121C por 15 min; ste fue
dispensado en volmenes de 3 mi en viales de capacidad 5 mI.
Desde placas de cultivo crecidas con las cepas de inters, se colect en condiciones estriles bajo
campana de flujo laminar, con un asa de cultivo las colonias de las cepas de inters, las cuales
fueron disgregadas en el crioprotector.
Los viales conteniendo las cepas con actividad fueron congelados a -20 o C durante 24 horas, y
posteriormente sometidos a proceso de liofilizacin.
-Pgina 21 de 130-

PROYECTO N 206-5467
1.1.3. RESULTADOS
DEL AISLAMIENTO
Enero 2010
Y CULTIVO DE BACTERIAS
Tabla Ir 7: Test realizados sobre los cultivos de consorcios bacterianos inoculados y

monitoreados semanalmente para determinar su actividad.
INCUBACION
1'" 5
TaAMBIENTE
MEDIO DE
CULTIVO
MUESTRA
LAGO 1
(-)
LAGO 2
M.MAR 1
(-)
M.MAR2
LAGO 1
DN
DN
N
No
No
No
No
(-)
(-)
(-)
(-)
(-)
(-)
No
No
No
No
No
(+0-)
LAGO 2
M.MAR 1
No
No
No
No
No
(-)
(+)
(+)
M.MAR2
LAGO 1
LAGO 2
No
No
No
M.MAR 1
M.MAR2
(-)
No
(-)
(-)
No
No
(+0-)
(-)
(+)
(+)
No
No
(-)
(-)
No
No
(-)
(-)
FECHA
CONTROL
SEMANA 1
SEMANA 2
SEMANA 3
Inicialmente los cultivos fueron incubados a temperatura ambiente (18 C) Y luego almacenados
frta a 5 e, donde se observ actividad.
en cmara
A partir de los consorcios con actividad positiva para nitrificacin y denitrificacin, se

realiz
aislamiento
bacteriano utilizando los medios de cultivo descritos y agregando
agar
bacteriolgico
para
proporcionar un soporte en placas de cultivo para aislamiento de cepas con actividad. Se realizaron
diluciones seriadas decimales desde los consorcios con actividad, y se sembraron en placas de cultivo con
los respectivos medios usando la tcnica de placa extendida. Se realizaron traspasos sucesivos de las
cepas en aislamiento hasta obtener cepas puras con actividad.
La actividad de las cepas se verific en medios de cultivo lquidos mediante los indicadores
mencionados.
-Pgina 22 de 130-
antes

PROYECTO N 206-5467
Tabla
Enero 2010
N' 8: Test de actividad para cepas y consorcios aislados desde muestras Lago y
Mar. Se realiz test ON para cepas denitrificantes y test N para cepas
nitrificantes.
MUESTRA ORIGEN
ROTULO
TEST
ACTIVIDAD
ON LAGO 1
ONl1-OO1
(-)
ON LAGO 1
ONl1-OO2
(+)
ON LAGO 1
ONl1-OO3
(-)
NOVIAL
ON LAGO 1
ONl1-004
(-)
ON LAGO 1
ONl1-OO5
(-)
ON LAGO 2
ONL2-OO1
(+)
ON LAGO 2
ONL2-OO2
(+)
ON MAR 1
ON M 1-001
(-)
ON MAR 1
ON M 1-002
(-)
ON MAR 1
ON M 1-003
(-)
10
ON MAR 2
ONM2-OO1
(-)
11
ON MAR 2
ONM2-OO2
(+)
12
ON MAR 2
DNM2-OO3
(-)
13
N LAGO 1
Nl1-OO1
(+)
14
N LAGO 2
NL2-OO1
(+)
15
NMAR2
NM2-OO1
(+)
16
ON LAGO 1
(-ON LAGO 1
(+)
17
ON LAGO 2
(-ON LAGO 2
(+)
18
ON MAR 1
(-ON MAR 1
(+)
19
DN MAR2
(-ON MAR 2
(+)
20
N LAGO 1
(-N LAGO 1
(+)
21
N LAGO 2
(-N LAGO 2
(+)
22
NMAR2
(-N MAR 2
(+)
23
-Pgina 23 de 130-
(-) no existe actividad
(+) existe actividad

PROYECTO N 206-5467
Figuras Ir 9: Micrograf1a 100 X,

Consorcios bacterianos aislados desde
muestra Mar M2 positivos para DN
Figura N" 11: Micrograf1a 100)(, consorcios

bacterianos aislados desde muestra Lago1
positivos para actividad N
-Pgina 24 de 130-
Enero 2010
Figura N" 10: Micrograf1a 100 X, Cepa

bacteriana NMar2-001
Figura N" 12: Micrograf1a 100 X, Cepa

bacteriana DNLag2-001

PROYECTO N 206-5467
Figura N 13: Test actividad

denitrificantes para cepas bacterianas
aisladas desde consorcios bacterianos
obtenidos desde muestras Mar con
actividad.
Enero 2010
Figura N-14: Test actividad denitrificantes para

consorcios bacterianos obtenidos desde
muestras Mar con actividad.
Figura N-15: Test actividad nitrificantes para
Figura N- 16: Producto liofilizado de cepas
consorcios bacterianos obtenidos desde

muestras Lago con actividad
bacterianas con actividad
-Pgina 25 de 130-

PROYECTO N 206-5467
ACTIVIDAD
1.
DENI TRIFI CANTE
2:
EVALUACIN
DE
LA
Enero 2010
ACTIVIDAD
BACTERIANA
NITRIFICANTE
Fecha de ejecucin: mes 3 y mes 4 (Diciembre 2007 y Enero 2008)

Objetivo:
Evaluar el potencial biorremediador de los inculos de bacterias nitrificantes y denitrificantes Marinas y
Lacustres. Se disei'laron pruebas de laboratorio de modo de remediar el sistema natural, por 10 que los
resultados se pueden extrapolar a lo esperado en terreno al utilizar dichos inculos al realizar
biorremediacin in situ.
Descripcin:
Para el desarrollo de las pruebas se ha dividido el trabajo en dos etapas, una de adaptacin de las cepas
a las condiciones de prueba y otra de biorremediacin propiamente tal.
1.2.1. MATERIALES
Material de Vidrio:
Reactivos:
Reactores con camisa para regulacin de temperatura. Capacidad 2 L.

Capilares de Vidrio largo aprox. 15 cm. diam. aprox. 0,5 cm.
Botellas graduadas de 2 l para preparacin de medios de cultivo.
Cmara de Recuentos Petroff Hausser profundidad 0,01 mm.
Medio de Cultivo de Winodrasky

Medio para Denitrificantes, Denitrificans
Sedimento Lacustre Contaminado
Cultivo fresco Bacterias Nitrificantes y Denitrificantes de concentracin conocida.
Instrumentacin
y Equipos:
Termmetro digital
Bafio termorregulado a 12 C
Autoclave
Soplador 50 Umin
Microscopio ptico
pH metro
Medidor de 02 disuelto
MedidorORP
Conductivlmetro
Medidor Salinidad
Kit medicin Amonio, nitrito, nitrato
-Pgina 26 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
Material Biolgico:
Las muestras de sedimentos lacustres y marinos, tanto controles (de zonas limpias) como problemas (de
zonas acuicolas) que fueron tomadas de los centros de cultivo de la empresa Marine Harvest.
1.2.2. PROCEDIMIENTO
Las pruebas han sido ejecutadas en dos etapas, las que se describen a continuacin:
I Etapa: Adaptacin Cepas

En esta etapa, las cepas del cultivo fresco, fueron contactadas paulatinamente con sedimento
lacustre contaminado, en condiciones de menor a mayor concentracin, para as, conseguir la
adaptacin de ellas a las nuevas condiciones de trabajo, de modo que sean capaces de trabajar
de mejor manera en sedimentos con una alta carga contaminante (materia orgnica).
El periodo de adaptacin tiene una duracin de aproximadamente 10 das. En los cuales, se prepara dos
adaptaciones, una para cepas nitrificantes y otra para cepas denitrificantes. Ambas experiencias se
trabajan por duplicado y en condiciones de TO y pH optimas (12 C y pH 7.0 aprox.)
Q
Para el caso de las cepas Nitrificantes (N) se trabaja en condiciones aerobias, en cambio, en el caso de
las cepas Denitrificantes (DN), se opera en condiciones anxicas, debido a sus caractersticas
anaerobias.
El plan de adaptacin, aplicable en todos los casos, se presenta a continuacin en la tabla N 17.
Tabla N 17: plan de adaptacin de cepas

Adaptacin Cepas
-
----_.-
ora
Lodo (%v/v)
In6culo (%vlv)
60
40
70
30
13
80
20
N1LL:
N2LM:
DN1LL:
DN2LM:
Cepa
Cepa
Cepa
Cepa
nitrificante en adaptacin Lodo Lacustre

nitrificante en adaptacin Lodo Marino
denitrificante en adaptacin Lodo Lacustre
denitrificante en adaptacin Lodo Marino
En esta etapa se observa que la adaptacin de las cepas a los lodos fue bastante fcil. Lo cual nos lleva
a pensar que esta fase puede eliminarse y que es posible agregar microorganismos cultivados en
laboratorio directamente al sistema a remediar; ya sea un batch o lodo contaminado en el proceso de
remediacin in situ.
-Pgina
27 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
11 Etapa: Biorremediaein
Para la etapa de biorremediacin propiamente tal, se trabaj en biorreactores
mantuvieron a una temperatura constante de 12C.
La blorremediacin se realiza en tres etapas consecutivas:
de 2 L, los cuales se
a) La primera es una etapa de denitrifieaei6n

(ON), en la cual, las cepas deben actuar en condiciones
anxicas (en ausencia de oxgeno), y deben abatir la alta carga de materia orgnica para la posterior
accin de las bacterias nitrificantes. En esta etapa se inocula un biorreactor que contiene sedimento
lacustre contaminado, con cepas denitrificantes adaptadas previamente; se realizan tres ciclos de
inoculacin. stas reducen bioqulmicamente aniones de nitrgeno oxidado, lo que
conlleva a la
transformacin progresiva desde nitrato a nitrito y oxido nitroso a nitrgeno molecular. Este proceso, en
su ambiente natural, puede ocurrir tanto en condiciones aerobias como anaerobias.
b) Finalizada la primera etapa de denitrificacin, se pasa a una etapa de nitrifieaein
(N), en la cual se
inocula clulas nitrificantes , adaptadas al lodo, en el mismo biorreactor. Para la nitrificacin ocurra, se
debe trabajar en condiciones aerobias, para lo cual se adiciona al biorreactor, un flujo constante de 7
mg/L de aire, para entregar las condiciones necesarias para metabolizar oxidativamente los compuestos
nitrogenados del sedimento. En esta etapa ocurre la conversin de amonio a nitrato. El amonio es
oxidado a nitrito, el cual es transformado en nitrato, el cual no es txico para las especies acuticas de
un cultivo.
e) Para terminar el ciclo, se pasa a una segunda etapa de den itrifieaei6n , en la cual se inocula
nuevamente con clulas DN adaptadas, para la conversin de nitrato a nitrgeno molecular (gaseoso),
esperando obtener un sedimento aun menos contaminado que en la etapa nitrificante.
Cada una de las etapas antes descritas, tiene una duracin aproximada de seis das, de los cuales, se
reinocula microorganismos cada dos das. Los microorganismos inoculados, corresponden a la etapa en
que se encuentre (DN/N).
a las inoculaciones durante el ensayo)
Tabla N 18 (los cuadros claros corresponden
Regla de tiempo ensayo Biorremediaci6n

ora
ciclo
ON
10
11 12 13
14 15 16
ON
17
ra
19
20
post
ciclos
I
d) La siguiente etapa, escapa a la etapa de biorremediaei6n
propiamente tal. Se realiz un seguimiento
posterior del ensayo durante 3 das, de modo de tener una visin ms acabada de la remediacin
completa, puesto que en un pre-ensayo realizado con anterioridad a esta prueba,
se encontr un
desfase en los ciclos de reduccin de los contaminantes, en relacin a lo esperado, pensndose en la
necesidad de esperar un periodo superior a un dla para observar los efectos del ciclo completo .
-Pgina 28 de 130

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
Diseo Pruebas
El sistema consiste en cuatro biorreactores, con un sistema de recirculacin de agua por donde circula
agua a temperatura 12C, temperatura ptima para el crecimiento de las clulas. Para las pruebas se
homogeniz el lodo y se prepar con una densidad 1.08gr/ml, de modo de lograr condiciones
estandarizadas y de que en cada prueba particular se utilice la misma preparacin base tanto en el
control como en la prueba de biorremediacin. Los microorganismos del sistema, son fotosensibles, por
lo cual se debe cubrir cada uno de los reactores, para protegerlos de la luz.
A continuacin se puede observar fotograffas de cada una de las pruebas y el sistema de reaccin de
cada una de las etapas.
a) Prueba control, la cual solo contiene sedimento lacustre o Marino contaminado el que a su vez aporta
los microorganismos
propios de ste.
Figura N' 19: Reactor control
b) Prueba W1 : Esta prueba contiene 2 L de sedimento lacustre, preparado con una densidad 1.08, el
cual es inoculado segn la frecuencia descrita en la tabla N 18, con clulas adaptadas, de modo de
llegar a una concentracin de 1.6 x 10 6 clulas/mL.
Figura
N' 20: Reactor problema
-Pgina 29 de 130-

FIgura
Enero 2010
ti' 21: Sistema de reaccin, en ausencia de oxigeno

(FaseDN)
Figura
ti' 22: Sistema de reaccin, en

condiciones aerobias (N)
-Pglna 30 de 130-
Figura ti' 23: Sistema de reaccin en condiciones

finales de trabajo (fotoprotegido)

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
1.2.3. RESULTADOS
Se realizaron evaluaciones de distintos parmetros, la evaluacin comparativa de dichos

resultados se expresa a continuacin.
1.2.3.1.- Concentracin celular
Las muestras de lodo inicialmente tenan conteos altos en tiempo cero. Los lodos problema Lago
5,Ox10E+8 cel/mI y los lodos problema Mar con 1,7*10E+8 ce/mi; por tanto el aporte en el conteo
total de los microorganismos ON y N agregados por vez: 1,6*10E+6 cel.lml es pequeo,
considerando que estas clulas se diluyen en el batch que es un pequeo ecosistema vivo donde
existen otros microorganismos que compiten.
Tabla N 24: Porcentaje microorganismos
microorganismos
lodo
inoculados en relacin
1
inoculacin
a microorganismos
% total
del Iodo.
% total
inoculaciones
Ensayo
Lacustre
5,OOE+08
1,60E+06
0,320/.
1.44E+07
2,88%
Ensayo
Marino
1,70E+07
1,60E+06
9,41%
1.44E+07
84,71%
Observando el porcentaje de microorganismos (Tabla N24) que se inocula cada vez en

comparacin a los microorganismos presentes en el lodo, se observa que este porcentaje es menor
al 1% en el caso del ensayo lacustre y menor al 10% en el caso del ensayo marino. Esto es un
equilibrio dinmico donde existe una competencia de las bacterias inoculadas, entonces, a pesar
que la sumatoria de microorganismos inoculados en el periodo completo que dur el ensayo (ver
regla de tiempo, Tabla N 18) da un total del 2,88% en el caso Lacustre y de un 84,77%, en el
segundo caso recin el al da 14 se produce un salto considerable en la concentracin celular.
Si analizamos los datos de los ensayos lacustres (ver grfica N 25), la dispersin de datos muestra
una mayor concentracin celular siempre para la muestra Remediacin-Lago inoculada. Ejemplo: el
da 2 se contaron 8*10E8 cel./ml para la muestra ensayo, un 1*108 cel.lml mas (un 14% ms) que
las 4,1*108 observadas en el control lacustre; del mismo modo el da 4 observamos una diferencia
de 2,3*106 cel.lml ms (un 56%), entre las 6,4*106 ceVml vistas en el caso del ensayo Lago y las
4,1*108 vistas en el control. Esta tendencia se aprecia en toda la prueba de remediacin Lago salvo
pocas excepciones (das 3,9, 10, 14).
-Pgina 31 de 130-

PROYECTO N 206-5467
1----9.00E+08 .
8.00E+08
7.00E+08
_ 6.00E+08
E 5.00E+08
4.00E+08
3.00E+08
2.00E+08
1.00E+08
O.OOE+OO
Concentracin celular pruebas remed~-l6n-La-g~
Enero 2010
10
12
cellml
Control
.~lmlEl'ISay
14
16
18
20
Grfica N 25: Grfica

dispersin concentracin
celular durante el ensayo,
Columna Control-Lago y
Columna Remediacin-Lago
22
tlempo(."
En los ensayos Marinos (ver grfica N 26), observamos la misma tendencia que la observada en el
ensayo lacustre donde solo los dlas 1, 3 Y 10 se marcan las excepciones en que los conteos en el
control son superiores a los conteos en el biorreactor prueba. Tenemos asi el dia 14 una diferencia
de 1,1 *108 bacterias.
Observamos en los ltimos das de anlisis de los resultados, que se observa una predominancia en
el nmero celular en las pruebas de remediacin (inoculadas). Si observamos la tendencia los dias
15, 16 Y 17 se observa siempre un mayor conteo para el caso de las pruebas de remediacin.
-~--
Concentracin celular ensayo rernediacin Mar
T-
024
ro
...
cellml
ffl
[ .cellmlE~o
ffl
20
Control
Grfica N 26: Grfica

dispersin concentracin
celular durante el ensayo,
Columna control-Mar,
Columna remediacin-Mar.
22
tiempo (di .,
Se puede concluir que paulatinamente

se va generando una incorporacin de las bacterias
inoculadas a los sistemas batch que contiene lodo contaminado, lo que se refleja en el aumento
cuantitativo en la concentracin bacteriana.
Esta incorporacin es un poco ms lenta o dificultosa en el caso del ensayo Marino, lo que se puede
entender por el esfuerzo adicional que necesitan los microorganismos para mantener su metabolismo
en conjunto con la regulacin de la osmosis en condiciones de salinidad alta.
Lo anterior implica la creciente incorporacin y adaptacin de las bacterias benficas a dicho sistema
experimental y se puede extrapolar a lo que suceder en la columna de agua con la continua
aplicacin del Bioproducto y el restablecimiento de la flora nativa benfica.
-Pgina
32 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
1.2.3.2.- Temperatura
La temperatura en las pruebas, fue controlada con el sistema de chaquetas de agua recirculada.
Esto permiti mantener la temperatura alrededor de la temperatura operacional ptima de 12C.
T" ensayo remadlacln lago
15
14
12
10
8
...
Grfica N 27: Grfica

dispersin Temperatura durante
el ensayo, Columnas Control
Lago y Remediacin-Lago
4
2
O
10
20
15
25
T" ensayo remadlacln mar

18
16
14
12
10
8
6
4
2
O
&
10
15
Grfica N 28: Grfica dispersin

Temperatura durante el ensayo,
Columna Control Mar y Columna
Remediacin-Mar
&
20
25
En ambos casos, Columnas Remediacin-Lago como Columna Remediacin-Mar se observan

variaciones alrededor de este ptimo, consistentes en la habilidad del sistema para regularse en
relacin a la temperatura ambiente.
-Pgina 33 de 130

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
1.2.3.3.- Evolucin pH de los ensayos

Al observar la Tabla NO 29, observamos claramente que en los lodos contaminados se genera una
acidificacin, donde el LLP (Lodo Lacustre Problema) posee un pH levemente ms cido de 6,66
en relacin al pH del LLC (Lodo Lacustre Control) 7,2. Del mismo modo el pH del LMP (Lodo Marino
Problema), es levemente inferior al pH del LMC (Lodo Marino Control).
NO 29: Muestras de sedimentos lacustres y marinos
Tabla
pH
MUESTRA
LLC: Lodo Lacustre Control

LLP: Lodo Lacustre Problema
LMC: Lodo Marino Control
LMP: Lodo Marino Problema
7.2
6.66
7.52
7.43
Grfica N 30: Grfica de dispersin pH durante el ensayo, Columnas Control Lago y

RemediacinLago
pH pruebas ramediacin lago
8
7.8
7.8
7.4
7.2
7
6.8
6.6
6.4
6.2
-..
.
-.-.
.
-
10
.
20
15
25
Grfica N 31: Grfica dispersin pH durante el ensayo, Columnas Control Mar y

Remediacin-Mar
pH pruebas ramedlacln mar
7.6
7.4
7.2
7
6.8
6.6
6.4
6.2
6
.~
8
7.8
lO
10
...
--]
pH Control
~ pHE",,!y'o
15
-Pgina 34 de 130-
20
25

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
Tabla N 32: Reacciones nitrificacin y desnitrificacin

NH4+
NH20H
H+
+
+ 2e-
+ O2
H20~
Y:z O2 + 2 H+
N02+ 2e ~
oao ~
+ 5H+
H20
+ 4 e- + biomasa
H20
N03- + biomasa
N02- + 0,5 O2 ~
2 N03- +
NH20H
N2 + H20 + 2 OH- + biomasa
Podemos entender la deriva de la concentracin de protones, y la leve alcalinizacin de los medios de

reaccin de las pruebas columnas del ensayo lago, por la aparicin de especies oxidadas
intermedias, como hidroxilaminas (NH20H) e iones hidroxilo. Este efecto es menos notorio para el
caso marino que para los ensayos lacustres.
Si bien en las reacciones qufmicas en juego existen productos que balancean el equilibrio, ya sea
hacia lo acdico o alcalino (especies resaltadas: H+, OH- NH20H); la observacin experimental dice
que la contaminacin acidifica levemente los lodos, de este modo el estado normnico de los lodos
tiende hacia la alcalinidad, a pHs levemente sobre el pH neutro. Por tanto, la accin del sistema
remediador regula los niveles hasta niveles ms cercanos al estado normomco.
-Pgina 35 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
1.2.3.4.- Oxgeno disuelto

La caracterstica inicial de los lodos agotados era completamente anxica con 0,08 mg/L en el caso de
los lodos lacustres y 0,11 mg/L en el caso de los lodos marinos. Al evaluar la concentracin de oxgeno
disuelto, condicin que se mantiene a pesar de la aireacin realizada en las fases aerobias, nos
encontramos con una observacin interesante.
En el caso de la columna de remediacin lacustre, se produjeron dos peacks de concentracin de
oxigeno al inicio del primer ciclo denitrificante el dfa 2, en el cual se registr una concentracin de
oxigeno de 0.32 mg/L, y el dla 12, al inicio de la segunda fase anaerobia, en el cual se registr una
concentracin de 0.45 mg/L.
Del mismo modo, se observ un peak similar en el ciclo de remediacin DN en la columna marina,
siendo el valor ms alto alcanzado, 0.6 mg/L el dia 2 registrndose, mantenindose alto en 0.5 mg/L el
dfa 3.
[02J disuelto
pruebas
Grfica N 33: Grfica
0.4~-------------------------------------
dispersin Oxigeno disuelto

durante el ensayo, Columnas
Control Lago y RemediacinLago
t--"-'------------------------------------
~.3
ti s.a.2
Lago
0.5
e
-e
remedlaci6n
0.1
. ..,
~-----------------------
:!---,---------~.------------
I '1, -
O~----~~----~------~------~----~
10
25
20
15
tiempo (dla"
[02J disuelto
pruebas
remediaci6n
Mar
02 Dis. Control
~_[)s'
0.7
0.6
-!--*------------------------------
Oxgeno disuelto durante el

ensayo, Columnas Control Mar y
Remediacin-Mar
~
u_ Q5+--~------------------------
i 'i 1-------------------------------ti
+-------------------------------8 Q2+--------------------------0.4
..0.3
0.1
Ensayo
+---1---.....,.......!(--c--;;--;;-.,....-::---.....,-------::------------
O~----~----~----~~--~--~------~
."..
.".
10
15
20
25
tlempoldla"
La observacin de los peacks de concentracin de oxigeno en las etapas Oenitrificantes (ON) son
interesantes, aunque no existe ninguna base dentro del estado del arte que apoye alguna teone de la
formacin de oxigeno molecular a partir de las especies nitrogenadas oxidadas, nitrato o nitrito.
-Pgina
36 de 130-

PROYECTO N 206-5467
1.2.3.5.- Potencial
Enero 2010
Redox
Se parte de la premisa que los lodos contaminados

en un estado ms oxidado (Bushmann, 2005).
con la gran concentracin
de materia orgnica estn
Las variaciones de potencial Redox deben ser compatibles a los ciclos de remediacin. El ciclo
denitrificante es un ciclo reductor, donde a partir de especies nitrogenadas oxidadas (Nitritos y Nitratos)
se llega a nitrgeno molecular gaseoso: especie nitrogenada reducida (Kishida, 2003). El ciclo nitrificante
en cambio es un ciclo oxidante, donde a partir de una especie nitrogenada reducida (amonio), se
producen nitratos y nitritos, especies nitrogenadas oxidadas.
En las grficas siguientes, se expresa las variaciones en ORP (Oxido reduction Potencial).
ORP pruebas
remedlacin
lago
200
- ::~!-.-.------------'---------------
i
E
50 .!-------.---
ORP Control
-.--~5
----,~O----~,5~
-
o r'
.:
-1
I~E~ayo
--------------20

Potencial Redox durante el ensayo,
Columnas Control Lago y
Remediacin-Lago
25
lIempoldl ,
ORP ensayllll
",mediacin
mar
200
100 j------------------------------
>"
I
o
-100
f----
__--- 5
1:o
__----~--~--~
10
-.c
,15
20 25l;::;~
-200 +--------~~-.-.-----------------

Potencial Redox durante el ensayo,
Columnas Control Mar y RemediacinMar
tiempo tela
En ninguno de los dos casos se observa que al trmino de la experiencia se tengan valores ms bajos
de potencial en los ensayos inoculados con bacterias en comparacin a los controles. Sin embargo si
comparamos punto a punto, de los 13 puntos mostrados para el experimento remediaci6n Lago, ocho
son ms bajos para el ensayo inoculado que para el control; del mismo modo para el ensayo marino seis
de los trece puntos estn ms abajo.
-Pgina 37 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
1.2.3.6.- Evolucin concentracin especies contaminantes
AMONIO
Grfica N 37: Grfica porcentajes de remediaci6n de Amonio durante el ensayo,
Remediaci6n-Lago
I AmoniO rilQIL
REIIEDlAClN AMONO CNitI
'lft relativo movll
-2
Columna
pero media mlAl

(Amonio mjL)
15O%------------------------l
100%
+---------
-150%
En el ensayo lacustre, como observamos en las figuras, y a pesar de lo previsto se observa una deriva
de la concentraci6n de Amonio coherente a lo esperado: disminuci6n-aumento-disminuci6n.
Se observan
los efectos claros de remediaci6n el dla 12, luego de un ciclo DN y un ciclo N. La disminucin de los
niveles de amonio el dfa 11 antes de la nueva inoculaci6n de bacterias DN, se puede entender como la
reacci6n de las bacterias que an estn en el sistema.
Grfica N 38: Grfica porcentajes de remediaci6n de Amonio durante el ensayo, Columna

Remediaci6n-Mar
25
En el ensayo Marino, como observamos en las figuras, al igual que en el Lacustre, se observa una
deriva de la concentraci6n de Amonio coherente a lo esperado: leve disminuci6n-aumento-disminuci6n.
Se observan los efectos claros de remediaci6n el dla 14, luego de un ciclo DN y un ciclo N. Notar que
este efecto en el caso lacustre se observ6 dos dfas antes. Los controles se mantienen cercanos al valor
inicial durante toda la prueba.
-Pgina 38 de 130-

NITRITO
Grfica N 39: Grfica porcentajes
Remediacin-Lago
Enero 2010
de remediacin
de Nitrito durante el ensayo,
1 __
IREMEDlAClN NTRlTO (HOz)

i
% ral.tlvo mOYiI
""(
Columna
..
-2 pero media mloiI

.
(Nitrito mg/L)
100%
~+---~~~
-100%
.J--
5__~-.-aH
11
13
~~~~l
--'~L.-I!!~~~L.__1L
1920
__18----~
.....
-150%
l2OO%--,-..;;...._=-__.Al comienzo del ensayo, se observ un aumento drstico de la cantidad de nitrito en la fase inicial de
remediacin -coherente a la accin de las bacterias denitrificantes- la tendencia general en el ensayo
fue la disminucin de los valores de concentracin de nitrito, sin embargo las medidas son slo
referenciales por encontrarse en el limite de deteccin de la tcnica.
Grfica N 40: Grfica porcentajes
Remediacin-Mar
[REMEDlAClN NTRlTO (H02)
% ral.tlvo mOYiI
I ::
de remediacin
de Nitrito durante
el ensayo,
Columna
NitrIto mg/L
+--------
400
200
o
-200
Se observa un peak en la concentracin de nitrito el da 8 y posteriormente un gran peak de la

concentracin de Nitrito el dla 12, al comenzar el segundo ciclo Oenitrificacnte (ON), el desfase en
relacin al ensayo Lacustre se puede entender por lo tenito del ensayo mar en relacin al ensayo
Lacustre. Si bien el Nitrito es una de las especies a remediar, su aumento relativo en este ensayo se
puede comprender dentro del restablecimiento de los ciclos naturales, como especie intermedia de la
oxidacin a nitrato y posteriormente el paso a Nitrgeno gaseoso.
-Pgina 39 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
Grctfica N 41: Grfica Dorcentaies de remediacin de Nitrato durante el ensavo. Columna

Remediacin-Laao
1_ % relatilos
IREMEDlAClON tlTRATO (NOJ)
'" relativo
I~
:-2
150%
100%
50%
0%
-50%
+-------------
Io8riaci6n
pero meda mlAl(%1

relatiws
movll
108Iiaci6n)
----------1
I :::
1-------
=------;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;,...;;;;,...~
Concordante a lo esperado, se observa una variacin de los niveles de Nitrato acorde a la

actividad de los ciclos DN: aumento al inicial y al final concordante a los ciclos N: con la
disminucin en los niveles al medio del experimento.
Grfica N 42: Grfica porcentajes de remediacin de Nitrato durante el ensayo, Columna

Remediacin-M~r
IREIIEDlAClN tlTRlTO (N02)
I
I
'"
_Nitrato
relativo movll
200
-2
per_ meda mlAl(Nitrato)
--------------------1
---------------------..--...----
150
100+-----------------~~~--50
O -I--~~_._~~~_
..
-50O 1 2
--------------
-----~
Del mismo modo que para el caso que para el ensayo Lacustre y concordante a lo esperado, se
observa una variacin de los niveles de Nitrato acorde a la actividad de los ciclos DN: aumento al
inicial y al final, y concordante a los ciclos N: con la disminucin en los niveles al medio del
experimento.
-Pgina 40 de 130-

PROYECTO N 206-5467
1.2.4. CONSTRASTACION
MEDICIONES LABORATORIO
Enero 2010
EXTERNO
A continuacin se presentan los resultados obtenidos en un laboratorio externo para contrastacin

nuestros resultados.
Para evaluar se compar
respectivos.
en tiempo final los valores obtenidos
en los ensayos
de
y sus controles
Tabla N 43: Mediciones laboratorio externo, ensayo Remediacin Lago y Control Lago
Parmetro
Nitrato
Nitrito
Amonio
Unidad
mglL
mglL
mg/L
lago
da O
< 0,10
< 0,05
9,71
control
da 20
<1
<0,05
12,3
lago
da 20
<1
<0,05
9,5
% remediaci6n
control dla 20
YS
-22,8
Tabla N 44: Mediciones laboratorio externo, ensayo Remediacin Mar y Control Mar
Parmetro
Nitrato
Nitrito
Amonio
Unidad
mg/L N-N03
mg/L N-N02
mgJL N-NH3
mar
da O
< 0,10
< 0,05
29,4
control
da 20
<0,1
<0,05
18,8
mar
da 20
0,2
<0,05
11,9
% remediaci6n
vs control da 20
-36,7
De los analitos observados solo se pudO tener valores del Amonio. Encontrndose una disminucin
en un 22% para el caso del ensayo Lacustre y de 37% en el caso del ensayo Marino.
-Pgina 41 de 130-

Enero 2010
1.3. FORMULACIN DEL PRODUCTO

Fecha de ejecucin: meses 7,8,9 Y 10 (Abril-Julio 2008)
ACTIVIDAD
Objetivo
Desarrollar una formulacin farmacutica para uso industrial, que permita la aplicacin de un nuevo
principio activo bacterial en el tratamiento de los fondos marinos y lacustres, afectados por la actividad
acucola.
En base a los requerimientos planteados, se defini que la forma farmacutica ms adecuada
para
cumplir con los objetivos esperados es un elemento comprimido del tipo tableta, que tras su desarrollo,
deber ser capaz de transportar al fondo marino el principio activo que realiza la biorremediacin
requerida.
Descripcin de metodologa empleada para el desarrollo
Para realizar el estudio requerido, se completaron un conjunto de tareas (o etapas) siguiendo
metodologa lgica indicada en el diagrama N 45.
la
ResII1ce,ones
FIsoeo-Oufmoeas
!lel PnnclptO
Actovo
Diagrama NfI45: Esquema metodolgico

empleado para el desarrollo del estudio
El desarrollo fue de naturaleza recursiva en algunas de las tareas realizadas en las cuales
no
se
alcanzaron los resultados esperados, hasta obtener mediante ensayos sucesivos la mejor aproximacin
a las caractersticas establecidas en las condiciones de diseo. La descripcin de las condiciones
establecidas ylo actividades desarrolladas en cada una de las etapas indicadas es la siguiente:
-Pgina 42 de 130-

PROYECTO N 206-5467
1.3.1. DEFINICIN DE CRITERIOS GENERALES
Enero 2010
DE DISEO
En esta etapa preliminar del desarrollo se tuvieron en cuenta el siguiente conjunto de requerimientos
especificos (o resultados esperados) a ser cumplidos por la nueva forma farmacutica:
o
Debe servir como transporte del principio activo hacia el fondo marino o lacustre que se
requiere remediar. Esto significa que la forma farmacutica a desarrollar debe poseer una
densidad final mayor a la del agua, de manera de permitir su hundimiento directo, una vez
aplicada en la superficie del lugar que se espera tratar.
Debe poseer una forma tal que evite su ingestin por parte de los peces u otra biota presente
en la zona de aplicacin de la forma farmacutica.
Debe ser capaz de viajar al fondo marino o lacustre sin romperse o desintegrarse
trayecto ni en el momento de contacto con el fondo.
durante su
Su forma debe ser amigable en presentacin y debe facilitar su fabricacin,

posterior transporte.
Los elementos componentes empleados (excipientes) debern en lo posible ser de naturaleza

amigable con el medio ambiente, estndar o comercial, de manera de conseguir un producto
final que sea viable tanto desde el punto de vista ambiental, tcnico y econmico.
manipulacin
Las condiciones que debern ser consideradas para el desarrollo sern:

}oo
solvente: agua salada yagua dulce
}oo
rango de temperatura entre 5C y 15C
}oo
rango de profundidad de aplicacin entre 15m y 40 m
En base a los requerimientos anteriores, se estableci que la forma farmacutica ms adecuada para
cumplir con los objetivos planteados seria un comprimido de forma cilndrica, con un dimetro de 8 cm.
1.3.2. DETERMINACiN
DE LAS CONDICIONES
FSICO-QuMICAS
DEL PRINCIPIO ACTIVO
Se suministr como principio activo para desarrollar la formulacin farmacutica,

muestras de material liofilizado, con propiedades variables entre
las distintas
posible caracterizar fisicamente como sigue:
un
conjunto
de
muestras, el que fue
}oo
Color: Caf rosceo variando de pardo a oscuro
}oo
Olor: Variable desde inodoro a sulfurado
}oo
Rango de densidad especfica granel (g/cm3): desde 0,3 hasta 0,7

(Nota: Muy dificil de medir debido
a la variabilidad de los liofilizados)
}oo
Humedad: No medida, aparentemente
}oo
Tamafio de partcula: Variable, las muestras se presentaron en estado agregado, por lo

cual se requiri de un proceso previo de desagregacin antes de la etapa de preformulacin
-Pgina 43 de 130-
baja ya que se presenta seco

PROYECTO N 206-5467
1.3.3. SELECCIN
PRELIMINAR
Enero 2010
DE EXCIPIENTES
Para el diseno de la formulacin del elemento comprimido se identific un conjunto de excipientes

comerciales de amplio y permanente uso en la industria farmacutica nacional, a partir de 105 cuales se
seleccion el siguiente grupo funcional en base a su conveniencia y disponibilidad:
o
Diluyentes (fillers):
o
Carbonato de Calcio
Carbonato de magnesio
Celulosa Vegetal Microcristalina
Sulfato de Calcio
Lactosa Anhidra
Almidn de malz
Aglutinantes
o
Glucosa Microcristalina
Sorbitol
Almidn de maz (se us tambin como filler)
Sacarosa
Lubricantes
o
Estearato de Magnesio
Talco
Desintegrantes
o
Carboximetilcelulosa
Hidroximetilcelulosa
Lactosa Anhidra (se us tambin como filler)
-Pgina 44 de 130-

PROYECTO N 206-5467
1.3.4. FORMULACIN
PRELIMINAR
Enero 2010
DE LOS COMPRIMIDOS
Utilizando un conjunto bastante diverso de excipientes, se estableci tentativamente un conjunto inicial

de formulaciones, el que fue paulatinamente mejorado en base a la retroalimentacin de los ensayos
fsicos realizados en laboratorio. La tabla N 46, muestra el resumen de formulaciones que fueron
consideradas en el estudio.
Tabla N 46: Resumen de formulaciones ensayadas para el desarrollo del estudio
N Fonnulacin
excipiente
('la)
Principio ActIvo
Wofilizada Bacterial
Dlh"nte. ,filie,.):
Carbonato da CalCIO
Carbonato de maanesio
Celulosa Microcrislllina
Sulfato de Calcio
Lactosa Anhidra
Almidn de m.z
"
10
11
12
13
14
15
16
17
70
70
70
40
70
50
60
40
50
60
40
50
21
22
23
60
40
50
19
49
50
55
50
44
39
100
100
4
4
Total
100
200
2
72
70
70
70
70
28
2B
28
28
28
28
29
29
29
29
29
29
29
29
29
40
28
49
28
28
30
20
10
100
100
4
100
100
4
100
100
4
30
20
10
100
100
4
100
100
4
100
100
4
30
20
10
100
100
4
100
100
4
100
100
D In~lIrlnte.
Carboximetilcelulcsl
Hidroximetilcalulosa
Lactosa AnhIdra
Total o,;, I
TOlal/or91
N" Mueslras Ensa -adas
20
10
lubricante.
Ellearato de rAsan.sio
Talco
19
10
AglutJnlnte.
Glucosa Anhidra
Sorbrtal
Almidn de maz
Sacarosa
18
100
100
2
100
100
2
100
100
2
100
100
2
100
100
2
100
100
2
100
100
2
100
100
2
100
100
2
100
100
4
100
100
100
100
Una vez preparadas las formulaciones preliminares, se las someti a un exhaustivo mezclado manual de
manera de lograr una distribucin homognea de los componentes antes del proceso de confeccin de
prototipos mediante compresin .
-Pgina 45 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
1.3.5. CONFECCIN DE PROTOTIPOS

Los comprimidos prototipos fueron fabricados mediante la utilizacin de un molde de laboratorio,
diseado y confeccionado para cumplir con los estndares impuestos en los criterios generales de
diseo.
El molde empleado, fue fabricado en tres partes que le otorgan la funcionalidad deseada (Figura N 47):
La base que soporta el conjunto completo, la cmara que contiene el producto y permite el desaireado
de la mezcla y el mbolo que transmite hacia el compuesto la presin hidrulica recibida de una prensa,
permitiendo as la formacin de la forma comprimida.
Figura N 47: Molde para confeccin

de prototipos de comprimidos para
ensayo
La prensa utilizada en conjunto con el molde, es de accionamiento hidrulico manual, para uso industrial,
con capacidad mxima de cierre de 15 toneladas, y se encuentra provista de indicador manomtrico.
Figura N 48: Prensa hidrulica para confeccin de prototipos de comprimidos para ensayo.
Manmetro
Accionamiento
Manual
Pistn
Hidrulico
-Pglna 46 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
El procedimiento de fabricacin de los prototipos consisti en las siguientes etapas:
Figura N" 49:
Armado conjunto base y cmara
del molde.
Figura N" 50: Llenado de cmara con la formulacin a

comprimir.
Figura N" 51: Cierre del molde con el mbolo.
Figura N 52: Compresin del molde lleno en

prensa.
-Pgina 47 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
Figura N 53: Desarme de base del molde
Figura ~ 54: Compresin del molde sin base para

soltar el comprimido.
Figura ~ 55: Obtencin del comprimido formulado
-Pgina 48 de 130-

1.3.6. PRUEBAS
Y ENSAYOS FSICOS REALIZADOS
Enero 2010
A LOS PROTOTIPOS
Los comprimidos prototipos obtenidos mediante compresin directa con el molde y la prensa
laboratorio, fueron sometidos a las siguientes mediciones y ensayos:
de
Densidad Compactada
3
La densidad compactada en todos los casos ensayados, se mantuvo en rangos entre 1,78 grs/cm y
2,28 grslcm3, con lo cual se asegura que ninguna de las formulaciones alternativas tendra riesgo de
flotar.
No se aprecio un cambio significativo, en trminos de, variaciones observadas en la densidad
compactada, entre aquellos prototipos compactados entre 8 toneladas y el mximo de 15 toneladas.
Friabilidad
La capacidad del comprimido para resistir al desmoronamiento
producto de su manipulacin.
Fue clasificada cualitativamente para cada una de las formulaciones

sealados y para las formulaciones indicadas en la Tabla N
56.
en los siguientes
trminos
Tabla N 56: Clasificacin Cualitativa de Friabilidad
Comportamiento Frente a la Abrasin

Manual
Resiste el roce de los dedos en sus
bordes sin dejar rastros de residuos en los
dedos.
Clasificacin de
Friabilidad
NO Formulacin
Muy Buena
Los bordes no se rompen producto de la

aplicacin de un apriete moderado.
Resiste el roce de los dedos sin
desmoronarse, pero al tacto deja rastros o
residuos en los dedos.
No resiste el roce de los dedos, se
desmorona pero slo en los sectores
aguzados de los bordes
No resiste el roce y se desmorona o se
parte frente a solicitaciones menores en
los bordes o en cualquier parte del
comprimido.
-Pgina 49 de 130-
Buena
1,2,4,5,6,12,15,18,20,22,23
Regular
3,7,9,10,11,13,14,
16,17,19,21.
Mala

PROYECTO N 206-5467
Tiempo de desintegracin
Enero 2010
en agua
Para asegurar que el comprimido no se rompa antes de alcanzar los fondos marinos o lacustres, y
por otro lado asegurar que el comprimido si se desintegre en un periodo prudente de tiempo y libere
as el principio activo motivo de su objeto.
Se realizaron ensayos de desintegracin en agua para todos los comprimidos prototipos formulados.
Los resultados de los ensayos se clasificaron en categoras, de acuerdo al tiempo requerido por el
prototipo para lograr su desintegracin total y permitir asl la liberacin del comprimido. Los
resultados obtenidos se resumen en la Tabla N 57.
Tabla N
Comportamiento
57: Clasificacin Cualitativa de desintegracin en agua
Frente a la Abrasin Manual
El comprimido no se desintegra
Clasificacin de
desintegracin
NO Fonnulacin
Malo
El comprimido se desintegra en un tiempo mayor

a 24 horas
Bueno
1,2.4,5,6,22,23
El comprimido se desintegra en un lapso menor a

24 horas.
Regular
3,6,7,8,9,10,11,12,13,
14,15,16,17,18,19,20,
21
1.3.7. RESULTADOS
Las principales conclusiones obtenidas en el desarrollo de este estudio son las siguientes:
o
Se valida que la forma farmacutica comprimida es la mejor alternativa para realizar la

aplicacin del principio activo, ya que se pueden lograr densidades adecuadas y tiempos
esperados de desintegracin.
Se valid que el principio activo mantuvo su viabilidad despus de ser reconstituido

del comprimido desintegrado.
La formulacin final r.o 23 parece alcanzar los estndares planteados al inicio del desarrollo y
debe por tanto ser probada en condiciones de uso industrial para validar lo obtenido en
condiciones de laboratorio.
-Pgina 50 de 130-
a partir

PROYECTO N 206-5467
ACTIVIDAD 1.4. DEFINICIN DE LA DOSIS DEL PRODUCTO

La dosis de producto fue definida en base a la actividad
microorganismo nitrificantes y denitrificantes".
Enero 2010
1.2. "Degradacin
de sedimentos
con
En estas pruebas se defini una dosis en base a ensayos de laboratorio y que tuvo como
base
de
clculo una concentracin celular de 10 6 cel/ml en un reactor de volumen de 250 mi, con ello se
obtuvieron los mejores resultados de biorremediacin a esta
escala.
Esta concentracin celular, respecto al volumen y rea de las columnas de prueba, fue definida la dosis
de producto, como "nmero de clulas por rea de sedimento biorremediado", cel/Ha. De acuerdo a ello
se determin que para una Ha de suelo aculcola contaminado se requiero 30 gr de biomasa.
Considerando
para esta misma superficie una distribucin espacial que cumpla con los aspectos de:
a)
Ser factible su manejo operacional en las salmoneras,

tabletas razonable de manipular por dosis/mes
lo cual quede reflejado en un nmero de
b)
Que las clulas queden distribuidas en el rea uniformemente de manera de asegurar el

biotratamiento lo ms homogneo posible (ver figura Ir 58 que representa la malla de distribucin
para una hectrea)
En caso de requerir remediar un rea ms impactada esta dosis aumentar a 60 o 90 tabletas /Ha.
De acuerdo a lo descrito anteriormente, se defini que el contenido celular en cada tableta es de un 10 %
para tabletas de 100 gr c/u. El % restante corresponde a los excipientes que permiten que la tableta
recorra el trayecto deseado sin desintegrarse, hasta llegar a los fondos marinos o lacustres segn
corresponda, y ahr liberar el principio activo durante 30 das al entrar en contacto con los sedimentos
(medios naturales de las bacterias que constituyen el principio activo del biorremediador).
La dosis fue proyectada con el fin de abarcar de manera lo ms uniforme posible la hectrea tratada,
dado que un menor nmero de tabletas significa la posibilidad de dejar zonas sin tratar y, por el contrario,
un mayor nmero de tabletas, significa mayor dificultad operacional, lo que no hara atractivo
comercialmente el producto en una faena productiva.
A continuacin la malla de distribucin pensada para el tratamiento de 1 Ha de superficie. La idea es
concentrar las tabletas en 15 puntos, que permitan cubrir de la mejor manera el rea deseada, sin que
esto constituya un problema operacional para el cliente.
La distribucin considera por tanto, 1,2 o 3 tabletas por punto, es decir, 30, 60 o 90 tabletas/Ha
funcin del grado de impacto.
e:
o
>
Figura NO 58: malla de distribucin de las tabletas en una

hectrea de fondo aculco/a
o
I
,J.
-Pgina 51 de 130-
en

PROYECTO N 206-5467
ACTIVIDAD
1.5. CARACTERIZACIN
Fecha de ejecucin:
Enero 2010
DE SEDIMENTOS
Mes 4, 5- Enero y Febrero 2008
Objetivo:
Realizar un monitoreo tipo INFA para identificar cualitativamente y cuantitativamente cual es el impacto
ambiental generado por el centro de cultivo en su entorno. Dicho monitoreo fue realizado por la empresa
Consultora en Control de Calidad y Medio Ambiente Geeaa Ltda.
El monitoreo se realiz en el centro de salmones
Marine Harvest y emplazado en la X Regin.
categorfa 3, Huelmo, perteneciente
a la empresa
Descripcin:
Las actividades realizadas fueron:
1.5.1. MUESTREO EN TERRENO
Para la realizacin del anlisis del sedimento que se solicit, fue necesario la extraccin del mismo y que
al igual que en la actividad W 1 sta se llev a cabo mediante draga, la cual est confeccionada
completamente
en acero inoxidable, posee diseflo de gatillo que asegura que las rnandlbulas
permanezcan abiertas durante el descenso. El volumen del muestreo es de 1800 cm" 'dragado
(aproximadamente).
~.
\
.........
Figura N 59: Draga
Figura
Ir' 60: Embarcacin
para el muestreo
Se us una embarcacin con las siguientes caracterfsticas: 6,30 m de largo, 1,9 m de ancho de fibra de
vidrio (lancha inscrita para actividades oceanogrficas y otros). Figura N 60
-Pgina 52 de 130

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
A continuacin, imgenes de la toma de muestra:

Figura N 61: Vista del centro de Salmones
Huelmo, X Regin
Figura
Figura
Ir' 63: Muestra
Ir' 65: Medici6n
de sedimento
de Temperatura
-Pgina 53 de 130-
Figura N
62: Draga de extracci6n de
sedimento
Figura
Ir' 64: Medicin
Figura
de parmetros in situ
NO 66: Disposici6n de las muestras

Enero 2010
1.5.2. ANLISIS EN LABORATORIO

Se tomaron muestras de las 8 estaciones de muestreo y de 2 estaciones de referencia o controles
(alejadas de los centros y que sirven de control de sedimento no contaminado). De cada una de estas 10
estaciones se tomaron 3 rplicas.
Tras la obtencin de las muestras se procedi al anlisis de los resultados
parmetros para clasificar el centro en funcin del grado de impacto.
y determinacin
Las estaciones se definieron tal como muestra la siguiente tabla N 67:

Tabla N 67: Plano de estaciones de muestreo
Estacin N"
Fecha
HonI:Mlnuto
UTlI_E
urll_N
Longitud
Latitud
Geoar6llc:a Geoar.nc.
11:30
12:20
663163
663279
5383136
4141'12.61"
5383517
4141'00.18"
13:10
662884
73"02'22.12"
73002'17.48"
44
4140'53.86"
4141'02;19"
73002'34.76"
55
73002'42.42"
38
5383690
5383409
4140'55.02"
73002'43:85"
4141'04.10"
663130
5383318
39
39
52
663035
5383422
4141'06.74"
4141'03.44"
73002'41.97"
73002'23.73"
73002'27.94"
50
663520
663317
5382556
5382548
73002'06.12"
73002'14,89"
38
27
21-01-2008
2
3
4
21-01-2008
21-01-2008
21-01-2008
14:00
862701
5383721
5383468
21-01-2008
8
7
21-01-2008
21-01-2008
14:50
15:40
862673
662710
16:30
8
Ret,1
Ret,2
21-01-2008
21-01-2008
17:20
18:10
19:00
21-01-2008
Profundidad
audelml
4141'31.14"
4141'31.55"
65
1.5.3. RESULTADOS
;..
Descripcin organo/ptica del sedimento:
;..
Color: Caf oscuro

Olor: en general, sin olor
Textura: arenosa
Temperatura: 12,7 C promedio
Materia orgnica (%). Tabla N 68

Porcentaje
Materia
Orgnica
Rplica 1
Rplica 2
Rplica 3
Estacin 1
0,76
0,84
0,84
0,81
Estacin 2
1,09
1,20
1,04
1,11
Estacin 3
1,22
1,29
1,14
1,22
Estacin 4
1,01
0,98
0,96
0,98
Estacin 5
1,01
1,13
1,10
1,08
Estacin 6
1,28
1,40
1,50
1,39
-Pgina 54 de 130-
Promedio
los de

PROYECTO N 206-5467
Estacin 7
Enero 2010
1,83
1,14
1,02
1,33
Estacin 8
1,03
0,94
1,00
0,99
Referencia 1
0,77
0,91
0,93
0,87
Referencia 2
0,97
0,93
1,02
0,98
pH Y potencial Redox. Tabla N 69

Potencial
ESTACION
REDOX(mV
Ag/AgCI)
pH
7,1
7,8
-48
7,6
19
7,9
7,9
-34
-8
-124
13,7
133
7,2
Referencia 1
173
7,6
Referencia 2
223
7,4
7,9
Perfil de oxigeno disuelto y temperatura. Tabla N 70

Perfil de oxigeno disuelto en la columna de agua
Capa
Profundidad
(m)
Oxgeno
disuelto
(mglL)
Temperatura
(OC)
Salinidad
(PSU)
15,3
30,0
Porcentaje
de
saturacin
(%)
8,6
-5
8,7
15,1
30,0
100
30,7
100
100
3
4
-11
8,9
14,0
-16
8,9
12,9
31,3
98
-20
8,9
11,6
32,2
96
-25
8,5
11,2
32,3
95
-30
7,8
10,8
32,6
86
-40
7,1
10,7
32,6
79
-42
6,3
10,6
32,7
70
-Pgina SS de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
Macrofauna bentnica
Tabla N 71: Macrofauna bentnica para la estacin N 1
Phytlum
Cirratulidae
Glvceridae
Glycera sp.
Lumbrineridae
Lumbrineris sp.
Nephtvidae
Nephtys sp.
Phyllodocidae
Eteooe sp.
Prionospio sp.
Nereidae
Nereidae
Polvnoidae
PoIynoidae
Ampharetidae
Ampharetidae
Terebellidae
Terebellidae
Syllidae
Syllidae
Flabelligeridae
Flabelligeridae
Paraonidae
Polygordiidae
Phoxocephalidae
Cumacea
Aoridae
Diastylidae
Mollusca
Nemertina
Echinodermata
Nassaridae
Rplica 2
RpDca3
40
10
30
50
10
70
30
10
10
20
280
10
10
Aoridae
Mytilus chilens;s
Aul8comya Btra
Nsssarius
Nuculidae
NucuJa pisum
Tindariidae
Tndaria striBta
Verenidae
T8Weragayi
Nemertina
Nemertina n d.
Ophiuroidea
Ophiuroidea n.d.
Echinidae
LDxechinus a/bus
Schizasteridae
Schizasteridae
-Pgina 56 de 130
60
10
10
10
10
30
is
10
240
10
10
10
30
40
30
10
10
10
190
19
N detaxa
20
10
Paraonidae
Schistomeringos
PoIygord;us sp.
Phoxocephalidae
Mytilidae
Rplica 1
10
s soederstroemi
Spionidae
Dorvilleidae
Arthropoda
Nmero de Individuos en la muestra
c:IenIifIco
Cirratulidae
Spionidae
Annelida
Nombnt
Familia
10
20
80
10
11
10
10
280
20
20
10
10
10
10
40
240
10
20

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
Tabla N 72: Macrofauna bentnica para estacin de referencia N1.
Phyllum
Annelida
Arthropoda
Mollusca
Nemer1ina
Echinoderrnata
Nmero de individuos en la muestra
Familia
Nombre cientifico
Cirratulidae
Cirratulidae 2
Glycendae
Glycera sp.
20
Nephlyidae
Nephtys sp.
Prionospio sp.
40
Amphinomidae
Amphinomidae
Goniadidae
Goniadidae
Paraonidae
Paguridae
Paraonidae
Pagurus sp.
Lysianassidae
Lysianassidae
Phoxocephalidae
Phoxocephalidae
Diastylidae
Nuculidae
Nucula pisum
Nemer1ina
Nemertina n d.
Ophiuroidea
Ophiuroidea n.d.
Echinidae
Schizasteridae
Loxechinus albus
Schizasteridae
N" de taxa
Rplica 1
Rplica 2
Rplica 3
10
10
20
50
10
10
10
10
20
10
10
20
20
10
10
10
80
180
10
9
Estos valores obtenidos se tomarn como referencia a la hora de valorar el efecto del
bioproducto. La valoracin de la eficacia del producto se har mediante comparacin de
resultados de los diferentes parmetros monitoreados, verificando asf la eficacia o no del
producto en desenouo.
-Pgina 57 de 130
40
10

PROYECTO N 206-5467
C.2. ETAPA 2, DISEO DEL PROCESO

EN CONDICIONES REALES
PRODUCTIVO,
Enero 2010
PRODUCCIN
PROTOTIPO
Y EVALUACIN
A continuacin la Carta Gantt correspondiente a esta segunda etapa y la descripcin de las

actividades realizadas para lograr los hitos de esta fase.
Objetivo
Disenar el proceso a escala piloto, produccin prototipo y evaluacin del producto en condiciones
reales.
-Pgina 58 de 130-

PROYECTO N 206-5467
ACTIVIDAD
Enero 2010
2.1: DISEO DEL PROCESO, DEFINICiN DE EQUIPOS Y ADQUISICiN
Fecha de ejecucin: Noviembre 2007 a Julio 2008

Objetivo:
Definicin de la lnea del proceso y 105 equipos para su adquisicin.
Descripcin:
Se solicit el diseno a nivel de ingenierla en detalle de un biorreactor piloto, con las siguientes
especificaciones e indicando que el biorreactor ser usado para fermentaciones de suspensiones
microbianas nitrificantes (aerobias) y desnitrificantes (anxicas).
Tabla N 73: Especificaciones
para el disei10 del biorreactor piloto.
Valor solicitado
ESR!cificacin
1.000 L
0,95 m
25 o C
Volumen de reaccin de la unidad

Dimetro mximo de la unidad (T)
Temperatura de fermentacin
Con vapor saturado
Para el diseo del sistema se entregaron 105 siguientes parmetros cinticos de la suspensin
microbiana nitrificante y desnitrificante. Se seleccionaron 105 valores
mximos para cada una de
las suspensiones.
Tabla
N' 74: Parmetros cinticos y ffsico-qufmicos de las suspensiones nitrificantes y

desnitrificantes
entregadas.
SusR!nsin nitrificante
SusR!nsin desnitrificante
Velocidad especifica mxima de

crerecimiento, IJm (h-1),
0.013 (cepa N lago)
0.28 (cepa DN lago)
Viscosidad dinmica, v (cst)
1.225 (cepa N mar)
1.085 (cepa DN lago)
-Pgina 59 de 130-

PROYECTO N 206-5467
2.1.1. CALCULaS
Enero 2010
DE DISEO
2.1.1.1. Volumen y dimensiones del equipo

Las dimensiones de la unidad se entregan en la Tabla N 75. La nomenclatura puede observarse en la
Figura N 76. Todos los clculos de diseno, relaciones geomtricas de la unidad y sus componentes,
fueron efectuados respetando las
recomendaciones dadas por la literatura.
Tabla N 75: Dimensiones del biorreactor piloto.
Especificacin
Valor
Volumen total de la unidad (V)

Volumen de reaccin (VL)
Dimetro de la unidad (TB)
Numero de deflectores
Altura total de la unidad (H)
Altura de liquido de la unidad (HL)
1.5 m3
1.0 m3
0.85 m
Restriccin impuesta o
Recomendacin
considerada
<=0.95 m
4
2.80 m
1.82 m
Figura Ir 76: Esquema del biorreactor y el sistema

de agitacin, usando la nomenclatura
estndar usada en equipos de fermentacin.
~ ,
t '
..
te
+----T-------a.
Las dimensiones del sistema de agitacin y los deflectores con que contar la unidad se presentan en la
Tabla N 77. Se seleccion un rotor de turbina de disco, turbina de Rhunston, que es el clsicamente
usado en fermentaciones aerobias, por su alta eficiencia en la dispersin de gases en medios liquidos y
adems de que resulta adecuado segn los valores de la viscosidad de la suspensin. Se usaran 3
rotores de modo de satisfacer los requerimientos de agitacin dado el volumen y las dimensiones de la
unidad.
-Pgina 60 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Tabla
tr 77:
Enero 2010
Dimensiones del sistema de agitacin y deflectores del biorreactor piloto.
Turbina de disco (de Rhunston)
Tipo de rotor seleccionado
0,38 m
Dimetro rotor (O)

Numero de aspas
Altura ubicacin rotor 1,
Altura ubicacin rotor 2, E+
Altura ubicacin rotor 3, F+E+
Ancho deflector (J)
Diferencia rotor 3-nivel liquido (A)
6
0,3m
0,9m
1,5 m
0,08 m
0.32 m
2.1.1.2. Aireacin
Para estimar el flujo de aire requerido a suministrar se deben calcular previamente las demandas en
oxigeno de los cultivos microbianos. En este caso la demanda de las suspensiones microbianas
nitrificantes. Estos valores sern tambin usados para estimar la generacin de calor metablico de los
cultivos microbianos.
81) DEMANDA DE OXIGENO PROCESO DE NITRIFICACION
En la Tabla N 78 se aprecia la demanda de oxigeno del cultivo nitrificante. La concentracin
celular fue fijada de modo de obtener una demanda en oxigeno posible de ser satisfecha
por
el
sistema de aireacin, as como tambin una generacin de calor factible de ser retirada por el
sistema de refrigeracin. Se fij una concentracin celular mxima, obtenida al final de la fase
exponencial de crecimiento. igual a 4.5 g biomasaL-1.
Tabla N 78: Demanda de oxigeno del cultivo nitrificante y parmetros cinticos

considerados
Parmetro
Velocidad especifica de
crecimiento (IJ)
Concentracin celular
mxima (XfNIT)
Rendimiento oxigeno en
clulas (V02)
Velocidad de consumo de
oxigeno (NA)
Velocidad de consumo de
oxigeno (NA)
en su determinacin.
Valor
considerado
Unidades
0,013
h-1
4,5
0,018
3,3
102
gSSV.L-1
gSSV.g02-1
g02.L-1.h-1
rnrnoles02.L-1.h-
82) DEMANDA DE NITROGENO PROCESO DE DESNITRIFICACION
-Pgina 61 de 130-
Consideracin o
Referencia
Laboratorio
Impuesta
Ruiz, (2000)

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
En la Tabla N 79 se aprecia la demanda de nitrgeno del cultivo desnitrificante, obtenida segn los
valores incluidos en la misma Tabla ND 79. Esta demanda fue usada para estimar la generacin de calor
metablico del cultivo desnitrificante. La concentracin celular mxima qued fijada en 5.0 g blomasa-L1, para que la generacin de calor del cultivo pueda ser retirada por el sistema de refrigeracin.
Tabla ND 79: Demanda de oxigeno del cultivo desnitrificante y parmetros

cinticos considerados en su determinacin.
Valor
considerado
Parmetro
Velocidad especifica de crecimiento (IJ)
Concentracin celular mxima (XfDES)
Rendimiento nitrgeno en clulas (YN)
Velocidad de consumo de nitrgeno (NAN)
Velocidad de consumo de nitrgeno (NAN)
0,28
5
1,2
1,2
83
Unidades
Consideracin
o Referencia
Laboratorio
h-1
gSSV.L-1
Impuesta
Ruiz, (2000)
gSSV.gN-1
gN.L-1.h-1
mmolesN.L-1.h-1
83) FLUJO DE AIRE REQUERIDO

El flujo de aire necesario para satisfacer las necesidades del cultivo nitrificante se presenta en la
Tabla ND 80. En ella se incluyen las principales variables que fueron consideradas para la
obtencin de este flujo.
Tabla N 80: Flujo de aire requerido y variables operaciones consideradas en su

determinacin.
Unidades
Parmetro
Valor
Velocidad de consumo de oxigeno (NA)

Temperatura suministro aire (T)
102
298
Presin del aire (P)
Atm absolutas
Eficiencia de transferencia del aire, E

Flujo de aire por volumen de reactor (WM)
Flujo de aire (F)
0,15
0,66
657
Laire- L-1' min-1
Consideracin o
Referencia
mmolesoz- L-1' h-1
Temperatura
fermentacin
Presin de
trabajo
< 0.7
tairemin-t
2.2.2.3. Potencias de agitacin

Se estimaron las potencias de agitacin sin y con aireacin del equipo. El segundo valor, con aireacin,
es sustancialmente menor al primero por efecto de la presencia de burbujas de aire en el medio. Sin
embargo dado que se efectuaran fermentaciones con suspensiones desnitrificantes (anxicas), se
utilizara como valor de diseno la potencia de agitacin sin aireacin.
-Pgina
62 de 130-

2.1.1.4. Transferencia
Enero 2010
de calor
Se calcul el calor metablico generado por los procesos de nitrificacin y desnitrificacin y se evalu el
calor transferido entre el biorreactor y el medio ambiente producto de las diferencias de temperatura
entre ambos.
El metabolismo celular es una reaccin global exotrmica. Por lo tanto si se desea operar una
fennentacin a una temperatura constante prefijada (25 "C para las fennentaciones consideradas), ser
necesario remover ese calor de fermentacin (OF).
En la Tabla N 81 se presentan los valores respectivos de las distintas formas de calor y las
consideraciones efectuadas para su estimacin.
Tabla N 81: Cuantificacin de las formas de calor consideradas en el balance de energia

efectuado al biorreactor.
Valor
Parmetro
Calor
Calor
Calor
Calor
Calor
Calor
Calor
de fermentacin nitrificacin (OFN)

de fermentacin desnitrificacin (OFO)
de agitacin nitrificacin (QAN)
de agitacin desnitrificacin (OAO)
transferido por las paredes (OP)
total a intercambiar nitrificacin (OIN)
total a intercambiar desnitrificacin (010)
2188
10000
1219
1000
-1177
14583
12177
Unidades
Kcalh-t
Kcal h-1
Kcalh-t
Kcalh-t
Kcal'h-1
Kcal-h-t
Kcalh-t
Consideracin
Referencia
T ambiente 35D
Como se aprecia en la tabla los procesos de nitrificacin requieren de un intercambio de calor superior al
de los procesos de desnitrificacin.
Equipo de enfriamiento
El sistema de enfriamiento fue diseado para satisfacer la condicin de intercambio de calor ms
exigente de los procesos de nitrificacin con un margen de seguridad de 10%.
Como sistema de enfriamiento se selecciono un serpentin sumergido en el caldo de cultivo, dado su bajo
costo y la alta rea de transferencia de calor que permite. Como fluido refrigerante se utilizara agua.
En la Tabla Ir 82 se presentan los distintos valores de diseo del sistema de enfriamiento y las
consideraciones efectuadas:
-Pgina 63 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
Tabla N' 82: Dimensiones del sistema de enfriamiento seleccionado: serpentfn

sumergido.
Valor
Parmetro
Coeficiente global de transferencia de calor (U) 500

Superficie de intercambio requerida (AS)
2.15
Dimetro tubo serpentfn
1
largo serpentrn (l)
26.9
Radio serpentln (R)
0.3
Avance serpentin (k)
0.1
Numero de vueltas (nV)
14.91
Altura serpentfn (HS)
1.49
Unidades
Consideracin o
Referencia
Kcal' h-1 m-2 DC-1

m2
pulgadas
m
m
m
m
2.1.1.5. Esterilizacin
Se estimaron los flujos de vapor necesarios para esterilizar el biorreactor y el medio de cultivo. De ellos
podr ser seleccionado el equipo de suministro de vapor adecuado.
Se estimo la cantidad de energia necesaria, calor, para efectuar el proceso de esterilizacin,
0
considerando que se desea obtener una temperatura en la superficie de la unidad de 121 C. la
superficie de esterilizacin corresponder a la suma del rea de manto y las reas de las tapas de alto y
fondo de la unidad. los resultados obtenidos y las consideraciones efectuadas se presentan en la Tabla
N 78.
Tabla N' 83: Flujo de vapor requerido para esterilizar el biorreactor y consideraciones
efectuadas.
Parmetro
Valor
Unidades
Coeficiente de conveccin
Superficie de esterilizacin manto
Superficie de esterilizacin tapas
Calor requerido
Calor de condensacin del vapor
Flujo de vapor
25
6.7
2.27
30000
538.9
60
Kcal h-t m-2oC-1

m2
m2
Kcalh-t
Kcalkg-1
Kg'h-1
-Pgina 64 de 130-
Consideracin
o Referencia
121
121
-c,
-c,
1 atm
1 atm

Enero 2010
2.1.2. LA Y-OUT DE PROCESOS

En la Figura N 84 se aprecia un esquema tipo lay-out del fermentador y de los sistemas auxiliares del
proceso. En diferentes colores se muestran los sistemas auxiliares ms importantes para la operacin.
Figura N' 84: Lay-out del fermentador y de los sistemas auxiliares del proceso.
AIre
s: PM
M.~-up
~":J
C~
Gv
-H
W
,t,'re
<.
. Cdtvc
2.1.3. SISTEMAS AUXILIARES

Sistemas de refrigeracin
Permite retirar el calor generado por el proceso fermentativo. Consiste en un intercambiador interno tipo
serpentln que retira el calor de fermentacin, mediante circulacin de agua fria. Esta agua a su vez, es
reciclada por una torre de enfriamiento, donde se desprende el calor retirado del fermentador y reinyectada al equipo a travs de una bomba. En la torre de enfriamiento se considera un "make-up" de
agua para reponer las perdidas por evaporacin.
En este sistema, existen 2 lazos de control bsicos:
~
~
Lazo Control Temperatura Fermentador. este lazo de control obtiene la temperatura del fermentador
y acta sobre la bomba de recirculacin, que inyecta agua fria al serpentln del fermentador.
Lazo Control Nivel agua en enfriador. este lazo mantiene el nivel dentro de un rango que permita a
la bomba de recirculacin operar en forma correcta. El lazo de control verifica el nivel de agua y
acta sobre una vlvula de "make-up" que rellena el sistema con agua fresca.
Permite controlar el proceso de esterilizacin mediante inyeccin de vapor directo al fermentador.
proceso de esterilizacin se ha diseado para la esterilizacin del fermentador vaclo.
-Pgina 65 de 130-
El

PROYECTO N 206-5467
);>
Enero 2010
Lazo de control esterilizacin: un sensor de presin verifica que la presin dentro del fermentador es
de 1 atm manomtrica durante el proceso de esterilizacin, actuando sobre la vlvula de ingreso de
vapor.
Sistema de control del Ph

Permite controlar el pH dentro de un rango predeterminado para la fermentacin. El control se hace en
base a una solucin de base o cido segn se requiera para la fermentacin.
);>
Lazo de control pH: el sensor de pH mide el pH de la fermentacin y acta sobre la bomba de
adicin de solucin de control.
Sistema de aireacin
Este sistema es el que permite aportar el oxIgeno necesario para la fermentacin aerobia.
El sistema se compone del impulsor de aire y del filtro asptico. Adems de esto se debe considerar
como medida de seguridad una vlvula check, para evitar que en un corte de suministro de aire, el
contenido del fermentador se devuelva por esta linea.
Sensores adicionales
Se ha solicitado la incorporacin de otros sensores que no estn incluidos en lazos de control, los que se
muestran en la figura con las siguientes siglas: OD: oxIgeno disuelto;Tb: turbidez; Rx: potencial redox.
-Pgina 66 de 130-

Enero 2010
2.1.4. PLANOS CONSTRUCTIVOS
MOTOR
seu.oACEPTICO
ROUPEDOR ESPUI
E..E AGITADOI1
SOPaITE
SERPEN1
SERPENT1N
_ AGITADOR
AIREADOR
Flaura NO 85 v N 86: Diseflo del biorreactor
-Pgina 67 de 130-
Figura N' 87: Esquema interior del

biorreactor

PROYECTO N 206-5467
2.1.5. INSTRUMENTACIN
Y CONTROL
A continuacin se indican los parmetros
controladores en los lazos de control.
1.
Enero 2010
de seleccin
para los instrumentos
requeridos
y para los
TEMPERATURA (P)
En este caso, corresponde a la temperatura del fermentador.
Parmetros para seleccin de Instrumento

Tipo
Carcasa
Unin de montaje
Otros
Conexin a controlador
2.
pH
PT100
Acero inoxidable
%"NPT
Esterilizable
La requerida por el controlador

Galvnico o polarogrfico
Metlica o plstica
%nNPT
Recomendado para operacin en
fermentadores
La requerida por el controlador
Tipo
Carcasa
Unin de montaje
Otros
3.
POTENCIAL REDOX (RX)

Sensor utilizado en procesos especiales, donde este parmetro puede ser importante para el buen
desarrollo de la fermentacin.

Metlica o plstica
%"NPT
Recomendado para operacin en
fermentadores
No requerida
Carcasa
Unin de montaje
Otros
-Pgina 68 de 130-

PROYECTO N 206-5467
2.1.6. ADQUISICION
Enero 2010
DE EQUIPOS PARA LA PLANTA
Para la seleccin de los equipos e instrumentos, se realiz un acabado trabajo de bsqueda de

proveedores, dado que prcticamente no existe proveedores despeclficos de equipos para plantas
biotecnologicas.
Por lo anterior se seleccion entre los preveedores existentes que ofrecieron
alternativas que fuesen adaptables a los requerimientos de la planta y que ofrecieran una buena relacin
precio/ calidad/plazo de entrega.
A continuacin un detalle de los rtems en que se invirti para la planta piloto asi como los proveedores y
el sistema al que corresponden segn el diseo anterior descrito .
:.
.:.
BIORREACTOR:
Proveedor: Gacsinox
Descripcin: Estanque de acero inoxidable 316 L da capacidad 1 m
SISTEMA DE ENFRIAMIENTO
Enfriador (chiller)
.:.
Proveedor:
Anwo
Descripcin: Enfriador para agua de refrigeracin, Flange, Junta elstica
SISTEMA DE ESTERILIZACiN
Generador de Vapor (caldera)
Proveedor: Combustin Integral
Descripcin: generador de vapor Marca QTA/Modelo: FLLR-100 / N1

Serie CI-010.
Accesorios generador de Vapor
Proveedor: Combustin integral
Descripcin: Estanque agua de alimentacin 300 L

Chimenea altura 6 m, diam 200 mm
Estanque preparacin medios de cultivo
Proveedor: Gacsinox
Descripcin: Estanque acero inoxidable 316 (300 1)
Bomba recirculacin para estanque de medios de cultivo
Proveedor: Punto hidrulico
-Pgina 69 de 130-

.:.
Enero 2010
Descripcin: Bomba para recirculacin medios cultivo
SISTEMA DE FILTRACiN
Filtros
Proveedor: Filterpore
Descripcin: 3 Carcasas: 3 pulg., 1 pulg., O, 22 pulg
Bomba Filtracin
.:.
Proveedor: Punto hidrulico
Descripcin: Bomba para filtracin de medios de cultivo
SISTEMA DE AIREACiN
Filtro de aire
Proveedor: Filterpore
Descripcin: Opticap XL 4W/Aervent, Carcasa de Acero
Impulsor de aire: soplador
.:.
Proveedor: Busch Chile S. A.
Descripcin: soplador trilobular Cat Modelo WD0040AP
SISTEMA DE LIOFILIZACiN
Liofilizador
.:.
Proveedor: Ivens
Descripcin: Liofilizador de sobremesa modelo L 101
INSTRUMENTACiN
y CONTROL
Controlador de pH
Proveedor: Hanna Instruments Ltda.
Descripcin: Controlador de pH modelo H1504224-2
Electrodo de pH
Descripcin: Electrodo pH modelo HI6101805
-Pgina 70 de 130-
y Cartucho 0,2 micras

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
Bomba control pH
Descripcin: Bomba dosificadora (2 unidades)
Accesorios controlador pH
Descripcin: Soporte electrodos HI6050, Solucin

solucin limpieza y solucin almacenamiento
pH 7.01,pH
4.01,
pH 10.01,
Medidor de oxigeno disuelto
.:.
Descripcin: medidor de oxigeno disuelto modelo HI9147-04
OTROS ACCESORIOS
Motor variador de frecuencia
Proveedor: Dimet Ltda.
Descripcin: motor elctrico Eberle % HP 380 Volt.
Medidor de Flujo
Proveedor: Vignola industrial
Vlvulas
Proveedor: Veto y Cia Ltda.
Descripcin: vlvula solenoide NC inoxidable, vlvula solenoides NC uso general.
Si bien no existen en Chile proveedores de equipos e instrumentacin espectca para biotecnologla a

escala piloto y que est al alcance de este proyecto, se seleccionaron proveedores que tenan equipos
operables a esta escala y que se pudieran adaptar a los requerimientos del proyecto. El nico
inconveniente de trabajar con sistemas adaptados es que, muchas veces, el proveedor es una pequel'\a
empresa, que no puede responder a la velocidad que se necesita. Por ello la causa de que varen ciertos
tiempos y duracin de actividades contempladas en el proyecto respecto a la carta Gantt.
-Pgina 71 de 130-

PROYECTO N 206-5467
ACTIVIDAD
Enero 2010
2.2. PRODUCCION PILOTO
Fecha de ejecucin:
Mes 11-Mes 17 (Agosto OS-Febrero 09)
Objetivo
El objetivo de esta etapa fue hacer una produccin prototipo de tabletas biorremediadoras
la evaluacin in situ del producto.
para realizar
Descripcin:
Esta actividad implica:
2.2.1. PUESTA EN FUNCIONAMIENTO
DE LA PLANTA PILOTO
Cabe decir que inicialmente en el proyecto se consider el montaje de la planta piloto para la produccin
prototipo en las instalaciones de la empresa de Biotecnologias Antofagasta S.A. en Antofagasta, pero
dicha empresa se traslad a Santiago (Comuna de !\Iunoa), donde no disponian de los espacios fisicos
para la instalacin de los equipos lo cual dificultaba su operacin y cumplir con las normas de seguridad.
Por lo tanto, previo acuerdo entre la empresa subcontratada Biotecnologia Antofagasta y Laboratorios
Recalcine, se decidi subcontratar otras instalaciones como Laboratorios Dukay S.A., empresa que es
de confianza de Recalcine y asl poder disponer del espacio adecuado para la instalacin de los equipos
y cumplir con los requerimientos de seguridad en su operacin.
Dicho cambio de ubicacin fue informado a la Subdireccin de Innova Chile mediante Oficina de Partes y
aprobado mediante pronunciamiento nO299 de fecha 25/0212009, ya que la ubicacin de la planta fue
constatada en terreno por la ejecutiva tcnica, corroborando que cumplla los requisitos tcnicos para una
adecuada ejecucin del proyecto.
Una vez habilitado el nuevo espacio para la instalacin de la planta piloto y teniendo todos los servicios
de agua, gas y electricidad operativos, se comenz con el montaje de la planta, es decir, la integracin
de todos los equipos en unea para la fabricacin de biomasa. Para ello, se elabor un instructivo para su
montaje (anexo N' 2).
Una vez armada la planta y con las conexiones de los equipos finalizadas se llev a cabo la puesta en
marcha de la planta, para lo cual fue necesario hacer una baterla de pruebas previas tales como:
Instalacin de bomba dosificadora para la caldera

Tratamiento anticorrosivo de la caldera
Tratamiento del chiller y puesta en marcha (enfriador)
Revisin del sistema de filtracin (fase aerbica)
Calibracin del pH metro, del sensor de oxigeno disuelto y de la temperatura
Graduacin del reactor, del estanque auxiliar, del contenedor de aguas limpias, del
contenedor de Riles
Esterilizacin del reactor y del estanque auxiliar
Pruebas hidrulicas
Pruebas de esterilizacin y vapor
Puesta a punto de todos los equipos y conexiones entre ellos
-Pgina 72 de 130-
--------------~

PROYECTO N 206-5467
A continuacin se muestran fotos de los equipos
Figura N 88: caldera y estanque de

la cekters.
Enero 2010
y de planta piloto:
Figura ~
cultivo.
Figura ~ 90: Sistema de enfriamiento y

estanques de aguas limpias y Riles.
-Pgina 73 de 130-
89: Estanque auxiliar para medio de
Figura ~ 91: Biorreactor y panel de control

PROYECTO N 206-5467
Figura
Ir
92: vista exterior planta biomasa
Figura NO 93: vista interior planta biomasa

En el DVD anexo se puede ver una grabacin de la planta piloto.
-Pgina 74 de 130-
Enero 2010

PROYECTO N 206-5467
2.2.2. OPERACIN
Enero 2010
DE LA PLANTA BIOMASA
Para la operacin de la planta biomasa se elabor un protocolo para estandarizar el proceso, el cual se
encuentra inserto como anexo N' 3 (slo en formato OVO).
En el siguiente diagrama N' 94 se muestra un esquema del flujo del proceso de la planta biomasa.
LABORATORIO
MICROBIOLOGICO
INOCULO
Nubientes
Biorreactor
Aireacin
Centrifugacin
Presin
-1
I
]-V810cidad.
rpm
SOLUCION DESCARTE
1-
Liofilizacin
Biomasa en POlVO)
D
Detonante--
( Mezclado
y Tableteado]-
Excipientes
Envasado Final)
TABLETA
BIORREMEDIADORA
Figura N' 94: Diagrama de flujo del proceso.
-Pgina 75 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
La primera etapa: laboratorio microbiolgico corresponde con e escaamiento ae oactenas, es oecu, la

aeneraci6n de forma secuencial de los in6culos bacterianos. aue son eJ ounto de cartida del oroceso a
escala piloto.
En la flaura N 95 se ouede ver el escalamiento de una de las cecas (DN-Iaao) desde 5 mi a 250ml. 2L v
QI
Figura ti" 95: escalamiento cepa DN

Este escalamiento se hizo con cada una de las cepas que constituyen la base del
biorremediador. v aue son 4:
1. Ceca N-Mar: nitrificante de mar
2.
ceoa
3.
Cepa N-LaQo: Nitrificante de laoo
4.
Cepa DN-Lago: Denitrificante de lago
DN-Mar: Denitrificante de mar
-Pgina 76 de 130-
producto

PROYECTO N 206-5467
2.2.3. PRODUCCiN
Enero 2010
PROTOTIPO
Objetivo
Fabricacin
reales.
de tabletas
necesarias
para
evaluar
la eficiencia
del
producto
en condiciones
Descripcin
La produccin se dividi en dos lineas productivas:
1.
Biomasa para sedimentos marinos
2.
Biomasa para sedimentos lacustres.
A su vez, cada Ifnea productiva tiene dos fases:

1. Fase microorganismos nitrificantes
2.
Fase microorganismos
2.2.3.1. PRODUCCiN
desnitrificantes
Produccin Escala Laboratorio

Esta primera etapa de la produccin
anterior, tuvo una duracin de 30 dias
PARA SEDIMENTOS
que se refiere al escalamiento
mencionado
y el volumen que se obtuvo fue de 10 L.
Produccin a Escala Piloto (planta biomasa)

Tuvo una duracin de 30 das y los ciclos fueron:
2 ciclos de DN-Lago ( 1000 L c/u)
2 ciclo de N-Lago ( 1000 L)
Produccin de las tabletas biorremediadoras para lago:

Centrifugacin ( 3 dfas)
Liofilizacin ( 15 dias)
Tableteado y envasado (5 dfas)
Obtencin de 50 tabletas de 100 grs. cada una.
-Pgina 77 de 130-
LACUSTRES
en el punto

Enero 2010
En las grficas N 96 Y N 97 se pueden observar las curvas cinticas obtenidas en estos ciclos de
produccin de lago:
Concentracin Celular vis Tiempo
DN Lago
J-'OE-n?
,---
1I.(lE"OO
L)
-
--- ----
i(''''F-''~
r--
.f.lIIl-:-+-I)H
~.'-hIF
(2000
~
BoOE+r:,:?
j.(IOE.08
f-
_
/1 ___
/1
---
..nrl
./
.-A'
t->
-"
30
20
TlelTllpo
Cdios,
Grfica N 96: concentracin celular vs tiempo DN-Iago

N Lago
::::i
E
I.40E"'9
1.20E+09
.!:!.
:v
..
!
4.00E08
O.OOE-+-Ol)
./
./
2.00E08
~
<..>
Grfica
2_2_3.2_PRODUCCiN
------
"IR
-lS
, .00'::+09
8.00E*08
t";.(U)E"
L)
1.00E*09
~'"
(1000
1.3QE+Utl
---
12
14
".;--
./
8
lO
10
18
Tiempo (dias)
Ir 97: concentracin celular vs tiempo N-lago
PARA SEDIMENTOS
MARINOS
~ Produccin Escala Laboratorio

Esta primera etapa de la produccin que se refiere al escalamiento, tuvo una duracin de 30 dias y
el volumen que se obtuvo fue de 10 L
~ Produccin a Escala Piloto (planta biomasa)
Tuvo una duracin de 30 dias y los ciclos fueron:
2 ciclos de DN-Mar ( 1000 L c/u)
2 ciclo de N-Mar ( 1000 L)
~ Produccin de las tabletas biorremediadoras para mar:
Centrifugacin ( 3 dfas)
Liofilizacin ( 15 dlas)
Tableteado y envasado (5 dlas)
Obtencin de 50 tabletas de 100 grs_ cada una.
En las grficas Ir 98 Y N 99 se pueden observar las curvas cinticas obtenidas en estos ciclos de
produccin de mar:
-Pgina 78 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010

ON Mar (2000 L)
1.40E+09
*..
./
ll.00E+09
!
~
.1
8.00E+08
6.00E+08
4.00E+08
2.00E+08
1.20E+09
O.OOE+OO
~
5
7
/
./
1,.-'"
Ir 98: concentracin
I
I
25
20
Tiempo
Grfica
~
15
10
35
30
(dlas)
celular vs tiempo DN-mar
Concentracin celular vis Tiempo

N MAR (1000 L)
-~----
1.40E+09
1.20E+09
1.00E+09
. 8.00E+08
6.00E+08
lo:!!
4.00E+08
2.00E+08
Grfica
I
I
-- -----;-----iI
...,/'
8
10
T1empo (dles)
Ir 99: concentracin
l.-----
-4
O.OOE+OO
l
I
12
14
16
celular vs tiempo N-mar
Como resultado de esta etapa se obtuvieron las tabletas biorremediadoras necesarias para llevar a cabo
las pruebas de eficacia en condiciones reales en los centros de cultivo de mar y centro de cultivo de lago.
2.2.4. OBTENCiN
DE PERMISOS DE LA SUBSECRETARA
DE PESCA
Para poder llevar a cabo las pruebas en terreno cumpliendo con lo establecido en el Reglamento
ambiental para la Acuicultura (RAMA), fue necesaria una Autorizacin por parte de la Subsecretaria de
Pesca. Para la obtencin de dicha Autorizacin se present una solicitud que incluy:
Protocolo de las pruebas
Resumen ejecutivo del proyecto
Detalle de los centros de cultivo asignados por la empresa Marine Harvest para el desarrollo
de las pruebas
Tras largos meses de espera, la Subsecretaria de Pesca otorg ambas Autorizaciones:
.:. Res. Ex. N 2683 de fecha 15 Octubre 2008 para el centro de Mar .
:. Res. Ex. N 718 de fecha 24 Febrero 2009 para el centro de Lago.
-Pgina 79 de 130-

PROYECTO N 206-5467
ACTIVIDAD
Enero 2010
2.3: EVALUACiN IN SITU DEL PRODUCTO BIORREMEDIADOR
Fecha de ejecucin:
Enero 2009- Agosto 2009
2.3.1. PRUEBAS DE EFICACIA EN AGUA DE MAR

Objetivo
El objetivo fue presentar un diseo de pruebas para la evaluacin del producto biorremediador
(Unidades Biorremediadoras),
de fondos aculcolas mediante la medicin de parmetros en 105
sedimentos marinos con respecto a valores iniciales (TO), luego de la aplicacin del producto
biorremediador.
Descripcin
Para cumplir este objetivo, Recalcine, solicit a Marine Harvest un centro de cultivo para llevar a cabo la
experiencia de biorremediacin en un piso marino que haya sido sometido a un impacto antrpico por
algunos aos, El centro escogido por Marine Harvest estaba ubicado en Chilo, y se encontraba en
descanso pero que tuvo actividad productiva por varios aos.
Con fecha 22 de enero de 2009 y mediante buceo autnomo, se instalaron unidades biorremediadoras
de acuerdo a cantidad y disposicin espacial definida, momento que es considerado como tiempo O (T o)
(ver filmacin de la implantacin contenida en formato electrnico del presente informe). Desde esa
fecha, a intervalo de aproximadamente 7 a 10 dlas se efectuaron una serie de monitoreos ambientales.
El trabajo incluy por parte de la empresa Geeaa Ltda. la elaboracin de los servicios de muestreo, parte
de 105 ensayos de Laboratorio y su anlisis, de manera de evaluar, entre otros, los resultados desde un
punto de vista ambiental y el cumplimiento normativo atingente a la acuicultura vigente (OS 320/00 Y
Resolucin N 3.411/06).
Para lograr el objetivo planteado se destac:
a.
b.
c.
d.
Diseo del rea de estudio, nmero de estaciones, disposicin espacial y eleccin de

variables a monitorear.
Monitoreo de las condiciones ambientales a un tiempo "cero" (TO), momento previo a la
instalacin de las unidades biorremediadoras.
Filmacin del proceso de instalacin mediante buceo en el sedimento de las unidades
biorremediadoras.
Monitoreo de seguimiento ambiental semanal del sector en estudio (T1 a T3).

El diseo final del trabajo contempl la informacin necesaria para evaluar desde un punto de vista
ambiental los posibles cambios en el sedimento atribuibles a las unidades biorremediadoras. El detalle
del alcance se encuentra detallado en la Tabla N" 100.
-Pgina 80 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
Tabla N 100. Alcance del trabajo centro mar

0bItervacI0nae
118m
Monitoreo Ambiental de Sedimento
Incluye UN (1) muestreo completo de variables

ambientales fisico-qumicas y biolgicas (*) con
DRAGA + OTICORER
Instalacin de Unidades de
Bacterias mediante Buzo y
filmacin del proceso
Incluye la instalacin del set con 3 unidades (con

buzo) y la filmacin correspondiente. Aplica para 15
puntos de siembra
Informe Inicial
Informe de Base con el anlisis integrado de todas

las variables ambintales monitoreadas
TRES (3)
muestreos
intermedios
Incluye TRES (3) muestreos completos de variables

ambientales fisico-quimicas y biolgicas (1) con
DRAGA + OTICORER. Se excluye Granulornetra y
Fauna bentnica.
Muestreo Final
Incluye UN (1) muestreo completo de variables

ambientales flsico-qulmicas y biolgicas (*) con
DRAGA + OTICORER
Informe FINAL
Informe Final integrado
Anlisis FINAL integrado de la informacin de los

monitoreos ambientales monitoreadas durante el
estudio.
Muestreo Inicial
Nota: La metodologia empleada en el anlisis de las variables contempladas en el estudio,

correspondieron a las estipuladas en la Resolucin N 3411/2006 de Subsecretara de Pesca.
Area de Estudio
El estudio se efectu en el centro de cultivo perteneciente a Marine Harvest, localizado en Chilo, Regin
de Los Lagos (ver Figura N 101). El centro de cultivo, durante el tiempo que dur el seguimiento
ambiental no estuvo en funcionamiento y no se encontraba instalado ningn artefacto naval, jaulas de
cultivo, etc.
rea de estudio
Figura ND 101: Sitio de estudio (Referencia de Imgenes; Google Earth V. 4.3.7284.3916 (beta).
-Pgina 81 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
Diseo del muestreo

La Figura N 102 esquematiza la situacin del centro de cultivo en relacin a la lnea de costa,
Concesin Marltima (CCMM), jaulas, etc. Los mdulos con las balsas jaulas que aparecen corresponden
a la situacin existente durante la ltima INFA realizada en este centro de cultivo, y que aconteci en
febrero del ao 2007, ano en el cual dej de operar el centro de cultivo. Esto implica que el centro en
cuestin, estuvo en descanso aproximadamente 1,5 anos previo al momento del inicio del implante de
las unidades biorremediadoras.
C.C".M.
I
I
ControI1
AREADE
,/
ESlUDIO
i'-::'
Control 2
TIerra
Om
200m
Figura N 102: Afea de estudio en el contexto de la

linea de costa y Concesin Marftima.
El rea de estudio en donde se instalaron las unidades biorremediadoras, se ubic en el mdulo norte
de la concesin maritima (CCMM) (ver Figura N 102). Esta rea rectangular, se dividi imaginariamente
en 30 cuadrados de 15 m * 15 m evocando un tablero de ajedrez (ver Figura N 104).
En estos cuadrantes, se eligieron en forma intercalada 15 reas para depositar un set de tres unidades
biorremediadoras (celdas negras, ver Figura N 104). Estos 15 cuadrantes fueron asignados como
Tratamiento (T) y fueron numerados de T1 a. Estos puntos fueron marcados mediante bollas (botellas),
las que fueron lastradas mediante muertos de 15 Kg. (Figura N 105 Y 106),
Las 15 cuadriculas restantes (blancas), fueron usadas como Referencia (R) y fueron rotuladas como R1
a R 15 Y sirvieron para contrastar al mismo tiempo el o los efectos
ambientales
de
las
unidades
biorremediadoras sobre el sedimento de las zonas de tratamiento.
-Pgina 82 de l30-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
Adicionalmente, tal como aparece en la Figura N 102, se utilizaron dos estaciones Control ubicadas en
los 2 vrtices de la CCMM ms cercanos a la costa. Estas estaciones, son las estaciones que en un
INFA (documento exigido por Subsecretaria de Pesca), serian
las estaciones con las cuales se
contrastarfan los resultados obtenidos en la periferia de cada uno de 105 mdulos de cultivo, metodologa
que no ser utilizada en este estudio por estar fuera del alcance del mismo.
La profundidad media del sector fue de 40 m, razn por la cual se utiliz buzos especialistas de la
Empresa Ecosub (Figura Ir 107 Y 108) para la filmacin del proceso de siembra de las unidades
biorremediadoras.
Foto Ir 103: Unidades Biorremediadoras: Fotografa

tomada mediante buceo. Se observan las tres
unidades biorremediadoras depositadas en cada uno
de los 15 puntos de Tratamiento.
Figura fIO 104: Area de Estudio. Nomenclatura de la

disposicin espacial del set tratamiento con unidades
biorremediadoras utilizadas originalmente por los
buzos durante la filmacin Submarina.
om
--
50 m
-Pgina 83 de 130-
--------------------
---

Figura
Enero 2010
N' 105 Y 106: Pesos (muertos) utilizados para individualizar y georreferenciar cada
punto de tratamiento
Figura N' 107 Y 108: Preparacin de los buzos encargados de sembrar las unidades biorremediadoras
durante la campana en tiempo TO.
Las muestras de sedimento se tomaron en estaciones georreferenciadas mediante un GPS Garmin Map
75 (+/5 m), utilizado unidades planas UTM (Universal Transverse Mercator).
Las muestras se obtuvieron desde una embarcacin mediante draga Ponnar de 0,1 m2 de rea. Se
intent la colecta mediante OTICORER, pero las caracter!sticas del sedimento (poco fango) impidieron
un resultado efectivo. En el monitoreo Tiempo 0, las muestras las tomaron los buzos, llenando ellos
2
mismos los corer. De ah! en adelante, se muestre usando una draga de 0,1 m , y submuestreando
-Pgina 84 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
mediante el uso de los corer de dimetro interno de 90 mm, de manera de asegurarse que en cada uno
de los monitoreos se colectara slo los 3 primeros cm superficiales del sedimento (Figura N 109 a 112).
Las muestras de agua fueron colectadas del agua superficial del contenido en el corer (Figura N' 115).
Las muestras para los anlisis de fauna fueron fijadas "in situ" mediante una solucin de formalina-agua
de mar al 10%. Todo el material recolectado, debidamente depositado y rotulado en bolsas de polietileno
con cierre hermtico, fue almacenado y transportado al laboratorio a baja temperatura utilizando bolsas
de hielo.
,.,....
Los anlisis efectuados se encuentran en la siguiente tabla:
_.
-c
~'
'a.Q'h20D9
. l)3.O2~ 1,
-
11eQaao3
1().()2..;20Q9
19-02-2009
pH
In situ
REDOX
In situ
M.O.T.
Laboratorio
GRANULOMETRIA
Laboratorio
FAUNA
Laboratorio
NOTA: Todos los muestreos, ensayos de variables ambientales y anlisis in situ fueron realizados
por personal de Geeaa Ltda.
Figura N 109
a 112: Uso del corer durante el estudio
-Pgina 85 de 130-

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Figura N 113 Y
Enero 2010
114: recoleccin del sedimento en bolsas de polietileno
Figura ~ 115: Obtencin de agua de los primeros

centlmetros del sedimento usando el carero
-Pgina 86 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
2.3.1.2. Resultados
Contenido
de Materia Orgnica
La materia orgnica en el sector analizado es baja. No obstante, como lo demuestra la Figura N 116, se
aprecia claramente que el sector Nor-Oeste del rea monitoreado es el que contiene mayor contenido
porcentual de materia orgnica (2,4 %). Tal como se aprecia, esta regin, est asociada con la zona
donde estuvieron ubicadas las balsas jaulas del centro de cultivo. Se aprecia tambin que los controles
presentaron un bajo contenido de materia orgnica 1%).
C.C.M.M.
ConIroI1
/~~~
AREADE
- ESTUDIO
~1IO*I6n
--J8u''<,
T~
2,4 %
'I,_---~
2.1 %
1.8%
CooIroI2
Dm
200m
Figura NO 116: Distribucin espacial del contenido de MOT en el tiempo 0(TO)
-Pgina 87 de 130-

PROYECTO N 206-5467
["~O"~
Enero 2010
Figura N 117: Reagrupacin de las estaciones en niveles. Ntese, que las corrientes provienen desde
el Noroeste y esto genera un arrastre de sedimento y material biorremediador en direccin Sureste,
generando un efecto acumulativo en las estaciones del Nivel 3 y 4.
Los resultados indican que las variaciones observadas en el contenido de MOT a travs
del
tiempo
en la estaciones de muestreo es bastante heterognea. Las corrientes del sector tienen el potencial de
generar un arrastre o transporte efectivo de partculas en direccin Sureste. En este caso particular, tal
transporte se habra verificado desde el Noroeste hacia el Sureste (Figura N 117), Y claramente las
estaciones de muestreo situadas en la cuarta columna (Nivel 4, estaciones 12, 13, 14 Y 15, son las que
tienen la mejor oportunidad de ser beneficiadas por la actividad biorremediadora de las unidades
implantadas, pues adems se generara un efecto acumulativo de la actividad biorremediadora producto
de material activo proveniente de las unidades biorremediadoras sembradas en el Noroeste. Esto ltimo,
durante el anlisis de la informacin, sugiri la agrupacin de las estaciones de monitoreo en 4 niveles,
tal como se observa en la Figura N 117. De esta manera, se encontr que los mayores cambios
ocurrieron en los niveles 3 y 4. Estos resultados se encuentran en la tabla N 118.
Los resultados indican que en las estaciones de Tratamiento los mayores cambios porcentuales en el
contenido de MOT se detectan en los niveles 3 y 4, Y a los 20 dias de iniciado la experiencia. Al da 29
se aprecia que la tasa de degradacin de MOT disminuye notablemente. Los cambios en el promedio de
MOT es significativo (p < 0,05) al dia 20 del nivel 4. Los porcentajes de disminucin al dfa 13, son
significativos en el nivel 2, 3 Y 4. Al dia 20 y 2 9 no existen diferencias significativas.
Sector
Nivel
N01
de dlas transcurridos
1.113
1.120
1.28
39,65
47,63
27,63
-15,91
9,58
-1,58
N02
-6,63
-28,88
-13,7
N03
-11,74
-30,79
N04
-11,51
Tabla N 118: Porcentaje de cambiO en el contenido de MOTentre la primera y las
sucesivas campaas, ordenadas por sector y nivel analizado.
Tratamiento
-Pgina 88 de 130-

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Enero 2010
TrlllllmienlD
ND4
N03
N02
N01
3,0
2,5
1,5
! !
1
1
1,0
!
1
13
20
29
13
20
29
13
20
!
"1"
29
13
20
29
IflDa
Figura ND 119: Cambios en el contenido de MOT de las

estaciones de Tratamiento por nivel y dla de seguimiento
Cambios
en el ORP del sedimento
La Tabla ND 120 Y la Figura N 121, muestran los cambios promedios que experimenta el potencial de
xido reduccin en el sedimento sometido al tratamiento con las pastillas biorremediadoras.
Los
resultados indican que existe un aumento en el valor de Eh en el nivel 3 y en el nivel 4. En el nivel 4, los
cambios se hacen significativos hacia el final de la experiencia.
Tabla ND 120: Promedio de Eh por nivel y csmpee.
NIvel
Dlllde
20
29
76
58
147
144
N01
1
144
N02
81
13
142
122
N03
N04
123
116
125
196
91
136
167
264
-Pgina 89 de 130-
----------------------------------------------~-

..,1
350
250
150
100
50
..,3
..,2
300
200
Enero 2010
t-tI
Iv'
o
1
NO DiII
Figura N 121: Variaciones en el Eh por nivel y por da de muestreo
Cambios
en el pH del sedimento
Tal como lo muestra la Figura N 122, los cambios que experimenta el pH son errticos, no presentan un
patrn definido y no exhiben cambios significativos. Esto no es algo nuevo, puesto que existe consenso
que el pH no es un buen indicador de los cambios que experimenta el sedimento producto del
enriquecimiento orgnico, conclusiones derivadas de un taller organizado por Subsecretaria de Pesca en
diciembre del 2008.
..,1
II1II2
fII4
II1II3
8,0
7,8
7,6
z:
Q.
7,4
7,2
t f 11
T
6,8
1
13
20
29
13
-r-
T
I
J...
1 -
7,0
I
f 1 !1
, ,
t
20
1
29
NO D!
13
20
29
13
20
29
Figura N 122: Variaciones en el pH por nivel y por dla de muestreo
-Pgina 90 de 130-

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Cambios
en la macrofauna
Enero 2010
bentnica
Los resultados indican que en sector sometido al tratamiento con las pastillas biorremediadoras,
un incremento en el nmero de especies posterior al implante (Tabla Ir' 123).
Tratamientll
.,"'.,
I
Ola 21
11
18
,...2
12
,.."I
di 1
19
1lIa:2I
14
existe
NIvel 4
Dlli29
Ola 1
21
17
Tabla Ir' 123: Variaciones en el nmero de especies, por nivel y dfa de monitoreo
La diversidad del sector es baja, lo cual es normal considerando la existencia por aos de una actividad
acurcola. No existen diferencias significativas entre la diversidad de Tratamiento (donde se implantaron
las unidades) respecto del sector de Referencia (cuadrantes sin tratamiento).
Un anlisis rpido de los resultados, muestra como la mayor diversidad (H) de especies se sita en los
sectores donde ms tarde se detect las mayores bajas en el contenido de MOT.
Cambios
en parmetros
fsico-qumicos
Los resultados que a continuacin se presentan muestran los valores obtenidos en los muestreos de la
prueba de biorremediacin de mar de ciertos parmetros que se consideraron clave para evaluar la
eficacia del producto biorremediador.
Dichos anlisis fueron realizados por la empresa Labs&Testing, a la cual, semanalmente
muestras de sedimento y de agua obtenidas en los muestreos.
se le hizo llegar
En la tabla Ir' 124 se muestran los parmetros analizados y la metodologfa empleada para su anlisis
Tabla Ir' 124: Parmetros y metodologfa analftica
-Pgina 91 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
El estudio de estos parmetros se hizo en funcin del ciclo natural del nitrgeno (ver figura N 125), el
cual es intervenido por el efecto del producto biorremediador. Este ciclo se inicia cuando la materia
orgnica compleja se transforma en amonio al reaccionar con el oxigeno disponible en el medio.
Luego de ello se activan dos etapas:
Una de desnitrificaci6n (DN), donde se transforma progresivamente
nitroso a nitrgeno molecular. Lo anterior en condiciones anxicas y
desde nitrato a nitrito
y oxido
Una de nitrificaci6n (N), la cual ocurre en condiciones aerobias, para metabolizar (descomponer)
materia orgnica. En esta etapa el amonio se transforma en nitrato, con un paso intermedio, en que
el amonio es oxidado a nitrito y ste es luego transformado en nitrato.
El nitrato no es toxico para las especies acuticas que podrian estar presentes en el medio.
'C7
Peces
Algas y
plantas
Desechos
,400'
Amoniaco
Nitratos
~,
Nitritos
T'
Figura N 125: ciclo de nitrgeno
-Pgina 92 de 130-

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AMONIO, NH4
Los datos medidos de amonio nos muestran un aumento del orden del 72% (tabla Ir 126) entre
el tiempo inicial y 1 (dfa 13), del 54% entre el tiempo 1 y 2 (29 dfas) para luego disminuir del orden
del 70% entre los tiempos 2 y 3 (29 dfas), ellos es explicado por esta transformacin de la materia
orgnica en amonio.
Con estos resultados se puede apreciar que el sector en prueba ha experimentado los cambios
esperados segn los equilibrios reestablecidos, ya que al inicio hay formacin de especies (aumento
amonio) y transformacin a otras en tiempos posteriores (disminucin del amonio).
Es importante, tambin, apreciar la directa relacin que han tenido las transformaciones
de
amonio
con las de Nitrato, son directamente proporcionales, tal como deberla ser al existir un equilibrio.
AM ONIO mglKg
MUESTRAS
TIEM PO 2- di.
20
TIEMPO 3-dl.
29
TIEMPO O
TIEMPO 1-dla
13
E-1
6,45
11\3
205,1l3
81,26
E-2
33,35
87,81
83,6
88,07
E-3
73,94
f17,46
6145
51
E-4
38,93
70,8
tl6,33
92,26
E-5
30,55
88,26
7148
65,17
E-a
34,51
56,93
117,15
78,54
E-7
50,72
44,16
117.93
89,89
E-a
12,55
28,26
54,75
37,62
E-9
35,52
30,2
24,58
45,78
E-1O
55,09
26,05
93,31
65,15
E-H
26,01
60,71
69,44
-50,39
E-12
14,24
30,23
93,98
32,75
E-13
24,99
40,23
55,67
39,8
E-M
1'.t1
31,59
50,58
38,1
E-15
22,87
43,61
48,11
39,16
Medi.
3t73
54,51
84,1
59,52
Tabla N 126: resultados amonio por estacin y campaa de muestreo
-Pgina 93 de 130-

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NITRATO, N03
Como era de esperarse este parmetro debe comportarse en forma equivalente a lo medido para el
amonio, dado que este es el compuesto que lo origina producto de las reacciones involucradas.
Se observa ello en los resultados (tabla N' 127), en donde se aprecia que existe un aumento en
promedio del orden del 54% entre la campaa inicial (O) y la 1, del 62% entre las campaas 1 y 2, Y
luego una posterior disminucin del 68% entre las campaas 2 y 3.
NITRATO mglKg
MUESTRAS TIEMPO TIEMPO TIEMPO TIEMPO
2-dIa
3-dia 29
1-dia 13
O
20
E-1
33,65
151,89
153,65
146,94
E-2
48,15
94,97
94,72
91,91
E-3
84,21
122,55
122,19
103,85
E-4
66,43
80,14
132,26
101,59
E-5
36,26
52,36
192,59
79,9
E-6
50,49
54,38
107,79
45,66
E-7
63,06
64,69
86,62
87
E-8
31,9
28,06
96,65
55,79
E-9
39,45
37,63
81,01
127,48
E-10
30,8
78,03
104,43
91,7
E-11
48,6
52,97
75,53
37,3
E-12
40,79
82,79
62,85
23,45
E-13
36,81
55,41
88,41
46,6
E-14
29,64
37,04
132,66
50,02
E-15
34,91
46,68
154,71
65,74
Media
45,01
69,31
112,4
77
Tabla N' 127: resultados nitratos por estacin y campana de muestreo
-Pgina 94 de 130-

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FOSFATO. P03
El fosfato es parte de la materia orgnica presente en los sedimentos marinos, si bien no est
directamente relacionado con el ciclo del nitrgeno, su aumento o disminucin, demuestra
restablecimiento de los equilibrios del sistema.
Las mediciones realizadas del fosfato en el sedimento, van en directa concordancia con lo
observado en los parmetros anteriores, aumento en los tres primeros tiempos y una fuerte
disminucin en el ltimo tiempo medido, del orden del 300% (vase tabla N 128).
FOSFATOS mgIKg
MU3STRAS
11EMPOO
nEMP01-
nEMP01-
nEMP03-
dla13
cla20
dia29
6-1
2045
3437
9649
453,9
6-2
2402
3154
7007
440,3
6-3
6615
5589
8191
1130,2
E-4
1503
5537
6409
1482,7
6-5
1737
3599
4906
497,8
E-6
2797
3460
5739
352,5
6-7
2516
4244
4560
808,5
E-8
185
2717
6212
1173,5
6-9
1274
2636
5411
487
6-10
4363
2889
3606
382
6-11
1132
3456
4544
319,1
6-12
1502
2638
3957
1790,7
6-13
896
7850
3437
542,6
6-14
1166
4018
4487
407,8
6-15
1916
2440
3671
365,5
Media
2.137
3.844
5.452
709
Tabla N 128: resultados fosfatos por estacin y campaa de muestreo
-Pgina 95 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
SULFUROS, S04
El sulfuro de hidrogeno o cido sulfhdrico es un parmetro que mide las condiciones de anoxia
de
un medio, mientras ms alto, ms an6xico se encuentra el medio. Ello implica que su aumento nos
indicara que estn ocurriendo reacciones que usan oxigeno, es decir, disminuye la cantidad de
oxigeno disponible en el sistema.
Esto es as y se puede correlacionar en forma clara, al observar que en los periodos en que
este
parmetro aumenta en promedio entre un 13 a un 63% (vase tabla Ir 129), el contenido de amonio
tambin aumenta, provocndose tal como ya fue explicado reacciones que consumen oxigeno.
SULFURO mglKg
MUESTRAS
TIEMPO I
TIEMPO J- dla
20
TIEM PO S-di.
ZI
E-1
1,04
1,49
E-2
\09
1,68
E-3
1,1
1,58
E-4
2,03
1,37
E-6
1,06
1,79
E-6
1,04
1,83
E-7
1,07
1,95
E-a
1,02
1,64
E-9
1,03
1,49
E-1O
1,05
\7
E-11
1,06
1,73
E-12
1,09
1,46
E-13
1,09
1,86
E-M
1,09
1,46
E-U
1,08
1,4
1,-0
1,63
Media
Tabla
TEMPOWIa
Ir 129: resultados sulfuros por estacin y campafla de muestreo
-Pgina 96 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
El anlisis de los parmetros ambientales monitoreados, ha detectado cambios, atribuibles a las
unidades biorremediadoras depositadas sobre el piso marino de un centro de cultivo sometido a la
actividad acurcola intensiva, lo que permite sugerir el uso de las unidades biorremediadoras para lograr
una disminucin significativa del enriquecimiento orgnico del piso marino y las consecuencias
ambientales que suelen derivarse de la actividad acucola.
Los resultados obtenidos en el presente estudio muestran que posterior al implante de las unidades
biorremediadoras, se detectan cambios importantes en variables ambientales de inters ecolgico,
medioambiental y de gestin ambiental. Los resultados indican que existe un efecto en la disminucin de
la materia orgnica y un incremento en el potencial redox. Los resultados, sugieren la posibilidad de un
aumento en la dosis inicial y/o efectuar una re-implantacin de pastillas cerca del dia 20, de manera de
regular el efecto. Se prev, que estos resultados sern an ms eficaces en sedimentos con valores ms
altos de contenido orgnico (ejemplo> 10%).
Se sugiere que las corrientes del sector juegan un rol preponderante en el transporte del material
biorremediador, generando un efecto acumulativo en los sectores de mayor depositacin. Cada centro
de cultivo posee caracteristicas oceanogrficas propias. Por esta razn, se recomienda previo a la
implantacin de las unidades bioremediadoras, modelar el rea de depositacin del material orgnico
generado por la actividad acuicola, puesto que el rea de depositacin de residuos orgnicos dista de la
forma de las estructura de cultivo, es decir, no necesariamente la depositacin ocurre inmediatamente
bajo las jaulas. La modelacin del rea de depositacin, permitir adems, cuantificar espacialmente la
cantidad de material orgnico depositado en cada caso, pudiendo de esta manera establecerse una
dosis diferencial para el rea a tratar.
El contenido de materia orgnica es una de las variables que experimentaron los cambios ms
favorables. Para el caso de la materia orgnica la mayor disminucin promedio ocurri en la
medicin del dia 20 y en el nivel 4, con un promedio 30,8% de disminucin. En los dias 13 y 29,
existe disminucin de la materia orgnica pero sus promedios oscilan entre un 6 y un 13 %. Esto
permite argumentar, que el mayor efecto de las pastillas biorremediadoras se genera entre los
primeros 20 das de iniciada su siembra. Este resultado, permite argumentar que el efecto de las
pastillas biorremediadoras en el medio marino, presenta un rea de influencia mucho mayor a 15
metros y con dosis adecuadas, el promedio de disminucin de MOT bordearla un 30%, proceso que
no afecta los ensambles bentnicos, lo que adems predice una recuperacin del piso marino en
menor tiempo, comparado con los 2 a 8 aos que en forma natural puede demorarse en recuperar
un centro de cultivo sometido a la actividad aculcola
El potencial de xido reduccin, es otra variable ambiental que experimenta cambios sustanciales. A
diferencia de lo que ocurre con la materia orgnica, el patrn de incremento de los valores promedio
de Eh se mantiene en incremento hasta el dia 29. Si bien en este periodo de tiempo, la materia
orgnica ha demostrado que inicia nuevamente a incrementarse (tal vez para llegar a un punto de
equilibrio) los mecanismo por los cuales se verifican los procesos biogeoqumicos en el sedimento
han cambiado sustancialmente y el sedimento presenta caracterlsticas que permiten concluir que
predominan los procesos aerbicos u oxidativos. Este aspecto es muy novedoso, y abre la
posibilidad de observar el problema del impacto antrpico de la acuicultura (entre otros) desde otra
perspectiva (la biogeoqulmica).
-Pgina 97 de 130-

Enero 2010
Los resultados indican que no existen cambios significativos en la estructura comunitaria de los
macroinvertebrados
del sector. Ms bien, pareciera que en el sector de tratamiento se han
producido cambios favorables desde el punto de vista de la riqueza de especies, aunque
prevalezcan grupos de baja biomasa y elevada abundancia, lo que probablemente sea un aspecto
positivo si se trata de el inicio de un proceso de sucesin ecolgica encaminada a la recuperacin
del bentos.
Las variaciones medidas en el tiempo para los compuestos amonio y nitrato son los esperados en el
reestablecimiento del equilibrio del nitrgeno presente en el sistema.
Lo anterior, se complementa en una fuerte disminucin del los fosfatos, compuestos presentes en la
materia orgnica, el cual si bien no est directamente involucrado en el ciclo del nitrgeno, resulta
ser, una medida indirecta de los resultados de biorremediacin
observados, extendiendo la
biorremediacin ms all de los compuestos nitrogenados a los fosfatados.
-Pgina 98 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
2.3.2. PRUEBAS DE EFICACIA EN AGUA DULCE

Objetivo
El objetivo fue elaborar un diseo de pruebas para la evaluacin del producto biorremediador de fondos
acutcolas (Unidades Biorremediadoras), mediante la medicin de parmetros en los sedimentos de lago
con respecto a valores iniciales (To), luego de la aplicacin del producto biorremediador.
Descripcin
Para cumplir estos objetivos se solicit a Marine Harvest un centro de cultivo para llevar a cabo la
experiencia de biorremediacin en un piso lacustre que haya sido sometido a un impacto antrpica por
algunos aos. El centro escogido por Marine Harvest fue Rupanco 11,centro de cultivo ubicado en Lago
Rupanco, activo hasta un par de meses.
En este centro, mediante un sistema mecnico, se instalaron unidades biorremediadoras
de acuerdo
a cantidad y disposicin espacial definida por Recalcine (vase filmacin anexa en formato electrnico
del presente informe)
Las etapas a destacar son:
1.
2.
3.
4.
5.
Diseo del rea de estudio, nmero de estaciones, disposicin espacial y eleccin de variables a
monitorear.
Monitoreo de las condiciones ambientales a un tiempo "cero" (TO), momento previo a la instalacin
de las unidades biorremediadoras.
Filmacin del proceso de instalacin en el sedimento de las unidades biorremediadoras entregadas
por Recalcine.
Monitoreo de seguimiento ambiental semanal del sector en estudio (T1 a T3).
Monitoreo de las condiciones ambientales a un tiempo "finar (T4).

El diseo final del trabajo contempl la informacin mnima necesaria para evaluar desde un punto de
vista ambiental los posibles cambios en el sedimento atribuibles a las unidades biorremediadoras. El
detalle del alcance se encuentra detallado en la Tabla N 130.
ContenIdo
ftam
Monitoreo Ambiental de
Sedimento
Induye un (1) muestreo completo de variables ambientales

Qumicas v biolgicas 'C*) con DRAGA + OTICORER
fsico-
Muestreo Inicial (TO)
Instalacin de Unidades de
Bacterias mediante sistema
mecnico y filmacin del proceso
Induye la instalacin del set con 3 unidades y la filmacin remota

correspondiente. Aplica para 15 puntos de siembra
Monitoreos
intermedios
Sedimento
Induye tres (3) monitoreos completos de variables ambientales

fsico-qumicas y biolgicas (1) con OTICORER. Se excluye
Granulometra y Fauna bentnica.
Monitoreo Final (T4)
Sedimento
Incluye un (1) monitoreo completo de variables ambientales fsicoQumicas v biolgicas

con DRAGA + OTICORER
Tabla ~ 130: alcance del trabajo
-Pgina 99 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
Area de estudio
El estudio se efectu en el centro de cultivo perteneciente a Marine Harvest Chile, (ver Figura N
131). El centro de cultivo, dejo de funcionar slo una par de semanas previo al inicio del monitoreo y
se encontraban presentes las jaulas de cultivo, las cuales sirvieron de referencia para el estudio. Para
la realizacin de este estudio, Marine Harvest, por intermedio de Recalcine, solicitaron un permiso
especial a Subsecretaria de Pesca, permiso que est estipulado en la actual resolucin acompai'lante
del RAMA, Resolucin N 3411 del 2006.
~-Figura Ir 131: sitio de estudio

Diseo Muestrea!
Se utiliz la disposicin espacial de las jaulas del centro de cultivo para la siembra de las unidades
biorremediadoras. Se eligieron en forma intercalada 15 jaulas para depositar un set de tres unidades
biorremediadoras (circulas negros de la Figura Ir 132). Estas 15 jaulas fueron asignadas como
tratamiento (T) y fueron numerados de T1 a T15. Las 15 jaulas restantes (blancas), fueron usadas
como referencia (R) y fueron rotuladas como R1 a R15 y sirvieron para contrastar al mismo tiempo el
o los efectos ambientales de las unidades biorremediadoras sobre el sedimento de las zonas de
Tratamiento.
La instalacin de las unidades biorremediadoras (Figura Ir 133), fue efectuada con la ayuda de un
dispositivo mecnico que se encuentra en la Figura N 134, el cual llevaba adosada una cmara
de
-Pgina 100 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
filmacin Submarina en su extremo posterior. El proceso de siembre de las unidades

biorremediadoras en el sedimento fue filmado en cada punto, y una secuencia completa de este
proceso se encuentra en la Figura N' 135.
e
a
T15
TOI
ROl
e o
ROl
0-
e_ o
e- o-
e- o
PUNlOSCENTRAlB
TOO
1011
RG5
DE JAUlAS
T1Ir
.-
Ono
e
e- oo- e_
Figura
Ir' 132: Area
T13
e
eR10
0-
Om
e a
R11
Figura
R12
RU
T12
R15
T~
e~
de estudio
ti" 133: Fotograf1as subacutica de las unidades biorremediadoras.
Figura N' 134: Equipo para instalar unidades Biorremediadoras
-Pgina 101 de 130-
en e/ sedimento de/lago.

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
Figura NO 135: Secuencia de instalacin de las unidades biorremediadoras.
-Pglna 102 de 130-

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Enero 2010
Muestreo de sedimento yagua

Las muestras de sedimento se tomaron en estaciones contempladas en la Figura N 132, que fueron
georreferenciadas
mediante un GPS Garmin Map 75 ( 5 m), utilizado unidades planas UTM
(Universal Transverse Mercator).
Las muestras de agua y sedimento se obtuvieron desde una embarcacin mediante un OTICORER
(Figura ND 137, 138). Para el sedimento, se colectaron aproximadamente los 3 primeros centfmetros
superficiales (Figura N 142). In situ se midi el pH y el ORP mediante un equipo multiparamtrico
(Figura N 140).
Las muestras de agua fueron tomadas del agua superficial del contenido en el corer (Figura ND 139),
cuya agua se extrajo mediante una sonda para llenar botellas enviadas
por el laboratorio para tal
efecto. El oxgeno disuelto del agua fue medido al interior del corer con multiparamtrico (Figura N
140), obtenindose la concentracin del los primeros decimetros del agua del fondo.
Las muestras para los anlisis de fauna fueron fijadas "in situ" mediante una solucin de formalinaagua al 10%. Todo el material recolectado, fue depositado y rotulado en bolsas de polietileno con
cierre hermtico (Figura N 143), almacenado y transportado al laboratorio
a baja
temperatura
utilizando bolsas de hielo.
Los anlisis efectuados se encuentran en la Tabla N 136. Todos los muestreos fueron realizados por
personal de Geeaa Ltda. Los ensayos de variables ambientales en el sedimento fueron efectuados
por el Laboratorio de la Empresa Geeaa Ltda. Todos los anlisis tomados in situ fueron efectuados
por la unidad de muestreo de la empresa Geeaa Ltda.
AttItipst8lTl
Oxgeno
Disuelto
trico
OxyGuanJ
...-
TIeMpo'
10
1IeMpo1
Tt
TIHIpoZ
12
1I8111J103
1S
TIempo 4
T4
1HtI
MlJJtj~
PoIencial
meo
Hanna HI
Redox
991003;
SondaHl
1297
Labolatorio
M.O.T.
Resolucin
ti' 3411
Labolatorio
Granulomelrfl
Resolucin
ti'
3411
Labolatorio
Fauna
Resolucin
N" 3411
Tabla ND 136: Parmetros analizados, fecha de monitoreo y entidad que realiz los ensayos.
-Pgina 103 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Figura
Enero 2010
ti" 137: OTI-Corer con sedimento
en el tubo de muestreo.
Figura N" 138: muestreo con oticorer
-Pgina 104 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
Figura N' 139: Procedimiento para la toma de agua para anlisis qulmico.
Figura N' 140: Procedimiento para la medicin de oxigeno disuelto en los primeros centfmetros del
sedimento.
-Pgina 105 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Figura fIO 141: Procedimiento para la medici6n de Eh, pH
Enero 2010
Y Temperatura en el sedimento.
Figura fIO 137: OT/-Corer con sedimento en el tubo de muestreo.
Figura fIO 143: Almacenamiento
del sedimento para ensayos posteriores.
-Pgina 106 de 130-

Enero 2010
2.3.2.2. Resultados
Caracterizacin del sedimento
El sedimento se caracteriz por ser extremadamente fangoso (Figura N 144a), con una capa superficial
oscura que indica probablemente un sedimento reducido. Esta caracterlstica fangosa es normal en un
lago. En el corer (Figura N 144b), se puede apreciar con ms detalle la naturaleza fangosa del
sedimento, donde adems se aprecia al menos tres niveles diferenciados por color (nmeros 1, 2 Y 3),
originado por la composicin del sedimento y asociado a distinto origen geolgico o a distintos estados
de descomposicin producto de alimento y fecas depositados en el fondo, asociado a estados de
oxidacin diferentes .
. '. b)
.a)
. : : .
Figura N' 144: Sedimento caracterfstico de la zona en estudio. La foto a) muestra el

sedimento contenido en la draga y la foto b) muestra el sedimento al interior del corer.
Tcnicamente, el sedimento se sita mayoritariamente en

gravosa de acuerdo al diagrama triangular de la Figura
conformado por las fracciones arena mediana (AM), arena
que la arena gruesa y muy gruesa suman en conjunto cerca
la clasificacin de arena fangosa levemente

N' 146. Cerca del 98 % de la arena est
fina (AF) y arena muy fina (AMF), mientras
del 2%.
Como se puede apreciar el tamao medio de las partlculas del sedimento corresponde a la fraccin de
fango. No se encuentran diferencias entre los resultados de los estadlsticos sedimentarios en el tiempo
TO y el T4, lo que indica que la composicin del sedimento es constante en el tiempo, al menos en el
periodo que dur el estudio.
-Pgina 107 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
61.1
Figura N' 145: Diagrama Triangular

mostrando la textura de acuerdo a
e/ases texturales predefinidas.
-Contenido de Materia Orgnica

El sedimento del rea bajo las jaulas present al tiempo TO un promedio general un 8,77 % 2,10%. Al
tiempo TO, el sector tratamiento ubicado bajo las jaulas present un promedio de MOT de 9,07% 2,32.
Posteriormente, en el sector tratamiento el porcentaje de materia orgnica disminuye de 9,07 % hasta
8,06 % en el tiempo T1, incrementndose levemente en el tiempo T2 (8,14%), mantenindose el valor
constante en el tiempo T3 y luego disminuir hacia el tiempo T4 a un valor de 7,38% (Ver Tabla Ir 146) .
Tabla
,.........
l'
TO
9,07
2,32
T1
8,06
245
T2
8,14
+2,46
T3
8,14
2,76
T4
7,38
1,81
N' 146: promedio de MOTen sedimento
En las estaciones sometidas al tratamiento con las unidades biorremediadoras, el sedimento disminuye
la MOT a una tasa que oscila entre un 5,81 % Y un 14,29. Las mayores tasas se detectan en las
primeras dos semanas de seguimiento (T1 y T2). Entre el monitoreo inicial y el primer monitoreo de
-Pgina 108 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
seguimiento, la tasa de disminucin promedio es de un 7,36 %, tasa que es mejorada hacia el ltimo
seguimiento (T4), donde luego de casi un mes de tratamiento, llega a un 14,29 %. El sector de
tratamiento disminuye en promedio la MOT en un 8,48% y el sector de referencia lo hace en un 6,93%.
Tabla fIO 147: Promedio de disminucin de Mor en el sedimento durante el estudio.
En los siguientes diagramas fIO 148 Y 149 se observa la diferencia en la distribucin espacial de la
materia orgnica entre la campana a tiempo O (antes de la implantacin del producto) y la ltima
campana (despus de un mes de tratamiento).
12~
11~
10~
Dlagtama fr 148:
distribucin
espacial MOr
tiempo O.
9%
8%
7~
8'110
T1a
R.5
-l
12~
11~
10~
T14
9%
8%
11M
7%
8~
5~
4~
-Pgina 109 de 130-
Dlagtama N' 149:

distribucin
espacial MOr a
tiemp04

Caracterizacin
del potencial
Enero 2010
redox (Eh)
La Tabla N o 150 y la Figura N 151 presentan los resultados de los valores promedio de Eh para cada
uno de los monitoreos entre el tiempo TO y el T4.
Los resultados indican que posterior a la instalacin de las unidades biorremediadoras, en las estaciones
de tratamiento el valor promedio de Eh se incrementa desde 100 46 mV (tiempo TO) hasta 166 84
mV (tiempo T1). A partir del tiempo T1 hasta el tiempo T3, el incremento del valor promedio de Eh es
menor, incrementndose de 166 84 mV (tiempo 1) hasta 178 34 mV (tiempo T3). Del tiempo T3 hasta
el tiempo T4, existe un descenso importante del valor promedio de EH, desde un valor de 178 34 mV
(tiempo T3) hasta 122 29 mV (tiempo T4).
Tabla NO 150: Promedios de Eh
Periodo ele TIeIl1llO

TO
T1
T2
T3
T4
Figura N
a travs
Referencia (nM
22
47
59
57
17
100
166
170
178
122
130
143
148
146
112
Referencia
46
84
59
34
29
---Tratamiento
178
170
166
170
~
o.u
ntoTrlM
151: Promedios de Eh a travs del tiempo.
190
:;..
del tiempo
148
lijO
130
110
90
70
50
TO
T2
T1
Perodo
-Pgina 110 de 130-
T3
T4

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
Los resultados indican que el sector noreste del modulo de cultivo es el que mayor cantidad de cambio
experiment. Esta rea, conforme avanza el seguimiento, restringe slo al sector ms noreste de las
jaulas.
-Pgina 111 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Caracterizacin
Enero 2010
del Oxgeno Disuelto (00)
Los resultados del cambio promedio que experimenta el oxigeno disuelto (00) en los primeros
centrmetros de la columna de agua se presentan en la Tabla N 152 yen la Figura nO 153.
Los resultados indican que al inicio de la experiencia (tiempo TO), no existen diferencias significativas
entre el contenido de 00 en los primeros centlmetros de la columna de agua del sector de referencia y el
que seria sometido al tratamiento. Al tiempo TO, el promedio de 00 en el sector referencia es de 5,97
0,63 mg/L, mientras que el sector tratamiento el promedio es levemente inferior de 5,91 1,52 mglL
Al tiempo T4, se observan cambios sustanciales en el contenido de 00 en los primeros declmetros de la
columna de agua. En el sector de referencia se obtiene un promedio de 7,04 0,78 mg/L, mientras que
en el sector de tratamiento se obtiene un promedio de 7,38 0,80 mglL, experimentndose
una
diferencia significativa entre el incremento de las estaciones de referencias y las de tratamiento.
Tabla N 152: Promedios de OD entre el tiempo TOy el T4.
Re"fttncla (mmIL)
Periodo de Tiempo
TO
T4
Tratamiento (qIL)
5,97
O,63
5,91
1,52
7,04
O,78
7,38
O,80
---+--- Relerene"
-e__ Tr~
',5
8.0
7,5
7,38
~
!. 7.0
o
o
6,5
6,0
'.o'
',5
10
Figura
Ir 153: Variacin Promedios de OD a travs del tiempo.
Como en ambos sectores existen cambios, estos pudiesen responder a un proceso naturales o bien a
un efecto ampliado de las unidades biorremediadoras, es decir, presentarlan un rea de accin mayor a
la prevista (15 m). Considerando a las corrientes como variables, es probable que esta ltima hiptesis
sea la ms acertada.
-Pgina 112 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
Macrofauna bentnica
En el sector de tratamiento, se colectaron 4 especies, de las cuales Oligochaeta n.d. fue dominante en
el tiempo TO y T4 tanto para la abundancia como para la biomasa. En cuanto a los promedios de
abundancia y biomasa del sector tratamiento (Figura NO 154) la mayor abundancia promedio
corresponde a Oligochaeta n.d., pero la biomasa promedio se atribuye a Pisidium sp.
250
1,20
-Biomasa
-o- Abundancia
200
203
1,008
0,975
1,00
0,90
'":"
"C
e
;:.
0,60
ni
u
e
ni
100
3
1
U!
liQ
....
0,40
"C
::1
oC
oC(
o
Gl
134
150
50
0,20
Pisidium sp.
n.d.
ro
H;rUdinea n.d.
20
-1
Oligochaeta
n.d.
0,00
Pisidium sp.
T1
Figura ~ 154: Promedio de Abundancia (ind./m2) y Biomasa (g/m2) en el sector tratamiento.
A pesar de las diferencias detectadas entre el monitoreo del tiempo TO y T4, el anlisis estadlstico de los
resultados de macrofauna indica que no existen cambios significativos en la estructura comunitaria entre
antes (TO) y despuS (T4) de aplicar las unidades biorremediadoras.
-Pgina 113 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
El anlisis de los parmetros ambientales monitoreados bajo las jaulas del centro en lago, ha detectado
que posterior a la siembra de unidades biorremediadoras, el bentos experimenta cambios atribuidos al
efecto biorremediador. Los resultados obtenidos sugieren que desde un punto de vista ambiental y
normativo, es favorable el uso de unidades biorremediadoras para ser aplicadas a fondos blandos de
lagos sometidos a la presin del enriquecimiento orgnico producto de la actividad aculcola, puesto que
variables utilizadas por la autoridad para la Gestin Ambiental, y que en la actualidad son exigidas por
las normas de acuicultura nacional, tales como oxigeno disuelto, potencial redox, materia orgnica y
macrofauna bentnica, experimentan una respuesta positiva y beneficiosa desde perspectiva ecolgica,
lo cual permite la recuperacin del sedimento bajo las jaulas de un centro de cultivo aculcola.
Los resultados indican que en lago, la respuesta del bentos a las unidades biorremediadoras es rpida
y significativa, generando cambios en variables ambientales como redox, oxigeno, materia orgnica y
macrofauna, cuyo efecto tiende a perderse con
el tiempo. Esta corta respuesta probablemente sea
consecuencia del alto contenido de material orgnico presente en el sedimento, caracteristica propia de
los lagos. Este tipo de ambiente, se caracterizan por ser reas de depositacin, ricas en materia orgnica
en los primeros centmetros del sedimento, variable directamente relacionada con el consumo de
oxigeno, proceso que modifica el potencial redox y genera cambios sustanciales en la estructura
comunitaria de macroinvertebrados. En un lago, el porcentaje de materia orgnica suele alcanzar y
superar el 15% del sedimento superficial y estas caractersticas pueden ser la causa del corto efecto de
las unidades biorremediadoras. Esto sugiere que la concentracin de unidades biorremediadoras a
utilizar en el futuro pueda ser mayor.
Se constata que al inicio de la experiencia, las especies de macroinvertebrados presentes son

consideradas en su mayoria como bioindicadoras de enriquecimiento orgnico o bien tolerantes a
niveles muy bajos de oxigeno. Particularmente la presencia de Oligoquetos y larvas de
Chironmidos son tipicas especies indicadores de enriquecimiento orgnico y/o bajas de oxigeno
disuelto (Rubio, 2000). Los Chironmidos estn ausentes en T4 y los oligoquetos disminuyeron en
un buen porcentaje su abundancia (luego de ser la especie dominante en TO). Si a esto agregamos
el hecho que durante el estudio el promedio de oxgeno en los primeros decmetros del fondo se
increment notablemente, que el nivel de materia orgnica disminuy y el Eh se increment, se
puede constatar un escenario que otorga condiciones favorables para un incremento de la
diversidad bajo las jaulas. Si bien esto ltimo no acontece por el corto tiempo que dura la
experiencia, en condiciones normales de redox y oxigeno en el sedimento los bioindicadores no
estn presentes, o bien lo estn a una muy baja densidad. Por ende, la disminucin de organismos
bioindicadores es una seal del beneficio de las unidades biorremediadoras en el sedimento,
sugiriendo una mejora de las condiciones ambientales destacable..
Se sugiere que el uso de las unidades biorremediadoras en una dosis ms alta que el usado en el
presente estudio o bien, de manera dosificada por un perodo de tiempo mayor, cuya duracin
depender de caractersticas propias de cada lugar. De acuerdo a los resultados, esta ltima opcin
podrla ser la mejor, puesto que los resultados indican que pasado una par de semanas el efecto de
las unidades biorremediadoras tiende a perder el efecto sobre algunas variables. Dada la gran
carga orgnica de origen antrpico que suele existir bajo las balsas jaulas, es importante lograr una
disminucin significativa del enriquecimiento orgnico y que perdure en el tiempo, y se acople y
coayude a los procesos biogeoqulmicos naturalmente en el sedimento de cada centro de cultivo.
-Pgina 114 de 130-

ACTIVIDAD
Enero 2010
2.4: ESTUDIO DE VIDA UTlL DEL PRODUCTO BIORREMEDIADOR
Objetivo
Establecer la vida til de las tabletas prototipo fabricadas.
Descripcin
Se sometieron a pruebas de vida til para determinar su resistencia a:
2.4.1. PRUEBAS A
Temperatura
Humedad
Tiempo
ra VARIABLE
Para estas pruebas se someti una tableta a cuatro temperaturas diferentes (4 e, 15 e, 30 e y 40 C).
Para ello, sta fue dividida en cuatro porciones, las cuales se sometieron a distintas condiciones y se
registr el comportamiento.
El parmetro de control, es el nmero de clulas por mL al resuspender
estril.
una porcin en agua destilada
Se mide estabilidad del comprimido, cualitativamente, describiendo el nmero de partes en que pudo
fragmentarse por efecto de la temperatura y cuantitativamente, pesando cada una de las partes.
Los resultados obtenidos
siguiente tabla N' 155.
tras 7 dias de prueba resuspendiendo
en 200 mL, se representan
en la
Tabla N' 155: resultados a temperatura variable
Temperatura
C
Masa
fragmento
(g)
Conc.celular
cellmL Ola 1
(tableta
completa)
26,2
4,51 x 109
Fragmento
2
3
4
15
30
40
225
24,7
26,6
451 x 10
4,51 x 10
4,51 x 10
N" de
fragmentos
despus
prueba
Conc.
Cellular
ora 7
4,34
3,5
2,5
9,2
X
X
X
109
9
Masa (g)
26,2
22,4
24,7
26,5
10
10
10
Los resultados indican que bajo ninguna de las condiciones de temperatura estudiadas, el producto
presenta mayores alteraciones. Sin embargo, se observa una diferencia relevante respecto a la
concentracin de clulas, en la muestra sometida a mayor temperatura.
-Pgina 115 de 130-

PROYECTO N 206-5467
2.4.2. PRUEBAS A HUMEDAD
Enero 2010
VARIABLE
Para estas pruebas se someti una tableta a cuatro rangos de humedad distintas. Para ello se dividi la
tableta en cuatro porciones, las cuales fueron sometidas a estas humedades.
El parmetro de control es el nmero de clulas por mL que se obtiene al resuspender una porcin en
agua destilada estril y la estabilidad del comprimido de manera cualitativa, describiendo el nmero de
partes en que pudo fragmentarse por efecto de la humedad y cuantitativamente, pesando cada una de
las partes.
Las muestras son sometidas durante 7 dlas a las siguientes humedades:
20 %
40%
60%
80%
Para simular las condiciones

humedad.
definidas,
el producto fue dispuesto
Los resultados de esta prueba resuspendiendo

siguiente tabla N' 156
Tabla
Humedad
20
40
para pruebas de
para recuento celular en 200 mL se muestran
en
la
N' 156: resultados a humedad variable
Fragmento
en una cmara
Masa
fragmento
(g)
Conc.celul
ar cellmL
Da 1
(tableta
completa)
Conc.
Cellular
Dia7
109
28,1
3,80 x 109
25,2
3,80
8,5
6,5 x 1(f
109
60
22,4
3,80 x 10S
80
24,3
3,80 x 109
3,6
2,8 x 10S
x 10S
N de
fragmento
s despus
Masa (g)
prueba
1
28,0
2
6
24,8
20,4
Indetenn inado
18,3
De acuerdo a los resultados puede concluirse, que las mejores condiciones de mantencin son a
humedad menor al 20 %. Mayor humedad cambia las condiciones
originales del producto en cuanto a
compactacin, y el nmero de clulas al final de la prueba disminuye mientras ms humedad existe.
Probablemente, debido a que las clulas se activan con la humedad, pero no cuentan con los nutrientes
necesarios para su crecimiento en la tableta.
-Pgina 116 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
2.4.3. PRUEBAS A TIEMPO VARIABLE

Para realizar estar pruebas se observ una tableta durante 60 das. Se realiz recuento celular al inicio y
trmino de las pruebas. El parmetro de control, es el nmero de celulas por mL al resuspender una
porcin en agua destilada estril y la estabilidad del comprimido de manera cualitativa, describiendo las
condiciones del comprimido al inicio y trmino de la prueba. Las masas fueron analizadas en cada uno
de los tiempos.
La temperatura y humedad de esta prueba fueron 60% y 15 C.
Los resultados se muestran en la siguiente tabla If' 157
Da
Masa
Tableta (g)
102,2
100,1
100,1
98,7
98,5
98
97,7
97,5
Tabla N 157: resultados
Conc.celular
CellmL Ola 1
(tableta
completa)
Conc.
Celular
CellmL da
30
4,20 x 10
3,8 x 10
a tiempo variable
De acuerdo a los resultados observados, se puede concluir que la tableta puede mantener
condiciones, al conservarlas a una temperatura y humedad adecuadas, por al menos 60 das.
-Pgina 117 de 130-
sus

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
C.3. ETAPA 3, ESTUDIO DEL MERCADO, DIFUSiN Y PROTECCiN
ETAPAS
Etapa 3 :
Estudio de
ACTIVIDADES
INTELECTUAL
nov.oS
dic.oS
ene.o9
feb.o9
mar.o9
abr.o9
1615
1616
1617
1611
1619
1620
3.1: Desarroi> del plan de

negocio
Establecer la inwrsill
de prodlJ:Ci6n Y
al personal de
3.4: Seminario y
pubicaciores
-Pgina 118 de 130-
1621
DEL PRODUCTO
1622
jul.o9
ago.o9
1623
lE 24

PROYECTO N 206-5467
ACTIVIDAD.3.1.
DESARROLLO
Enero 2010
DEL PLAN DE NEGOCIO
Este plan de negocio implic el desarrollo de todo un plan de marketing, cuyos principales contenidos
son:
COBERTURA
DE MERCADO
X REGiN
XI REGiN
DISTRIBUIDORES,
para la:
X Regin
XI Regin
HERRAMIENTAS
Avisos publicitarios: revistas especializadas
Folletos y manuales
Incentivos al vendedor
-Pgina 119 de 130-
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PROYECTO N 206-5467
Bonificaciones al cliente final por compras grandes
Marketing directo al cliente final (centro a centro)
Creacin de pagina web
Incentivos vendedores
Charlas-seminarios
Enero 2010
y lanzamiento producto
SISTEMA DE GESTlON INTEGRAL DE VENTAS
DEFINICIN
MERCADO
CLIENTES
ACnJALES
VENTA
CLIENTES
NUEVOS
CARTERA
CLIENTE
INF O Rl\.fAC ION
GESTION
ANALISISDE
RESULTADOS
PREPARACIN
DEPRODUCTO~----~
ARGENTINA
;"IPORTAcr:-,
FACTURACIOl'\
ENTREGA
COBRA"lZA
-Pgina 120 de 130-

PROYECTO N 206-5467
ASISTENCIA
COMERCIAL
Enero 2010
POST-VENTA
-1 E-MAIUNG
~I----~
RECLAMOS
INFORMACIN
CONSULTAS
INFORMACIN
HELPDESK
L....--------I
CONTACT
CENTER
I TELEMARKETING I
1-----1
yWEB
3.2. ESTABLECER
PARTICIPACIN
LOGISTICA
RESPUESTAS
ACTIVIDAD
GESTIN BASE IINFORMACIN

ENUNEA
H PEDIDOS
INVERSIN
PAGO
COBRANZA
SEGUIMIENTO
Y COSTOS DE PRODUCCIN
Para el desarrollo de esta actividad se contrataron los servicios de Asesora de la empresa Tecnovax,
empresa especializada en procesos de fermentacin biolgicos a nivel industrial.
Se realizaron estudios de Investigacin y Desarrollo con nuestro principio activo fabricado en la planta
piloto, con el objetivo de disear e implementar un sistema de produccin industrial de los
microorganismos constituyentes de producto biorremediador.
-Pgina 121 de 130-

PROYECTO N 206-5467
ACTIVIDAD
3.3. SEMINARIOS
Enero 2010
Y PUBLICACIONES
Dentro del plan de difusin del proyecto se realizaron diferentes actividades:
3.3.1. SEMINARIO
Realizado en Puerto Montt el da 1 de Diciembre del 2009. A ste asistieron representantes de las
diferentes empresas salmoneras pertenecientes al rea de medio ambiente, del rea de salud, de
I+D ... asi como representantes de Semapesca, SISS ....
La exposicin fue realizada por:
Carlos Gonzlez- Gerente Divisin Veterinaria- Laboratorios Recalcine S. A.
Elena Senz- Jefa de proyecto- Laboratorios Recalcine
Marcelo Rivas- Jefe Depto. Medio Ambiente- GEEAA Ltda.
Igor Stack- Gerente Depto. Medio Ambiente- Marine Harvest Chile S. A.
3.3.2. PUBLICACIONES
~ REVISTA VIS ION ACUICOLA
En la siguiente figura ~
N 117, MES DICIEMBRE 2009
158 se muestra el publirreportaje que se public.
-Pgina 122 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
._III
oI1SA
Recalcine suma nuevo desarrollo en investigacin

y refuerza su compromiso con la salmonicultura
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Figura N' 158: publicacin revista Visin Acufco/a
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REVISTA AQUA
Se est preparando el publirreportaje, el cual saldr publicado en dicha revista el mes de Marzo
2010 coincidiendo con la Feria Aqua Sur 2010, en la que se entregar a todos los asistentes un
ejemplar de la revista.
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PROYECTO N 206-5467
ACTIVIDAD
Enero 2010
3.4. PROTECCIN DEL PRODUCTO
Con fecha 16.01.2009 se present al INAPI la solicitud de patente, correspondiente a "Productos

biorremediadores que contienen microorganismos liofilizados para reducir la materia orgnica".
Como informacin adicional para adjuntar a esta solicitud de patentamiento se realizaron estudios
adicionales en la Universidad de Concepcin con el fin de determinar la resistencia/no de las bacterias de
nuestro producto a los antibiticos usados en la industria salmonera (florfenicol), as se conocieron las CMI
(concentraciones
mnimas inhibitorias) y las CMB (concentraciones
mxima bactericida) de nuestras
bacterias frente al florfenicol.
-Pgina 124 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
D. RESUMEN Y CONCLUSIONES
Se cumpli en cabalidad con todos los objetivos del proyecto, que a grandes rasgos son:
~
Aislamiento de cepas (principio activo)
Determinar dosis y frecuencia de uso
Disei'to y formulacin del producto
Disei'to del proceso productivo, layout, compra y montaje de planta piloto
Obtener una produccin prototipo
Evaluacin del producto en condiciones reales de aplicacin
Establecer las condiciones de uso y de almacenamiento
Establecer una estrategia de marketing
Obtener el reconocimiento de la innovacin mediante la difusin del proyecto y de sus

resultados exitosos, a profesionales de la industria salmonera.
Proteccin intelectual del producto.
del producto
Obtuvimos un producto nacional pionero en Chile y de caracterlsticas
autctonas.
Producto de fcil uso y baja necesidad de manipulacin en la aplicacin de la tecnologia.
Fortalecido por una mayor difusin y conocimiento de la biorremediacin
Adems la ventaja de que existe una mayor conciencia ambiental y exigencia social por preservar el
medio ambiente.
Aplicacin del concepto whole-product:
No existe una tecnologia inserta en el mercado, que aporte al impacto ambiental asociado al cultivo
del salmn.
Con esta nueva tecnologia se ayuda al cumplimiento de las normativas vigentes para la Acuicultura
que introducen mayores exigencias para operar.
Con esta tecnologla se permite la recuperacin de sitios a travs de un producto inocuo y autctono
y por ende, la permanencia de los centros en sus lugares, disminuyendo los costos que implica la
rotacin de centros.
Es un proyecto con sustentabilidad:
a nivel social.
bioproducto asociado a respaldo tcnico y capacitacin.
Ambiental
Tcnica
-Pgina 125 de 130

PROYECTO N 206-5467
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Productiva
Econmica
Con este producto innovador se puede cumplir con el objetivo empresarial de crecimiento
manteniendo la armonla con el medio ambiente.
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Enero 2010
E. BIBLIOGRAFA
Berg, H., Michlsen, P., Troell, M., Folke, C. & Kautsky, N. (1996). Managing
sustainability in tropical Lake Kariba, Zimbabwe. Ecological Economics, 18, 141-159.
aquaculture
tor
Buschman A., (2001) Impacto ambiental de la acuicultura, El estado de la investigacion en chile y el

mundo. Terram Publicaciones. 63p.
Enell, M. & Ackerfors, H. (1991). Nutrient discharges trom aquaculture operations in Nordic countries
into adjacent sea areas. ICES report C.M. 1991/F:56.Ref.MEQC, 17 pp.
Kautsky N., Folke C. (1989)
aquaculture. Biota 5: 1-11.
Management
ot coastal
areas tor a sustainable
development
of
Morissey, D.J., Gibbs, M.M., Pickmere, S.E. & Cole, R.G. (2000). Predictin impacts and recovery of
marine farrn sites in Stewart Island, New Zealand, from the Findlay-Watling model. Aquaculture, 185,
257-271.
Weston, O.P. (1991). The effects of aquaculture on indigenous biota. En: Aquaculture,
Brune & J. R Tomasso, ed.) Wortd Aquaculture Society, Batan Rouge, pp. 534-567.
Bushmann, A, Fortt, A, Vasquez, J., Ahumada,
Contaminacin Marina, documento W19, 2005.
R., Hemndez,
M.C., Astudillo,
Vol.3 (D.E.
C., Industria y
Chamy, R., Carrera, J., Jeison, D., Ruiz, G., Avances en Biotecnologfa Ambiental- Tratamientos de
residuos Lquidos y Slidos, pginas 13-23, Ediciones Universitarias de Valparafso- Pontificia
Universidad Catlica de Valparaiso.
Kishida N, Kim JH, Chen M, Sasaki H, Sudo R. Effectiveness of oxidation-reduction potential and pH
as monitoring and control parameters for nitrogen removal in swine wastewater treatment by
sequencing batch reactors. J Biosci Bioeng. 2003; pginas 285-90, Vol 96, W 3.
Martens, A.S. y Jannasch, W., Cycling of Metabolizable C, N, P, in organic-rich marine sediments, The
Majar Biogeochemical Cycles and Their Interactions Comentario Capftulo 18, versin electrnica del
libro http://www.icsu-scope.org/downloadpubslscope21/chapter18.html#com.
Ventosa, A, Nieto, J., y Oren, A, Biology of Moderately Halophilic Aerobic Bacteria, Microbiol Mol Biol
Rev, 1998, pginas 504-544, Vol. 62, W 2.
CLARKE K. R. Y R. M. WARWICK. 1994. Change In Marine Communities: An Approach To Statistical
Analysis And Interpretation. Natural Environmental Research Council. Plymouth, Reino Unido: 144 Pp.
CLARKE,
K.R. 1993. NONPARAMETRIC
MUL TIVARIATE
ANAL YSIS OF
COMMUNITY STRUCTURE. AUSTRALlAN JOURNAL OF ECOLOGY 18: 117143.
CHANGES
IN
FERRARO, S. P. y F. A COLE. 1990. TAXONOMIC LEVEL ANO SAMPLE SIZE SUFFICIENT FOR
ASSESSING POLLUTION IMPACTS ON THE SOUTHERN CALIFORNIA BIGHT MACROBENTOS.
MARINE ECOLOGY PROGRESS SERIES 67: 251262.
FIELD, J.G., K.R. CLARKE & R.M. WARWICK. 1982. A PRACTICAL STRATEGY FOR ANALYSING
MUL TISPECIES DISTRIBUTION PATTERNS. MAR. ECOL PROG. SER. 8: 3752.
-Pgina
127 de 130-

PROYECTO N 206-5467
Enero 2010
FOLK, R.L.: 1974, PETROLOGY OF SEDIMENTARY ROCKS, HEMPHILL, AUSTIN, TX, 159 PP.
GAMITO, S. 1997. APPLlCATION OF CANONICAL CORRESPONDENCE ANALYSIS TO
ENVIRONMENTAL ANO BENTHIC MACROFAUNA DATA OF FOUR SITES IN THE RIA FORMOSA
(PORTUGAL). EN: INVESTIGACIONES SOBRE EL BENTOS MARINO: IX SIMPOSIO IBRICO DE
ESTUDIOS DEL BENTOS Marino (1923 De Febrero, 1996. Alcal De Henares, Madrid, Espaa), J.
M. Viitez y J. Junoy (Eds.). Publicaciones Especiales. Instituto Espal"lolDe Oceanografla 23: 4152.
GRAY, J. S. 1981. THE ECOLOGY OF MARINE SEDIMENTS: AN INTRODUCTION TO THE
STRUCTURE AND FUNCTION OF BENTHIC COMMUNITIES. CAMBRIDGE UNIVERSITY PRESS.
CAMBRIDGE: 185 PP.
HEIP, C., R. M. WARWICK y M. R. CARR. 1988. ANALYSIS OF COMMUNITY ATTRIBUTES OF
THE BENTHIC MEIOFAUNA OF FRIERFJORD/LANGESUNDFJORD. MARINE ECOLOGY
PROGRESS SERIES 15: 111.
LEGENDRE, L. & P. LEGENDRE. 1979. ECOLOGIE NUMERIQUE. V.2. LA STRUCTURE DES
DONNES COLOGIQUES. MASSON, PARIS & PRESSES DE L' UNIVERSIT DU QUEBEC.
254PP.
LUDWIG, J.A. & J.F. REYNOLDS. 1988. STATISTICAL ECOLOGY: A PRIMER ON METHODS ANO
COMPUTING. JOHN WILEY AND SONSoNUEVA YORK. 337 P.
MORENO, C.E. 2001. Mtodos Para Medir La Biodiversidad. M&TManuales Y Tesis Sea V1,
CytedOrcytUnescoSociedad Entomolgica Aragonesa (Sea), Zaragoza, 84 Pp.
PIELOU, E.1966. THE MEASUREMENT OF IN DIFFERENT TYPES OF BIOLOGICAL COLLECTION.
J. THEORET. BIOL. 13: 131.144.
RUBIO, R., 2000. MACROINVERTEBRADOS BIOINDICADORES DE LA CALIDAD DE LAS AGUAS
LOTICAS EN EL SALVADOR. XXVII. CONGRESSO INTERAMERICANO DE ENGENHARIA
SANITARIA E AMBIENTAL.
SANDERS, H. L. 1956. OCEANOGRAPHY OF LONG ISLAND SOUND, 19524. THE BIOLOGY OF
MARINE BOTTOM COMMUNITIES. BULLETIN OF THE BINGHAM OCEANOGRAPHIC
COLLECTION 15: 345414.
SANDERS, H.L. 1968. MARINE BENTHIC DIVERSITY: A COMPARATIVE STUDY. AM. NATUR.
102:243282.
SNEATH PHA & RR SOKAL (1973) NUMERICAL TAXONOMY. H. FREEMAN & CO., SAN
FRANCISCO. 538 PP.
WARWICK, R. ANO K. CLARKE. 1994. RELEARNING THE ABC: TAXONOMIC CHANGES ANO
ABUNDANCE/BIOMASS RELATIONSHIPS IN DISTURBED BENTHIC COMMUNITIES. MARINE
BIOLOGY, VOLUME 118, NUMBER 4/ MARCH, 1994.
WARWICK, R. M. 1993. Environmental Impact Studies On Marine Communities: Pragmatical
Considerations. Australian J. Ecol. 18: 6380.
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PROYECTO N 206-5467
F.ANEXOS
1. INSTRUCTIVO
2. PROTOCOLO
MONTAJE OE EQUIPOS (s610 en OVO)

OPERACIN PLANTA BIOMASA (slo en OVO)
3. OVO 1
Infonne tcnico
Anexos
Libros de compras
Libros de ventas
Filmacin planta piloto
4. OVO 2- Filmaci6n submarina LAGO
5. OVO 3- Filmacin submarina MAR
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PROYECTO N 206-5467
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Enero 2010

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INFORME TCNICO FINAL

"Desarrollo de un producto biorremediador para ser aplicado en los

CDIGO PROYECTO: 206-5467

LABORA TOR/OS RECALC/HE S.A.

INFORME TCNICO FINAL

B.1. PROBLEMA A RESOLVER QUE JUSTIFIC LA EJECUCiN DEL PROYECTO ............ 8

B.3. PRODUCTO DESARROLLADO

PLAN DE TRABAJO Y RESULTADOS OBTENIDOS 18

ACTIVIDAD 1.1: AISLAMIENTO, IDENTIFICACiN Y CULTIVO DE BACTERIAS

1.1.3. RESULTADOS DEL AISLAMIENTO

I Etapa: Adaptacin Cepas

ACTIVIDAD 1.3. FORMULACiN DEL PRODUCTO ........................................................... 42

INFORME TCNICO FINAL

1.3.6. PRUEBAS Y ENSAYOS Fls/COS REALIZADOS A LOS PROTOTlPOS

1.3.7. RESUL TADOS

1.4. DEFINICiN DE LA DOSIS DEL PRODUCTO ....................................... 51

1.5.1. MUESTREO EN TERRENO

1.5.2. ANALIS/S EN LABORATORIO

C.2. ETAPA 2, DISEO DEL PROCESO PRODUCTIVO, PRODUCCiN PROTOTIPO Y

2.1.3. SISTEMAS AUXILIARES

Sistema de control del Ph

2.1.4. PLANOS CONSTRUCTIVOS

DE EQUIPOS PARA LA PLANTA

2.2. PRODUCCION PILOTO ........................................................................

2.2.1. PUESTA EN FUNCIONAMIENTO

2.2.2. OPERACIN DE LA PLANTA BIOMASA

2.2.4. OBTENCiN DE PERMISOS DE LA SUBSECRETARIA

ACTIVIDAD 2.3: EVALUACiN

IN SITU DEL PRODUCTO BIORREMEDIADOR

2.3.1. PRUEBAS DE EFICACIA EN AGUA DE MAR

2.3.1.1. Mtodo de estudio

INFORME TCNICO FINAL

Diseo del muestreo

Contenido de Materia Orgnica

Cambios en el ORP del sedimento

Cambios en el pH del sedimento

Cambios en la macrofauna bentnica

Cambios en parmetros fisico-quimicos

AMONIO, NH4 ...............................................................................................................................

2.3.2. PRUEBAS DE EFICACIA EN AGUA DULCE

2.3.2.1. Mtodo de estudio

Contenido de Materia Orgnica

del Oxigeno Disuelto {OD)

ACTIVIDAD 2.4: ESTUDIO DE VIDA UTIL DEL PRODUCTO BIORREMEDIADOR

2.4.1. PRUEBAS A T" VARIABLE

2.4.2. PRUEBAS A HUMEDAD VARIABLE

2.4.3. PRUEBAS A TIEMPO VARIABLE

C.3. ETAPA 3, ESTUDIO DEL MERCADO, DIFUSiN Y PROTECCiN INTELECTUAL

ACTIVIDAD 3.2. ESTABLECER

DEL PLAN DE NEGOCIO ....................................................

INVERSiN Y COSTOS DE PRODUCCIN ................... 121

ACTIVIDAD 3.3. SEMINARIOS Y PUBLICACIONES

Dentro del plan de difusin del proyecto se realizaron diferentes actividades:

ACTIVIDAD 3.4. PROTECCiN DEL PRODUCTO ...............................................................

D. RESUMEN Y CONCLUSIONES ......

INFORME TCNICO FINAL

2. INSTRUCTIVO MONTAJE DE EQUIPOS (slo en OVO)

3. PROTOCOLO OPERACiN PLANTA BIOMASA (slo en OVO) ...................................... 129

5. OVO 2- Filmacin submarina LAGO ......................................................... 129

7. CARTA GANTT COMPLETA

INFORME TCNICO FINAL

En el mercado nacional compite en las lineas farmacuticas de pediatra, ginecologa, dermatologa,

activo para los fondos aculcolas con