BIODEGRADACION DE PCB EN BIORREACTOR AIRLIFT

BIFENILOS POLICLORADOS (PCB)

DESCRIPCIN:

Los bifenilos policlorados (PCBs) son compuestos aromticos sintticos compuestos de la

estructura de bifenilo, es decir dos anillos de benceno enlazados entre s, y que estn clorados en
diversos grados. La frmula qumica de los PCBs es C 12 H(10-n) Cln , en la que n representa el
nmero de tomos de cloro. Existen 209 combinaciones posibles, dependiendo de las
sustituciones de cloro que tenga su estructura qumica, las cuales pueden variar entre 1 a 10
tomos.
Los PCBs forman un grupo de 209 congneres, dependiendo de las sustituciones de cloro que
tenga su estructura qumica, las cuales pueden variar entre 1 a 10 tomos de cloro. Los PCBs
pueden tener sustituciones de cloro en la posicin para, meta y orto, tal como se muestra en la
figura 1, siendo esta ltima la ms difcil de degradar biolgicamente (De Giorgis et. al., 2003).

Figura 1. Estructura qumica de los PCBs

Los bifenilos policlorados (PCBs) son compuestos sintticos que han sido ampliamente utilizados
principalmente en aceites de transformadores y condensadores debido a su baja presin de vapor,
baja inflamabilidad, estabilidad trmica y qumica, entre otras. Sin embargo, estos compuestos
son altamente txicos, se acumulan en tejidos adiposos y se adhieren fuertemente a matrices
orgnicas tales como el suelo, producto de su hidrofobicidad.
Los bifenilos policlorados poseen baja conductividad elctrica y alta resistencia trmica, siendo
estas las bases para que se utilicen como lquidos aislantes en los equipos elctricos. Los PCBs
presentan una estabilidad trmica en un rango de temperatura de 170 380C. Sin embargo, los
PCBs sufren descomposicin trmica y son transformados a dibenzodioxinas policlorados
(PCDDs) y dibenzofuranos policlorados (PCDFs) en un rango de temperatura de 400-1000 C.
(Portero, 2007).
El Policloruro de bifenilo (PCB) est considerado segn el Programa de las Naciones Unidas para
el Medio Ambiente (PNUMA) como uno de los doce contaminantes ms nocivos fabricados por
el ser humano. La legislacin actual limita el uso de estos compuestos, por ejemplo dentro de la
UE su uso slo se permite dentro de los sistemas cerrados. Su fabricacin est prohibida desde
1977 en Estados Unidos y desde 1983 en Alemania. Actualmente su uso est prohibido en casi
todo el mundo.

PROPIEDADES FSICO QUMICAS DE LOS PCBS

Los PCBS son algunas de las sustancias qumicas orgnicas ms estables que se conocen, por lo
tanto no se degradan con facilidad. Su constante dielctrica baja y su punto de ebullicin elevado
los hacen ideales como fluidos dielctricos en condensadores y transformadores elctricos. En
resumen, stas son las caractersticas de los PCBS:

Constante dielctrica baja

Baja volatilidad
Resistentes al fuego
Baja solubilidad en agua
Alta solubilidad en solventes orgnicos
Alta resistencia al envejecimiento, no se deterioran durante el uso.
Sin embargo, estas mismas caractersticas lo convierten en peligroso para el medioambiente,
concretamente su estabilidad, que evita su descomposicin qumica y/o biolgica, permaneciendo
y acumulndose en organismos vivos, con sus consecuentes efectos, dispersndose por doquier y
llegando a zonas remotas como los cascos polares, ocanos, etc. Por ello es considerado como
contaminante orgnico persistente (COP) y se incluye en la docena sucia de los doce
contaminantes ms peligrosos del planeta, por ser:
No biodegradables
Persistentes en el medio ambiente
Bioacumulables en los tejidos adiposos del cuerpo
Posibles carcingenos.

PRODUCCIN

Los PCB poseen magnficas propiedades dielctricas, longevidad, incombustibilidad y son

resistentes a la degradacin trmica y qumica. Por esta razn, antes de que se prohibieran en los
pases, se fabricaban para utilizarlos en equipo elctrico, intercambiadores de calor, sistemas
hidrulicos y distintas aplicaciones especializadas de otra ndole. El principal perodo de
fabricacin tuvo lugar entre 1930 y finales del decenio de 1970 en los Estados Unidos de
Amrica; hasta 1974 en China (Organismo Estatal de China para la Proteccin del Medio
Ambiente, 2002); hasta principios del decenio de 1980 en Europa y hasta 1993 en Rusia
(Programa de Vigilancia y evaluacin del rtico, 2000); y entre 1954 y 1972 en el Japn. Los
PCB se fabricaban en forma de mezclas de congneres, por ejemplo, en la forma de cloracin
progresiva de lotes de bifenilo hasta que se alcanzaba determinado porcentaje ponderal
preestablecido de cloro. Muy pocas veces se utilizaban los PCB de mxima concentracin que se
fabricaban. Por ejemplo, se les aada en pequeas cantidades a la tinta, los plsticos, la pintura y
el papel carbn o se utilizaban en formulaciones de PCB de hasta 70% en el lquido para
maquinaria hidrulica, transformadores y calentadores. A temperatura ambiente, la mayora de
ellos son lquidos oleosos o slidos cerosos.
Entre los nombres comerciales ms conocidos de los productos que contienen PCB figuran los
que se enumeran a continuacin: Apirolio (Italia), Aroclor (Estados Unidos), Clophen
(Alemania), Delor (Checoslovaquia), Elaol (Alemania), Fenchlor (Italia), Kanechlor (Japn),
Phenoclor (Francia), Pyralene (Francia), Pyranol (Estados Unidos), Pyroclor (Estados Unidos),
Santotherm (Japn), Sovol (URSS), Sovtol (URSS)
La produccin mundial acumulada de PCBs se ha calculado en 0,75 a 2 millones de toneladas.

LOS PCB EN EL MEDIO AMBIENTE

En ros y lagos, los PCB quedan adheridos a sedimentos en los que pueden quedar enterrados
durante mucho tiempo antes de ser liberados al agua y al aire. Los PCB presentes en el aire
pueden llegar al suelo con la lluvia o la nieve, o simplemente al depositarse las partculas por
efecto de la gravedad. Ms en ingls
Los PCB pueden acumularse en los animales con el tiempo y a lo largo de la cadena alimentaria.
Los PCB se encuentran en el tejido adiposo de animales tanto terrestres como acuticos,

especialmente en aquellos que estn en la cima de la cadena alimentaria. El hombre tambin

puede, por lo tanto, acumular los PCB procedentes de su alimentacin.
Algunas especies animales, entre las que se cuentan las aves, los peces, los mamferos, los
insectos y otros invertebrados, pueden descomponer o transformar determinados tipos de PCB
dentro de su cuerpo.
En el aire, los PCB se descomponen por efecto indirecto de la luz solar. El tiempo necesario para
que la mitad de la cantidad inicial se descomponga vara entre unos pocos das y unos pocos
meses, en funcin del tipo concreto de PCB. En el agua, su descomposicin es ms lenta, y puede
producirse por accin de la luz solar o de los microorganismos. Estos organismos desempean un
papel importante en la descomposicin de los PCB en suelos y sedimentos.
Se ha descubierto que los niveles de PCB en el aire exterior son menores en las zonas rurales y
remotas que en las urbanas e industriales. En el aire interior, las concentraciones de PCB suelen
ser al menos diez veces superiores a las del aire exterior.
Los niveles ms altos de PCB en el agua de mar suelen darse cerca de las zonas industriales.
Desde que se limit la produccin de PCB en los aos setenta, las concentraciones en peces y en
los depsitos ms recientes de sedimentos fluviales han experimentado un descenso gradual.

UTILIZACIN

Los PCB se utilizaron en una variedad muy amplia de aplicaciones industriales y de consumo. La
Organizacin Mundial de la Salud calific esos usos de completamente cerrados, nominalmente
cerrados y abiertos (IPCS, 1992). Entre esos usos figuran: Sistemas completamente cerrados:
Transformadores elctricos, Condensadores elctricos (incluidas las reactancias de lmparas
fluorescentes), Interruptores, rels y otros accesorios elctricos, Cables elctricos, Motores
elctricos y electroimanes (cantidades muy pequeas), Sistemas nominalmente cerrados:
Sistemas hidrulicos; Sistemas de transmisin de calor (calentadores, intercambiadores de
calor); Sistemas abiertos: Plastificante en cloruro de polivinilo, neopreno y otros cauchos
artificiales, Ingrediente en pinturas y otros materiales de recubrimiento; Ingrediente en tintas y
papel de autocopia; Ingrediente en adhesivos; Aditivos de plaguicidas; Ingrediente en
lubricantes, materiales de sellado y de calafateo.
Si bien se define el uso en los transformadores elctricos que contienen PCB como una aplicacin
completamente cerrada, las prcticas industriales hicieron que los PCB pasaran a otros tipos de
equipo, lo que cre puntos de contacto adicionales con el medio ambiente. Una prctica comn
era la de rellenar o recargar con PCB los transformadores que no contenan PCB (aceite mineral)
cuando no se dispona de otro fluido.

TOXICOLOGA DE PCBS

Los PCBs generalmente se biomagnifican y bioacumulan en los niveles trficos dentro de la

cadena alimenticia. Los bifenilos tienden a acumularse en los tejidos grasos de los organismos
que han estado expuestos y pueden ser causas de varios efectos en la salud. (Portero, 2007).
Las exposiciones agudas de PCBs en el humano pueden producir erupciones cutneas, cloracn,
purito y quemaduras, irritacin de ojos, cambios pigmentarios en piel y uas, irritacin del tracto
respiratorio, nerviosismo y fatiga.
Billy: LMITES PERMISIBLES DE BIFENILOS POLICLORADOS, VA DE DEGRADACIN DE
BIFENILOS POLICLORADOS BIORREACTOR AIRLIFT

LMITES PERMISIBLES DE BIFENILOS POLICLORADOS

Los materiales que contienes PCBs son

clasificados de acuerdo a la concentracin
de PCBs presente (Kuckuck, 2000).
PCB puro

> 500 ppm

Contaminado con PCB

entre 5 y 500 ppm

Sin contaminacin de PCB

< 5 ppm

emisin

concentracin

Emicion a la admosfera

entre 5 y 500 ppm

Sin contaminacin de PCB

< 5 ppm

VA DE DEGRADACIN DE BIFENILOS POLICLORADOS

a) Procesos anaerbicos
Los procesos anaerobios, que tienen un perodo de duracin de aproximadamente 20 semanas,
son capaces de reducir el nmero de cloruros en compuestos altamente clorados. La reduccin en
el grado de cloracin produce compuestos que son ms susceptibles a la degradacin aerobia, la
que degrada congneres medianamente clorados (6). (De Giorgis et. al., 2003).
Estudios con grnulos anaerobios, formados por bacterias sintrpicas, acetognicas y
metanognicas, han demostrado que stos son capaces de degradar congneres en las posiciones
orto, meta y para, alcanzndose porcentajes de remocin de hasta un 70%. Con tales estudios, se
ha comprobado que los grnulos anaerbicos tienen caractersticas de tolerancia al oxgeno y
capacidad para degradar a temperatura ambiente, que los hacen convenientes para ser utilizados
en biorremediacin in situ de ambientes contaminados por PCBs (7). (De Giorgis et. al., 2003).
En este proceso los PCBs actan como donadores de electrones, y el cloro es liberado como
subproducto, es empleado por los microorganismos como un aceptor final de electrones,
involucrando la adicin del electrn al enlace cloro carbono, seguido por la perdida del cloro y
del hidrogeno, el compuesto del cual el hidrgeno es eliminado es desconocido. (Abramowicz,
1990). (Fig. 2)

Figura 2. Posible mecanismo de decloracin reductiva de PCBs

b) Procesos aerbicos
Los PCBs son relativamente resistentes a la biodegradacin, sin embargo se ha aislado un amplio
rango de bacterias capaces de degradar PCBs. Estas bacterias poseen los genes bphA, bphB,
bphC, bphD que codifican las enzimas involucradas en la degradacin aerobia de PCBs (Lee,
1997).
En la mayora de los casos, el proceso enzimtico es referido a la va bifenil (bph). La va bph
involucra cuatro enzimas especficas, bifenil-2,3 dioxigenasa (BphA),
2,3-dihidro-2,3dihidroxibifenil-2,3 deshidrogenasa (BphB), 2, 3-dihidroxibifenil -1,2 dioxigenasa (BphC) y 2hidroxil-6-oxo-6-fenilhexa-2,4-cido dienoico hidrolasa (BphD). Las enzimas involucradas
actan secuencialmente en la degradacin oxidativa de PCBs en clorobenzoatos y 2-hidroxipenta
2,4 dienoate. El producto 2 hidroxipenta -2,4 dienoate es convertido en acetaldehdo y
piruvato. (Liden y Sun, 2004).

Figura 3: Va de degradacin por PCBs por bacterias anaerbicas

Se han clonado los genes bph responsables de la degradacin de PBCs en una gran variedad de
bacterias.

BIOREACTOR
Biorreactores que sirven para el desarrollo de los cultivos. Aseguran un ambiente uniforme y
adecuado para los microorganismos. Mantienen la temperatura estable. Suministran oxgeno a
una velocidad que satisfaga el consumo. El Biorreactor tipo air lift el mezclado se realiza
mediante la inyeccin de aire.

BIORREACTOR AIRLIFT
El biorreactor tipo airlift tambin es un equipo agitado neumticamente y se caracteriza porque el
suministro de energa para mantener homogeneidad en su interior tiene lugar mediante la
expansin isotrmica del gas introducido. La alimentacin de gas permite el suministro de
oxgeno para las operaciones que as lo requieran, y adems se mantienen patrones de flujo
internos aproximadamente bien definidos. Los biorreactores Airlift tienen una gran cantidad de
aplicaciones potenciales tanto en procesos qumicos y biolgicos. En los reactores Airlift, la
fluidizacin de slidos no es una consecuencia directa del burbujeo del gas sino es, ms bien,
debida a la circulacin del lquido dentro del reactor. Debido a lo anterior, stos equipos ofrecen
la posibilidad de una fluidizacin de slidos muy simple, de alta eficiencia y permiten establecer
ambientes internos con esfuerzos de corte aproximadamente constantes a lo largo del biorreactor,
debido a que la distribucin de la energa suministrada para agitacin y mezclado se realiza por
expansin del gas inyectado y no se introduce mediante energa cintica de un agitador. Por lo
tanto se evitan cambios morfolgicos y metablicos en las clulas de cultivo. Entre las
configuraciones geomtricas ms usadas en biotransformaciones, existen las de circulacin
interna y las de circulacin externa [6]. Reactores airlift de circulacin interna: El cuerpo del
reactor se divide en dos zonas, por medio de un tubo concntrico o bien por medio de una
particin plana colocada en forma vertical. En stos reactores solamente una de las regiones se
mantiene aireada y la otra funciona exclusivamente como recirculacin [6]. Reactores airlift con
circulacin externa: Consisten de dos columnas interconectadas en donde la columna de dimetro
mayor es la que se mantiene aireada y los lquidos se recirculan por la columna ms pequea [6].
Los reactores airlift estn comprendidos en cuatro zonas distintas, cada una de estas tiene su
propio patrn de flujo, el cual divide al reactor en dos regiones de flujo: flujo ascendente y flujo
descendente. Las zonas o canales permiten una recirculacin en macro escala del lquido
alrededor del circuito formado. La primera zona en la que el gas es aspersado se conoce como la
zona de ascenso, la dispersin de gas en el lquido se da generalmente en dos fases en corriente
paralela. Esta seccin, tiene la retencin de gas ms alta en el reactor y es en la que ocurre la
mayor parte de la transferencia de oxgeno. El lquido que ingresa al domo de la columna entra en
una zona de liberacin de oxgeno (zona II) que es un separador gas-lquido en el que algo o la
mayora del oxgeno dispersado es eliminado. El lquido libre de gas fluye entonces hacia la zona
de descenso (III) y viaja hacia el fondo de la columna (zona IV), en l cual completa el ciclo y
reingresa a la zona de ascenso.
Aunque el biorreactor Airlift presenta algunas de las caractersticas de las columnas de burbujeo
convencionales, la circulacin del fluido en escala industrial lo diferenca de los segundos. Esta

circulacin es un efecto causado por la retencin fraccional de oxgeno en la zona I y la zona III.
As mismo, esto crea una diferencia de presin hidrosttica entre el fondo de la zona I y el fondo
de la zona III, que acta como fuerza impulsora para el movimiento del fluido (ver figura 2.3) [6

FACTORES QUE INFLUYEN

BIORREACTOR AIRLIFT.

EN

LA

OPERACIN

DEL

Existen una serie de factores que influyen en la operacin y eficiencia de un sistema

detratamiento tipo Airlift y de los sistemas de tratamiento biolgico en general, sin embargoel
anlisis y control de ellos depender de las condiciones operacionales del sistema que sedesea
implementar.

Soporte

En el proceso de tratamiento, mediante un biorreactor tipo Airlift, se debe tener especial atencin
en la eleccin del soporte que es el material donde se producir. Eldesarrollo microbiano. Este
material debe presentar caractersticas de bajo costo, altaeficiencia y buena estabilidad en el
tiempo. Adems, se deben considerar otrascaractersticas fsicas y mecnicas: como estructura,
.rea especifica, resistencia al flujo ycapacidad buffer; y propiedades biolgicas: como
disponibilidad de nutrientes inorgnicosy actividad biolgica especifica.
Temperatura.
La mayora de los microorganismos que se utilizan para la degradacin de compuestosorgnicos
voltiles son mesofilos, es decir, pueden desarrollarse o realizar sus funcionesmetablicas que
oscilan entre los 10 y 35 C la temperatura del interior del biorreactor seincrementa cuando las
clulas son ms activas, lo que se produce dentro de un rango entre35 y 40C para organismos
degradadores del tolueno.

pH

Los valores de pH ms adecuados para la actividad microbiana dependern de lascondiciones

ambientales que necesite el microorganismo para su adecuado desarrollo biolgico.
Generalmente, las condiciones de pH requeridas para la biodegradacin decompuestos orgnicos
voltiles son neutras (entre 7 y 8), debido a que bajo estascondiciones los microorganismos
alcanzan mximas velocidades de desarrollo.
Velocidad de flujo y Tiempo de Residencia de la Fase Gaseosa.
La velocidad del flujo de gas de entrada es uno de los parmetros hidrodinmicos msimportantes
en el proceso, ya que regula el rgimen de flujo dentro del biorreactor ycuantifica la cantidad de
gas contaminado a ser tratado por unidad de tiempo, as como latransferencia de masa entre las
fases.
El tiempo de residencia del gas dentro del biorreactor es un parmetro muy importante
aconsiderar y est directamente relacionado con la velocidad del flujo del gas de entrada.
Nutrientes
Los nutrientes son componentes esenciales para el desarrollo de los microorganismos.
Losorganismos, en condiciones naturales, generalmente presentan carencias en fosforo,nitrgeno
y azufre. La adicin de estos compuestos estimula el crecimiento de la poblacinnatural, y quizs
an ms importante, mejora su metabolismo, facilitando el transporte por las membranas
celulares y, por lo tanto, el ataque metablico
Microorganismos y biopelcula.
Los microorganismos o la biopelcula son el componente ms crtico del sistema Airlift, yaque
son ellos los que producen la transformacin o destruccin del contaminante. La poblacin
microbiana requiere un cuidadoso control de su ambiente, tomando en cuentafactores como
temperatura, pH y nutrientes.
Control de biomasa.
Dentro de las variables que deben ser controladas en un reactor Airlift, destaca laconcentracin de
la biomasa en suspensin, debido a que existe una relacin directa entreeste parmetro y la
eficiencia de eliminacin del contaminante, por lo tanto el control de la biomasa posibilita el
aumento de la flexibilidad operacional del sistema.Una alternativa que permite mantener
constante la concentracin de biomasa en suspensin,es incorporar una fase liquida continua,
provista de un sedimentador de clulas que permitala separacin del soporte y biomasa,
retornando el soporte al biorreactor y realizando una purga de clulas continuamente

BIODEGRADACION DE PCB EN BIORREACTOR AIRLIFT

Biodegradacin aerbica de Bifenilos Policlorados (PCBs) mediante

el uso de bacterias aerbicas (Pseudomonas sp).
BIOPROCESO

TITULO:

Biodegradacin.

II

TEMA:

Biodegradacin de Bifenilos Policlorados (PCBs) mediante el uso

(Pseudomonas sp).

III

de bacterias aerbicas

PROBLEMA:

Biomagnificacin y bioacumulacin en los niveles trficos dentro de la cadena alimenticia, su

acumulacin ha causado varios efectos en la salud de los organismos que han sido expuestos.
(ATSDR, 1990, 2000).
IV

INTRODUCCIN:

Los bifenilos policlorados se produjeron comercialmente en los Estados Unidos desde 1929 hasta
1977, cuando se dejaron de manufacturar. (Aguilar, 2005). Los bifenilos policlorados son
compuestos sintticos que han sido ampliamente utilizados principalmente en aceites de
transformadores y condensadores debido a su baja presin de vapor, baja inflamabilidad,
estabilidad trmica y qumica, entre otras. Sin embargo, estos compuestos son altamente txicos,
se acumulan en tejidos adiposos y se adhieren fuertemente a matrices orgnicas tales como el
suelo, producto de su hidrofobicidad. (De Giorgis et. al., 2003).
Ante la preocupacin que existe sobre el impacto de estos contaminantes muchos pases
industrializados han empezado a tomar medidas con respecto a la erradicacin del uso y manejo
de los PCBs. Sin embargo, en algunos pases, an se utilizan productos que contiene este
contaminante, por ejemplo en el Ecuador en el ao 2006 se realiz un inventario nacional y se
encontr 6000 toneladas de aceite dielctrico que contiene bifenilos policlorados proveniente de
los transformadores elctricos.
La eliminacin de los PCBs en el medio ambiente depende del grado de cloracin del bifenilo. En
general, la persistencia de los PCBs aumenta con el grado de cloracin. Los procesos utilizados
con mayor frecuencia son los mtodos fsicos, qumicos y biolgicos, de ellos los de empleo ms
comn son la incineracin y la desorcin trmica, este ltimo utilizado para el tratamiento de
suelos contaminados con PCBs.
La biodegradacin es uno de los tratamientos que se utilizan para reducir la presencia de los
PBCs en el ambiente. La transformacin de los PBCs se realiza por dos procesos: aerobio y
anaerobio. (Aguilar, 2005).
-

Aerobio: Atacan oxidativamente, rompiendo el anillo y destruyendo los

compuestos.
Anaerobio: Remueven los cloros del anillo bifenlico sin afectar la estructura del
bifenilo (decloracin).

Tambin se ha propuesto la combinacin de ambos procesos para una degradacin ms eficiente,

en donde el tratamiento inicial es el proceso anaerobio que transforma los compuestos altamente

clorados en PCBs menos clorados y finalmente para su completa degradacin se emplean las
bacterias aerbicas. La mayora de
bacterias aerobias capaces de degradar productos qumicos txicos pertenecen a los gneros de
las Pseudomonas, Alcaligenes, Acinetobacter. (Evans, 1996)
El presente trabajo est orientado a demostrar la degradacin de Aroclor 1242 por Pseudomonas
sp., investigacin realizada por Vsquez y Reyes en el 2002. El Aroclor 1242 es un PCBs y forma
parte de numerosos compuestos que son usados en diversas actividades humanas, tales como la
industria de pinturas, lubricantes, asfalto, agricultura. Presenta alta persistencia en el ambiente y
toxicidad para el hombre y los animales. El presente trabajo est orientado a demostrar la
degradacin de Aroclor

I.

JUSTIFICACIN:

Aproximadamente 1.5 millones de toneladas de PCBs fueron producidos comercialmente a nivel

mundial desde 1929 hasta 1979. De la produccin total se estima que 750.000 toneladas han sido
liberadas al ambiente y una cantidad no determinada de PCBs est presente en equipos elctricos
todava en servicio (U.S. EPA, 1997; HELCOM, 2001; Mondello, 2002).
En la actualidad, las fuentes potenciales de contaminacin ambiental incluyen liberaciones
directas o accidentales de equipos elctricos en servicio o almacenaje y emisiones de sitios
contaminados con PCBs. Por lo tanto, los efectos de la contaminacin del medio ambiente, sus
causas y las consecuencias de la exposicin de los sistemas biolgicos a agentes nocivos es lo
que motiva a la investigacin de tecnologas ms efectivas, rpidas y ecolgicas para recuperar
suelos contaminados. Los procesos biolgicos son una alternativa para el tratamiento de bifenilos
policlorados en suelos contaminados.
Si se toman en cuenta los efectos contaminantes de los bifenilos policlorados y el riesgo potencial
que estos implican para el organismo humano por su incorporacin a travs de la cadena
alimenticia, se comprende la importancia de poder encontrar la metodologa ms eficiente que
puede aminorar los problemas causados por la bioacumulacin y biomagnificacin de estos
contaminantes.
V

OBJETIVOS

Objetivo General:
Demostrar que el proceso aerobio empleando Pseudomonas sp es una alternativa eficiente para la
degradacin de PCBs.
Objetivos Especficos:

VI

Realizar una caracterizacin de la bacteria que interviene en el proceso.

Determinar los puntos crticos.
Determinar la metodologa ms apropiada para la biodegradacin de los PCBs.

MARCO METODOLGICO

Caracterizacin del contaminante

La biodegradacin de los PCBs depende del grado de cloracin del bifenil. Las bacterias
aerbicas degradan de manera eficaz los bifenilos monoclorados, diclorados, triclorados y
tetraclorados. En el caso de biorremediacin aerbica, los mejores resultados se han obtenido en
suelos contaminados y sedimentos moderadamente contaminados (20 a 700 de PCB / kg), en
donde el nivel de contaminacin disminuye de un 40-75%.
Caracterizacin de la flora
Las Pseudomonas sp. han sido ampliamente utilizadas. Su metabolismo es respiratorio,
generalmente aerobio. Presentan una versatilidad metablica debido a su capacidad de utilizar
como fuente de carbono substratos muy variados. Las bacterias que son capaces de degradar
PCBs poseen genes bphA, bphB, bphC, bphD, que codifican las enzimas involucradas en la va
de degradacin aerobia.
Material y Mtodos
En este trabajo se presenta la metodologa ms eficiente que de acuerdo a consulta bibliogrfica
se utiliza para la degradacin de PCBs mediante Pseudomonas sp. Esta bacteria en comparacin
con otras tiene el mayor ndice de degradacin.
a) Preparacin del inculo
los bifenilos monoclorados, diclorados, triclorados y tetraclorados. En el caso de biorremediacin
aerbica, los mejores resultados se han obtenido en suelos contaminados y sedimentos
moderadamente contaminados (20 a 700 de PCB / kg), en donde el nivel de contaminacin
disminuye de un 40-75%.
Caracterizacin de la flora
Las Pseudomonas sp. han sido ampliamente utilizadas. Su metabolismo es respiratorio,
generalmente aerobio. Presentan una versatilidad metablica debido a su capacidad de utilizar
como fuente de carbono substratos muy variados. Las bacterias que son capaces de degradar
PCBs poseen genes bphA, bphB, bphC, bphD, que codifican las enzimas involucradas en la va
de degradacin aerobia.
Material y Mtodos
En este trabajo se presenta la metodologa ms eficiente que de acuerdo a consulta bibliogrfica
se utiliza para la degradacin de PCBs mediante Pseudomonas sp. Esta bacteria en comparacin
con otras tiene el mayor ndice de degradacin.
a) Preparacin del inculo
Cada uno de los cultivos de Pseudomonas sp se sembr en placas petri con agar comn mediante
el mtodo en superficie y se incub a 37C por 24 horas. Despus se realiz la cosecha bacteriana
con 5 ml de solucin salina fisiolgica en tubos de ensayo. Finalmente se hicieron diluciones
hasta alcanzar una concentracin de 106 bacterias por ml que es el inculo bacteriano.
b) Inoculacin al biorreactor
Se inocul 1 ml de inculo bacteriano a un biorreactor tipo Air Lift de 250 ml de capacidad.
Colocando 100 ml de Medio Mnimo de Sales (MMS) ms 1 mg de Aroclor 1242. Se puso en

funcionamiento el biorreactor, por un perodo de 7 das, teniendo en cuenta los siguientes

parmetros: pH 7.0, aireacin (60 cm3/min) y temperatura ambiente.
c) Recuento de unidades formadoras de colonia (UFC)
Se tomaron muestras de 1 ml de caldo de cultivo a los tiempos 0, 2, 4, 8, 12, 14, 24 y 30 horas
con los que se hicieron las diluciones respectivas (Esquivel y Hyaccha, 1996). De cada "dilucin
de siembra", se tom 1 ml de muestra y se sembr por el mtodo de incorporacin en placa
utilizando agar cuenta grmenes (PCA) por duplicado. Las placas se incubaron a 37C por 24 a
48 horas, al trmino de los cuales se hizo el recuento de las unidades formadoras de colonias.
d) Obtencin de la curva de crecimiento bacteriano
Con los recuentos de las unidades formadoras de colonias versus tiempo se obtuvo la curva de
crecimiento para cada cultivo a partir del cual se calcul la fase logartmica media de cada uno de
los cultivos.
e) Determinacin de la capacidad de degradacin de Aroclor 1242
Una vez conocida la fase logartmica media de cada uno de los cultivos se repiti la
parte a y b para la determinacin de la curva de crecimiento bacteriano a partir del
cual se tom 1 ml de muestra en la fase logartmica media y se inocul a otro
biorreactor tipo Air Lift conteniendo 100 ml de MMS ms 1 mg de Aroclor 1242 bajo
las siguientes condiciones: pH 7,0, aireacin (60 cm 3/min), por un perodo de 7 das
a temperatura ambiente, al trmino de los cuales se realiz la cuantificacin de

Aroclor existente en el medio de cultivo.

Cada una de las experiencias realizadas se hizo por duplicado, adems se realiz un control con
clulas inactivadas por autoclave a 121 C, por 15 minutos.
d) Cuantificacin de Aroclor 1242
Al trmino del perodo de incubacin el cultivo bacteriano fue sometido a un proceso de
extraccin de Aroclor residual en un embudo de separacin de 250 ml de capacidad para lo cual
se aadi 10 ml de ter etlico. La muestra se agit vigorosamente con el propsito de extraer
totalmente el Aroclor. Esta etapa se repiti dos veces. La fase orgnica conteniendo el Aroclor se
separ en un matraz de destilacin de 250 ml y luego se someti a un proceso de evaporacin
para recuperar el solvente en un evaporador rotatorio. El residuo conteniendo Aroclor 1242 se
diluy con alcohol metlico y se transfiri a un matraz volumtrico de 50 ml para su
cuantificacin.
Las lecturas de absorbancia se realizaron en un espectrofotmetro Diode Array UV/VIS HP 8452
a una longitud de onda de 224 nm(Roberts, 1974)(Perkin Elmer, 1992).
Las concentraciones de Aroclor fueron obtenidas de una curva de calibracin estndar preparada
previamente.
I.

RESULTADOS

CARACTERIZACIN DEL BIOPROCESO

Fuente de carbono
PCBs
Grupo microbiano

Pseudomonas Aerobia

Fuente de energa

PCBs

Donador de electrones

PCBs

Aceptor de electrones

O2

Productos

cido benzoico; cido

pirvico, Acetaldehdo

Eficiencia del proceso y parmetros crticos

Eficiencia
96% (promedio de los tres
cultivos)
pH
7,0
Temperatura
30C
Aireacin
60 cm3/min
Tiempo de incubacin
7 das
Tabla 1: Eficiencia y parmetros crticos mtodo de Vsquez y Wilson

I.

DISCUSIN

La degradacin de PCBs en el ambiente es un proceso relativamente lento y variable. Por lo tanto

la transformacin de PCBs a nivel ambiental est influenciada por algunos factores que incluyen
concentracin de PCBs, tipo de poblacin microbiana, disponibilidad de nutrientes y temperatura
(Farrington, 2000).
Es probable que tambin ocurra volatilizacin del compuesto a la atmsfera. Una vez que los
bifenilos se encuentran en la atmsfera pueden migrar a grandes distancias, en una serie de ciclos
de volatilizacin y deposicin, siendo la causa de la contaminacin global (Kuckuck, 2000).
De acuerdo a investigaciones realizadas por Patricia Portero Barahona las cepas adaptadas a
PBCs corresponde a cuatro gneros: Alcaliges sp., Pseudomonas sp., Sphingomonas sp., y
Stenotrophomonas sp. Estos resultados coinciden con los obtenidos de otras investigaciones.
Clark et al. (1979) y Bedard et al (1978) seleccionaron especies de Alcaligenes. Furuwaka et al.
(1983) caracteriz a Sphingomonas paucimobilis. Barton et al. (1988) y Hayase et al. (1990)
identificaron varias especies del gnero Pseudomonas, capaces de metabolizar diferentes
congneres de PCBs.
Los resultados obtenidos referente al porcentaje de degradacin bacteriana de Aroclor 1242
(96%); corroboran investigaciones que evaluaron la degradacin de mezclas comerciales de
PCBs. Portero (2007) degradacin de Aroclor 1254 (0 a 31%) y Aroclor 1260 (6 a 53%) Tucker
et al. (1975) demostr que una variedad de Aroclores fueron degradados: Aroclores 1221 y 1242
(90 a 100%) y el Aroclor 1254 parcialmente (50 a 70%).

Las Pseudomonas han desarrollado el potencial gentico para el uso de bifenilos policlorados
como fuente de carbono y energa en los procesos metablicos. (Focht,1994). La supervivencia
de
las Pseudomonas sugiere que poseen la capacidad de utilizar bifenilos policlorados como
donadores de electrones, debido a que la fuente de carbono se incluy en el medio de cultivo
(Focht, 1994).
La cepa seleccionada en este estudio coincide con los resultados de investigaciones realizadas por
Bedard et al. (1986 y 1987), Gibson et al. (1993), Billingsley et al. (1997) y Seah et al. (2001)
que identificaron a especies pertenecientes a los gneros Pseudomonas sp., como especies con
excepcional rango de degradacin de congneres de PCBs de Aroclor 1242, 1248 y 1254.
VII
-

CONCLUSIONES
Los tres cultivos degradaron Aroclor 1242 en cantidades de: 0,9984mg, 0,8940 mg y
0,9838 mg., teniendo una capacidad de adaptacin y crecimiento en el medio lquido de
enriquecimiento suplementado con bifenil policlorado.
Los tres cultivos de Pseudomonas sp. degradan de manera efectiva bifenilos con cuatro
cloros en su estructura. Estas bacterias pueden ser consideradas aptas para utilizarse en
procesos que permitan generar tecnologas de biorremediacin para zonas contaminadas
con PCBs.
El promedio de eficiencia de degradacin de PCBs es del 96%.
Para una degradacin eficiente se deben tomar en cuenta los siguientes parmetros como:
pH 7.0, aireacin (60 cm3/min) y 21C (temperatura ambiente).
El mtodo de Vsquez y Wilson utiliz un biorreactor tipo Air Lift de 250 ml de
capacidad colocando: 100 ml de Medio Mnimo de Sales (MMS) + 1 mg de Aroclor 1242
+ 1 ml de solucin bacteriana para lo cual obtuvo una porcentaje de biodegradacin del
96%. El mtodo de Patricia Portero posterior a la seleccin de las bacterias capaces de
biodegradar PCBs utiliz: 100 ml de Medio Mnimo de Sales + 1 ml de solucin
bacteriana + 40 mg de Aroclor 1254, 1260 para lo cual obtuvo un porcentaje de
biodegradacin del 31 53%. Esta diferencia de porcentajes de degradacin tiene lgica
ya que el Aroclor 1242 presenta menor cantidad de cloros, tomando en cuenta que los
nmeros 1242, 1254, 1260 representa en primera instancia el nmero de carbonos (12) y
en segunda instancia el porcentaje de cloracin. (42, 54, 60).

VIII
-

IX

RECOMENDACIONES

Los niveles de degradacin obtenidos en laboratorio deberan ser probados en procesos de

mayor escala.
Para obtener una degradacin ms completa se debera trabajar con procesos combinados
como reactores tipo batch, en donde exista una fase anaerobia y una aerobia.
Se deberan realizar ms estudios sobre la degradacin de PCBs con bacterias anaerobias,
para conocer el mecanismo de decloracin de los PCBs.

BBLIOGRAFA

-ARAOZ, B. y VIALE, A A. Deshalogenacin microbiana de bifenilos policlorados en

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Enero 2009], p.47-51.

Disponible
en
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http://www.scielo.org.ar/scielo.php?
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-De Giorgis F., Schwarz F., Chamy R., Schiappacasse M.
ALTERNATIVAS DE
TRATAMIENTOS BIOLOGICOS PARA LA REMEDIACION DE SUELOS
CONTAMINADOS CON PCBs EN CHILE. Pontificia Universidad Catlica de Valparaso,
Escuela de Ingeniera Bioqumica, Avda. Brasil 2147. XV CONGRESO DE INGENIERIA
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2009).
Disponible en la World Wide Web: http://www.bvsde.paho.org/bvsaidis/chile15/alterna.pdf
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Disponible en la World Wide Web:
http://redalyc.uaemex.mx/redalyc/pdf/416/41615202.pdf ISSN 0188 -6266
Disponible en la World Wide Web:
http://www.linros-interinsumos.com/Tempo/revista1/degradacion_aroclor_1242.htm
Vsquez Mara., Reyes Wilson. Degradacin de Aroclor 1242 por Pseudomonas sp. Revista
No. 2 de la Sociedad Peruana de Gestin Ambiental. Deposito Legal N 1301012000-0501
Biblioteca Nacional del Per. 2002
- Tesis de grado Seleccin y adaptacin de bacterias aerobias biodegradadotas de PCBs;
Patricia Portero Barahora; Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Quito 2007.