Eletroforese em gel
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Tipos de eletroforese
Eletroforese em gel de agarose - Nesse caso, a agarose é utilizada como gel para a
eletroforese. A agarose é um polissacarídeo, e forma uma rede que segura as moléculas
durante a migração. Dependendo da concentração de agarose, têm-se uma diferença no
gradiente de separação. Para preparar um gel de agarose, simplesmente faz-se a mistura
entre o pó de agarose e água quente. Após fundir, coloca-se brometo de etidio, que fará
o DNA ou RNA "brilhar" quando exposto ao UV. Quando a mistura esfriar, o gel estará
duro. Esse endurecimento é feito em um local apropriado, o mesmo local onde será feita
a corrida da amostra. Um detalhe importante é a colocação do pente no gel durante o
endurecimento. O pente cria poços que serão utilizados para a colocação das amostras.
poços
Sentido da
corrida
Cromatografia
A cromatografia é uma técnica analítica que procura separar os diversos
componentes de uma mistura complexa, como o sangue e a urina. Após a separação,
estes componentes podem ser quantificados.. É utilizada para separar substâncias com
diferentes solubilidades num determinado soluto. Na cromatografia uma mistura é arrastada
(por um solvente apropriado) num meio poroso e absorvente. Como diferentes substâncias têm
diferentes velocidades de arrastamento num determinado solvente, ao fim de algum tempo há
uma separação dos constituintes da mistura. Este processo é normalmente usado para
pequenas quantidades de amostra. Existem diversos tipos de cromatografia, com
indicações específicas, sensibilidade e complexidade variáveis. Por exemplo, a
cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) é uma técnica muito versátil e poderosa
e tem sido empregada na determinação de diversas substâncias, especialmente
aminoácidos.
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Diagnóstico em paciente sintomático
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• Ácido pirúvico, dosagem no plasma;
• Ácido beta hidróxi-butírico, dosagem no plasma;
• Carnitina livre e total, dosagem no plasma e,
• Porfobilinogênio, uroporfirinas, urobilinogênio, coproporfirinas, ácido delta
aminolevulínico, dosagem na urina;
Doenças mitocondriais
Dosagem enzimática
Dosagem de aminoácidos no plasmo e no líquor.
Acidose metabólica: A acidose metabólica é um distúrbio freqüentemente encontrado
em alguns EIM, seja pelo acúmulo de lactato, como ocorre nas doenças mitocondriais,
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seja pelo acúmulo de outros ácidos orgânicos. Algumas vezes, ela é persistente, mas
com sinais clínicos discretos, o que dificulta o seu reconhecimento.
O diagnóstico bioquímico depende muito da análise dos ácidos orgânicos urinários, por
meio de cromatografia gasosa e/ou espectrometria de massa (GC/MS).
Métodos bioquímicos:
São exames que permitem avaliar o tipo e o grau de comprometimento hepático e servem como indicadores
tanto da evolução natural da infecção para a cura ou para a cronicidade, quanto para monitorar a eficácia
terapêutica de medicamentos.
1. Fotocolorimetria
2. Caracterização de açúcares
3. Caracterização de lipídeos
4. Caracterização das proteínas
5. Dosagem de glicose
6. Dosagem de triglicerídeos
7. Dosagem de colesterol
8. Dosagem de proteínas séricas
9. Dosagem de amilase sérica
10. Dosagem de cálcio
11. Dosagem de Transaminases (aminotransferases)
12. Dosagem de Fosfatase Alcalina
13. Identificação de Vitamina B12
14. Identificação de vitamina C
15. Identificação de Tiamina
16. Identificação de Folato
17. Identificação de Niacina