Antioxidantes en la salud, en la

enfermedad y en la alimentacin

Estrs oxidativo y
neurodegeneracion.
Antioxidantes y Alzheimer.
Modulo II. Patologas y estados Redox
FEM. Molina de Segura. Curso 2011-2012
Dr. Julin Castillo Snchez (14/02/2012)

Todos somos conscientes de que

Tambin somos conscientes de que pasan cosas, pero porqu?

Y. tenemos alguna forma de

evitar esta desagradable
situacin?

Por tanto, nuestros hbitos y actuaciones deberan dirigirse a..

Peroy si no somos
capaces o
no podemos conseguirlo?

Alzheimer
Nos encontramos ante un proceso
fisiolgico de prdida de la funcin
cognitiva, neurodegeneracin y
demencias.

Distribucin mundial de incidencia del Azheimer

Evolucin 1990-2020

En el ao 2007, el alzheimer afecta en Espaa a unas 600.000 personas, afectando a cerca de un 25%
de los mayores de 65 aos.
En 2020 habr ms de un milln de enfermos de Alzheimer en Espaa y en el ao 2050, se espera
que haya cerca de 2 millones de afectados.

Segn el Dr. Molinuevo, coordinador del grupo de estudio de Conducta y Demencias de

la SEN, manifiesta que: la estrategia fundamental debe centrarse en el diagnstico
precoz y en la instauracin de medidas teraputicas eficaces en los estadios iniciales de
la enfermedad.

Cul es el futuro?

Informe realizado por la Universidad John Hopkins (Baltimore,

USA) en 2007 (Prof. Ron Brookmeyer).

En el ao 2006 sufran esta patologa ms de 26 millones de

personas (estudio anterior: ao 1990, 14 millones; previsin
ao 2020, 30 millones).

En el ao 2050, 1 de cada 85 personas padecer la enfermedad,

alcanzando una poblacin de 106 millones de personas. La
mayor incidencia se dara en Asa, donde se generan el 48% de
los casos mundiales.

Si, de acuerdo a los conocimientos actuales y en investigacin,

se tomasen medidas para retrasar el inicio de la enfermedad,
podran reducirse en 12 millones las personas afectadas. Si
adicionalmente, se lograse actuar sobre la progresin de la
enfermedad, el nmero terico de afectados se reducira en
unos 10 millones ms de personas.

Principales causas del Alzheimer

1.
2.
3.
4.

Factores fisiolgicos neurodegenerativos.

Factores relacionados con patologas especficas.
Factores ambientales y metablicos diversos.
Factores genticos (originales y/o mutados).

Factores fisiolgicos, metablicos,

patolgicos y ambientales

Escasa actividad cerebral.

Escasa actividad fsica.
Dietas inadecuadas (distribucin lipdica) que
generan elevados niveles de ox-LDL.
Hiperglucemia (dicotoma insulina-glucocorticoides).
Elevados niveles de homocisteina.
Hipertensin arterial.
Accidentes cerebro-vasculares (isquemias y
traumatismos).
Contaminacin ambiente

Metales neurotxicos (Al, Zn,Pb

Pesticidas y otras quimio-agresiones
Agentes infecciosos (sepsis-inflamacin)

Conozcamos algo del

sistema nervioso
para entender como
pueden afectar a su
funcionamiento estos
procesos

Y que efectos provocan a medio y largo plazo estos factores

de generacin?

Degeneracin de las neuronas colinrgicas (bloqueo de la

transmisin neuronal)
Formacin de placas de protena -amiloide.
Formacin de ovillos neurofibrilares de protenas tau.

Plasticidad neuronal

Aspectos caractersticos del alzheimer

Degradacin neuronas
Colinrgicas

Placas seniles

Dficit cognitivo

Ovillos neurofibrilares

Placas de protena amiloide y ovillos neurofibrilares

Neurona normal

Neurona degradada

Degradacin de la actividad cerebral

NORMAL

Placa amiloide teida con

hematoxilina

Placa amiloide vista con el

microscopio de fluorescencia

ALZHEIMER

Protena amiloide (APP)

/ secretasas

Ovillos neurofibrilares
(protenas tau de larga vida media)
(albmina)

PLACAS: depsitos fibrilares

de pptido amiloide A

Fallo en los mecanismos

de transporte del pptido
hacia el exterior del CNS

Acumulacin generalizada de pptidos (PLACAS)

y de protenas (OVILLOS)

qu hacemos?: dianas teraputicas y potenciales

tratamientos en investigacin y desarrollo

Tratamientos relacionados con

los receptores de acetilcolina

Tratamientos dirigidos
al control de la acumulacin de
protena Beta-Amiloide

Compuestos
neuroprotectores

Tratamientos dirigidos
al control de la acumulacin de
Ovillos neurofibrilares
de protenas Tau

Tratamientos hormonales
Estrategias antioxidantes
y antiinflamatorias
Otros

El Alzheimer y la dicotoma oxidacin-inflamacin

Relacin estrs oxidativo- enfermedades neurodegenerativas.

Elevada tasa de metabolismo cerebral (oxgeno ---- especies radicales).

Vulnerabilidad neuronal: (elevada tasa metablica y escasez de
antioxidantes endgenos).
Estrs oxidativo mediador clave en la neurotoxicidad de la protena Betaamiloide: incremento peroxidacin de los lpidos de la membrana
neuronal.
En cerebros con Alzheimer se producen un gran nmero de factores
neuro-inflamatorios como son: inmunoprotenas y citoquinas generadas
por neuronas, astrocitos y microglia.

Mecanismos de desarrollo y posible prevencin

Adems de la acumulacin
generalizada de pptidos amiloides
(PLACAS) y de
protenas tau (OVILLOS),
sucede algo trascendental..

protena

protena

lisina

arginina

protena

Bases de Schiff

glucosa

oxidacin

das

Compuestos de Amadori
Semanas, meses,.

AGEs

Activacin del factor NF-kB

Induccin de la expresin de citoquinas
Y otros elementos pro-inflamatorios

Crculo
pro-inflamatorio

Interleukinas:
IL 1, IL 1, IL 6, IL 8, IL 12
TNF-
MCSF-1
VCAM-1
COX-2
iNOS
Activacin de macrfagos, neutrfilos
Activacin de microgla, neuronas, astrocitos..

incremento estrs oxidativo!!!

O2-, OH, ROO, ONOO.

AGE

RAGE

Varias etapas

Activacin NADPH oxidasa

Generacin de anin superxido

O2Protena IkB-P

Cascada de estrs oxidativo

TRX (tioredoxin)

citosol

Activacin del factor NF-kB

ncleo

Adems de la acumulacin generalizada de pptidos amiloides (PLACAS)

y de protenas tau (OVILLOS), sucede algo trascendental..

glucosa

protena

protena

lisina

arginina

Bases de Schiff
oxidacin

Los dos factores

clave
en el estudio del
Alzheimer, el
estrs oxidativo
y la inflamacin
consiguiente,
pero!!

protena

das

Compuestos de Amadori
Semanas, meses,.

AGEs

Los productos de glicosilacin avanzada (AGEs), estn presentes en

las placas de proteina Beta-amiloide y contribuyen a su insolubilidad y
a su resistencia a la accin de proteasas.

AGEs

RAGEsClulas endoteliales

y otras

AGE

RAGE

Existen varios, bien caracterizados,

Algunos son miembros de la familia
de las inmunoglobulinas: MSR-A,
AGE-A; AGE-R1; AGE-R2; AGE-R3

Varias etapas
Activacin de los factores de transcripcin inflamatoria

AGE

RAGE

Varias etapas

Activacin NADPH oxidasa

Generacin de anin superxido

citosol

O2Protena IkB-P

ncleo

Cascada de estrs oxidativo

TRX (tioredoxin)

Activacin del factor NF-kB

Activacin del factor NF-kB

Induccin de la expresin de citoquinas

Y otros elementos pro-inflamatorios

Crculo
pro-inflamatorio

Interleukinas:
IL 1, IL 1, IL 6, IL 8, IL 12
TNF-
MCSF-1
VCAM-1
COX-2
iNOS
Activacin de macrfagos, neutrfilos
Activacin de microgla, neuronas, astrocitos..

incremento masivo del estrs oxidativo!!!

O2-, OH, ROO, ONOO.

antioxidantes

A
antioxidantes

Microgla
activada

La necesaria combinacin
entre AGEs y proteina A
para desencadenar la
agresin pro-inflamatora
de la microgla activada

antioxidantes

Polifenol

[Fe libre]

PKC (, )

IRP 1/2

-secretasa

APP

sAPP

A
Desestabilizacin

de A

ROS

APOPTOSIS

Generacin y
acumulacin de
factores proinflamatorios

Neuroproteccin

Profesor Valdivieso

Actuales estrategias y tratamientos

antiinflamatorios y antioxidantes

Principales estrategias antiinflamatorias:

Atenuacin de los efectos destructivos de las clulas de microgla activadas.

Reduccin de la concentracin de protena beta-amiloide (mecanismos an no
definidos).
Inhibicin de las COX (sobre todo COX-2), durante las etapas ms tempranas
de la progresin clnica de la enfermedad).
Bsqueda de agonistas de las PPAR- (receptor activado por el proliferador
de peroxisoma) que bloqueen la secrecin de agentes proinflamatorios.

Los medicamentos antiinflamatorios no esteroideos AINEs, que incluyen

aspirina, ibuprofeno e indometacina, estn bajo investigacin. Los
corticosteroides son los medicamentos antiinflamatorios con mayor
frecuencia prescritos, pero el uso a largo plazo no es recomendable.
Existen, opiniones contradictorias sobre el uso de estos AINEs.

Se estn realizando diversos estudios empleando

diversas sustancias de origen natural PRESENTES EN
LA DIETA: vitaminas, dietas enriquecidas en
polifenoles, etc..

dieta

Compuestos bioactivos: vitaminas, polifenoles,

Actividad antioxidante-antiinflamatoria

Reduccin del nivel de oxidacin en plasma

PERO,.?

. hay evidencias
epidemiolgicas significativas?
antioxidantes / antiinflamatorios

DCC
demencia

?
Descenso de la
capacidad cognitiva

Alzheimer
(RIA)

hay evidencias epidemiolgicas significativas?

Kalmijn et al., 1997:

Vitaminas C y E
Flavonoides
(estadsticamente no significativo)
Morris et al., 2002:
Vitamina E

DCC
DCC

NO
SI

DCC

SI

Commeges et al., 2000:

Flavonoides
RIA
(estadsticamente no significativo)
Engelhart et al., 2002:
Vitaminas E y C
RIA
Otros suplementos antioxidantes
RIA
(carotenoides)
Washington Heights-Inwood Columbia Aging Protect 2003:
Suplementos antioxidantes
RIA
(vitaminas)

SI

SI
NO

NO

hay evidencias epidemiolgicas significativas?

Estudio PAQUID: envejecimiento fisiolgico y funcional.

Poblacin > 65 aos (> 5.000 individuos)
Tiempo del proyecto: 1990-2003 (controles cada 2 aos)
Capacidad cognitiva: MMSE, BVRT, IST
Ingesta controlada de antioxidantes y flavonoides a travs de la dieta:
ctricos, kiwis, frutas en general, remolacha, col, espinacas, esprragos,
pimientos, avena, chocolate, t, caf, zumos de fruta..
Principales flavonoides ingeridos (evaluado segn Hertog et al., 1993):
quercetina, kaempferol, miricetina, y luteolina.
Ingesta mg/da

ndice MMSE
(desde 28.4)

% Reduccin
MMSE

0-10.5

26.2

- 7.7

10.5-13.6

26.7

- 6.0

13.6-17.7

27.1

- 4.6

17.7-36.9

27.5

- 3.1

hay evidencias epidemiolgicas significativas?

Un reciente estudio realizado en Nueva York con 2,258 personas, con una media de
70 aos de edad, sugiere que, aquellos que siguieron una dieta Mediterrnea
(rica en antioxidantes presentes en frutas, vegetales, legumbres, pescado, vino,),
mostraron un reduccin del 40% en la incidencia de desarrollo y aparicin de la
enfermedad de Alzheimer (Scarmeas et al., 2006).

Un estudio realizado sobre 1,836 Japoneses-Americanos, monitoriz durante 10

aos su estado fisiolgico general, encontrando que aquellas personas que haban
ingerido frutas y/o zumos de frutas, al menos tres veces por semana, mostraban
una reduccin del 76% en la incidencia de desarrollo y aparicin de la enfermedad
de Alzheimer .

Podra sugerirse, por tanto, que los polifenoles, que como sabemos se encuentran
presentes en muchos alimentos, especialmente vegetales y frutas, pueden
detener y/o ralentizar algunos de los procesos que conducen a la acumulacin
del pptido beta-amiloide en el cerebro y, por tanto, retrasar la potencial aparicin
del (Dai et al., 2006).

Estudio de Letenneur et al., 2007.

1640 personas > 65 aos.

Periodo 1990-2000 (control cada 2,5 aos)

Tipos de control: MMSE, BVRT, IST

Objetivo: relacionar capacidad cognitiva del sujeto con la ingesta de

flavonoides.

Conclusin: positiva, pero no definida estructural ni molecularmente.

Un anlisis de situacin: porqu estos difusos

resultados?

Las concentraciones en plasma de los compuestos ingeridos a travs de la dieta,

o de alimentos suplementados, son insuficientes de acuerdo con los datos
estudiados de dosis-respuesta.

Los procesos metablicos a los que se ven sometidos estos compuestos, y que
suponen en gran medida su modificacin estructural, reducen significativamente
su potencial eficacia.

El incremento de las actividades antioxidante y antiinflamatoria en plasma, sera

solo el resultado de la ingesta continuada de un heterogneo conjunto de micro
y macronutrientes biolgicamente activos.

Ello conduce a la consideracin de que no es uno solo el mecanismo que regula

estas actividades, interviniendo de forma global procesos de captacin de
radicales, regulacin de factores de modulacin de seales celulares, regulacin
de la expresin gnica de diversos enzimas, etc

Es evidente que existe ya, publicados en los ltimos aos, un buen nmero de
estudios cientficos que permiten considerar a estos compuestos (polifenoles en
general) como potenciales agentes teraputicos y/o profilcticos en las
patologas neurodegenerativas, sin embargo, son necesarios nuevos y ms
completos ensayos clnicos correctamente planificados y verificados, que
permitan extrapolar con seriedad esa aparente potencialidad.

Cual debera ser, por tanto, la actividad

de estos compuestos en las
enfermedades neurodegenerativas?

Deben ser capaces de atravesar la barrera

hematoenceflica (BBB) y proteger a las clulas
cerebrales de los radicales libres.

Deben inhibir la iNOS, reduciendo los niveles de

peroxinitrito y la formacin de AGEs.

Deben ser
inflamatoria.

capaces

de

reducir

la

respuesta

La barrera hematoenceflica: BBB

(Blood Brain Barrier)

Esta barrera est formada por el endotelio de los capilares

sanguneos del cerebro, bajo la influencia de clulas
asociadas, especialmente astrocitos.

Existen adems otros transportadores involucrados en la

regulacin del paso de sustratos a travs de la BBB, incluidas
ciertas protenas asociadas (Multidrug resistance-associated
proteins, MRPs).

La interaccin entre la estructura molecular del compuesto y la

del transportador es fundamental para poder atravesar la BBB.

En funcin de cierto nmero de estudios publicados, los

compuestos de naturaleza lipoflica o semi-lipoflica, con
estructuras menos polares (aglicones, esterificados, etc..)
atraviesan ms fcilmente la BBB.

Ginkgo Biloba: flavonoles y ginkgolides

Existen muchas y complejas discusiones y controversias

sobre su eficacia y mecanismo de funcionamiento.
Algunos estudios parecen mostrar resultados similares
al Donepezil (Aricept).
Combinara efectos diversos: antioxidantes,
antiapoptticos y antiamiloidgenos.

Catequinas del t

Curcuminas

Pretende reunir los conceptos de antioxidante y

antiinflamatorio.
Se basa sobre todo en estudios epidemiolgicos realizados
en India, donde la prevalencia del AD es 5 veces inferior que
en USA.?????
Parece mostrar eficacia en la reduccin de la acumulacin de
-Amiloide (IC50 en torno a 1 M) (2004, 2005).
Tiene ciertos problemas de biodisponibilidad.
Hay varios estudios epidemiolgicos en curso.

Free Radic Biol Med. 2012 Jan 1;52(1):35-45.

Flavonoids, cognition, and dementia: actions, mechanisms, and potential therapeutic utility for
Alzheimer disease.
Williams RJ, Spencer JP.
Department of Biology and Biochemistry, University of Bath, Bath, UK.

There is increasing evidence that the consumption of flavonoid-rich foods can beneficially influence
normal cognitive function. In addition, a growing number of flavonoids have been shown to inhibit the
development of Alzheimer disease (AD)-like pathology and to reverse deficits in cognition in rodent
models, suggestive of potential therapeutic utility in dementia.
The actions of flavonoid-rich foods (e.g., green tea, blueberry, and cocoa) seem to be mediated by the
direct interactions of absorbed flavonoids and their metabolites with a number of cellular and
molecular targets.
For example, their specific interactions within the ERK and PI3-kinase/Akt signaling pathways, at the
level of receptors or kinases, have been shown to increase the expression of neuroprotective and
neuromodulatory proteins and increase the number of, and strength of, connections between neurons.
Concurrently, their effects on the vascular system may also lead to enhancements in cognitive
performance through increased brain blood flow and an ability to initiate neurogenesis in the
hippocampus.
Additional mechanisms have been suggested for the ability of flavonoids to delay the initiation of
and/or slow the progression of AD-like pathology and related neurodegenerative disorders, including a
potential to inhibit neuronal apoptosis triggered by neurotoxic species (e.g., oxidative stress and
neuroinflammation) or disrupt amyloid aggregation and effects on amyloid precursor protein
processing through the inhibition of -secretase (BACE-1) and/or activation of -secretase (ADAM10).

Situacin y necesidades

La mayor parte de los compuestos polifenlicos que acabamos de

describir no terminan de demostrar una eficacia contrastada. Sigue
siendo necesario identificar nuevos compuestos que demuestren
consistentemente su potencial capacidad como protectores de la
neurodegeneracin.

Compuestos lipoflicos que puedan atravesar la BBB.

Posibilidad de actuacin sobre diferentes dianas preventivas y/o

teraputicas, a travs de diversas rutas.

Bsqueda e identificacin de los receptores especficos de estos

compuestos.

Necesidad de descubrir los verdaderos mecanismos de actuacin,

con objeto de posibilitar el diseo de agentes neuroprotectores ms
especficos.

Qu hemos hecho y que estamos

haciendo nosotros?

Proyecto financiado por el INFO

de la Regin de Murcia

Aspectos incluidos en el estudio

Estudio de la actividad neuroprotectora de ciertos

compuestos polifenlicos de origen vegetal en la
prevencin y tratamiento del alzheimer.

Efectos txicos e inflamatorios de protena -amiloide en microgla

y neuronas.
Efectos de diversos compuestos polifenlicos sobre la produccin
de NO, TNF- y viabilidad celular en clulas de microgla N-11
activadas.
Efectos de diversos compuestos polifenlicos sobre la produccin
de NO, TNF- y viabilidad celular en macrfagos (RAW264.7)
activados.
Efectos de diversos compuestos polifenlicos sobre la viabilidad
de
neuronas N2A incubadas con microgla y/o macrfagos
activados.
Desarrollo de un sistema rpido y eficaz para la identificacin de
compuestos antiinflamatorios y neuroprotectores.

Efectos txicos y antiinflamatorios de la

protena -Amiloide en microgla y neuronas.
Estimulacin por AGEs
N O P r o d u c tio n b y N -1 1
M ic r o g lia in R e s p o n s e to L P S
20

[Nitrite] (M)

Produccin de NO

Produccin de TNF-

15

10

0
0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

4000

[L P S ] ( g /m l)
3000

[TNF- ] (pg/ml)

NO Production by N-11 Microglia

in Response to BSA-AGE

N O P r o d u c t io n b y N - 1 1 M ic r o g lia in
R e s p o n s e t o L P S a n d IN F -
25

BSA-Glu1
BSA-Glu2
BSA-Glu3

40
30

2000

[Nitrite] ()

Nitrite ()

50

20

20
15

250

500

Protein Concentration
(g/ml)

750

1000

10

10

AGE-BSA
BSA

+ 5 U/m l INF -
+ 0 U/m l INF -

0
0

10

20

30

[ L P S ] ( g /m l)

40

50

12

time(h)

15

18

21

24

Estudio inicial para la determinacin de los valores de IC50 de la capacidad de

inhibir la produccin de NO por clulas de microgla y macrfagos activados

Inhibicin de la produccin
de NO y TNF-: cultivos de microglia

120

Cell viability (AB)

Cell viability (MTT)
TNF-
Nitrite

80
125

Viabilidad

60

% +ve control

% of control

100

40

100
75
50

Oxido Ntrico

25

20

0
0

0
0

20

40

60

[apigenin] (M)

80

100

25

50

[Apigenin] ()

75

100

Aparente lgica ausencia de sinergia

100

100

Nitrite
(% control)

125

Nitrite
(% control)

125

75
50
25
0
0.01

Apigenin
Carnosic acid
Apigenin + Carnosic acid
0.1

75
50
25

10

[Apigenin] ()
[Carnosic acid] (g/ml)

100

0
0.1

Apigenin
Citrolive
Apigenin + Citrolive
1

10

[Apigenin] ()
[Citrolive] (g/ml)

100

Estudios sobre la viabilidad neuronal

Estudio sobre la viabilidad celular de neuronas N2A cultivadas

separada y/o conjuntamente con clulas de microgla y/o
macrfagos activados por diferentes compuestos.

Capacidad de proteccin, regeneracin mantenimiento

de la viabilidad celular de diversos compuestos. Dichos
compuestos se incubaron con clulas de microglia N-11y
neuronas N2A-EGFP, determinando la viabilidad neuronal
mediante
fluorescencia EGFP usando el ensayo MTP y
citometra de flujo. (EGFP: Enhanced Green Fluorescent
Protein; aislamiento de plsmido de E. Coli pEGFP-N1 y
transferencia a neuronas N2A para marcaje fluorescente)

Desarrollo de un sistema rpido, eficaz y especfico para la

identificacin simultnea de compuestos potencialmente
antiinflamatorios y neuroprotectores.

Alamar Blue
PI
EGFP

100
75
50
25
0
-5

-4

75
50
25
0
-1

50
25
0

log [CH3CH2OH] (M)

-6

-5

-4

-3

log [NaN3] (M)

D
Alamar Blue
PI
EGFP

-2

75

-7

100

-3

Alamar Blue
PI
EGFP

100

-2

log [H2O2] (M)

C
Cell viability (% of control)

-3

Cell viability (% of control)

Cell viability (% of control)

Cell viability (% of control)

Alamar Blue
PI
EGFP

100
75
50
25
0
-7

-6

-5

-4

log [Triton X-100] (M)

Viabilidad celular (expresada en neuronas-EGFP) en cultivos de neuronas incubadas 24 horas con diferentes toxinas.
(la viabilidad se midi por Alamar B, Ioduro de Propidio, y EGFP fluorescencia despues de 24 h:
incubacin con H2O2 (A), NaN3 (B), CH3CH2OH (C) y Triton X-100 (D).

Estadios en la muerte celular de neuronas-EGFP tratadas con Triton X-100

Neuronas N2a expresando EGFP, incubadas con 15M de Triton X-100 durante 6 h hasta visualizar la muerte celular.
Se uso Ioduro de propidio para marcar el ncleo celular y observar as la desintegracin

Co-cultivo de EGFP-neuronas y microglia N-11.

A. Neuronas-EGFP (verde fluorescente) y clulas de microgla N-11 en una proporcin 1:1,
visualizadas con un estereomicroscopio
(480nm ex/520nm em).
B. Anlisis por citometra de flujo de neuronas 2A-EGFP y clulas de microgla N-11.

24h

48h
MTP assay
FACS

80
60
40
20
0
0.0

5.0

10.0

20.0

[IFN + LPS] (U/ml and g/ml)

EGFP positive cells (%)

100

100

EGFP positive cells (%)

MTP assay
80

FACS

60
40
20
0
0.0

5.0

10.0

20.0

[IFN LPS] (U/ml and g/ml)

Viabilidad celular de
neuronas-EGFP cocultivadas con clulas de
microgla N-11 tratadas con
la combinacin de 20 U/ml
IFN- y 20 g/ml LPS durante
24 y 48 h. La expresin de
neuronas EGFP se analiz a
travs de ensayo MTP y
citometra de flujo (FACS).

100

MTP assay
FACS

80
60

**
40

**

**

**
**

20
0
0.0

5.0

10.0

25.0

EGFP positive cells (%)

EGFP positive cells (%)

100

MTP assay
FACS

80
60

**

40

0.0

100

FACS

60

**
*

EGFP positive cells (%)

EGFP positive cells (%)

**

1.0

5.0

10.0

15.0

[Carnosic acid] ()

MTP assay

20

**

50.0

100

40

**

20

[Apigenin] (M)

80

**

MTP assay

80

FACS

60

**

40

**

**
**

**

** **

20
0

0
0.0

10.0

25.0

50.0

[Co-enzyme Q10] (M)

100.0

0.0

1.0

5.0

10.0

20.0

[Curcumin] (M)

Estudio dsis-respuesta del efecto de diversos compuestos

antioxidantes sobre la muerte neuronal inducida por IFN- y
LPS en co-cultivos de neuronas-EGFP y clulas de microgla
N-11, despues de 48 horas.

NO production (% of control)

Apigenin
Carnosic acid
Co-enzyme Q10
Curcumin

100
75
50
25
0
0

20

40

60

80

100

[compound] (M)

Inhibicin de la produccin de NO por ciertos antioxidantes en

co-cultivos de neuronas-EGFP y clulas de microgla N-11.
Ambas fueron activadas en el co-cultivo por 20 g/ml LPS y 20
U/ml IFN-.

Idea de mecanismo: captacin vs inhibicin

Capacidad antioxidante-antiinflamatoria:
Conclusiones bsicas

Algunos polifenoles y flavonoides antioxidantes y/o

antiinflamatorios, son capaces de regular, tambin
de forma dosis-dependiente la produccin de NO.

Ciertas combinaciones de estos compuestos

muestran un cierto efecto aditivo, pero no sinrgico.

La acumulacin de protena -amiloide induce de

forma dosis-dependiente la produccin de NO por
clulas de microgla N11 (y ciertos macrfagos).

Algunos compuestos polifenlicos son capaces de

regular la produccin de NO inducida por la protena
-amiloide.

Viabilidad celular: Conclusiones bsicas

Ciertos flavonoides y polifenoles son capaces de

regenerar
la
viabilidad
de
neuronas
N2A
previamente tratadas con altas concentraciones de
protena -amiloide.

Ciertos flavonoides y polifenoles son capaces de

proteger a las neuronas del ataque de clulas de
microgla activadas, incrementando la viabilidad
neuronal de forma dsis-dependiente.

El grado de proteccin de estos compuestos parece

estar relacionado, con su capacidad para
regular/inhibir la produccin de NO (bloqueo o an
ms, regulacin de la expresin de la iNOS).

 Y ahora: Test in vivo!!

10

10
10
99

9
8

8
7
7
6

6
5

Control

ApigeninK
4
3
3

Estimulacin
memoria

2
1
0
0

14

21

28

35

42

49

0
56

Grupo/
das

1day

Day 7

Day 14

Day 21

Day 28

Day 35

Day 42

Day 49

Day 56

Salino

10/10

9/10

7/10

5/10

3/10

0/10

0/10

0/10

0/10

Apigenina

10/10

9/10

9/10

9/10

8/10

8/10

8/10

6/10

6/10

jugando con gusanitos!!

Antioxidanteantiinflamatorio

Buscamos marcadores de prevencin!!!!

A versatile high throughput screening system for the simultaneous
identification of anti-inflammatory and neuroprotective compounds.
Hansen E, Krautwald M, Maczurek AE, Stuchbury G, Fromm P, Steele M, Schulz
O, Garcia OB, Castillo J, Krner H, Mnch G.
J Alzheimers Dis. 2010 Jan; 19(2):451-64.

Y ahora, qu?

Mol Nutr Food Res. 2008

Apr;52(4):427-38.

Cmo saber cuando prevenir?