UTILIZACIN DE LOS
MEDIOS DE CULTIVO
.
Son
los
ms
corrientemente
utilizados, y aunque no vamos a
enumerarlos todos, s son los ms
conocidos en un laboratorio de
Microbiologa.
Agar nutritivo: Este medio es
bastante bueno para el cultivo de
grmenes
que
no
presentan
exigencias particulares. No es
diferencial.
Agar sangre: Es un medio
enriquecido que se utiliza adems
para la investigacin de los diversos
tipos de hemlisis (, gamma ).
Se utiliza para el crecimiento de
estreptococos. Para la preparacin
del agar sangre se puede utilizar el
agar nutritivo enriquecido con
cloruro sdico o un preparado
enriquecido con otras sustancias
como Columbia o el tripticase de
soja. La adicin de sangre a un
medio de cultivo no proporciona las
sustancias que estn en el interior de
los hemates, pero s puede aadir
factores inhibidores del crecimiento
bacteriano presentes en el suero.
Este es un inconveniente que puede
solucionarse calentando la sangre
para romper los eritrocitos y para
que se destruyan las sustancias
inhibidoras, que son termolbiles.La
sangre utilizada como aditivo a estos
medios suele ser sangre de carnero
enriquecimiento de Salmonellas.
Agar
Cetrimida.
Agar
King: Permiten el crecimiento de
Pseudomonas, inhibiendo Gram
positivos y la mayora de
enterobacterias.El segundo pone
adems
de
manifiesto
la
pigmentacin
fluorescente
de
Pseudomonas bajo luz UV.
Agar Schaedler: Es un medio con sangre y
vitamina K muy adaptado para el cultivo de
anaerobios.
Agar Gardnerella:Agar con sangre humana ms
una mezcla de antibiticos que permiten la
observacin
de
colonias
betahemolticas
caractersticas de Gardnerella vaginalis
Campylosel: Se utiliza para el aislamiento de
Campylobacter intestinales creciendo a 42 C en
microaerofilia.
Agar BCYE (Buffer Charcoal Yeast Extract):Se
utiliza para el aislamiento de bacterias del gnero
Legionella
Lwenstein-Jensen:Este medio se utiliza para el
cultivo de Mycobacterium tuberculosis. Contiene
verde malaquita parainhibir parcialmente el
crecimiento de otras bacterias. El huevo se utiliza
como sustancia de enriquecimiento.
Tincin Simple
Bacilos
grandes
variaciones
morfolgicas:
estreptobacilos, cocobacilos
fusiformes,
Tinciones especficas
Se utilizan para incrementar el contraste en las clulas
microbianas y revelan estructuras particulares, entre las
que se incluyen en los flagelos y las cpsulas.
Tincin adecuada
En su forma ms simple, el verdadero proceso de tincin
puede implicar la inmersin de la muestra en la solucin
colorante, seguido del aclarado que es un lavado para
eliminar el exceso de colorante y la observacin. Muchos
tintes, sin embargo, requieren del uso de un mordiente.
Cuando la solucin de colorante en exceso se elimina
durante el aclarado, la tincin mordentada permanece.
Tincin negativa
Un mtodo sencillo de tincin para bacterias, que adems
es un claro caso de cromofobia y que por lo tanto funciona
aun cuando los mtodos de tincin positiva fallan, es
la tincin
negativa.
Esto
puede
ser
conseguido
simplemente extendiendo la muestra en un portaobjetos y
aplicando
directamente
sobre
ella
una
gota
de nigrosina o tinta china y cubriendo luego la muestra
humedecida con un cubreobjetos. Luego de esto, los
microorganismos pueden ser observados fcilmente por
medio de microscopa en campo claro como inclusiones
claras muy bien contrastadas contra el medio oscuro que
las rodea
Tincin indirecta:
Se denomina de este modo a las tinciones que hacen uso
de un mordiente. Un mordiente habitual es el cido tnico.
Tincin directa:
Hablamos de tincin directa
interacciona directamente con
tratamiento previo.
cuando el colorante
el sustrato, sin otro
Tincin: RODAMINA-AURAMINA
Los cidos miclicos de las paredes celulares de las
micobacterias poseen afinidad para los fluorocromos
auramina y rodamina. Estos colorantes se fijan a las
bacterias, que aparecen de color amarillo o naranja
brillante contra un fondo verdoso. El permanganato de
potasio, empleado como contraste, evita la fluorescencia
inespecfica. Todos los microorganismos cido-alcohol
resistentes, incluyendo los esporozoarios parsitos, se
tien con estos colorantes.
Un aspecto importante de la coloracin rodaminaauramiria es que luego los frotis pueden ser reteidos con
la coloracin de Ziehl-Neelsen o Kinyoun directamente
sobre la tincin con el fluorocromo, si se elimina antes el
aceite de inmersin. De esta forma, los resultados
positivos pueden ser confirmados con las coloraciones
tradicionales, que adems permiten la diferenciacin
morfolgica.
Colorantes
La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos
que tienen alguna afinidad especfica por los materiales
celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia son
molculas cargadas positivamente (cationes) y se
combinan con intensidad con los constituyentes celulares
cargados negativamente, tales como los cidos nucleicos
y los polisacridos cidos.
Verde
de
metilo;
El verde
de
metilo se
utiliza
frecuentemente en microscopia de campo claro, para teir
la cromatina de las clulas y facilitar as su visualizacin.