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Metabolitos secundarios

1) No son esenciales para el crecimiento


2) Generalmente se producen como mezclas de productos muy
relacionados qumicamente entre s.
3) La produccin puede perderse fcilmente por mutacin espontnea
4) Cada uno de estos productos es producido por un grupo muy
reducido de organismos
ANTIBIOTICOS
ANTITUMORALES:

doxorubicina
bleomicina
zinostatin
INHIBIDORES DE PROTEASAS:

leupeptina
aprotinina
INHIBIDORES DE LA SINTESIS DEL COLESTEROL: compactina
lovastatina
INMUNOSUPRESORES : ciclosporinaA
FK506 (tracolimus)

ANTITUMORALES:
Doxorubicina. S. peuceticus
Bleomicina S. verticullus
Zinostatina S. macromomyceticus

INHIBIDORES DE PROTEASAS Y PEPTIDASAS


Leupeptina, aprotinina
Streptomyces sp

A58365A Streptromyces sp

INHIBIDORES DE LA SINTESIS DEL COLESTEROL


Compactina (Penicillium)
Lovastatina (Aspergillus)

HMG CoA
HMG CoA
Reductasa
Mevalonato
Geranil PP
Farnesil PP
Escualeno

CH3

INMUNOSUPRESORES
CiclosporinaA
FK506 (tracolimus)

Colesterol

Estatinas

ANTIBITICOS
INTRODUCCIN
GRUPOS DE MICROORGANISMOS PRODUCTORES
APLICACIONES
IMPORTANCIA ECONOMICA

CLASIFICACIN DE LOS ANTIBITICOS POR


SU MECANISMO DE ACCIN:
ANTIBITICOS QUE ACTAN SOBRE LA PARED
CELULAR.
ANTIBITICOS LACTMICOS
MODO DE ACCIN
ESTRUCTURA QUMICA
BIOSNTESIS Y REGULACIN
TECNICAS DE ESTUDIO
DESARROLLO DE CEPAS
MTODOS DE PRODUCCIN

GRUPOS DE MICROORGANISMOS PRODUCTORES DE


ANTIBIOTICOS
Hongos filamentosos:
Penicillium (penicilina)
Aspegillus
Acremonium (cefalosporina)
Actinomicetos, familia Streptomycetaceae.
Streptomyces (tetraciclina, eritromicina, estreptomicin
Nocardia
Micromonospora
Familia Bacillaceae. Ej.
Bacillus (bacitracina, gramicidina y polimixina)

APLICACIONES
1) Como agentes quimio-terapeticos.
2) Antibiticos utilizados en patologa de plantas.
3) Antibiticos usados para aumentar el crecimiento de los
animales en veterinaria.
5) Antibiticos usados como herramientas en bioqumica
y en biologa molecular.
IMPORTANCIA ECONOMICA
Aproximadamente 30000 toneladas/ao.24 billones de $
Debe continuar la bsqueda de nuevos antibiticos?

PARED CELULAR
Gram-

Gram+

CLASIFICACIN DE LOS ANTIBIOTICOS POR SU


MECANISMO DE ACCIN
1.- Antibiticos que afectan a la pared celular:
Bloquean la sntesis del peptidoglicano
fosfomicina, cicloserina, bacitracina, vancomicina, beta-lactmicos
2.- Antibiticos que actan sobre la membrana plasmtica:
Polipeptidicos: polimixina B
Polienos: nistatina y la anfotericina B
Agentes imidazlicos
3.- Antibiticos que acta sobre la sntesis de protena
Actan sobre la transcripcin: Actinomicina y Rifamicina
Actan sobre la traduccin: Aminoglicsidos (estreptomicina,
kanamicina..etc), tetraciclinas, cloranfenicol y eritromicina.
4:- Antibiticos que actan sobre el DNA.
Mitomicina, novobiocina, cido nalidixico.

Antibiticos que afectan a la pared celular

Los aminoazcares son de dos tipos


N-acetylglucosamina (NAG) y su pariente
cido N-acetylmuramic acid (NAM).

INTERIOR

EXTERIOR

autolysins

N acetilglucosamina 1P

Glucosamina 6P

N acetilglucosamina 6P

UTP
P-P

UDP-NAG
FOSFOMICINA
PEP

Glutamato

CICLOSERINA

Lala Dglu DAP Dala-Dala

NADPH

2D-ala

Fructosa 6P
Glutamina

2L-ala

NADP

UDP-NAM

UDP-NAM

pentapptido

Lipido-P-P-NAM

Lpido-P
(Bactoprenol)

pentapptido

BACITRACINA

INTERIOR

UDP-NAG
Lpido-P-P
UDP

EXTERIOR

Lipido-P-P-NAM-NAG
pentapptido

NAM-NAG-NAM-NAG+NAM-NAG
pentapptido pentapptido

VANCOMICINA
Transpeptidacin

NAM-NAG-NAM-NAG
pentapptido

PENICILINAS /CEFALOSPORINAS

Resistencia a vancomicina en
enterococos, genes vanHAX

Antibiticos que afectan a la membrana plasmtica


Polimixina B

(6, metil octanoico)

Efecto detergente

Antibiticos que afectan a la membrana plasmatica


Anfotericina B

La anfotericina B forma complejos con los esteroles de la


membrana y crea poros causando alteraciones en la
permeabilidad

Ketoconazol, fluconazol
Afectan a la ruta de biosntesis del ergosterol,
inhiben a la esterol-14-alfa-desmetilasa

Actan sobre el DNA


(Actinomicina)

Transcripcin
Antibiticos que
inhiben la sntesis de
protenas
Traduccin
Iniciacin,
elongacin y
terminacin

Actan sobre RNA polimerasa


(Rifamicina)

Actan sobre la subunidad 30S


(Aminoglicsidos y Tetraciclinas)
Actan sobre la subunidad 50S
(Cloranfenicol y Eritrocicina)

Antibiticos que inhiben la sntesis de proteinas: Transcripcin

Actinomicina D

Rifamicina, R= H
Rifampicina, R=

Antibiticos que inhiben la sntesis de proteinas: Traduccin


Inhibidores de la sntesis de protenas a nivel de la subunidad 30S

AMINOGLICSIDOS
5 4 3
2
6
1

Estreptomicina
Tobramicina
Amicacina
Gentamicina

TETRACICLINAS

Tetraciclina
Aureomicina
Doxiciclina

Streptomyces
Micromonospora

Antibiticos que inhiben la sntesis de proteinas: Traduccin


Inhibidores de la sntesis de protenas a nivel de la subunidad 50 S

Cloranfenicol

Antibiticos que inhiben la sntesis de DNA

Mitomicina

Se une a la subunidad Beta de la DNA


girasa

Novobiocina

Antibiticos -lactmicos:
Penicillium chrysogenum

Antibiticos -lactmicos: Estructura qumica


ncleo 6-APA
6-aminopenicilnico

anillo lactmico

anillo tiazolidinico

ncleo 7-ACA
7-aminocefalospornico
anillo lactmico
anillo dihidrotiazinico

Especies productoras de los principales grupos de antibiticos -lactmicos


Ncleo -lactmico

Estructura

Penam

Cefem

Hongos

Bacterias Gram (+)

Gram (-)

Aspergillus
Penicillium
Epidermophytum
Trichophyton
Acremonium
Anixiopsis
Arachnomyces
Spiroidium
Scopulariopsis

Streptomyces
Nocardia

Flavobacterium
Xantomonas
Lysobacter

o
Clavam

Streptomyces

Carbapenem

Serratia
Erwinia

Nocardia

Pseudomonas
Gluconobacter
Chromobacter
Agrobacter
Acetobacter

Monobactam

Streptomyces

NH

Transpeptidacin

+ penicilina

Modificaciones de las Penicilinas

NATURAL PENICILLINS

Penicillin G o V
Penicillin acylase (E. coli)

H2N

+ R-COOH

6-aminopenicillanic acid

La Cefalosporina C fue descubierta en el hongo Acremonium chrisogenum.


Tiene actividad contra bacterias Gram (-) y es ms estable que la Penicilina
G frente a las penicilinasas

Acremonium

Conversin de la Cefalosporina C a 7-ACA

(D- amino acid oxidase)

Cefalosporinas
Primera generacin

Segunda
Generacin
(cefamicina)

Tercera generacin

Cuarta
generacin

Oral
Cephalexin (Keflex)
Cephradine (Velosef)
Cefadrosil (Duricef)

Oral
Cefuroxime (Ceftin)
Cefacor (Ceclor)
Cefprozil (Cefzil)
Ceftibutin (Cedax)
Cefpodoxime (Vantin)

Oral
Cefixime (Suprax)
Cedinir (Omnicef)

Oral
Cefpirome

IV
Cefazolin
Cephalothin
Cephapirin
Cephradine

Cefoxitina
(cefamicina)

IV
Cefamandole
Cefonocid
Cefuroxime
Cefoxitin
Cefotetan
Cefmetazole

IV
Ceftazidime
Cefoperazone
Ceftriaxone
Cefotaxime
Ceftizoxime

IV
Cefepime (Maxipime)

Cefepime

Biosntesis de penicilinas y cefalosporinas

penicilinas

cefalosporinas

Biosntesis de penicilinas y cefalosporinas


(L)

penicilinas
(D)

En Acremonium

En Streptomyces

Agrupamiento de genes implicados en la biosntesis de


antibiticos -lactmicos en varios organismos fngicos y procariotas

Aspectos evolutivos relacionados con la biosntesis de


Penicilinas y Cefalosporinas
El % de identidad entre la ACV Sintetasa, IPN Ciclasa, Cef E y Cef F, de bacterias con
las protenas homologas en eucariotas es del 57-60%. Este porcentaje es mayor que el
encontrado entre otras protenas muy conservadas, como enzimas del metabolismo primario.
Se ha sugerido una posible transferencia horizontal de la ruta biosinttica
de antibiticos lactmicos desde organismos procariticos hasta los eucariotas.
Se estima que la transferencia debi ocurrir hace 370 millones de aos
Esta teora esta apoyada por la ausencia de intrones en el gen pcbAB (11KB), pcbC y
cef EF, mientras que genes especficos ausentes en los clusters bacterianos pero
presentes en hongos productores de penicilinas y cefalosporinas como penDE,
cefG, cef D1 y cef D2 , contienen intrones.
Otro dato a favor de esta teora es la funcionalidad de las secuencias promotoras
de los genes pcbAB de A. chrysogenum en un organismo procaritico como E. coli.
CONSECUENCIAS. A partir de entonces los hongos podran competir con las bacterias
de su entorno usando un arma a la que ellos mismos no son sensibles

Desarrollo de cepas
0,07g/l

Mtodos clsicos: obtencin


de mutantes

0,55g/l
Penicillium notatum (Fleming)

2 u/ml
85.000 u/ml

7g/l

Desarrollo de cepas
Clsico. Mutagnesis utilizando rayos X, mostazas nitrogenadas,
rayos u.v, EMS. Tras la mutagnesis:
1- Se evala la actividad antibacteriana de los mutantes
(BSQUEDA)
2- Se efecta el proceso de preseleccin de mutantes como paso previo
a la evaluacin de la produccin (SELECCIN).
2-1. En la resistencia al propio antibitico producido.
2.2. En la bsqueda de superproductores de precursores.
2-3. Seleccin de mutantes resistentes a iones metlicos pesados
2-4. Destoxificacin selectiva

Recombinacin gentica: se utiliza para traspasar funciones de


una cepa a otra
Recombinacin parasexual. Fusin de protoplastos.

Procesos parasexuales:
Procesos no meiticos en clulas vegetativas que conducen a recombinacin
FUSION PARASEXUAL: recombinacin mittica
Penicillium

(10-3)

(10-6- 10-7)

FUSION DE PROTOPLASTOS: permite mezclar el material gentico


de cepas que no poseen sistemas naturales de recombinacin

Mejora de la produccin de antibiticos lactmicos


mediante ingeniera gentica
*Mutagnesis dirigida
*Aumento de la dosis gnica de enzimas biosintticas de pasos
limitantes
*Produccin biosinttica de nuevos antibiticos
*Expresin heterloga de genes en hongos filamentosos

ACV

*Produccin
ACV anlogo biosinttica de
nuevos
antibiticos

Anlisis de cepas industriales


En muchas de las cepas industriales que se utilizan actualmente han
ocurrido fenmenos de amplificacin gnica.

5-6 copias
14 copias

Secuencia especfica de recombinacin TTTACA

Bsqueda de nuevas molculas


*Uso de cepas de bacterias hipersensibles a lactmicos pero no a
otros antibiticos
* Para buscar molculas de la familia de la Vancomicina se inmoviliza
el dipptido D-ala-Dala en una columna de afinidad por la que se pasa
un extracto
*La adicin de D-ala-D-ala a las placas de prueba revertir la accin
de antibiticos de la familia de las Vancomicinas
*Mutasntesis, es el empleo de mutantes bloqueados en un paso a los
que se aaden distintos compuestos utilizables por la siguiente enzima
de la ruta

Mutasntesis

Precursor
natural

Bloqueo

Precursor
anlogo

Antibitico
Anlogo
Antibitico
natural

Proceso de produccin de penicilina


Fuente de N2: lquido de maceracin
de maz
Fuente de carbono: lactosa
pH: 6,5-7,7
cido fenilactico

40.000-200.000 litros

5x 103 /ml

Acetato
de amilo
0-3C, pH 2,5

proceso aerbico (vvm, 0,5-1)


impulsores de tipo turbina para el mezclado

Medio alcalino
cristaliza