Actinobacillus pleuropneumoniae

Etiologia
Desde el punto de vista morfolgico Actinobacillus pleuropneumoniae se presenta
con el microscopio ptico como pequeos cocobacilos o pleomrficos (0'5-1 x 1-2
m), Gram negativos, con cpsula e inmviles. Estructuralmente, en la membrana
externa, se incluye el lipopolisacrido (LPS) y distinto tipo de protenas de gran
inters. La cpsula es, tambin, una estructura de gran importancia que se
relaciona con la patognesis y que es muy til en la clasificacin. En aislamientos
recientes se ha descrito la presencia de fimbrias.

Caracteres de crecimiento y cultivo

La mayora de las cepas de A. pleuropneumoniae se caracterizan por su
dependencia del factor V, de coagulacin de la sangre (nicotinamida adenina
dinucletido, NAD) constituyendo el biotipo I, que es el principal; no obstante se
han descrito tambin otras capaces de crecer en su ausencia constituyendo el
biotipo II, de menor inters prctico, aunque estas cuestiones han sido revisadas
recientemente y en la actualidad todas las cepas se integran en un biotipo nico.
Actinobacillus pleuropneumoniae crece bien a 37 C, preferiblemente en presencia
de CO2 (5%), al menos en los cultivos iniciales. En 24 horas o menos (en los
subcultivos) produce colonias redondas, pequeas (1 mm de dimetro o menos),
lisas y brillantes o mates y de aspecto creo, de color gris blanquecino y olor
caracterstico.
No se consideran microorganismos muy exigentes y crecen bien en distintos tipos
de medios de cultivo (suplementados con NAD) aunque los medios ricos en
glucosa, minerales y vitaminas, producen mejores crecimientos y estos son ms
rpidos. Habitualmente se utiliza agar chocolate suplementado con b-NAD (0'0250'07%). Alternativa mente se utilizan tambin agar PPLO suplementado y agar
sangre (5% de sangre), inoculando una estra nodriza deStaphylococcus aureus o
S. intermedius, que producen NAD y permiten un crecimiento satlite.

Caracteres metablicos y diferenciacin de especies

prximas
Actinobacillus pleuropneumoniae posee numerosas enzimas que le permiten un
metabolismo muy activo. Produce cido de la glucosa (sin gas) y tambin (con
gas) del manitol, xilosa y ribosa y, algunas cepas, incluso de la lactosa. Adems
poseen una potente ureasa, a y b-galactosidasa, fosfatasa alcalina, reducen los
nitratos a nitritos y producen SH2. Desde el punto de vista de la diferenciacin con

otras especies, reviste especial importancia su capacidad hemoltica y el que

produzcan reaccin CAMP con exosustancias (b- toxina) de S. aureus.

Antgenos. Serotipos.
Actinobacillus pleuropneumoniae se clasifica en serotipos sobre la base del
antgeno capsular (K). Como se ha indicado, inicialmente, sobre la base de la
dependencia o no del NAD para el crecimiento, se describieron 2 biotipos (I y II);
en el biotipo I se integraron 12 serotipos (1 a 12) y en los serotipos 1 y 5 se
sealaron subtipos (a y b). Dentro del biotipo II, tambin se incluyeron serotipos 1
y 2. Sin embargo como consecuencia de que, pese al carcter dependiente o no
de NAD, se comparten antgenos entre ambos biotipos, recientemente se ha
unificado el sistema en un solo biotipo con 15 serotipos, con la particularidad de
que en los serotipos 2, 4, 7 y 9 pueden aislarse cepas independientes, igual que
los serotipos 13 y 14. En cualquier caso, ambos biotipos producen
pleuroneumona porcina, clnicamente indiferenciable.
El antgeno O (somtico) del LPS, inmunodominante, causa reacciones cruzadas
que originan problemas en la tipificacin, especialmente muy evidentes en el caso
de los serotipos 1, 9 y 11; 3, 6 y 8; y 4 y 7. Un serotipo se identifica por sus
antgenos K y O.
Otras molculas de la membrana externa (protenas de la membrana externa
-PME-) tambin son antgenos importantes desde el punto de vista taxonmico. Se
incluyen lipoprotenas y otras protenas que se expresan en presencia de maltosa
o ausencia (condiciones limitantes) de hierro libre. Finalmente algunas sustancias
solubles que son secretadas durante el crecimiento y multiplicacin microbiana
poseen carcter antignico, entre las que destacan las toxinas RTX.
En el proceso de tipificacin de A. pleuropneumoniae se utilizan diversos mtodos
serolgicos en los que se emplean antisueros producidos en conejo o anticuerpos
monoclonales. En cuanto al antgeno, cuanto ms simple y menos agresiva sea su
preparacin, se consigue mayor especificidad (un extracto obtenido en solucin
salina a temperatura ambiente proporciona los mejores resultados). Respecto del
sistema, aunque se han utilizado muchos procedimientos, han prosperado la
aglutinacin rpida en placa, la coaglutinacin y la hemaglutinacin indirecta.
Otros sistemas presentan ms inconvenientes (falta de especificidad, reacciones
cruzadas o inconvenientes propios de ejecucin de la tcnica).
La aglutinacin rpida en placa, aunque presenta algunas reacciones cruzadas,
evita otras, pero su principal desventaja es la autoaglutinacin espontnea de las
cepas rugosas o semirrugosas (con cadenas laterales cortas o ausentes, como
ocurre en los serotipos 3 y 6 y, algunas cepas de los serotipos 1 y 5). La
coaglutinacin evita esto pero no diferencia entre los serotipos 3, 6 y 8, aunque
globalmente es un procedimiento de eleccin pues permite usar antgenos

solubles (que se fijan a las inmunoglobulinas, fijadas a su vez por la porcin Fc , a

la protena A de Staphylococcus aureus).
La hemaglutinacin indirecta se basa en la utilizacin de eritrocitos
sensibilizados con un extracto salino de A. pleuropneumoniae que se enfrentan
a diluciones de los antisueros de cada serotipo. La tcnica es sensible y
especfica y permite diferenciar entre serotipos (excepto entre el 6 y 8 y,
tampoco, con H. parasuis).

Resistencia en el ambiente y a los factores fisicoqumicos.

Actinobacillus pleuropneumoniae es muy lbil en el medio ambiente y en el
laboratorio no sobrevive ms de 8-10 das en caldo a temperatura ambiente
(independientemente de la suplementacin o no con NAD) o algo ms a 4C.
En suero la supervivencia a temperatura ambiente alcanza los 12 das,
duplicndose en el caso de suplementar el medio con NAD o bajar la
temperatura a 4C, aunque a esta temperatura y suplementado, la
supervivencia solo llega a los 18 das. Resulta adecuada para su conservacin
prolongada la utilizacin de temperaturas de -80C en un medio de
conservacin que incluye leche descremada y glicerina, al igual que la
liofilizacin. Distinto es, sin embargo, lo que puede suceder en condiciones de
campo, en las que el microorganismo se encuentra protegido por las
secreciones nasales y fluidos orgnicos que permiten mayor
supervivencia.Actinobacillus pleuropneumoniae es destruido por la mayora de
los desinfectantes. En un estudio en el que se compararon ms de 20 principios
activos y formulaciones comerciales complejas resultaron eficaces gran nmero
de ellos, especialmente los derivados de cloro, aunque la materia orgnica
siempre resulta un inhibidor comn. A. pleuropneumoniae tampoco resiste
especialmente el calor.

Factores de virulencia.
La virulencia de A. pleuropneumoniae es multifactorial, integrada por la suma
de distintos factores estructurales y secretados; entre los primeros se incluyen
componentes de la membrana externa, como el LPS, la cpsula, las fimbrias o
las PME, mientras que entre los segundos se incluyen las toxinas.
El LPS posee propiedades semejantes al de otros Gram negativos, asociadas a
su carcter de endotoxina; adems tambin permite la adherencia al epitelio
de las vas respiratorias, siendo clave en la colonizacin e incluso tambin
puede representar una alternativa en la captacin del hierro, a partir de la
hemoglobina. El LPS es importante en la respuesta inflamatoria por la

capacidad inductora de citoquinas (TNF-a, IL-1, IL-6 y IL-8) que desempean

una importante funcin en la patognesis de la enfermedad respiratoria. En la
pleuroneumona porcina se han descrito niveles altos de IL-6, IL-1 y TNF-a en el
suero de los animales enfermos y tambin en clulas de lavado pulmonar 2-4
horas post-infeccin. El TNF-a aparece tanto en procesos agudos como en
crnicos.
El grado de desarrollo de la cpsula vara segn los serotipos (mientras que en
los serotipos 1, 3 y 5 esta bien definida, en el 2 y el 7, apenas se identifica). Su
papel se deduce del descenso de mortalidad cuando se utilizan anticuerpos
anti-cpsula, aunque otros datos son ms cuestionables; adems posee
propiedades antifagociticas y resulta una barrera muy til frente a los
anticuerpos o frente al poder bactericida natural del suero (activacin del
complemento por la va alternativa).
Con el microscopio electrnico se han identificado fimbrias a travs de las
cuales se adhiere a la traquea y al pulmn, por lo que se piensa que pueden
desempear un papel activo en la colonizacin.
Algunas PME inducen anticuerpos que actan como opsoninas en la fagocitosis
por PMN (neutrfilos) y otras (como los receptores para transferrina), inducen
anticuerpos neutralizantes, protectores de la infeccin. Para resolver el
problema de la captacin de hierro A. pleuropneumoniae ha desarrollado un
sofisticado sistema de receptores de superficie que se expresan cuando en el
ambiente bacteriano existe escasez de hierro libre y que son capaces de
obtener este elemento de diversas fuentes complejas, previa transformacin
en formas solubles. Tales receptores incluyen dos protenas denominadas TbpA
(o Tbp1) y TbpB (o Tbp2), altamente inmungenas, funcionales con transferrina
porcina, srica o de los espacios intersticiales, pero incapaces de realizar la
misma funcin con compuestos similares procedentes de especies animales
distintas. La TbpA es una protena transmembrana de 106-110 kDa con escasa
variabilidad de su secuencia, segn los serotipos. La TbpB es, tambin, otra
protena (lipoprotena) represible por el hierro, pero mucho ms variable que
TbpA en funcin de los serotipos (se han descrito 3 tipos), con un tamao entre
60 y 70 kDa y parece que est expuesta en la superficie. Parece que ambas se
presentan como un complejo.