TEMA 1.

1.1

BIOTECNOLOGA ALIMENTARIA

GENERALIDADES DE LA BIOTECNOLOGA

El trmino biotecnologa puede parecer nuevo para el pblico amplio, pero, la biotecnologa est
presente en la vida cotidiana hace mucho tiempo. De hecho, la biotecnologa es una actividad
antigua, que comenz hace miles de aos cuando el hombre descubri que al fermentar las uvas se
obtena un producto como el vino. Tambin es biotecnologa la fabricacin de cerveza a partir de la
fermentacin de cereales que el hombre empez a elaborar hace 4.000 aos, y la fermentacin de
jugo de manzanas para la fabricacin de sidra. En estos procesos intervienen microorganismos que
transforman componentes del jugo de frutas o de cereales en alcohol.
Tambin es biotecnologa la fabricacin de pan mediante el uso de levaduras, la elaboracin de
quesos mediante el agregado de bacterias, y tambin de salames. El yogurt tambin es un producto
que se obtiene mediante procesos biotecnolgicos desde la antigedad. Aunque en ese entonces los
hombres no entendan cmo ocurran estos procesos, ni conocan la existencia de microorganismos,
podan utilizarlos para su beneficio. Estas aplicaciones constituyen lo que se conoce como
biotecnologa tradicional y se basa en la obtencin y utilizacin de los productos del metabolismo de
ciertos microorganismos. Se puede definir la biotecnologa tradicional como la utilizacin de
organismos vivos para la obtencin de un bien o servicio til para el hombre.
El trmino biotecnologa puede significar que se trata de una disciplina individual, pero la esencia
de la biotecnologa es su naturaleza multidisciplinaria, la cual requiere amplias aportaciones de la
ciencia y la ingeniera. Esto quiz se ilustra mejor en la figura siguiente:

La biotecnologa surge como un espacio de recombinacin de conocimiento de diversas areas del

conocimiento que pretende dar soluciones a los problemas relacionados con la medicina, la
agronoma, zootecnia, la agroindustria, la ingeniera de alimentos, problemas ambientales, entre
otros campos.
1.2

BIOTECNOLOGA TRADICIONAL APLICADA A LA INDUSTRIA

La biotecnologa se aplica a diferentes ramas de la industria: alimenticia, textil, detergentes,

combustibles, plsticos, papel, farmacutica, etc. En general lo que se usa son productos del
metabolismo de los microorganismos. Por ejemplo, algunas de las aplicaciones de la biotecnologa
tradicional a la industria son:
1

 El alcohol que se puede usar para la industria alimenticia o farmacutica, pero tambin se
puede usar como combustible (en Brasil se produce alconafta a partir de la caa de azcar).
Produccin de yogures probiticos en los que se usa el microorganismo entero que est
presente en el producto final.
A partir de microorganismos se pueden fabricar cidos orgnicos para diferentes
aplicaciones, como el cido ctrico para endulzar gaseosas y golosinas.
Muchos antibiticos son fabricados por microorganismos, como la penicilina que la fabrica
un hongo de la familia penicillium.
Los plsticos son polmeros de diferentes estructuras qumicas. La mayora de ellos se
producen a partir de derivados de petrleo. Pero hay microorganismos que fabrican
polmeros que son biodegradables.
Las enzimas son protenas que tiene la funcin de catalizadores biolgicos, que aceleran
reacciones qumicas, haciendo que el proceso sea ms rpido y eficiente que cualquier otro
proceso qumico. Las enzimas se utilizan habitualmente en los detergentes o polvo para lavar
la ropa. Por ejemplo, lipasas para sacar manchas de grasas, proteasas para sacar manchas de
protenas, etc. Cada tipo de enzima tiene un rango de temperaturas dentro del cual es activa.
En la temperatura ptima acta al 100% y al alejarse de esa temperatura disminuye su
funcin. Para determinados procesos en los cuales se necesitan temperaturas extremas, se
van a emplear enzimas provenientes de organismos extremfilos que pueden actuar a
temperaturas extremas (altas o bajas). Por ejemplo, la ropa de hospital que requiere
esterilizacin se lava con productos que tengan enzimas que funciones a temperaturas altas,
mientras que el lavado en agua fra emplea enzimas provenientes de microorganismos que se
desarrollan en temperaturas bajas.
En la industria alimenticia tambin se usan enzimas. Por ejemplo en la etapa final de la
fabricacin de jugos cuando hay que sacar los restos de pepitas de frutas antes de la
pasteurizacin, se emplea la enzima pectinasa que degrada la pectina, el principal
componente de las semillas.
Las enzimas tambin se usan en la industria textil para ablandar los jeans. En este caso se usa
celulasa, que degrada la celulosa que es el principal componente de las clulas vegetales
(entre ellas, las clulas del algodn que es el principal componente de la tela de jean).
Mediante un proceso controlado (temperatura, tiempo, cantidad y tipo de celulasa) se logran
diferentes texturas de jean. Tambin se usa la enzima celulasa en la industria del papel (que
est formado por celulosa) para lograr diferentes texturas.
1.3

BIOTECNOLOGIA MODERNA

Actualmente, los cientficos comprenden mucho ms cmo ocurren los procesos biolgicos que
permiten la fabricacin de productos biotecnolgicos. Esto les ha permitido desarrollar nuevas
tcnicas a fin de modificar o imitar algunos de esos procesos y lograr una variedad mucho ms
amplia de productos. Los cientficos hoy saben, adems, que los microorganismos sintetizan
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compuestos qumicos y enzimas que pueden emplearse eficientemente en procesos industriales.

Estos conocimientos dieron lugar al desarrollo de la biotecnologa moderna.
A diferencia de la biotecnologa tradicional, la biotecnologa moderna surge en la dcada de los 80,
y utiliza tcnicas, denominadas en su conjunto ingeniera gentica, para modificar y transferir genes
de un organismo a otro. El siguiente esquema resume la definicin actual del trmino biotecnologa:
Biotecnologa
Tradicional:
Empleo de organismos
para la obtencin de un
producto til para la
industria.

+
Biotecnologa
Moderna:

1.4

Biotecnologa Hoy:
Es el empleo de organismos vivos
para la obtencin de un bien o servicio
til para el hombre, e incluye la
produccin
de
protenas
recombinantes, el mejoramiento de
cultivos vegetales, animal y el empleo
de organismos para limpiar el medio
ambiente.

DEFINICINES DE BIOTECNOLOGA

Existen diversas definiciones de Biotecnologa provenientes de diversos enfoques y puntos de vista,

que van desde conceptos ms generales hasta particulares. Por ejemplo: La biotecnologa, se ha
definido como la aplicacin de organismos, componentes o sistemas biolgicos para la obtencin de
bienes y servicios. Sin embargo, se considera que este enunciado es muy amplio y engloba todas
las operaciones de la biologa aplicada desde la agricultura hasta la ciencia culinaria.
La Federacin Europea de Biotecnologa defini a la biotecnologa como el uso integrado de la
ingeniera, la bioqumica y la microbiologa para conseguir la aplicacin tecnolgica (industrial) de
las capacidades de los microorganismos, clulas de tejido cultivado y sus partes.
En un sentido mucho ms estrecho, la palabra biotecnologa se refiere a veces, para definir la
utilizacin de la manipulacin gentica con el fin de obtener la expresin correcta a altos niveles de
un gen clonado en clulas husped. As como tambin la aplicacin de la biologa molecular en
direcciones que se esperan sean de utilidad como el uso de marcadores moleculares para identificar
microorganismos de importancia agrcola.
Una definicin ms exacta y con la cual nos quedaremos es la siguiente. La biotecnologa es la
aplicacin de la ciencia y la ingeniera en el uso directo o indirecto de organismos vivos o parte
de ellos, en sus formas naturales o modificadas, en una forma innovadora para la produccin de
bienes y servicios o para la mejora de procesos industriales existentes.
Indudablemente con la biologa moderna est avanzando nuestra tecnologa para manejar
organismos complejos, incluyendo nuestra propia especie. Est mejorando nuestro entendimiento de
muchos procesos tradicionales, en los que los agentes biolgicos se utilizaron de forma menos
controlada o deliberada. As por ejemplo, la biotecnologa de las fermentaciones, tal y como la
conocemos actualmente, se origino no de los antiguos descubrimientos caseros del vino y la col
fermentada, ni siquiera del conocimiento obtenido mediante observacin tal y como se obtuvo en el
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siglo 19, sino de las primeras aplicaciones de los agentes microbianos seleccionados a procesos,
con fines especficos.
Son ejemplos de ello:
La bsqueda y obtencin de biomasa adaptada a los procesos de activacin de residuos
La seleccin y propagacin a gran escala de cepas especificas de Clostridium para la
produccin de acetona y butanol.
Se puede tambin intentar definir la biotecnologa en funcin de lo que realiza, esperando evitar
quedar rpidamente retrasados si consideramos lo que puede hacer.
En industrias directamente de produccin, la Biotecnologa est totalmente implicada en la
produccin de biomasa microbiana para alimentacin animal (y en el futuro para humanos),
de algunos productos qumicos como; acido ctrico, acido glutmico y otros aminocidos; y
de algunos productos especiales, fundamentalmente antibiticos y ciertas vitaminas.
En competicin con la tecnologa petroqumica puede producir productos a gran escala,
como etanol, acetona, butanol, acido actico, etc.
En competicin con la explotacin de organismos enteros, puede ser usada para fabricar
substancias especiales de plantas y productos de clulas animales, estos ltimos bien sea
directamente o en clulas microbianas transformadas para que produzcan antgenos,
anticuerpos o distintos agentes teraputicos o de diagnostico.
La biotecnologa puede proporcionar a la agricultura una variedad de agentes tiles, desde
inoculantes para suelos hasta productos veterinarios, con extensin en el futuro a cultivos
acuticos y marinos.
Estn empezando a ampliarse los mtodos genticos tradicionales para el desarrollo de cepas
nuevas. O mejoradoras de plantas o animales para uso convencional en agricultura.
Proporciona a la industria de alimentacin agentes claves como cultivos iniciadores y
enzimas, y proporciona cada vez ms, conocimientos y tcnicas al procesamiento de los
alimentos.
En las industrias la biotecnologa tiene un papel fundamental en el tratamiento de residuos
tanto acuosos como slidos, en la valoracin de las basuras y en la purificacin del agua.
Por consiguiente la definicin de Biotecnologa es muy amplia, claramente cambia con el tiempo y
ciertamente se ampliar en nuevas direcciones que aun no podemos prever.
1.5

HISTORIA DE LA BIOTECNOLOGIA

Al repasar gran parte de los acontecimientos relevantes en la historia de la biotecnologa, se los

puede agrupar en los siguientes perodos:
Ao 6.000 A.C. hasta 1.700 D.C. (Primeras aplicaciones de la biotecnologa).
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Se desconoce el origen exacto de los primeros intentos del hombre en la utilizacin de organismos
vivos para obtener un beneficio, pero la transicin de sus hbitos cazador-recolector a la vida en
comunidades y ciudades, es acompaada por innovaciones que pueden considerarse como los
primeros indicios de actividades biotecnolgicas. As, se encontraron evidencias de esas
actividades en culturas ancestrales como la china, griega, sumeria y otras que habitaron la tierra
5000 aos A.C. Durante este perodo, dado que el hombre desconoce la existencia de los
microorganismos, gran parte de los procesos biotecnolgicos son de carcter emprico, y estn
relacionados principalmente a la elaboracin de alimentos.
Acontecimientos importantes en este perodo:
6000 AC: Los sumerios y babilonios fabrican cerveza empleando levaduras.
4000 AC: Los egipcios descubren cmo preparar pan leudado. Se establecen otros procesos
de fermentacin en el mundo antiguo, especialmente en China. La transformacin de la leche
por bacterias cido-lcticas resulta en la preparacin de yogurt. Se utilizan hongos
filamentosos (mohos) para producir queso, y otros procesos de fermentacin para
manufacturar vino y vinagre.
1000 DC: Los hindes notan que ciertas enfermedades permanecen en la familia. Ms an,
llegan a creer que los chicos heredan todas las caractersticas de sus padres.
1100 1700 DC: La generacin espontnea es la explicacin dominante acerca del origen
de los organismos a partir de materia inerte.
1300 DC: Los aztecas en Mxico cosechan algas de los lagos como una fuente de alimento.
1400 DC: La destilacin de una gran variedad de bebidas alcohlicas a partir de granos
fermentados se distribuye mundialmente. Egipto y Persia dejan de lado estos procesos por
influencia del Islam. Los cereales fermentados son base de la dieta africana (an en la
actualidad).
1492 DC: Cristbal Coln y otros exploradores que visitan Amrica, llevan maz (originario
de este continente) al resto del mundo, y los cultivadores europeos adaptan el cultivo a sus
condiciones locales. Los navegantes tambin llevan papas, cultivo nativo de los Andes
americanos.
1630 DC: William Harvey concluye que las plantas y los animales se reproducen
sexualmente: la contraparte masculina aporta el polen y la femenina los ovocitos. Pasarn
ms de 200 aos hasta corroborarse por microscopa la existencia de las gametas.
1665 DC: Robert Hooke observa la estructura celular del corcho. Pasarn 200 aos hasta que
las tcnicas microscpicas permitan a los cientficos descubrir que todos los organismos
estn compuestos por clulas.
1673 DC: Anton Van Leeuwenhoek, comerciante holands, utiliza sus microscopios para
realizar descubrimientos en microbiologa. Es el primer investigador en describir a las
bacterias y protozoos, entre otros microorganismos.
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Perodo 1700-1900
El mtodo emprico y la revolucin industrial generan cambios enormes en la industria y en la
agricultura, mientras que las ciencias biolgicas se inspiran en los trabajos de Charles Darwin y Luis
Pasteur. Se establece el mtodo cientfico, y la experimentacin en las ciencias biolgicas. En este
contexto, se determina la naturaleza microbiana de las fermentaciones microbianas y de numerosas
enfermedades. Gregor Mendel realiza sus investigaciones acerca de la herencia pero es ignorado en
su poca.
Acontecimientos importantes en este perodo:
1750-1850: Los agricultores en Europa aumentan el cultivo de leguminosas y comienzan a
practicar la rotacin de cultivos para mejorar el rendimiento y el uso de la tierra.
1798: El mdico ingls Edward Jenner publica un trabajo donde compara la vacunacin
(infeccin intencional a los humanos con el virus de la viruela bovina para inducir resistencia
a viruela) con la inoculacin (infeccin a los humanos con una cepa suave de viruela para
inducir resistencia a cepas ms severas de la enfermedad). Sus ideas surgen de observar que
las personas expuestas al virus de la viruela bovina, no eran vulnerables al virus de la viruela
humana. La palabra vacuna deriva de la palabra en latn vaccinus ( de las vacas).
1809: Un cocinero francs, Nicols Appert, desarrolla una tcnica que permite enlatar y
esterilizar los alimentos a altas temperaturas, y gana un premio entregado por Napolen.
1850s: Nuevas herramientas agrcolas (arados tirados por caballos, mquinas sembradoras,
cortadoras de forrajes, rastrillos) se vuelven populares en Europa, y en EE.UU. se introduce
alimento para animales procesado industrialmente, y fertilizantes inorgnicos,
revolucionando las prcticas agrcolas.
1856: Luis Pasteur (1822 - 1895) demuestra que los microorganismos son responsables de la
fermentacin. Sus experimentos posteriores demostrarn que la fermentacin es el resultado
de la actividad de levaduras y bacterias.
1859: Charles Darwin (1809 - 1882) trabaja en su teora de la seleccin natural como
mecanismo de evolucin de las especies. Su libro El origen de las Especies se publica en
Londres.
1864: Luis Pasteur desarrolla el proceso de pasteurizacin, calentando el lquido hasta lograr
la inactivacin de los microorganismos presentes, que podran agriarlo. Desde entonces
productos como la leche pueden ser transportados sin deteriorarse.
1865: Gregor Mendel (1822 - 1884), un monje austriaco presenta las leyes de la herencia a
la Sociedad de Ciencias Naturales en Brunn, Austria. Mendel propone que existen unidades o
factores de informacin responsables de los caracteres observables, y que tales factores
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(luego conocidos como genes) son transmitidos de una generacin a la siguiente. El trabajo
de Mendel permaneci ignorado hasta 1900, cuando los cientficos De Vries, Von Tschermak
y Correns corroboran el mecanismo propuesto por Mendel.
1870: Walter Flemming descubre el proceso de divisin celular conocido como mitosis.
1871: Hoppe-Seyler descubre la invertasa (enzima que convierte al disacrido sacarosa en
glucosa y fructosa), usada en la actualidad para producir endulzantes.
1879: En Michigan, un discpulo de Darwin desarrolla la primera cruza controlada de maz
con el objeto de obtener mayores rendimientos.
1880: Pasteur publica su trabajo sobre cepas atenuadas o dbiles que no seran patgenas
pero protegeran contra otras formas ms severas.
1881: Robert Koch describe colonias bacterianas creciendo en rodajas de papa, medio
gelatinoso y medio agarizado. El agar nutritivo se convierte en una herramienta comn para
obtener cultivos puros y para identificar mutantes. Esto es considerado como uno de los
descubrimientos ms importantes que origin la microbiologa. En el mismo ao, Pasteur
utiliza la atenuacin para desarrollar vacunas contra patgenos bacterianos responsables del
clera aviario y del ntrax y resulta clave en la historia de la inmunologa ya que se abre el
campo de la medicina preventiva.
1882: Robert Koch, utilizando cobayos como hospedadores alternativos, describe a la
bacteria causante de la tuberculosis en humanos. As, es el primero en develar al agente
causal de una enfermedad microbiana humana.
1884: Pasteur desarrolla la vacuna contra la rabia, que ser ensayada en humanos en 1885.
1892: El ruso Dimitri Ivanovsky y su grupo descubren al agente causante del mosaico del
tabaco (TMV). Reportan que el agente es transmisible y puede atravesar filtros que retienen
a las bacterias ms pequeas. Esos agentes se denominarn aos despus virus.
1897: El qumico alemn Eduard Buchner demuestra que la fermentacin puede ocurrir en
un extracto de levaduras (sin levaduras vivas), un descubrimiento clave para la bioqumica y
la enzimologa.
Perodo 1900 1953
Millones de personas mueren a causa de dos guerras mundiales, empujando a la medicina hacia
nuevos lmites. Durante la Primera Guerra Mundial, se desarrollan procesos de fermentacin para
producir acetona a partir del almidn y solventes para pinturas, necesarios para la industria
automotriz en crecimiento. En los aos 30 el esfuerzo se focaliza en tratar de usar los subproductos
de la agricultura para suplir a la industria en lugar de petroqumicos. La llegada de la Segunda
Guerra Mundial trae consigo la manufactura de la penicilina. As, el foco biotecnolgico apunta a
los compuestos farmacuticos.
Acontecimientos importantes en este perodo:
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 1900: Avanza la gentica con el redescubrimiento de las Leyes de Mendel. Ese mismo ao se
demuestra por primera vez que algunos qumicos claves para la industria (glicerol, acetona y
butanol) pueden ser generados utilizando bacterias.
1902: El bilogo estadounidense Walter Sutton seala que los cromosomas llevaran los
factores hereditarios sugeridos por Mendel.
1909: El botnico dans Wilhelm Ludvig Johannsen acua el trmino 'gen' para describir al
elemento transportador de los caracteres hereditarios. Denomina genotipo a la constitucin
gentica de un organismo, y fenotipo a la expresin del genotipo.
1910: Tomas Hunt Morgan, genetista estadounidense, experimenta con moscas y prueba que
los genes estn en los cromosomas, estableciendo las bases de la gentica moderna.
1912: El fsico britnico Lawrence Bragg descubre que los rayos X pueden usarse para
estudiar la estructura molecular de sustancias cristalinas. Este hallazgo conduce al desarrollo
de la tcnica de cristalografa de rayos X, que posibilitar explorar las estructuras
tridimensionales de cidos nucleicos y protenas, jugando un rol crtico para el
descubrimiento de la estructura de la molcula de ADN aos ms tarde.
1918: Se crecen levaduras en grandes cantidades para producir glicerol, y se producen
tambin a gran escala barros activados para el tratamiento de efluentes industriales.
1919: El economista e ingeniero hngaro Kroly Ereky publica en Berln su obra clsica,
"Biotechnologie", donde acua el trmino Biotecnologa segn su visin de una nueva era
tecnolgica basada en la bioqumica. Fue considerado padre fundador de la biotecnologa.
1926: El genetista estadounidense Hermann Muller descubre que los rayos X inducen
mutaciones en las moscas de la fruta, aportando un instrumento para inducir mutaciones con
diversos fines.
1928: El bacterilogo ingls Frederick Griffiths observa que unas bacterias con apariencia
rugosa cambian a lisa cuando un principio transformante desconocido de la bacteria lisa
est presente. Luego de 16 aos, Oswald Avery identificar la naturaleza de tal principio
transformante: ADN. En otras reas, Lewis Stadler demuestra que la radiacin U.V. tambin
puede inducir mutaciones, y Alexander Fleming observa que todas las bacterias creciendo en
un radio alrededor de la especie de hongo filamentoso (moho) Penicillium notatum mueren,
comenzando as la era de la penicilina. Pasarn ms de 15 aos hasta que la penicilina est
disponible para su uso mdico por la comunidad.
1933: Se comercializan las primeras semillas de maz hbrido
1935: Andrei Nikolaevitch Belozersky asla ADN en estado puro por primera vez.
1938: En Francia, se produce comercialmente el primer bioinsecticida, basado en la bacteria
Bacillus thuringiensis. Ese ao, surge el trmino Biologa Molecular
1939: El fisilogo francs Roger Jean Gautheret obtiene y cultiva callos (tejidos
indiferenciados) de zanahoria
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 1940-1950: Los pases occidentales comienzan a emplear mquinas en vez de animales en el

campo.
1944: Se produce penicilina a gran escala. , Oswald Theodore Avery, Colin MacLeod y
Maclyn McCarty determinaron que el ADN es el material hereditario involucrado en la
transformacin de las bacterias de fenotipo rugoso a liso. Al principio, esta hiptesis no
tendra muchos adeptos, porque la molcula de ADN pareca demasiado simple para
contener toda la informacin gentica de un organismo, a diferencia de las protenas. Por su
parte, Frederick Sanger utiliza un nuevo mtodo denominado cromatografa para
determinar la secuencia de aminocidos de la molcula de insulina bovina. Ese ao, la
cientfica estadounidense Brbara McClintock, descubre que los genes pueden transponerse
(saltar) de una posicin a otra del genoma. Recibir en 1983 el premio Nbel por el
descubrimiento de los transposones.
1945 1950: Se crecen cultivos de clulas animales aisladas en los laboratorios.
1946: D.C. Salmon, un consejero militar norteamericano radicado en Japn, enva a EE.UU.
la variedad de trigo Norin 10, fuente del gen de enanismo que luego ayudara a producir las
variedades de trigo de la Revolucin Verde.
1950: El qumico austriaco Erwin Chargaff descubre que las cantidades de las bases
nitrogenadas adenina y timina son aproximadamente iguales en el ADN, al igual que las
bases guanina y citosina. Estas relaciones se conoceran luego como la regla de Chargaff,
sirviendo como principio clave en los anlisis de varios modelos de estructura del ADN por
Watson y Crick. En el rea agropecuaria, se logra la inseminacin artificial del ganado,
utilizando semen congelado.
1952: Alfred Hershey y Martha Chase realizan los experimentos de licuadora usando fagos
(virus que infectan bacterias, descubiertos en 1917). Postulan que si se marcan de manera
diferente las molculas de ADN y las protenas, se puede determinar cul de ellas est
involucrada en el proceso de replicacin del fago en la bacteria. Descubren que el ADN, y no
las protenas, puede ingresar desde el fago a la bacteria, aportando otra evidencia a favor de
la naturaleza nucleica del material gentico. Ese ao, el bilogo molecular norteamericano
Joshua Lederberg introduce el trmino plsmido para describir a las estructuras de material
gentico extracromosmico presentes en las bacterias, y William Hayes descubre el
fenmeno de conjugacin bacteriana (transmisin directa de genes de una bacteria a otra).
1953: James Watson y Francis Crick, con el aporte de Rosalind Franklin, proponen un
modelo de estructura para el ADN: molcula doble cadena, helicoidal, con dos hebras
complementarias y antiparalelas. Por ello recibirn el Premio Nbel en 1962. Adems,
William Hayes descubre que los plsmidos pueden usarse para transferir marcadores
genticos introducidos de una bacteria a otra.
Perodo 1953 1976
Expandiendo los lmites de la investigacin del ADN. El descubrimiento de la estructura del ADN
result en una explosin en la investigacin de la biologa molecular y la gentica.
Acontecimientos importantes en este perodo:
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 1953: El Dr. George Grey desarrolla la lnea celular humana HeLa (formada por clulas que
pueden cultivarse in vitro indefinidamente), herramienta fundamental para numerosos
descubrimientos posteriores.
1957: Los investigadores Francis Crick y George Gamov proponen el "dogma central de la
biologa", que sugiere que la informacin gentica fluye en una sola direccin, desde el
ADN, pasando por ARN mensajero, finalizando en la sntesis de protenas (concepto central
que luego sera modificado con el descubrimiento de la replicacin de los retrovirus como el
HIV). Matthew Meselson y Franklin Stahl demuestran el mecanismo de replicacin del
ADN.
1958: Arthur Kornberg descubre y asla la ADN polimerasa, que se convierte en la primera
enzima para sintetizar ADN en un tubo de ensayo. Adems, ese ao, abre en Colorado el
Laboratorio Nacional de almacenamiento de semillas (NSSI), el primer organismo para el
almacenado de semillas a largo plazo del mundo.
1959: Reinart es capaz de regenerar plantas completas a partir de los cultivos indiferenciados
de callos de zanahoria.
1961: Marshall Nirenberg construye una hebra de ARNm formada nicamente por varias
copias de la base uracilo. Examinndola, descubre que el triplete de bases Uracilo (UUU)
codifica para el aminocido fenilalanina. Este fue el primer paso en el descifrado del cdigo
gentico.
1962: En Mxico, comienza la plantacin de variedades de trigo de alto rendimiento (ms
tarde conocidos como los granos de la Revolucin Verde). Las semillas seran liberadas por
el Programa Agrcola Mexicano a otros pases.
1966: Se descifra el cdigo gentico. Marshall Nirenberg, Heinrich Mathaei, y Severo Ochoa
demuestran que una secuencia de tres bases nucleotdicas (denominada codn) determina
cada uno de los 20 aminocidos.
1972: Paul Berg asla y emplea una enzima de restriccin para cortar el ADN; utiliza tambin
una enzima ligasa para pegar dos fragmentos de ADN, formando una molcula hbrida
circular, generando as la primer molcula de ADN recombinante. En una carta pblica, Berg
y colegas proponen al Instituto Nacional de Salud de EE.UU. (NIH) generar un conjunto de
guas para regular los experimentos con ADN recombinante, hasta que se pudieran resolver
cuestiones relacionadas con la biotica y la bioseguridad de los mismos. Sus preocupaciones
derivarn en la Conferencia de Asilomar de 1975.
1973: Por primera vez los cientficos logran transferir ADN de un organismo a otro. Stanley
Cohen, Annie Chang y Herbert Boyer ensamblan fragmentos de ADN viral y bacteriano
cortando con la misma enzima de restriccin, creando un plsmido recombinante. Luego lo
introducen en la bacteria Escherichia coli, produciendo as el primer organismo
recombinante, transgnico o genticamente modificado.
1975: Conferencia de Asilomar. Los cientficos piden al gobierno que adopte normas para
regular la experimentacin con ADN recombinante, e insisten en el desarrollo de cepas de
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bacterias seguras que no salgan del mbito del laboratorio. Por su parte, Georges Kohler y
el argentino Csar Milstein fusionan clulas para producir anticuerpos monoclonales.
1976: Herbert Boyer y Robert Swanson fundan Genentech Inc., una compaa
biotecnolgica dedicada al desarrollo y a la venta de productos basados en la tecnologa del
ADN recombinante. El NIH enuncia las primeras reglas para la experimentacin con ADN
recombinante, restringiendo varios tipos de experimentos.
Perodo 1977 1999
El amanecer de la Biotecnologa Moderna. La Ingeniera Gentica se convierte en realidad cuando
un gen modificado por el hombre se utiliza por primera vez para producir una protena humana en
una bacteria, empujando a las universidades y a las empresas
biotecnolgicas a una carrera. En
1978, una versin sinttica del gen de la insulina humana es construida e insertada en la bacteria E.
coli. Desde este momento clave, comienza la
produccin de enzimas, frmacos, reactivos de
diagnstico y otras molculas de inters
industrial a travs de tcnicas cada vez ms rpidas y
mejoradas del clonado y la secuenciacin del ADN.
Acontecimientos importantes en este perodo:
1977: Genentech, Inc., informa la produccin en bacterias, por primera vez, de una protena
humana: somatostatina (factor inhibitorio de la liberacin de hormona de crecimiento).
Walter Gilbert y Allan Maxam desarrollan un mtodo para secuenciar el ADN por
degradacin qumica, mientras que Sanger y sus colegas proponen un mtodo de
secuenciacin enzimtico que rpidamente se transformara en el mtodo de eleccin de los
investigadores.
1978: Genentech, Inc. y un centro mdico anuncian la produccin exitosa a escala de
laboratorio de insulina humana, utilizando la tecnologa del ADN recombinante. Ese ao,
David Botstein y colaboradores, descubren que la aplicacin de enzimas de restriccin al
ADN de diferentes individuos genera una serie nica e individual de fragmentos, pudiendo
ser este patrn usado como una huella digital gentica. A este tipo de marcador
molecular se lo conoce como RFLP (polimorfismo en el largo de los fragmentos de
restriccin), y resulta muy til para estudios genticos en todo tipo de organismos. Ese ao,
William J. Rutter y sus colegas clonan la protena de cubierta del virus causante de la
hepatitis B.
1980: La Suprema Corte de EE.UU. establece que, en su pas, los organismos modificados
genticamente son patentables y, en 1980, permite a la compaa petrolera Exxon patentar un
microorganismo degradador de petrleo.
1981: Bill Rutter y Pablo Valenzuela publican un sistema de produccin del antgeno de
superficie del virus causal de la hepatitis B, en levaduras, dando los primeros pasos en el
desarrollo de la vacuna recombinante. Cientficos producen los primeros animales
transgnicos: son ratones. En el rea vegetal, se obtienen los primeros callos vegetales
transformados genticamente.

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 1982: Genentech, Inc. recibe la aprobacin de la Administracin de Alimentos y Drogas de

EE.UU. (en ingls, FDA) para comercializar la insulina humana recombinante (producida en
E. coli), aprobando as la primera droga generada por esta tcnica.
1983: Laboratorios de EE.UU. y Francia aslan el virus del HIV. Un estudio de una familia
en Venezuela con la enfermedad de Huntington, muestra un patrn distinto y caracterstico
de RFLP en los individuos enfermos, llevando al desarrollo de un test de diagnstico basado
en dicha metodologa. El mismo mtodo revelar patrones caractersticos de las
enfermedades fibrosis qustica y distrofia muscular, entre otras. K. Mullis y colegas
desarrollan una tcnica para multiplicar fuera de la clula fragmentos de ADN de manera
especfica, denominada Reaccin en cadena de la polimerasa (o PCR), estableciendo una
de las tcnicas ms revolucionarias en biologa molecular. Tambin ese ao se obtienen
plantas de tabaco transformadas genticamente
1984: Chiron Corp. anuncia el clonado y la secuenciacin del virus de la inmunodeficiencia
humana (VIH), descubierto en 1983; Alec Jeffrey desarrolla la tcnica de huella gentica
para identificar individuos.
1986: Se realizan ensayos de campo por primera vez, de plantas transgnicas resistentes a
insectos, virus y bacterias, en EE.UU. y Europa. En EE.UU. la Agencia de Proteccin
Ambiental (EPA, en ingls) aprueba la liberacin del primer cultivo modificado por
ingeniera gentica: tabaco. El NIH, por su parte, aprueba guas para realizar ensayos
clnicos de terapia gnica en humanos. Las empresas Caltech y Applied Biosystems, Inc,
desarrollan el secuenciador automtico de ADN por fluorescencia. La FDA otorga una
licencia a Chiron Corp. para la primer vacuna recombinante (para prevenir la hepatitis B).
1987: Se generan plantas transgnicas para resistencia a insectos (mediante protena de
Bacillus thuringiensis) y resistencia a herbicidas. Tambin se obtienen plantas de algodn
transgnicas, y se desarrolla la tcnica de bombardeo gnico. Se aprueba la vacuna
recombinante para la hepatitis B: Recombivax-HB.
1988: Se otorga la primera patente a investigadores de Harvard sobre un animal
genticamente modificado: es un ratn altamente susceptible al cncer de mama. En el rea
vegetal, se transforman genticamente plantas de soja y arroz, y comienzan los ensayos a
campo con las plantas de tomate transgnicas de maduracin retardada desarrolladas por
Calgene.
1989: Se crea el Centro Nacional para la investigacin del Genoma Humano en EE.UU.,
dirigido por James Watson, con el objetivo de mapear y secuenciar el genoma humano
completo para el ao 2005, y contar para ello con la suma de 3 mil millones de dlares.
1989-1992: Primeros indicios, tras investigaciones de los grupos de Matzke, Jorgensen y
Limbdo, de la existencia de mecanismos de silenciamiento gnico, que permitiran aos ms
tarde desarrollar tcnicas claves para la biotecnologa.
1990: Calgene conduce el primer ensayo de campo exitoso con plantas de algodn
transgnicas (tolerantes al herbicida Bromoxynil), y Michael Fromm, reporta la
transformacin estable del maz usando una pistola gnica de alta velocidad. Adems,
GenPharm International, Inc. desarrolla la primer vaca transgnica para producir protenas
12

humanas en su leche para la formulacin de leches para bebs. Ese ao, se lleva a cabo el
primer protocolo de terapia gnica, en una nia de 4 aos con una enfermedad autoinmune
denominada ADA. La terapia resulta exitosa, pero desata una gran discusin tica en el
entorno acadmico y tambin en los medios. Se inicia el Proyecto Genoma Humano, como
un consorcio mundial para secuenciar el genoma humano, con un costo estimado de 13 mil
millones de dlares. El gobierno de los Estados Unidos autoriza por primera vez el uso de
una enzima recombinante en la fabricacin de alimentos: la quimosina, para la elaboracin
del queso.
1991: En Argentina se crea una instancia de consulta y apoyo tcnico para asesorar al
Secretario de Agricultura, Ganadera, Pesca y Alimentacin en la formulacin e
implementacin de la regulacin para la introduccin y liberacin al ambiente de materiales
animales y vegetales obtenidos mediante Ingeniera Gentica: la Comisin Nacional Asesora
de Biotecnologa Agropecuaria (CONABIA).
1992: Se reporta la transformacin estable de trigo. Alrededor de 400 ensayos de campo con
cultivos transgnicos se realizan en todo el mundo. Ya se obtienen plantas transgnicas con
composicin modificada de hidratos de carbono, y de cidos grasos.
1994: La FDA aprueba el primer cultivo genticamente modificado utilizado como alimento:
el tomate Flavr Savr. Para obtenerlo, se introduce el gen que codifica para la enzima
poligalacturonasa en una disposicin particular para que, al transcribirse, genere molculas
de ARN complementarias al ARNm de poligalacturonasa propio de la planta, impidiendo as
su traduccin. Dado que dicha enzima es la responsable de degradar la pectina (componente
de la pared celular vegetal que le da firmeza a la misma), los frutos de la planta de tomate
transgnico Flavr Savr permanecen firmes por ms tiempo, mejorando su uso en la industria
alimenticia y su comercializacin. Por otro lado, el USDA (Departamento de Agricultura de
EE.UU.) y la FDA aprueban la soja tolerante a herbicida. En otro contexto, se identifican los
genes relacionados con una serie de enfermedades, incluyendo melanoma, sordera, dislexia,
cncer de tiroides, cncer de prstata y enanismo. Esta tarea se realiza por anlisis de
ligamiento similares a los realizados con la familia venezolana (1983) y otras tcnicas ms
avanzadas. Ese ao se da a conocer un primer mapa aproximado del genoma humano.
1995: Un grupo de investigadores logra transplantar corazones de cerdos genticamente
modificados a babuinos (primates), probando la posibilidad de los xenotransplantes
(transplante de un rgano o de un tejido desde un animal a otro de distinta especie). En
diciembre del mismo ao, se realiza en el Hospital General de San Francisco, el primer
transplante de mdula sea (pretratada) de un babuino a un paciente humano enfermo de
Sida, con la intencin de reforzar su sistema inmunolgico con clulas del mismo tipo pero
resistentes a la infeccin por el VIH como son las clulas de estos animales. 8 aos despus
(2004) se demostrar que la salud del paciente no se vio comprometida, que no se trasladaron
infecciones desde el donante, pero que se necesita trabajar ms para lograr que las clulas
transplantadas sobrevivan el tiempo necesario en el enfermo. Tambin ese ao, se completa
la secuencia del genoma del primer organismo diferente a un virus: la bacteria Hemophilus
influenzae, y se genera un ratn transgnico portando el material gentico necesario para
desarrollar sntomas similares a la enfermedad de Alzheimer humana, convirtindose en un
modelo para estudio y ensayo de posibles terapias. Tcnicas como la terapia gnica, la
modulacin del sistema inmune y los anticuerpos generados por ingeniera gentica ingresan
en protocolos de investigacin clnica como terapias en la lucha contra el cncer. En el rea
13

vegetal, la EPA (Agencia de Proteccin medioambiental de Estados Unidos) aprueba la soja

tolerante a herbicida.
1996: El gobierno del Reino Unido anuncia que 10 personas se han infectado con el agente
BSE (causante del Mal de la vaca loca en animales) por exposicin a carne contaminada.
Se reporta la secuenciacin del genoma completo de la levadura Saccharomyces cerevisiae,
utilizada para la fabricacin del vino, del pan y de la cerveza. Se secuencian tambin los
genomas de un grupo de bacterias particulares que habitan ambientes extremos (temperaturas
muy extremas, concentracin de sal muy elevada, etc.; se las denomina extremfilas). Su
estudio otorga a los cientficos herramientas para la obtencin de nuevas enzimas de
aplicacin industrial (enzimas activas a temperaturas, pH, salinidad extremas). A nivel
mundial, se aprueba la comercializacin de los primeros cultivos transgnicos (soja, algodn
y maz). Particularmente en Argentina, se aprueba la comercializacin de la soja tolerante a
glifosato.
1997: Investigadores del Instituto Roslin de Escocia, reportan el clonado de una oveja,
conocida mundialmente como Dolly, a partir de una clula de la ubre de una oveja adulta. Se
completa la secuenciacin del genoma de Borrelia burgdorferi, patgeno causal de la
enfermedad de Lyme, junto con los genomas de Escherichia coli y Helicobacter pylori
(bacteria causal de la lcera gstrica). Tambin se aprueba el Rituxan, el primer
medicamento para una terapia anticancergena basada en anticuerpos (para pacientes
enfermos de linfoma no Hodkin).
1998: Cientficos de la Universidad de Hawaii clonan tres generaciones de ratones a partir de
un ncleo de clulas del cmulo de un ratn adulto, y cientficos de Japn clonan ocho
terneros usando clulas de una vaca adulta. Adems, dos equipos de cientficos logran crecer
clulas madre embrionarias, un anhelo perseguido por mucho tiempo. Por otro lado, la FDA
aprueba el primer agente teraputico basado en la estrategia de cido nucleico antisentido:
Fomivirsen. Es un agente antiviral para el tratamiento de la retinitis causada por el
citomegalovirus (CMV) en pacientes cuyo sistema inmune est comprometido, como los
enfermos de SIDA. Tambin ese ao se completa la secuenciacin del primer genoma
animal, perteneciente al gusano Caenorhabditis elegans, y se publica un borrador del mapa
del genoma humano, donde se muestra la posicin de unos 30.000 genes. En Argentina, se
aprueba la comercializacin de cultivos de maz transgnico tolerante al herbicida
glufosinato de amonio, y cultivos de maz y algodn transgnicos resistentes a insectos
lepidpteros.
1999: Se completa la primera secuencia de un cromosoma humano, el cromosoma 22. La
investigacin contina y crecen los debates ticos. Hasta el 2000, haba un total de 1274
compaas biotecnolgicas solamente en los Estados Unidos, con al menos 300 productos
biotecnolgicos entre drogas y vacunas que estn siendo evaluadas en ensayos clnicos, y
cientos ms en etapas tempranas de desarrollo. Entre los productos biotecnolgicos, se
incluyen medicinas y pruebas de diagnstico, biopesticidas y cultivos genticamente
modificados.
Perodo 2000 2016
La era de la convergencia - Nanotecnologa, Biotecnologa, Ciencias cognitivas y de la Informacin.
El amanecer del nuevo milenio comienza con un anuncio que proveer el punto de apoyo para la
14

ciencia del siglo XXI. En el ao 2000, se completa el borrador del genoma

humano
emprendido por el Proyecto Genoma Humano y la empresa Celera Genomics, y se
publica en
2001 la secuencia del genoma humano. Con este acontecimiento, se abrieron las puertas a la era de
la genmica, la protemica, nutrigenmica, la bioinformtica y la medicina personalizada. Hoy en
da una persona puede analizar su genoma por solo U$ 99 y
conocer las probabilidades de
desarrollar ciertas enfermedades. Tambin a lo largo de estos
aos se han secuenciado genomas
de diferentes organismos (bacterias, plantas, animales) que
han
permitido
importantes
avances en la produccin de alimentos, frmacos, mejoramiento animal y vegetal y el desarrollo de
biocombustibles. Actualmente, uno de los desafos que
debe enfrentar la biotecnologa es
satisfacer las necesidades de una poblacin creciente
preservando el medio ambiente. Es por
eso, que hoy en da, se est poniendo un esfuerzo enorme en reemplazar las tecnologas
contaminantes por otras ms limpias, preservando el
ambiente, la biodiversidad y recursos
como el agua y el suelo.
Acontecimientos importantes en este perodo:
2000: Se completa la secuenciacin de los genomas de la mosca Drosophila melanogaster y
de la planta modelo Arabidopsis thaliana.
2001: Se publica el primer borrador del genoma humano. En Argentina, se aprueban para su
comercializacin cultivos de algodn transgnico tolerante al herbicida glifosato y otro maz
resistente a insectos lepidpteros.
2002: Se completa por primera vez el genoma de un cultivo comestible, el arroz, que
constituye la fuente de alimento principal de las dos terceras partes de la poblacin mundial.
2003: Se completa el Proyecto Genoma Humano, con un total de 2,85 mil millones de
nucletidos secuenciados, comprendiendo entre 20.000 y 25.000 genes estimados. Una
empresa argentina, Bio Sidus, obtiene por primera vez una ternera (Mansa) que en su leche
contiene hormona de crecimiento humana. Por otro lado, 7 millones de agricultores siembran
67,7 millones de hectreas de cultivos GM en 18 pases. Argentina ocupa el segundo lugar,
con 14 millones de hectreas de soja, maz y algodn. La adopcin asciende al 98%, 50% y
20% de las superficies totales para estos cultivos, respectivamente.
2004: Secuencian el genoma del pollo. Argentina autoriza el primer maz tolerante a
herbicida, anticipndose por primera vez en una aprobacin regulatoria a la UE.
2005: Secuencian el genoma de un perro bxer. En Argentina, se aprueban para su
comercializacin un maz transgnico con tolerancia a glufosinato de amonio y resistencia a
lepidpteros, y otro maz transgnico tolerante a glifosato. Se cumplen 10 aos de cultivos
GM en Argentina. Los beneficios econmicos a nivel nacional acumulados desde el
comienzo de su adopcin, en 1996; ascienden a 20 mil millones de dlares.
2006: Los cultivos GM alcanzan las 100 millones de hectreas en todo el mundo.
2007: La empresa argentina Bio Sidus obtiene vacunos clonados y transgnicos que portan el
gen que codifica para la insulina humana (conocidos como dinasta Patagonia), con el objeto
15

de obtener la hormona a partir de su leche. Otro grupo de investigacin local logra la

gestacin del primer clon equino de Amrica latina. Argentina siembra maz con
caractersticas acumuladas (resistencia a insectos y tolerancia a herbicida) y Brasil autoriza
un maz GM por primera vez, iniciando una etapa de aceleracin en las aprobaciones y en la
adopcin de transgnicos.
2008: Cientficos japoneses desarrollan la primera rosa azul.
2009: De secuencia el primer genoma bovino de una vaca Hereford. Cientficos de Dubai
logran desarrollar el primer clon de camello. Tambin se clona el primer toro campen de la
raza Brangus en el mundo. Se completa la secuencia del genoma del sorgo, del maz y del
cerdo domstico. Cientficos de Estados Unidos logran mapear el genoma de todos los
rinovirus causantes del resfro comn. Descubren bacterias vivas bajo un glaciar de la
Antrtida. La Administracin de Drogas y Alimentos de los Estados Unidos (FDA) aprueba
un frmaco (antitrombina) producido en cabras. Argentina siembra algodn con
caractersticas acumuladas (resistencia a insectos y tolerancia a herbicida) y supera las 20
millones de hectreas de cultivos GM. La adopcin representa el 100% de la soja, el 98% del
algodn y el 82% del maz.
2010: Un consorcio internacional de investigadores logra secuenciar el genoma completo de
la frutilla silvestre. Adems se completa la secuencia del genoma de la soja, del durazno, del
manzano, del ricino y de una gramnea del grupo del trigo y la cebada. Investigadores
brasileos y canadienses secuencian el primer genoma de un toro ceb. Se comercializan las
primeras enzimas para la produccin de etanol celulsico. Investigadores argentinos logran
clonar espermatozoides. Cientficos de Estados Unidos crean la primera clula controlada
por un genoma sinttico. En Argentina, investigadores clonan por primera vez un caballo. Se
cumplen 15 aos de cultivos GM en la agricultura argentina. Los beneficios acumulados a
nivel nacional alcanzan los 72 mil millones de dlares.
2011: Se logra la secuenciacin del genoma de la papa realizado por un grupo de cientficos
de 14 pases (incluyendo a investigadores del INTA Balcarce). Asimismo, se secuencia el
genoma de Medicago truncatula, un pariente cercano de la alfalfa y un modelo para el
estudio de la biologa de las plantas leguminosas. Cientficos argentinos secuencian por
primera vez el genoma de un microorganismo que sobrevive en condiciones extremas en la
Puna Argentina. Expertos surcoreanos crean un cerdo transgnico capaz de producir rganos
para trasplantes a humanos. En Argentina, se desarrolla el primer bovino genticamente
modificado del pas, que en su edad adulta producir leche semejante a la leche materna.
Brasil autoriza la siembra comercial de un poroto resistente a virus, completamente
desarrollado por una institucin pblica (EMBRAPA). El sistema regulatorio argentino
cumple 20 aos de trabajo ininterrumpido.
2012: Un grupo internacional de investigadores descifra el genoma del gorila. Por otro lado,
un consorcio internacional formado por 150 investigadores de 12 pases secuencian los
genomas del cerdo y el jabal. La Administracin de Alimentos y Frmacos de EE.UU.
aprueba el primer medicamento producido por zanahorias genticamente modificadas para
uso en pacientes con enfermedad de Gaucher. De la mano del INTA, la Argentina y otros 12
pases secuencian el genoma del tomate. Adems se secuencia el genoma del meln, de la
cebada, de la pera, de la sanda y de la banana. Unos 17 millones de agricultores siembran
170 millones de hectreas de cultivos GM en 28 pases. Argentina ocupa el tercer lugar, con
16

casi 24 millones de hectreas de soja, maz y algodn. Argentina autoriza la siembra

comercial de maces con cuatro y cinco genes acumulados para el control de malezas e
insectos.
2013: Consorcio internacional logra descifrar el genoma del garbanzo. Adems un equipo de
investigadores de diferentes pases secuencia y ensambla el genoma del kiwi. El Ministerio
de Agricultura, Ganadera y Pesca anuncia la renovacin y modernizacin del marco
regulatorio argentino para OGM, que acumula 5 aprobaciones comerciales en soja, 20 en
maz y 3 en algodn, adems de ms de 1.000 autorizaciones para ensayos a campo.
Adems de los avances en biomedicina, el progreso durante el presente siglo depender de la
convergencia de las tecnologas conocidas como NBIC (nanotecnologa, biotecnologa, informacin
y cognicin). Estas tecnologas combinan el inmenso conocimiento generado durante los ltimos 30
aos en biotecnologa con las nuevas habilidades de modificar la materia a la escala atmica
(nanotecnologa), y con 15 aos de avances en las ciencias de la computacin (tecnologa
informtica) y de la comprensin del cerebro humano (ciencias cognitivas). La revolucin que
comenz en la biotecnologa con el descubrimiento de la estructura del ADN hace 50 aos tuvo su
paralelo en las ciencias de la computacin, desde que Jack Kilby gener el primer circuito integrado
en 1958, hasta las compactas computadoras modernas con ms de mil millones de transistores y un
mundo conectado por Internet, telfonos celulares y computadoras de mano (PDAs). El
conocimiento de la naturaleza de la materia y de la energa extiende su escala hasta el mundo
subatmico de los quarks y la formacin de las galaxias. La combinacin de estas nuevas
tecnologas y su integracin a lo largo de todas las escalas, permitir en un futuro no tan lejano la
construccin de nuevos materiales, la erradicacin de enfermedades, el descubrimiento de energas
renovables e, incluso, la desaceleracin del proceso de envejecimiento.

17

TEMA 2
2.1

MICROORGANISMOS: ESTRUCTURA Y FUNCIN CELULAR

LOS MICROORGANISMOS COMO CLULAS

La clula es la unidad de vida fundamental. Una clula es una entidad aislada de otras clulas por
una membrana celular (y tal vez por una pared celular) que contienen en su interior diversos
compuestos y estructuras subcelulares.
La membrana celular es la barrera que separa el interior de la clula del exterior. Dentro de la
membrana celular se encuentran las diversas estructuras y componentes que hacen posibles que la
clula funcione. Son estructuras clave el Ncleo o Nucleide, donde se guarda informacin
gentica, el acido desoxirribonucleico (DNA) necesario para hacer nuevas clulas, y el citoplasma,
donde se encuentra la maquinaria para el crecimiento y otras funciones celulares.
Todas las clulas estn formadas por 4 tipos de componentes qumicos: protenas, cidos nucleicos,
lpidos y polisacridos. En conjunto, se denominan macromolculas. La naturaleza qumica y la
disposicin de las macromolculas de una clula de un organismo es lo que diferencia una clula de
otro organismo.
Aunque cada tipo de clula tiene una estructura y un tamao definido, una clula es una unidad
dinmica, que realiza constantes cambios reemplazando sus componentes. Incluso cuando no est
creciendo, una clula puede estar tomando materiales del medio para incorporarlos a su propia
estructura. Al mismo tiempo libera productos de desecho en el medio. Por tanto, una clula es un
sistema abierto en constante cambio y, sin embrago, permanece igual.
Las clulas se pueden considerar bajo dos aspectos. Por un lado, las clulas pueden ser consideradas
como maquinas qumicas que llevan a cabo transformaciones qumicas dentro de los lmites de la
estructura celular. Los catalizadores de esta mquina qumica son las enzimas, protenas capaces de
acelerar notablemente la velocidad de reacciones qumicas especficas. Por otro lado, las clulas
tambin pueden ser consideradas como sistemas codificados, anlogos a las computadoras, que
18

guardan y procesan la informacin gentica (DNA) que pasa finalmente a la descendencia durante la
reproduccin.
En condiciones adecuadas, una clula viable aumenta de tamao y luego se divide para formar dos
clulas. En el proceso ordenado que supone la divisin celular, la cantidad de todos los
constituyentes de la clula se duplica. Cuando una clula se divide cada una de las dos clulas
resultantes contienen toda la informacin gentica necesaria para la formacin de mas clulas y, por
tanto, durante el crecimiento debe haber tambin una duplicacin del DNA. En consecuencia, tanto
la maquina como el cdigo deben estar funcionalmente coordinados para lograr que una clula se
reproduzca con fidelidad.
2.2

TIPOS DE ORGANIZACIN CELULAR

Los organismos vivos se pueden dividir en dos reinos: los vegetales y los animales multicelulares, y
los protistas y los virus, segn la siguiente tabla

La estructura celular de ambos reinos ha permitido la divisin de los tipos celulares en dos grupos
(sin incluir los virus). Estos grupos son los eucariotas y los procariotas; la diferencia entre ellos
depende principalmente de si los cromosomas (DNA) estn contenidos en un ncleo bien definido.
En la siguiente tabla se listan las principales diferencias entre los procariotas y los eucariotas en
trminos de su estructura celular y contenido de DNA

Los procariotas contienen un solo cromosoma, en tanto que los eucariotas contienen muchos
cromosomas en una estructura unida a una membrana, el ncleo.
En los eucariotas, el DNA contenido en los cromosomas est unido a histonas, protenas bsicas
ausentes en los procariotas. El DNA del ncleo de los eucariotas no es el nico DNA presente en la
clula, puesto que otras estructuras unidas a membranas, las mitocondrias y los cloroplastos,
19

tambin contienen DNA. Estas estructuras rodeadas de membrana, conocidas como organelos, no se
encuentran en los procariotas. Los organelos tambin contienen a las estructuras capaces de
sintetizar protenas, las cuales incluyen a los ribosomas. Los ribosomas de los organelos son
similares en tamao a los ribosomas de los procariotas (70S), en tanto que los ribosomas
citoplasmticas miden 80 S (S unidades de Sverberg).
Unidad de medida de la tasa de sedimentacin de una partcula en un campo centrfugo. Es una
velocidad de migracin utilizada para caracterizar macromolculas y complejos macromoleculares. Ej.
El ribosoma eucarionte es 80s y cada una de sus subunidades son 60s y 40s. Una unidad S = 10 -13
cm/seg. Se determina mediante ultracentrifugacin y depende del tamao de la partcula, de su
densidad, de la densidad y viscosidad del medio en el cual se encuentra y de la fuerza centrfuga

Los virus se incluyen con frecuencia en el grupo de los protistas. Los virus fueron detectados en
1982 por Iwanowski. Los virus contienen cidos nucledos que codifican toda su informacin
gentica, pero dependen de las clulas husped preexistente para su reproduccin. Esta incapacidad
para existir sin usar otras clulas ha originado muchos argumentos en cuanto a si los virus son o no
organismos vivos. Los virus afectan a vegetales, animales y bacterias.
2.2.1 PROCARIOTAS
Los procariotas representan las clulas ms pequeas del reino protista, el cual consiste en bacterias
y algas verde-azules. El resto, algas, levaduras, hongos y protozoarios, son eucariotas. La siguiente
tabla muestra la comparacin de los protistas, bacterias, mohos y las levaduras en cuanto a su forma,
tamao y composicin.

Las clulas bacterianas se presentan como bastones, esferas, cadenas y espirales, que en general son
ms pequeas que las levaduras y los mohos

20

Los tres grupos contienen organismos que pueden formar esporas cuando las condiciones son
desfavorables. La composicin de las bacterias muestra que contienen ms protenas y menos
lpidos o carbohidratos que las levaduras o los mohos.
Las diferentes formas de las bacterias se usan en las primeras etapas de la identificacin, pero
debido a la falta de otras caractersticas, se usan las nutricionales para una identificacin ms
detallada. Segn su fuente de energa, las bacterias y las algas verde-azules se pueden clasificar en
cuatro categoras:
Organismos fotoauttrofos, los cuales dependen de la luz como fuente de energa y utilizan
dixido de carbn como fuente de carbono. Este grupo incluye las algas verde-azules, pero
tambin ciertas bacterias fotosintticas (bacterias sulfurosas purpuras y verdes), as como
plantas superiores y algas verdes eucarioticas.
Organismos fotohetertrofos, los cuales dependen de la luz como fuente de energa, pero
usan compuestos orgnicos como fuentes de carbono. Estos son las bacterias purpuras no
sulfurosas.
Organismos quimiauttrofos, que dependen de varios compuestos qumicos para obtener
energa, pero usan dixido de carbono como fuente de carbono. Esta capacidad se asocia con
la de usar compuestos inorgnicos reducidos como; H2S, S o NH3 para producir energa y
est restringida a las bacterias.
Organismos quimiohetertrofos, que dependen y obtienen su energa y molculas de
carbono de fuentes orgnicas. Estos representan el grupo ms grande de bacterias y
eucariotas y es muy diverso.
Si se combinan las caractersticas estructurales, la forma de movimiento y los grupos nutricionales,
los procariotas se pueden dividir en cuatro grupos principales, los cuales se ilustran en la siguiente
tabla. De estos, las eubacterias son el ms grande y mayor inters en la biotecnologa

21

En la siguiente figura se muestra el diagrama representativo de las clulas procariotas.

2.2.1.1

Pared celular

El citoplasma bacteriano est encerrado por una pared celular rgida altamente estructurada que
determina la forma de la clula. La eliminacin de esta pared provoca que la clula adquiera una
forma esfrica conocida como protoplasto cuando la membrana celular tiene poca resistencia
intrnseca. Si el protoplasto se coloca en un medio hipertnico, una solucin ms diluida que el
citoplasma, se provoca una rpida captacin de agua y, finalmente, la ruptura de la membrana.
En las algas verde-azules, la pared celular se compone bsicamente de celulosa, en tanto que en las
bacterias la pared est formada por un polmero nico de amino-azcar, peptidoglicano o murena.
La composicin qumica y la estructura del peptidoglicano muestran variaciones considerables entre
diferentes organismos, aunque su estructura bsica es la misma. Est formado por cadenas lineales
de polisacridos, hebras de glicano, entrecruzadas por cadenas peptdicas cortas.
Los cordones de glicano estn constituidos por unidades alternadas de N-acetilglucosamina y cido
N-acetilmurmico A cada molcula de N-acetilmurmico est unida una cadena de cuatro
aminocidos, los cuales son responsables del entrecruzamiento, tal como se ilustra en la siguiente
figura.

En algunas bacterias, cerca del 50% de la pared celular est compuesta de peptidoglicano; el resto
son varios polmeros, lo cual depende del organismo. Un grupo de estos son los cidos teicoicos,
polmeros que contienen fosfato.
22

Otras bacterias tienen pared celular con menor contenido de peptidoglicano pero tienen una
estructura ms compleja que contienen lpidos y protenas. Etas diferencias son responsables de las
observaciones realizadas por Gram en 1884, de que algunas bacterias se tien y otras no.
En la siguiente tabla se muestra el mtodo de tincin que divide a las bacterias gram-positivas y
gram-negativas.

La composicin general de la pared de las bacterias gram-positivas y gram-negativas se puede

apreciar en la siguiente figura.

Las bacterias gram-positivas tienen una estructura bsica de peptidoglicano unida a cido teicoico,
en tanto que las bacterias gram-negativas tienen una membrana fuera de la capa de peptidoglicano
que consiste en una bicapa de fosfolpidos con lipopoliscaridos y protenas.
Las diferencias entre las bacterias gram-positivas y gram-negativas detectadas por la tincin de
Gram, se pueden correlacionar con otras caractersticas como la sensibilidad a la penicilina y a la
digestin con lisozima.

23

La penicilina es de los muchos antibiticos que se sabe inhiben la sntesis de peptidoglicano al

unirse a las enzimas responsables del entrecruzamiento de las cadenas. Puesto que ninguna otra
actividad biosinttica es afectada, el crecimiento de las clulas continua, pero son incapaces de
producir paredes celulares adecuadas y, por lo tanto, producen formas anormales y finalmente se
lisan.
Las clulas humanas y animales no contienen peptidoglicano por lo que son afectadas. La enzima
lisozima encontrada en clara de huevo, las lagrimas y otras secciones, rompe el enlace entre las
unidades de cido N-acetilmurmico y N-acetilglucosamina.
En la parte exterior de la pared celular de algunas bacterias, se encuentran polisacridos de alto peso
molecular formando un gel hidroflico, conocido como cpsula. El espesor de la cpsula puede
variar enormemente desde 10 nm hasta 1.0 m, y puede variar de acuerdo al estado de la clula. La
cpsula no tiene una funcin bien definida, sin embargo muchos patgenos estn encapsulados y los
componentes de la cpsula pueden ser antignicos.

2.2.1.2

Membrana citoplsmica

Debajo de la pared celular bacteriana est la membrana de unos 40-80 A de espesor. La membrana
acta como una barrera semipermeable que controla la captacin y la liberacin de materiales,
ayudando a determinar la composicin del citoplasma.
Alrededor del ao 1900 se descubri el primer indicio de que los lpidos, molculas orgnicas
pequeas insolubles en agua que incluyen a las grasas y los aceites pueden ser un constituyente de
las membranas biolgicas. En la dcada de los aos 50 Robertson propuso que la membrana
consista en una capa externa de polisacridos, una capa interna de protenas y, entre estas, una
bicapa de lpidos conocida como una unidad de membrana. La bicapa lipdica consista en
fosfolipidos, molculas de glicerol con un extremo hidrfilo (el fosfato) y un extremo hidrofbico
(tallo de cido graso), arreglados como una capa doble.

Sin embargo, los adelantos de la microscopia electrnica (crio-fractura) revelaron un cuadro ms

complejo con protenas asociadas a la membrana. Adems, aparentemente las protenas no estn
fijas en la capa de lpidos, sino que estn libres para moverse en forma lateral. Estos
descubrimientos sugirieron el modelo actual para las membranas, el mosaico fluido, el cual se aplica
a membranas de todos tipos.

24

En las bacterias, la membrana citoplsmica es la nica estructura membranosa real, aunque existe
una membrana similar en los eucariotas alrededor de estructuras como el ncleo, las mitocondrias y
los cloroplastos.
2.2.1.3

Flagelos

Las bacterias pueden moverse en respuesta a varios estmulos o a componentes qumicos al alejarse
de los estmulos o al acercarse a ellos. Se ha demostrado que muchos nutrientes simples, como los
azucares y los aminocidos provocan respuestas en las bacterias. El medio de locomocin principal
de las bacterias es el flagelo. Este consiste en un cuerpo basal embebido en la membrana
citoplsmica, una regin en forma de gancho que conecta la base con un eje largo que es flexible y
delgado.

El flagelo se compone de hebras de una protena llamada flagelina. El ordenamiento de los flagelos
en la bacteria determina su tipo de movimiento y, a menudo se puede usar en su clasificacin.
Cuando son vistos en el microscopio electrnico, pueden observarse otros apndices sobre las
bacterias, que consisten en delgados filamentos conocidos como fimbrias o pilis, los cuales
participan en la transferencia de material gentico.
2.2.1.4

Esporas

El citoplasma de las bacterias contiene muy pocas estructuras separadas de unos o dos agregados de
material nuclear. Sin embargo, se puede hallar una estructura que solo est en las bacterias grampositivas, la endospora. Cuando las condiciones son difciles, o bien, en alguna etapa del ciclo de
desarrollo, las bacterias forman una espora refractiva a partir de una invaginacin de la membrana
citoplsmica. La gruesa pared de las esporas les confiere resistencia al calor o a la desecacin.

25

2.2.2 EUCARIOTAS
La clula eucariota est representada por plantas, animales, levaduras, algas y hongos. A pesar de la
gran diversidad entre estas clulas, hay muchas caractersticas comunes a ellas, lo cual incluye un
alto grado de complejidad interna.
Clula
animal

2.2.2.1

Clula
vegetal

Pared celular

En los hongos, las levaduras y las algas, la clula est encerrada en una pared rgida que consiste
principalmente en polisacridos, los cuales le confieren una forma fija y la protegen del dao
mecnico y osmtico. La pared estabiliza la estructura celular y, en cuanto a las procariotas, puede
usarse como caracterstica taxonmica. Las levaduras pueden tener forma casi esfrica u oblonga y
se dividen por gemacin o fisin, en tanto que el crecimiento micelio se realiza por elongacin, el
cual puede incluir ramificacin.

2.2.2.2

Estructura de la membrana

Las eucariticas estn limitadas por una membrana de estructura similar a la de los procariotas. En
cuanto a los eucariotas vara mucho el tamao de las estructuras que rodean la membrana dentro de
la clula
26

2.2.2.3

Ncleo

La caracterstica ms sobresaliente de las clulas eucariticas es el ncleo, el cual contienen el DNA

de la clula y est limitado por la membrana. Dentro del ncleo se pueden ver reas densas, ricas en
RNA, conocidas como nuclolos.
2.2.2.4

Mitocondrias

Las clulas eucariticas contienen estas estructuras, las cuales, a menudo son grandes, cilndricas,
encerradas por una membrana doble y contienen invaginaciones numerosas conocidas como crestas.
La mitocondria es el sitio principal de generacin de energa y contiene su propio sistema
sintetizador de protenas y su propio DNA. En la siguiente figura se puede observar con ms detalle

2.2.2.5

Cloroplasto

El cloroplasto tambin es una estructura rodeada por una membrana y, al igual que las mitocondrias,
contiene un sistema separado para la sntesis de protenas y su propio DNA. Como su nombre lo
indica, los cloroplastos contienen el pigmento de clorofila y en ellos se lleva a cabo la fotosntesis.
27

2.2.2.6

Otras estructuras membranosas

El retculo endoplsmico es una compleja red de membranas que participan en el almacenamiento y

transporte intracelular de varios productos. El retculo endoplsmico tambin puede tener muchos
ribosomas unidos a una superficie y ser participe en la sntesis y secrecin de protenas.
La mayora de las eucariotas contienen un complejo de membranas denominado aparato o cuerpo de
Golgi, algunas veces nombrado ditiosoma. Al igual que el retculo endoplsmico, el aparato de
Golgi participa en la secrecin de substancias de la clula en particular enzimas.
Las vacuolas se encuentran en muchos tipos de clulas, especialmente en plantas. A menudo se usan
para almacenar enzimas o productos que podran ser disruptivos o txicos para la celula (las
vacuolas pueden llegar a ocupar de 80 a 90% del volumen celular total).
Muchas de las estructuras citoplasmticas descritas estn en equilibrio dinmico y son sintetizadas y
degradadas segn sea requerido. Las diferentes estructuras parecen derivarse, ya sea directa o
indirectamente, del retculo endoplsmico de acuerdo con el esquema mostrado a continuacin.

2.3

REQUERIMIENTOS PARA EL CRECIMIENTO

La mayora de las levaduras y las algas pueden sintetizar los compuestos orgnicos necesarios para
su crecimiento a partir de la fuente de carbono. Muchas bacterias no pueden hacer esto y
necesitan la presencia de factores de crecimiento especficos en el medio, adems de una fuente de
carbono y energa.
El requerimiento ms comn son las vitaminas, las cuales se necesitan en cantidades
extremadamente pequeas como cofactores para varias enzimas. As, Clostridium kluyveri requiere
un medio complementado con biotina y acido p-aminobenzoico.
Ciertas bacterias lcticas tienen necesidades muy estrictas de prcticamente todos sus aminocidos,
purinas, pirimidinas y vitaminas. En consecuencia estos organismos realmente pueden crecer en un
medio en el que no se conoce la concentracin de uno de estos nutrientes necesarios para el
crecimiento.
El grado de crecimiento estar relacionado directamente con la concentracin del nutriente esencial.
Esto constituye la base del ensayo microbiolgico.
En la siguiente tabla se listan algunas de las vitaminas y compuestos relacionados que a menudo se
necesitan para el crecimiento
28

2.4

COMPONENTES ESTRUCTURALES BASICOS DE LA CELULA

Las clulas microbianas, como todos los sistemas vivos con excepcin de los virus, se componen de
carbohidratos, grasas, lpidos y cidos nucleicos. Estos materiales se forman a partir de las unidades
bsicas de construccin o productos metablicos primarios, a saber, monohidratos, cidos grasos,
aminocidos y nucletidos (o nucleosidos) y, por otras reacciones metabolicas, se convierten en los
componentes estructurales principales de las clulas, como paredes celulares, membranas, enzimas,
protenas estructurales y DNA o RNA.
2.4.1 Carbohidratos
Son compuestos orgnicos con la formula general (CH2O)n, donde n>3. Existen dos formas
principales de carbohidratos; los monosacridos y los polisacridos.
Los monosacridos o azucares simples, son los carbohidratos ms pequeos que contienen entre 3 y
9 tomos de carbono y son las unidades de construccin de los polisacridos.
La D-glucosa (hace girar la luz polarizada en el plano en la direccin +) es el monosacrido mas
comn. Se compone de 6 tomos de carbono y, al igual que otro azucares, es un derivado
polihidroxialcohol (ver figura)
Para muchos microorganismos la D-glucosa es el compuesto base que se metaboliza para formar los
dems compuestos celulares. La mayora de los microorganismos (particularmente las levaduras),
pueden crecer en glucosa, la cual se transporta a travs de la membrana hacia la clula de difusin
pasiva, transporte activo o trasnlocacin de grupo.
Cuando hay polisacridos en el medio, es comn que sean hidrolizados a unidades de glucosa por
enzimas extracelulares (invertasas, celulasas, amilasas, amoniglucosidasas) antes de ser
transportados hacia la clula.
Los monosacridos se clasifican como aldosas o cetosas (ver figura). As, la glucosa es una
aldohexosa (aldo=azcar; hexosa= 6 tomos de carbono).

29

Hay dos formas de glucosa (y otros azcares) llamadas formas D y L, que son imgenes especulares
entre s.

Los azucares de origen natural por lo general son de la forma D-. La glucosa se presenta
principalmente como una estructura de anillo, denominada la forma piranosa, en la que en enlace y - representan la posicin del grupo OH del tomo del carbono I
La unin de otros grupos qumicos a la estructura bsica, da lugar a una variedad de derivados de
azcar que incluyen alcoholes (glicerol, sorbitol, etc.), cidos (acido gluconico, acido glucornico),
fosfatos (glucosa-1-fosfato, glucosa-6-fosfato), desoxi-azcares (desoxirrobosa, ver figura) y
aminoazcares (glucosamina, galactosamina, acido N-acetilmurmico). Estos son componentes
comunes de la estructura de la clula microbiana.

Bajo la influencia de enzimas, los monosacridos se pueden condensar entre s para formar
polisacridos. El grupo OH sujeto al tomo de carbono en la posicin 1 de la molcula de glucosa,
30

es relativamente reactivo y se puede condensar con el grupo OH en la posicin 4 o 6 de otro

azcar para producir un disacrido con un enlace - (o -) 1,4 glucosdico (ver figura)

Si las unidades de la glucosa se polimerizan an ms mediante la formacin de enlaces -1,4glucosdicos se obtiene un polmero de cadena recta con un peso molecular de hasta 500000,
denominado amilosa (un componente del almidn).

La amilopectina (el componente principal del almidn) se compone de unidades de -D-glucosa

unidades por enlaces -1,6-glucosdicos. La molcula completa del almidn (un polisacrido comn
de almacenamiento) es una combinacin de amilosa y amilopectina.

El glicgeno un polmero comn de almacenamiento en bacterias y levaduras, tienen una

composicin similar al almidn, excepto que esta mucho mas ramificado que la amilopectina,
con ramificaciones -1,6-glucosdicos, que aparecen cada 8 a 10 residuos de glucosa.
El dextrano es otro polisacrido importante de almacenamiento microbiano, similar al almidn y al
glucgeno, que est formado de unidades de D-glucosa unidas principalmente por enlaces -1,6glucosdicos. Sin embargo los puntos de ramificacin son caractersticos de las especies, y pueden
ser enlaces -1,2, -1,3 o -1,4. Los dextranos forman soluciones viscosas que tienen aplicaciones
amplias en la industria como: lubricantes, en la separacin de molculas orgnicas por filtracin y
cromatografa de intercambio inico, etc.
31

Un polisacrido estructural importante es la celulosa, la cual contiene ms del 50% del carbono
orgnico total de la biosfera. La madera contiene aproximadamente 50% de celulosa, en tanto que el
algodn es casi celulosa pura. Se compone de unidades de D-glucosa unidas por enlace -1,4 (ver
figura) y es el componente principal de las clulas vegetales y algas.

El potencial de la hidrlisis fsica o enzimtica de la celulosa (papel de desecho, peridico, viruta,

residuos de cosechas), seguida de una fermentacin posterior para la produccin de alcohol,
representa uno de los mayores desafos a la industria biotecnolgica.
Las paredes celulares estn formadas por un peptidopolisacarido complejo llamado Peptidoglicano
o murena. Este consiste en cadenas paralelas de polisacrido compuestas de un disacrido de Nacetil-D-glucosamina y cido N-acetilmurmico unido por enlaces -1,4 glucosdicos. En el grupo
hidroxilo del cido lctico unido al cido murmico, se encuentra una cadena lateral del tetrapptido
compuesta de L-alanina, D-alanina, cido D-glutmico y cido diaminopimlico o L-lisina (ver
figura). La D-alanina terminal de la cadena peptdica lateral de un polisacrido puede unirse con la
cadena peptdica de otra cadena de polisacrido, ya sea directamente o a travs de otra cadena
polipeptdica corta (Staphylococcus aureus, esta cadena de polipptido se compone de 5 unidades de
glicina).
Por lo tanto, el Peptidoglicano consiste en cadenas de polisacridos paralelas con muchas uniones
entre las cadenas que le confieren fuerza y rigidez a la pared celular.
La enzima lisozima hidroliza los enlaces -1,4 del Peptidoglicano para producir disacridos de Nacetil-D-glucosamina y cido N-acetilmuramico, a los cuales estn unidos los pptidos. Este es uno
de los mtodos usados para obtener protoplastos de bacterias gram+

32

La penicilina, un antibitico importante, inhibe la formacin de los entrecruzamientos peptdicos

entre las cadenas de polisacrido, formando as paredes celulares dbiles.
2.4.2 Grasas y lpidos
Los lpidos son compuestos orgnicos insolubles en agua localizados en todas las clulas vivientes,
pero son solubles en solventes no polares como el benceno y el ter.
Tienen 4 funciones principales:
1. Como componentes estructurales de las membranas
2. Como materiales de almacenamiento intracelular cuya oxidacin produce energa para el
crecimiento
3. Como fuente de combustible (energa) transportable
4. Como componente protector de las paredes celulares de las bacterias, las hojas, las plantas y
la piel de los vertebrados.
Las grasas y lpidos se componen de cidos grasos, de los cuales se han aislado ms de 70 tipos
diferentes. Los cidos grasos se componen de una cadena larga de hidrocarburos con un grupo
carboxilo terminal, como se muestra en la figura.

Donde n est por lo general, entre 12 y 20. La cadena de hidrocarburo puede ser saturada (sin
enlaces dobles) o insaturada (uno o ms enlaces dobles). Los cidos grasos difieren principalmente
en la longitud de la cadena y en el nmero y la posicin de los dobles enlaces. Algunos de los cidos
grasos ms importantes y comunes se muestran en la siguiente tabla.

33

Casi todos los cidos grasos naturales tienen nmero par de tomos de carbono y se llaman
saturados si no tienen dobles enlaces.
Los cidos grasos insaturados presentan uno o ms dobles enlaces (ver tabla). Si bien las plantas y
animales superiores tienen predominantemente cidos grasos insaturados de 14 a 22 tomos de
carbono; los microorganismos, y en particular las bacterias, tienen tipos ms simples de 12 a 18
tomos de carbono y cidos grasos insaturados C16 o C18: en las bacterias no se han encontrado
cidos grasos con ms de un enlace doble.
Los cidos grasos slo se encuentran en pequeas cantidades en forma libre. Se localizan en
materiales estructurales y de almacenamiento como esteres de glicerol (glicridos o acilgliceroles) o
como fosfosteres de glicerol (fosfoglicridos o fosfolpidos).
Los glicridos son la forma de almacenaje principal de grasas en los microorganismos, plantas y
animales.
Hay tres clases de glicridos, dependiendo del nmero de cidos grasos esterificados en la molcula
de glicerol.

1-monoacilglicerol (monoglicerido)
1.2-diacilglicerol (diglicrido)
1.2.3-triacilglicerol (triglicrido)

34

Los ms comunes en la naturaleza son los triacilgliceroles. La clase de triacilglicerol depende del
tipo y posicin de los cidos grasos esterificados en relacin con el glicerol, por ejemplo,
triesteroilglicerol.
Los fosfoglicridos se encuentran casi exclusivamente en las membranas celulares, siendo escaso en
grasas de almacenamiento. Son similares en estructura a los glicridos excepto que uno de los
grupos alcoholes primarios del glicerol est fosforilado ms que esterificado con un cido graso.
As, el componente bsico de los fosfolpidos es el glicerol-1-fosfato o el glicerol-3 fosfato, al cual
estn unidos dos cidos grasos.
Los fosfoglicridos (ver figura) poseen una cabeza polar (hidroflica) y dos cadenas hidrocarbonadas
no polares (hidrofbicas) y, por tanto, se denominan lpidos anfipticos.

As en solucin acuosa, es fcil que formen micelas con las regiones polares de un grupo de
fosfoglicridos en contacto con el agua, en tanto que las cadenas laterales no polares se agrupan
entre s (ver figura).

En interfases aire-agua, los fosfoglicridos formaran monocapas, mientras que en solucin,

particularmente aperturas que separan dos compartimentos acuosos, formaran con facilidad bicapas
de aproximadamente 70 A de espesor. Estas bicapas son muy similares a las membranas celulares,
las cuales permiten el paso libre de agua, pero son impermeables a varios iones. En la siguiente tabla
se enlistan algunos de los fosfoglicridos ms comunes de los microorganismos

35

2.4.3 Esteroides
Los lpidos complejos, los cuales no son saponificables, incluyen a la clase bioqumicamente
importante de los esteroides. Los esteroides se obtienen de una estructura bsica, tal como se ilustra
en la figura.

Los animales sintetizan un gran nmero de esteroides, los cuales tienen diversos papeles fisiolgicos
y bioqumicos, incluyendo su funcin como hormonas. Algunos ejemplos son: colesterol, cortisona
y testosterona.
2.4.4 Protenas
Las protenas son las molculas orgnicas ms abundantes de las clulas vivas, comprendiendo entre
el 30% y el 70% del peso seco total de las clulas. Son componentes celulares muy importantes
puesto que son copiados de la informacin gentica de la clula y, posteriormente, dirigen la
maquinaria metablica de ella.
Las protenas se componen invariablemente de carbono, oxgeno y nitrgeno; casi todas contienen
azufre. Adems, algunas protenas contienen otros elementos como fierro, fsforo, zinc y cobre
El peso molecular de las protenas varia desde 5000 hasta ms de 40 millones. Sin embargo, ciertas
cadenas peptdicas, como las que se asocian con el peptidoglicano, constan de pocos aminocidos
con pesos moleculares tan bajos como 240. Las protenas y pptidos se componen de .aminocidos, los cuales representan las unidades de construccin de las protenas. Existen 20 aminocidos comunes unidos entre s mediante enlaces peptdicos para formar polmeros grandes,
no ramificados o cadenas polipeptdicas, ellos son; Glicina, Alanina, Serina, Cistena, Treonina,
Valina, Leucina, Isoleucina, Metionina, Fenilalanina, Tirosina, Triptfano, cido asprtico,
Aspargina, cido glutmico, Glutamina, Lisina, Arginina, Histidina y Prolina.
Los enlaces peptdicos se forman por una reaccin de condensacin entre el grupo carboxilo de un
aminocido y el grupo amino de un segundo aminocido.
36

El nmero y secuencia de los residuos aminocidos en una cadena polipeptdica (protena)

determina la funcin y la actividad cataltica (si existe). El peso molecular promedio de un
aminocido es 138. Sin embargo, puesto que se pierde una molcula de agua en la formacin de un
enlace peptdico, el peso molecular promedio de un residuo de aminocido en una protena es de
120.
Las protenas simples se componen solamente de aminocidos con aproximadamente 50% de
carbono, 7% de hidrogeno, 23% de oxgeno, 16% de nitrgeno y ms de 3% de azufre. Las protenas
conjugadas contienen, adems de aminocidos, otro material orgnico o inorgnico llamado grupo
prosttico de la protena. Estas protenas conjugadas se clasifican de acuerdo a la composicin
qumica del grupo prosttico. As, las nucleoprotenas contienen cido nucleico; las lipoprotenas
contienen lpido o fosfolpido; las glicoprotenas contienen carbohidratos; las hemoprotenas
contienen una estructura de porfirina asociada con fierro; las flavoprotenas contienen grupos flavn
y las metaloprotenas contienen iones metlicos.
La estructura, y en consecuencia, la funcin de una molcula de protena, est gobernada no slo por
su composicin de aminocidos, sino tambin por su forma tridimensional caracterstica o
conformacin. Muchos de los aminocidos tienen cadenas laterales ya sea hidrofbicas (no polares)
o hidroflica (polares), que determinan la manera en la cual se dobla una molcula de protena.
Adems, el aminocido cistena contiene un grupo sulfhidrilo (-SH) que puede reaccionar con otra
cistena para formar enlace sulfhidril covalente (enlace disulfuro).

Estos enlaces, junto con fuerzas de Van der Waals, puentes de hidrogeno e interacciones polares,
son los causantes de la conformacin tridimensional de una protena. Existen dos conformaciones
principales de protenas; fibrosas y globulares
Las protenas fibrosas son ms fuertes fsicamente y son insolubles en agua o soluciones acuosas
diluidas. Se componen de cadenas polipeptdicas arregladas en paralelo a lo largo de un solo eje para
formar fibras grandes o lminas. Representan los componentes estructurales bsicos del pelo
37

(queratina), cuero, uas, colgeno y tendones de los animales superiores, as como de los flagelos,
cilios y pilis de los microorganismos.

Las protenas globulares consisten en cadenas polipeptdicas estrechamente empaquetadas dobladas

en formas esfricas o globulares. Por lo general, son solubles en solucin acuosa y se difunden con
rapidez. En consecuencia, son bastante mviles en el citoplasma celular y, a menudo, tienen una
funcin cataltica (enzimas). Por lo tanto, la mayora de las enzimas y protenas de transporte son
protenas globulares.

Se observa que hay cuatro niveles diferentes de estructura protenica, las cuales se pueden resumir
como sigue:
Estructura Primaria: Secuencia de residuos de aminocidos unidos por medio de enlaces
peptdicos
Estructura Secundaria: Se refiere a la forma de la extensin o del enrollamiento helicoidal
de la cadena polipedtdica, en particular en las protenas fibrosas, la cual es resultado
principalmente del establecimiento de puentes de hidrogeno entre los aminocidos.
Estructura Terciaria: Se refiere al doblamiento y curvatura de la cadena para formar
protenas globulares inducidas por enlaces disulfuro covalentes, puentes de hidrogeno o
enlaces salinos e interacciones hidrofbicas e hidroflicas.
Estructura Cuaternaria: Es la manera en la que las cadenas polipeptdicas individuales se
renen para formar una protena multimrica. Los enlaces responsables del establecimiento
de la estructura cuaternaria son similares a los mencionados en el punto 3
Las protenas que tienen ms de una cadena polipeptdica se denominan protenas multimricas u
oligomricas, y cada polipptido se conoce como subunidad o protmero.
38

En general, la mayora de las protenas grandes tienen dos o ms subunidades que pueden no poseer
ningn enlace covalente entre ellas. Ejemplos de protenas ologomricas son las enzimas,
hexocinasa de las levaduras (4 subunidades), triptfano sintetasa (4 subunidades), lactato
deshidrogenasa (4 subunidades) y la sintetasa de cidos grasos (21 subunidades), aunque la
ribonucleasa y la lisozima poseen una sola subunidad.
De ordinario, las subunidades estn asociadas estrechamente, aunque puede no haber enlaces
covalentes. En consecuencia, la protena acta como una sola molcula y, de hecho, casi siempre se
requieren todas las subunidades para el funcionamiento ptimo de la protena.
En la siguiente tabla encontramos algunas protenas que se encuentran ms comnmente en la
naturaleza y su funcin.

39

Una de las clases principales de protenas son las enzimas, las cuales funcionan como catalizadores
biolgicos.
2.4.5 cidos nucleicos
Los cidos nucleicos se componen de nucletidos y participan en el almacenamiento, replicacin,
transcripcin y transferencia de la informacin gentica. Los nucletidos tambin tienen funciones
importantes en el metabolismo, particularmente en reacciones de transformacin de energa. Los
nucletidos sirven como coenzimas portadoras de energa, como coenzimas en la transferencia
del acido actico, azucares, aminas y otras molculas y como coenzimas en reacciones de oxido
reduccin.
Los mononucletidos se componen de una base nitrogenada, un azcar de 5 carbonos y acido
fosfrico. Hay dos clases de bases nitrogenadas: las pirimidinas y las purinas.
En los nucletidos se encuentran comnmente tres bases pirimdicas: uracilo, timina y citocina y, en
una cantidad menor 5-metilcitocina y 5 hidroximetilcitocina (ver figura).

Hay dos bases puricas principales, a saber: adenina y guanina y formas menores como 2metiladenina y 1-metilguanina (ver figura).

Los nucleosidos son similares a los nucletidos excepto que carecen del grupo fosfato unido en la
posicin 5 del anillo de la ribosa (azcar de 5 carbonos). Hay dos tipos de nuclesidos: los
ribonuclesidos que contienen D-ribosa como componente de azcar y los 2desoxirribonuclesidos, que contienen 2-desoxiribosa-D-ribosa (ver figura)

40

Los cuatro ribonuclesidos principales son la 2-desoxiadenosina, 2-despxiaguanosina, 2desoxicitidina y 2-desoxitimidina. Estos nuclesidos no se encuentran en cantidades apreciables en
forma libre dentro de las clulas.
Los nucletidos son steres de nuclesido con cido fosfrico y, otra vez, son de dos tipos, a saber:
los ribonucletidos, que contienen D-ribosa y los desoxirribonucletidos, los cuales contienen 2desoxi-D-ribosa. Es comn encontrar a los nucletidos en forma libre en el interior de las clulas.
Los ribonucletidos son los constituyentes principales (bloques de construccin) de los cidos
ribonucleicos (RNA), y los desoxirribonucletidos de los cidos desoxirribonucleicos (DNA). El
grupo de cido fosfrico, en general, se encuentra unido en posicin 5 de la D-ribosa o de la 2desoxi-D-ribosa, pero puede asociarse con las posiciones 2o 3en incluso formar grupos de cido
fosfrico cclicos, en forma notable, la adenosina-3, 5-monofosfato (AMP cclico), la cual es un
compuesto importante en la regulacin del metabolismo (ver figura).

Los ribonuclesidos y los desoxirribonuclesidos pueden existir dentro de la clula como 5monofosfatos (nucletidos), 5disfosfatos y 5-trifosfatos. (ver figura).

Estos grupos fosfatos forman complejos con Mg2+ y Ca2++ dentro de la clula y tienen funciones muy
importantes. La ATP (adenosina-5-trifosfato) es el portador primario de energa en la clula, que
transfiere energa desde reacciones catablicas (oxidativas) a reacciones anablicas (biosintticas).

41

Los nuclesidos di- y tri- fosfatos sirven tambin como portadores de molculas especficas. As, la
UDP (uridina difosfato) es un portador especfico de residuos de azcar en la sntesis de
polisacridos, esto es, como UDP-glucosa para la biosntesis de glucgeno.
Los nuclesidos trifosfato funcionan tambin como precursores de unidades de mononucletido para
la sntesis de DNA y RNA.
Existe gran cantidad de otros mononucletidos importantes que contienen bases que no se
encuentran en los cidos nucleicos. La nicotinamida adenina dinucletido (NAD) y su forma
fosforilada (NADP), as como la flavina mononucletido (FMN) y la flavina adenina dinucletido
(FAD) (ver figuras), son compuestos cuya funcin principal es actuar como cofactores o coenzimas
en reacciones de xido reduccin en el interior de la clula.

Otro mononucletido importante es la coenzima A (CoA.SH), la cual contienen adenina y vitamina

cido pantotnico. La coenzima A interviene en la transferencia de grupos acetato y cidos grasos en
reacciones celulares, por ejemplo, en la formacin de citrato catalizada por la enzima citrato sintasa
(ver figura).
Estructura de la

42

El DNA (cido desoxirribonucleico) es un biopolmero no repetitivo que contiene toda la

informacin gentica celular (en ciertos virus esta funcin la tiene el RNA).
Durante la divisin celular, cada clula hija recibe una copia exacta y completa del DNA parental.
En los procariotas (bacterias, algas verde azules) hay una molcula de DNA nica que forma un solo
cromosoma, el cual tiene un peso molecular superior a 2*10 9 y constituye aproximadamente el 1%
del peso seco de la clula. En los eucariotas (levaduras, hongos, animales y plantas superiores)
generalmente existen algunos cromosomas (molculas de DNA9 los cuales, en clulas diploides, se
presentan en el ncleo en forma combinada con protenas llamadas histonas. Adems del DNA
nuclear, las clulas eucariticas contienen DNA satlite, especialmente en las mitocondrias y en los
cloroplastos, el cual es diferente del DNA nuclear. El DNA procaritico de ordinario est unido a un
pliegue o invaginacin de la membrana celular llamado mesosoma en la regin nuclear (los
procariotas no poseen un ncleo verdadero).No hay protenas asociadas con el DNA. Los
procariotas tambin pueden tener un material extracrosomal denominado plsmidos o episomas.
Todas las molculas de DNA estn formada de cuatro unidades de mononucletidos principales
unidas entre s por enlaces 3,5fosfodister para formar una cadena de polinucletido larga y sin
ramificaciones (ver figura).

43

Dos de tales cadenas, las cuales son complementarias una de la otra, se combinan para formar una
estructura de doble hlice en la que las dos cadenas permanecen juntas por la formacin de puentes
de hidrogeno entre pares de bases complementarias. As, la adenina de una cadena siempre est
unida por puentes de hidrgeno con la timidina de la segunda cadena, y la citocina se une por
puentes de hidrogeno a la guanina.
Los enlaces de hidrogeno estabilizan la molcula de doble enlace del DNA y, puesto que las bases
G-C se unen por tres de tales enlaces en comparacin con dos entre las bases A-T, mientras mayor es
la cantidad de pares de bases guanosina-citosina (G-C), la molcula de DNA es ms estable (ver
figura).

Dentro de la clula el RNA (cido ribonucleico) existe en tres formas, a saber: RNA mensajero
(mRNA), RNA de transferencia (tRNA) y RNA ribosomal (rRNA). Todas consisten en una cadena
de polirribonucletido compuesta de los cuatro ribonucletidos principales (aunque el tRNA
contiene adems algunos ribonucletidos inusuales que incluyen a los cidos pseudourudlico y
ribotimidlico). En los procariotas todos los RNAs se encuentran en el citoplasma, en tanto que en
los eucariotas el rRNA se localiza en el citoplasma (en los ribosomas) y el mRNA y tRNA se
encuentran en el ncleo, mitocondrias, cloroplastos y citoplasma.
El mRNA se sintetiza por la transcripcin enzimtica de una hebra de la molcula de DNA. Las
bases que constituyen la hebra individual de mRNA son complementarias a dicha hebra (excepto
que el uracilo reemplaza a la timina). Despus de la transcripcin, el MRNA pasa a los ribosomas
donde sirve como molde para el ordenamiento secuencial de los aminocidos durante las sntesis de
protenas. Los tripletes de nucletidos (codones9 a lo largo de la hebra de mRNA determinan un
aminocido especifico.
Los tRNAs son molculas pequeas (23000-30000 de peso molecular) que actan como portadores
de aminocidos especficos. Durante la sntesis de protenas, cada uno de los 20 aminocidos mas
comunes tiene al menos un tRNA especifico que lo conduce hasta el mRNA que se encuentra unido
44

al ribosoma. Una vez all, el tRNA transfiere el aminocido correspondiente a la cadena

polipeptdica en crecimiento.
El rRNA constituye hasta el 65% del peso de los ribosomas y se divide en tres tipos; 23 S, 16 S y 5
S, dependiendo de su capacidad para sedimentar en la centrifugacin. Durante la sntesis de
protenas, el mRNA se une al ribosoma, y un tRNA se adhiere al mRNA y transfiere su aminocido
a la cadena polipeptdica en crecimiento; el ribosoma se mueve entonces a lo largo del mRNA hasta
el codn prximo que da la informacin para el aminocido siguiente. Sin embargo, la verdadera
funcin de los diferentes tipos de rRNA se desconoce an.

2.5

Cuestionario
1. Porque una clula necesita membrana citoplasmtica? Qu propiedades se supone que
debera tener dicha membrana?
2. Cul es la funcin importante de los ribosomas en las clulas?
3. Que significa el termino Genoma? En qu se diferencia el genoma de los eucariotas con
el genoma de los procariotas?
4. Porque motivos se producen en los eucariotas los procesos de meiosis y mitosis?
5. Defina Los trminos: Quimiotrofo, Quimiolitotrofo, Fotoauttrofo, Fotohetertrofo.
6. Porque el C y el N son macronutrientes y el Co es micronutriente
7. Que son los Sideforos y para que se usan?
8. Porque el siguiente medio no puede ser considerado un medio definido: Glucosa 5 gr,
NH4Cl 1 gr, KH2PO4 1 gr, MgSO4 0,3 gr, extracto de levadura 5 gr, agua destilada 1 Lt.
9. Para necesita la clula enzimas
10. Que es un transportador de electrones. De 3 ejemplos de transportador de electrones e
indique sus formas oxidadas y reducidas
11. Por qu se denomina pptidoglicano a la capa rgida de la pared celular bacteriana?
Cules son las razones qumicas que explican la rigidez que indican la rigidez?
12. Defina los siguientes trminos: Endospora madura, Clula vegetativa y Germinacin.
13. Cunto tiempo permanecen viables las esporas en un estado de latencia y cul es la
prueba de esto?

45

Tema 3
3.1

BIOLOGIA MOLECULAR

GENERALIDADES

El trmino biologa molecular se aplica especficamente al estudio de la estructura y funcin del

conjunto de macromolculas que se encuentran en las clulas vivas.
La gentica es la disciplina que trata de los mecanismos por los cuales los caracteres se transmiten
de un organismo a otro y como se expresan. Puesto que la transmisin de la informacin biolgica
es la base de la funcin celular, la gentica es una herramienta de primera magnitud. Acoplada con la
biologa molecular permite entender los mecanismos moleculares que permiten que la clula
funcione. El estudio de la gentica desde la perspectiva molecular tambin es fundamental para
entender la variabilidad de los organismos y la evolucin de las especies.
La comprensin de cmo la informacin se transmite a travs de los sistemas biolgicos tiene
enormes aplicaciones prcticas. Por ejemplo, la gentica nos proporciona tcnicas que permiten
modificar especficamente los organismos.
Muchos de los recientes avances en agricultura, industria y medicina se basan en la gentica y la
biologa molecular. La comprensin de la transmisin biolgica en una celula no solo permite
entender el funcionamiento en el organismo normal, sino tambin como estas funciones se alteran en
el organismo enfermo. Con este conocimiento, los cientficos estn desarrollando no solo mtodos
para controlar importantes enfermedades infecciosas, sino tambin soluciones para alteraciones
metabolicas que se crean incurables.
3.2

MACROMOLECULAS E INFORMACION GENETICA

Muchas de las molculas implicadas en la transmisin gentica son macromolculas. Antes de que
conociramos su naturaleza, o incluso las etapas de dicha transmisin, estaba claro que exista una
unidad de informacin gentica denominada gen.
La mayora de los genes son entidades que codifican la estructura de un nico polipptido o
protena. Un polipeptido se compone de una serie de aminocidos unidos por un enlace peptidico.
Existen unos 20 AA diferentes presentes en las protenas, y una nica molcula de protena
normalmente tiene varios cientos de AA. El gen es el elemento de informacin que codifica la
secuencia de AA de la protena: Los genes son los almacenes de la informacin, mientras que las
protenas son las entidades funcionales.
46

En todas las clulas los genes estn compuestos de cido desoxirribonucleico (DNA). La
informacin del gen est contenida en la secuencia de bases del DNA. La informacin guardada en
el DNA codifica la secuencia de una protena, y lo hace exclusivamente a travs de una molcula
intermediaria, el cido ribonucleico (RNA). Dado que las tres clases de macromolculas, DNA,
RNA y protena, contienen la informacin biolgica en sus secuencias, frecuentemente se
denominan macromolculas que llevan informacin.
En el DNA y el RNA, la informacin est codificada en la secuencia de las bases pricas y
pirimdicas de la cadena polinucleotida. La secuencia de AA de un polipeptido esta codificada por la
secuencia de las bases pricas y pirimdicas del cido nucleico.

3.3

ETAPAS DE LA TRANSMISIN DE LA INFORMACIN

Los procesos moleculares implicados en la transmisin de la informacin gentica pueden dividirse

en tres fases:

Replicacin: La molcula de DNA que acta como el material gentico de la clula, es una
doble hlice de dos largas cadenas. Durante la replicacin el DNA se duplica produciendo
dos hlices dobles
Transcripcin: El DNA no participa directamente en la sntesis de protenas sino que lo
hace a travs de un intermediario de RNA. La transferencia de la informacin al RNA se
denomina transcripcin, y la molcula de RNA que lleva la informacin que codifica una
protena se denomina RNA mensajero (mRNA). En la mayora de los casos, para un
segmento particular del cromosoma slo se transcribe una de las cadenas del DNA (Figura de
arriba). Algunas regiones del DNA que se transcriben no codifican protenas, sino que
contienen la informacin para otros tipos de RNA, tales como RNA de transferencia (tRNA)
y RNA ribosmico (rRNA). As, debemos ampliar nuestra definicin de gen para incluir
regiones del DNA que codifican estos tipos de RNA.
Traduccin: La secuencia especfica de AA en cada protena est determinada por una
secuencia especfica de bases en el mRNA (que se transcribe a su vez a partir del DNA).
47

Existe una correspondencia lineal entre la secuencia de bases de un gen y la secuencia de AA

de un polipeptido (figura de arriba). Se necesitan tres bases del mRNA para codificar un solo
AA y cada uno de estos tripletes se denominan codn. Este cdigo gentico se traduce a
protena por medio de la maquinaria para sntesis de protenas. Este sistema consta de
ribosomas (compuestos a su vez de protenas y rRNA), tRNA y varias enzimas.
En el proceso de replicacin, transcripcin y traduccin, la informacin en la secuencia del cido
nucleico puede codificar bien la secuencia de otro cido nucleico o de una protena. Sin embargo, la
transferencia de la informacin desde el cido nucleico a la protena es unidireccional; la secuencia
de la protena no indica la secuencia del acido nucleico. Esta transferencia unidireccional de
informacin desde el cido nucleico a la protena se conoce como dogma central de la biologa,
porque es compartida por todas las formas de vida de nuestro planeta.
3.4

ESTRUCTURA DEL DNA

La informacin gentica para todos los procesos celulares se guarda en el DNA en forma de
secuencia de bases de la cadena polinucleotdica. En el DNA slo hay 4 bases diferentes. Adenina
(A), guanina (G), citosina (C) y timina (T).
El esqueleto de la cadena de DNA est formado por unidades de fosfato y del azcar desoxirribosa
alternando entre s. Unida a cada azcar existe una de las bases mencionadas. Debe recordarse el
sistema de numeracin para las posiciones del azcar y de la base; el fosfato que conecta dos
azucares va desde el carbono 3de un azcar al carbono 5del azcar adyacente. En un extremo de la
molcula del DNA, el azcar tiene un fosfato en el hidroxilo 5, mientras que en el otro el azcar
tiene un hidroxilo libre en la posicin 3.

En los cromosomas de todos los organismos celulares, el DNA existe en forma de dos cadenas
polinucleotdicas cuya secuencia de bases es complementaria. La complementariedad de las bases
surge de la especificidad del apareamiento de las bases pricas y pirimdicas: la adenina se aparea
siempre con la timina, y la guanina con la citosina.

48

Las dos cadenas de la doble hlice resultante estn ordenadas de manera antiparalela. Esto significa
que las dos cadenas estn orientadas cabeza-pie. En la figura de abajo, la cadena de la izquierda
est ordenada en la direccin 5a 3de arriba abajo, mientras que la otra se ordena en la direccin 5a
3de abajo arriba. Las dos cadenas estn enrolladas entre s formando una doble hlice. En esta
hlice, el DNA forma dos surcos distintos, el mayor y el menor.

Estructura del DNA, naturaleza complementaria y

antiparalela del DNA. Ntese que uno de los extremos de
las cadenas termina en un grupo 5-fosfato, mientras que el
otro extremo es un 3-hidroxilo

De las mltiples protenas que interaccionan especficamente con el DNA, la mayora interaccionan
principalmente con el surco mayor, donde existe una cantidad de espacio considerable. Dada la
regularidad de la doble hlice, algunos de los tomos de las bases estn siempre expuestos en el
surco mayor.
El tamao de la molcula de DNA puede expresarse en trminos de su peso molecular, pero dado
que cada nucletido tiene peso molecular de 330 y que, por otra parte, las molculas de DNA tienen
muchos nucletidos, el peso molecular aumenta rpidamente. (El cido nucleico, incluso el de los
virus pequeos, puede tener un peso molecular del orden de millones y el DNA de las clulas de
49

miles de millones). Una manera ms conveniente de expresar los tamaos de las molculas de DNA
es en trminos del nmero de miles de bases, o de pares de bases, por molcula. As, una molcula
de DNA con 1000 bases contiene una kilobase de DNA. Si la molcula de DNA es una doble hlice,
entonces se habla de kilopares de bases. As, una doble hlice de 5000 pares de base tendra el
tamao de 5 kilopares de bases.
La bacteria Escherichia coli tiene 4600 kilopares de bases de DNA en su cromosoma. Dada la
inmensa cantidad de informacin se secuencias genmicas que se est acumulando, es
frecuentemente til hablar de millones de paras de bases o megapares de bases. El genoma de E. coli
tiene 4.6 megapares de bases.

3.5

LA REPLICACIN DEL DNA ES SEMICONSERVATIVA

Cuando una clula se divide en dos, cada una de las clulas hijas contiene el complemento total de
informacin gentica (excepto en las divisiones que originan vulos y espermatozoides). El DNA
debe replicarse en forma precisa; lo cual se logra mediante la separacin de las dos cadenas, seguida
por la asociacin de los nucletidos de las hebras sencillas con las bases complementarias mediante
puentes de hidrogeno (ver figura).

Mediante la replicacin semiconservativa del DNA se generan hlices hijas idnticas doble. Esto
significa la asociacin de la guanina con la citosina y la de la adenina con la timina. A continuacin
los nucletidos que se han asociado con los de la cadena sencilla, los primeros se unen entre s. La
sntesis del DNA nuevo la realizan las enzimas conocidas como DNA polimerasas. El DNA se
sintetiza en forma continua sobre una cadena de DNA (cadena 3-5) conocida como cadena
principal, empero, la cadena 3-5est mal orientada para la sntesis continua mediante la enzima
50

DNA polimerasa. En esta cadena el DNA, la sntesis ocurre en fragmentos de aproximadamente 100
nucletidos, llamados fragmentos de Okasaki. (Ver figura).

La replicacin del DNA significa, por tanto, la asociacin de una cadena original con una nueva y se
dice es semiconservativa. Hay otras enzimas que participan en la sntesis del DNA. Entre estas estn
el cido ribonucleico (RNA), polimerasas y nucleasas, ya que las molculas de cido ribonucleico
actan como iniciadoras de la replicacin del DNA, y la DNA ligasa que sirve para unir entre s
fragmentos de Okasaki adyacentes. Hay otras enzimas encargadas de relajar el enrollamiento del
DNA para permitir la replicacin en las horquillas de replicacin. El proceso de tal actividad es ms
complicado para los eucariotas debido a la estructura cromosmica ms compleja.
En E. coli, la replicacin del DNA comienza en un sitio especifico del cromosoma llamado Ori C.,
este es un tramo de 440 pares de bases (pb) cuya funcin normal da por resultado la replicacin del
DNA lejos de este origen en ambas direcciones. El anlisis de otros sitios de iniciacin de
replicacin de DNA procaritico han revelado regiones conservadas repetidas de 12 pb con zonas
espaciadoras de 16 pb. Probablemente estas permiten la unin de protenas al DNA en las secuencias
conservadas y la iniciacin de la replicacin del DNA.
Aunque la replicacin del DNA en los eucariotas se comprende menos, se han hecho algunos
adelantos mediante el uso de la levadura Saccharomyces cerevisiae como sistema modelo. A partir
de este organismos se han aislado secuencias que permiten replicar pequeas molculas circulares
de DNA llamadas plsmidos. Las secuencias se denominan Autonomously Replicating Sequences,
ARS (secuencias de replicacin autnoma) y es posible que funcionen de forma c=similar a Ori C.
3.6

ACIDO RIBONUCLEICO (RNA)

La expresin de la informacin gentica contenida en el DNA es transmitida por una molcula de

RNA mensajero. Esta transfiere la informacin del DNA al sitio donde se efecta la sntesis de
protenas, los ribosomas. La diferencia entre el RNA y el DNA es que en el RNA la base uridina est
en lugar de la timina, el azcar ribosa reemplaza a la desoxirribosa y, por lo general, es una molcula
de una sola hebra, aunque sus bases se pueden asociar mediante puentes de hidrogeno para dar
origen a regiones internas de doble hebra.
3.6.1 Transcripcin del DNA
El RNA mensajero que transfiere la informacin gentica es transcrito del DNA mediante una
enzima RNA polimerasa dependiente del DNA. Para que esto ocurra las cadenas de DNA deben
separarse, slo una cadena se usa como molde con las bases de RNA unidas por puentes de
51

hidrogeno con el DNA. La RNA polimerasa dependiente del DNA, cataliza la formacin de
fosfodiester entre las unidades nucleotdicas que parten del extremo 5del DNA (ver figura). E. coli
posee slo una de estas polimerasas, pero los eucariotas tienen por lo menos cuatro clases, que
posiblemente reconocen secuencias distintas de unin o iniciacin.

La RNA polimerasa de E. coli, que ha sido objeto de estudios detallados, es un tetrmero (cuatro
subunidades). Se necesita un polipptido adicional denominado sigma para la iniciacin exacta;
algunas veces, se requiere de un factor, rho, para determinar la transcripcin.
3.6.2 Tipos de RNA
El RNA mensajero (mRNA) es slo uno de varios tipos de molculas de RNA que se encuentran en
la clula. EL tamao del RNA vara entre procariotas y eucariotas. En los primeros, a menudo se
codifican varios mensajes en una sola molcula de mRNA, pero en los eucariotas los transcritos
primarios, los m RNA, a menudo son mucho ms grandes que en mRNA maduro final, el cual es el
resultado del proceso del mRNA. Una caracterstica importante del mRNA es que solo contiene la
informacin para protenas especficas, sino tambin otras secuencias laterales que intervienen en el
mecanismo de la sntesis de protenas.
El RNA ribosomal (rRNA) es el componente estructural principal de los ribosomas, que son el sitio
de la sntesis de protenas. En los procariotas hay tres molculas distintas de rRNA, en tanto que en
los eucariotas hay cuatros. Hay mltiples copias de las especies de rRNA en el DNA, que junto con
las protenas conforman las subunidades grandes y pequeas de los ribosomas.
El RNA de transferencia (tRNA), es el ms pequeo de los RNA, con aproximadamente 80
nucletidos. En una clula existen alrededor de 40 a 60 especies diferentes de tRNA. Este se
distingue de los otros RNA por contener frecuentemente nucletidos poco comunes.
Los tRNA tienen similitudes estructurales considerables; la estructura secundaria incluye
configuraciones asociadas internas. Cada tRNA contiene una secuencia caracterstica conocida como
anticodn, situada en el extremo de un lazo no asociado en un extremo de la molcula. El anticodn
se asocia con ciertas secuencias del mRNA. En el extremo 3del tRNA esta una secuencia CCA, a la
cual se pueden unir aminocidos especficos. Las molculas de tRNA portadoras de aminocido,
junto con el mensaje transcrito en el mRNA, permiten que la informacin gentica se traduzca en los
ribosomas en una protena.
3.7

EL CODIGO GENETICO

En la descripcin del material hereditario, su replicacin y transcripcin y el sitio de la traduccin,

no se hizo mencin de la naturaleza del cdigo gentico en s. La unidad funcional del DNA es el
52

gen, y en este contexto en cdigo gentico de un gen individual dirige la sntesis de una protena
especfica mediante la transcripcin hacia el mRNA, seguida por la traduccin hacia una protena en
los ribosomas. Los genes tambin llevan la informacin para las molculas de RNA.
El cdigo en s, se determina por una secuencia de tres nucletidos (un triplete) para cada
aminocido. Como esto produce 64 combinaciones posibles y hay 20 aminocidos, entonces algunos
aminocidos son codificados por ms de un triplete.
El triplete que da la clave a un aminocido, como en el mRNA, se conoce como codn. Las posibles
combinaciones del cdigo gentico se muestran en la siguiente tabla para los codones de los 20
aminocidos presentes en las protenas. Adems se usan tres codones como seales de detencin
durante la traduccin, los cuales se denominan codones sin sentido.

Los codones son llevados por el mRNA y la informacin complementaria, o anticodn, se encuentra
en la hebra transcrita del DNA y tambin en el tRNA.
Los codones indicados en la tabla muestran que las dos primeras bases tienen el efecto mayor al
especificar un aminocido en particular, pero que la tercera base puede variar a menudo sin afectar
el sentido del codn. Por ejemplo, tanto el codn UUU como el UUC, conducen a la incorporacin
del aminocido fenilamina.
El codn AUG para la metionina casi siempre se usa como codn de iniciacin para que el primer
aminocido sea incorporado en un polipptido con una sucesin de tripletes que especifica a los
aminocidos hasta que se llegue a un codn sin sentido y se termina la traduccin.
3.7.1 Traduccin de la informacin gentica
53

El codn de iniciacin de la traduccin es AUG, el cual es el nico codn para la metionina, pero
hay dos molculas de tRNA que contienen el anticodn para AUB (es decir, CAU) Uno de estos se
usa siempre para la iniciacin en los procariotas (tRNAmmet), el cual lleva una N-formilmetionina:
para insertar la metionina en posiciones internas en los polipptido se usa un tRNA diferente
(tRNAmmet).
En los eucariotas tambin existen dos molculas de tRNA para la metionina, pero la forma de
iniciacin no est formulada. En general, el aminocido N-terminal de las protenas maduras no es
metionina, lo cual indica que este residuo es separado de la protena despus de la traduccin.
El proceso de iniciacin incluye la unin de un tRNA de iniciacin para la metionina en el mRNA,
junto con la presencia de cofactores (ver figura). A continuacin el complejo se une con la
subunidad pequea del ribosoma mediante la asociacin de las bases en la regin 5del mRNA y el
rRNA 18S (en eucariotas) o 16S (en procariotas).

54

3.8

MUTACION

Una vez que se ha descrito el material hereditario, su cdigo y su traduccin, es ms fcil entender
la naturaleza de las mutaciones. Estas se originan debido a las perturbaciones en el cdigo gentico
y ocasionan cambios en la regulacin o funcionamiento de las protenas. Por ejemplo, un tipo de
mutacin simple se origina cuando se altera la secuencia de nucletidos, ocasionando un cambio en
el sentido de un codn. Hay muchas formas de clasificar la mutacin, y estas ilustran los
mecanismos y efectos de las mutaciones. El estudio de la mutacin y el marco conceptual para
comprender el proceso de la mutagnesis se basan principalmente en el estudio de los procariotas y
sus virus. Los eucariotas inferiores, en particular Saccharomyces cerevisiae, tambin ha aportado
evidencias moleculares comparativas que muestran algunas diferencias entre eucariotas y
procariotas. Por ejemplo, diferentes sistemas celulares inician mecanismos de reparacin del DNA
que mantienen al DNA, si este se daa. Son tiles dos conceptos acerca del origen de las
mutaciones, que son: que las mutaciones pueden surgir por mala replicacin del DNA, es decir, por
errores en la replicacin del DNA, o bien, por una mala reparacin, es decir, por errores durante la
reparacin del DNA daado.
Parece ser que la replicacin del DNA es ms discriminatoria en los eucariotas, como tambin la
reparacin del dao del DNA inducido por agentes mutagnicos. Por lo tanto, existe una tendencia
de fagos a procariotas y a eucariotas inferiores hacia la presencia de reparacin errnea como fuente
de mutacin.
3.8.1 Mutaciones cromosmicas
Las mutaciones se pueden clasificar como mutaciones puntuales o mutaciones cromosmicas. Las
mutaciones cromosmicas son cambios bruscos ya sean en el numero o estructura de los
cromosomas, en tanto que las mutaciones puntuales son cambios pequeos a nivel de los
nucletidos. El dao al DNA causado por agentes mutagnicos puede ocasionar errores en la
transmisin hereditaria de cromosomas completos y, por lo tanto, puede causar la prdida o ganancia
de estos. Tambin puede suceder que los cromosomas se rompan, y estos tengan afinidad por otros
cromosomas rotos dando lugar a aberraciones cromosmicas. Estas pueden ocasionar la
transferencia de un cromosoma a otro (translocacin); la perdida de material gentico (delecin); o
bien, la inversin de una porcin del cromosoma si ocurren dos rupturas en el mismo cromosoma.
3.8.2 Mutacin por sustitucin de bases
Los cambios en la secuencia de nucletidos pueden alterar el sentido del cdigo gentico dando
como resultado un aminocido diferente en un polipptido o un polipptido truncado si el cambio es
de un codn con sentido a uno sin sentido. Los efectos de tal mutacin, es decir, el fenotipo,
dependen del lugar de la mutacin. Es evidente que una mutacin sin sentido que produce una
55

protena truncada, causara la ausencia de la actividad protenica particular, a menos que la mutacin
tenga lugar cerca del extremo normal del polipptido. Las mutaciones sin sentido que producen un
cambio en un aminocido de un polipptido tendrn un efecto que depende de la posicin del
aminocido en la protena. Es claro que los cambios en el lugar activo o en una posicin que afecta
la estructura de la protena tendrn mayor efecto. Algunos cambios causaran una disminucin en la
actividad de la protena dando como resultado una mutacin rezumante. Sin embargo, algunas
mutaciones por substitucin de bases no producen un cambio en el sentido debido a los codones
mltiples de algunos aminocidos. Es obvio que estas no tienen efecto sobre el producto protenico.
3.8.3 Mutacin por cambio en el marco de lectura
Estas mutaciones son el resultado de inserciones o deleciones de bases. Estas alteran el marco de
lectura del DNA y alteran la secuencia de codones posterior. El efecto de la mutacin por cambio en
el marco de lectura es dar una protena no funcional, por ejemplo (ver figura)

Estas mutaciones pueden ocurrir, por supuesto, con mltiplos de una base. Los mltiplos de tres
bases deben ser aadidos o eliminados, as el marco de lectura no se altera, pero los aminocidos se
aaden o eliminan en el polipptido final.
3.8.4 Mutacin espontanea e inducida
La mutacin puede surgir ya sea espontneamente o debido a la induccin con un agente
mutagnico. La mutacin espontanea puede ocurrir debido a la radiacin de fondo, errores en la
replicacin del DNA o inclusive por modificaciones tautomricas de nucletidos que cambian
propiedades de asociacin de las bases. La mutacin inducida es el resultad de un tratamiento
mutagnico, por lo general, con una agente inductor de daos en el DNA.
Los daos al DNA pueden ser de dos tipos generales. Los cambios sutiles en el DNA, como la
alquilacin de una base de DNA, pueden ocasionar la asociacin equivocada de la base en la
replicacin del DNA. En este caso la posicin de la alquilacin es importante y la posicin o6 de la
guanina es la lesin ms importante que da como resultado mutaciones GC a AT. Esto demuestra la
especificidad de las alteraciones mutacionales inducidas por algunos mutgenos. Otros, como la
acridina, inducen mutaciones de corrimiento de marco de lectura por lo menos en sistemas
procariticos.
Algunos daos al DNA producen formas de lesiones del DNA que son no codificantes y, por tanto,
interrumpen la sntesis de DNA. Este dao es inducido por la luz ultravioleta que forma enlaces
cruzados entre timidinas adyacentes. Estas lesiones voluminosas interrumpen la sntesis del DNA y
ocasionan espacios en el DNA. Para ambos tipos de dao existen mecanismos de reparacin que
pueden llevar al DNA a su forma original, pero la reparacin del DNA tambin puede provocar
mutaciones si se cometen errores.
RESUMEN
56

3.9

El DNA es el material hereditario y est constituido por una hlice de hebra doble.
Las protenas estn asociadas al DNA el cual se enrolla sobre s mismo.
El cdigo gentico se determina a partir de secuencias de tres nucletidos, con una seal de
iniciacin y tres seales de terminacin de la trascripcin.
El cdigo gentico se transfiere mediante el mRNA y se traduce en los ribosomas en una
protena. Los tripletes de nucletidos que codifican para los aminocidos en el mRNA se
llaman codones, los cuales se asocian con los anticodones en el tRNA que lleva aminocidos
especficos.
Las mutaciones se producen como resultado de alteraciones en el cdigo gentico (o en el
acceso a l). Estas pueden ser cambios globales en los cromosomas, que pueden verse al
microscopio, o bien, cambios

INGENIERIA GENETICA

3.9.1 Metodologa
Las tcnicas de la ingeniera gentica, tambin conocidas como tecnologa del DNA recombinante,
han evolucionado las ciencias biolgicas. Dicho en forma simple, con estas tcnicas se logra la
captacin de DNA de una fuente conocida y su incorporacin a un vector para mover y amplificar
esta pieza de DNA para su anlisis. Los vectores pueden ser estructuras basadas en plsmidos, o
bien, en virus. Los plsmidos son molculas pequeas de DNA circular que se encuentran
comnmente en bacterias. Las clulas que captan estas molculas se conocen como clulas
transformadas.
Se emplean diferentes mtodos para aislar genes de inters de organismos procariticos, eucariticos
inferiores, plantas y animales. El DNA se puede aislar por clonacin, es decir, la amplificacin de
secuencias de DNA idnticas, mediante varios mtodos que producen fragmentos de DNA
adecuados para su incorporacin en un vector. stos incluyen el corte del DNA en sitios especficos
mediante enzimas conocidas como enzimas de restriccin, la ruptura fsica de molculas grandes de
DNA por esfuerzo de corte, la sntesis de DNA complementario (cDNA) a un mRNA mediante el
uso de la enzima transcriptasa reversa, o bien, al sntesis qumica del DNA.
3.9.2 Endonucleasas de restriccin
Estas enzimas sirven a la bacteria en la que aparecen, como proteccin contra DNA extrao. Las
enzimas cortan el DNA extrao desde el exterior de la hlice, pero no digieren el DNA husped
debido a los patrones de metilacin caracterstico del DNA. Hay muchas enzimas de restriccin
conocidas, de las cuales muchas de ellas estn disponibles en forma comercial; algunas de ellas
reconocen secuencia similares como su sitio de actividad. stas se conocen como isoquizmeros.
Las enzimas de restriccin se nombran de acuerdo con las especies de donde provienen, con
nmeros romanos para distinguir enzimas diferentes que provengan del mismo organismo. Por
ejemplo, la enzima Hapa I proviene de Haemophilus parainfluenzae.
La enzimas de restriccin reconocen secuencias de DNA con un eje de simetra repetido llamadas
secuencias palindrmicas (ver figura).

57

En estas secuencias algunas enzimas de restriccin cortan a la doble hlice a lo largo del eje de
simetra y otras la cortan de manera escalonada. En el primer caso se dice que las enzimas producen
extremos romos y en el segundo caso se dice que los extremos son cohesivos. La formacin de
extremos cohesivos es una propiedad muy til, ya que el DNA obtenido de una fuente distinta, pero
cortada de manera similar, se puede asociar mediante puentes de hidrogeno entre bases
complementarias. Una DNA ligasa (generalmente ordinaria del fago T4) puede unir entonces las
molculas para producir DNA hbrido o quimrico.
De esta forma es posible incorporar fragmentos de DNA en vectores e introducirlos en clulas
mediante el proceso conocido como transformacin. (ver figura insercin de DNA).
Las secuencias de cuatro o seis bases reconocidas por enzimas de restriccin se presentarn en un
nmero limitado de sitios de todo el DNA de un organismo (DNA genmico). El corte con enzimas
de restriccin dar como resultado longitudes adecuadas de DNA para clonacin, aunque debe
tenerse cuidado en caso de que el gen de inters tenga un sitio de restriccin para la enzima dentro
de l. Esto se puede superar solo mediante la digestin parcial de la enzima, de modo que, en
promedio, el gen de inters quede intacto. La frecuencia probable de una secuencia particular de
hexanucletidos es aproximadamente cada 4096 pares de bases y pares de bases y para una enzima
que reconoce cuatro bases, cada 256 pares de bases. Por lo tanto, es probable, ya que un gen tpico
de procariotas tiene d 1 a 2 pares de kilobases (1000 bases), que por lo menos algunas
endonucleasas de restriccin que reconocen 6 pares de bases, no corten tal secuencia. En los
eucariotas los genes pueden ser ms grandes y contener secuencias interpuestas llamadas intrones,
que pueden causar complicaciones.

58

3.9.3 Aislamiento de cDNA

Se puede obtener genes determinados mediante la elaboracin de DNA complementario a un RNA
mensajero (mRNA) particular. Este enfoque se utiliza ampliamente en estudios con plantas y
mamferos. El mRNA se puede aislar fcilmente debido a su extremo poliadenilado de hasta 200
nucletidos de longitud. El RNA crudo se pasa a travs de una columna que contiene secuencias de
poli U o poli T unidas a un soporte solido, que une a las secuencias de poli A del mRNA. As, la
transcriptasa reversa puede usarse para sintetizar una molcula de DNA de una sola hebra la cual se
puede convertir posteriormente a una hebra doble mediante una DNA polimerasa (ver figura). El
cDNA se puede incorporar en vectores para su amplificacin y anlisis.

59

En ciertos casos los anticuerpos monoclonales se pueden usar para aislar un mRNA slo a partir de
los componentes celulares. Los anticuerpos monoclonales se obtienen, se inyectan a un ratn o a un
conejo con la protena para la que se requiere el cDNA.
El animal se sacrifica posteriormente para obtener las clulas del bazo, las cuales se fusionan con
clulas de mieloma. Las clulas denominadas hibridomas producen un anticuerpo muy especfico
para la protena blanco (ver figura de abajo).
El anticuerpo se utiliza entonces para precipitar mRNA para la protena de inters mientras se
produce en el ribosoma. As, el mRNA se separa del anticuerpo como ya se describi, y se obtiene
una copia de cDNA. Puesto que los genes de los eucariotas superiores a menudo contienen
secuencias interpuestas no codificadoras llamadas intrones, la produccin de cDNA es crtica en la
representacin de secuencias codificadoras cuando es necesaria la expresin en los organismos
inferiores. Lo anterior evita los problemas asociados con el reconocimiento y proceso de secuencias
no codificadoras.

3.9.4 Mapeo con la nucleasa S1

El anlisis de la enzima de restriccin permite indicar la posicin de los genes al cortarlos, o bien,
sus secuencias laterales efectuaran su expresin cuando se analice la formacin de producto gnico
en los fragmentos. Las secuencias laterales intervienen en funciones tales como regulacin, la unin
de la RNA polimerasa y la unin ribosmica.
La nucleasa S1 digiere nicamente DNA o RNA de una sola hebra. El mapeo con la nucleasa S1 es
una herramienta muy til para ubicar el sitio de transcripcin en el DNA.
60

Mediante la hibridacin de una RNA transcriptasa a DNA de una sola hebra, se produce un hibrido
resistente a la digestin por la nucleasa S1. As, es posible desnaturalizar el hibrido DNA-RNA y
analizar y separa el DNA.
3.9.5 Electroforesis en gel
En forma rutinaria, las molculas de DNA se analizan mediante electroforesis en gel. El gel es una
red compleja de molculas polimricas y la distancia que el DNA migra a travs del gel refleja su
tamao, el cual se puede estimar usando fragmentos de DNA marcador como referencia. La agarosa
se usa en el anlisis de molculas de varios cientos hasta 20000 pares de bases, en tanto que la
poliacrilamina se usa para fragmentos de DNA ms pequeos. El DNA se observa usando luz UV
despus de teirlo con bromuro de etidio (ver figura)

Electroforesis de DNA en geles de agarosa. La flecha indica la

direccin de la migracin. Las bandas de DNA se observan al
sumergir el gel en una solucin de bromuro de etidio (el cual
se intercala entre las bases apareadas formando complejos
con el DNA) y fotografiar la fluorescencia anaranjada que
resulta de la exposicin del gel a luz ultravioleta. A) DNA del
fago restringido con Eco RI y analizado en un gel de agarosa
al 1%. B) Forma circular abierta (OC) y superenrollada (SC) de
un plsmido de 6.4 pares de kb. Observe que los
superarrollados compactos migran considerablemente ms
rpido que los crculos abiertos. C) DNA de un plsmido lineal
producido mediante tratamiento de la preparacin mostrada
tratado con Eco RI como el carril B. El plsmido tiene un solo
en el carril B con Eco RI para la cual hay un sitio nico. Bajo

3.9.6 Hibridacin de cidos nucleicos

61

La homologa entre molculas de cidos nucleicos se puede determinar mediante la unin

irreversible de DNA o del RNA a un material que generalmente consiste en filtros de nitrocelulosa,
seguida por la hibridacin usando sondas de DNA o RNA marcadas radiactivamente.
La reasociacin de molculas complementarias se puede detectar por autorradiografia. La
transferencia southern describe el proceso de hibridacin de una sonda de DNA de cadena sencilla
con DNA, en tanto que la transferencia northern hibrida al DNA de una sola hebra.
Por otra parte, la tcnica complementara con el RNA que ha sido transferido al papel de
nitrocelulosa o otras membranas (ver figura)

Transferencia Southern. El DNA se fragmenta con una o varias

enzimas de restriccin. Los fragmentos se separan por tamao
usando electroforesis en gel de agarosa. El gel se coloca entonces
sobre una pieza de nitrocelulosa y se hace pasar un flujo de
solucin amortiguadora a travs del gel que est sobre la
nitrocelulosa. Esto hace que los fragmentos de DNA salgan del gel
y se unan al filtro, de modo que en l se obtiene una rplica de los
fragmentos de DNA separados del gel. EL filtro puede hibridarse
con una sonda marcada adecuadamente y los fragmentos de DNA

62

3.9.7 Determinacin de secuencias de bases

La secuencia de bases del DNA se puede determinar usando uno de dos mtodos. En uno de ellos,
creado por Maxam y Gilbert, se necesita el rompimiento de la hebra en bases especficas, con lo que
se obtiene molculas de tamao caracterstico. El segundo mtodo, ms usado requiere la sntesis de
DNA en presencia de nucletidos, pero con la adicin de un nucletido anlogo que interrumpe la
sntesis (un trifosfato de di-desoxinuclesido). Ambos mtodos utilizan una cantidad limitante de
ruptura de DNA o reactivo de terminacin, por lo que la frecuencia de estos eventos es aleatoria y
ocurre en cada sitio disponible en el DNA. Las molculas de tamao diferente son separadas por
electroforesis en gel de poliacrilamida y se observan mediante la autorradiografia de DNA marcado
radiactivamente.
3.9.8 Vectores para la transferencia de DNA clonado
Los fragmentos de DNA de inters se manipulan en pequeas molculas circulares de DNA
llamadas plsmidos o en virus. La mayor parte de las manipulaciones del DNA requieren la bacteria
E. coli, para la transferencia hacia otros organismos husped despus de la amplificacin y el
anlisis.
Los plsmidos son molculas de DNA de doble hebra que contienen la informacin de un origen de
replicacin y varias protenas. En las bacterias estas protenas a menudo estn asociadas con la
resistencia, por ejemplo, a los antibiticos. En este caso, los plsmidos llevan la informacin de
protenas que rompen el antibitico. Los plsmidos se aslan y modifican para su uso en la
experimentacin con DNA. Un ejemplo de un plsmido de uso comn es el pBR322 (ver figura)

La estructura del pBR322 muestra los sitios de ruptura nicos. Los

nmeros corresponden a la coordenada de la base que
corresponde al nucletido 5de cada secuencia de reconocimiento.
Las flechas delgadas dentro del crculo indican la direccin de la
transcripcin de los genes Ap R y TcR. Las flechas gruesas indican la
direccin de la replicacin del DNA.

63

El plsmido consta de 4362 pares de bases y lleva genes resistentes a la ampicilina y la tetraciclina.
Su mapa de restriccin est perfectamente caracterizado con un sitio para la enzima Bam HI en el
gen resistente a la tetraciclina y un sitio Pst I en el gen existente a la ampicilina. El DNA
recombinante se puede preparar mediante la ruptura de uno de estos dos sitios de restriccin. Lo
anterior produce extremos cohesivos y se puede asociar, mediante puentes de hidrogeno, un
fragmento de DNA de otra fuente obtenido con la misma enzima. Por ltimo, el DNA es unido
covalentemente por medio de la enzima DNA ligasa.
Si el DNA del plsmido (pBR322) y el de la fuente se cortan con Bam HI y se ligan entonces esto
inactiva al gen de resistencia la tetraciclina, y la introduccin del plsmido recombinante E coli da
lugar a que la bacteria sea sensible a la tetraciclina y resistente a la ampicilina. Las bacterias que no
hayan incorporado el plsmido se eliminan exponindolas a ampicilina; entre las colonias resistentes
a este antibitico, aquellas que son resistentes a la tetraciclina contienen insertos de DNA.
Los plsmidos que contienen genes de inters tendran que ser aislados de insertos obtenidos del
DNA celular total o de cDNA obtenido a partir de mRNA. Estos pueden determinarse si se dispone
de una sonda para el gen de inters al realizar la hibridacin de la colonia. El DNA de colonias
individuales se hibrida en filtros de nitrocelulosa. O tambin, es posible seleccionar un plsmido si
se puede detectar su protena caracterstica, por ejemplo, al rescatar una bacteria mutante por medio
del DNA extrao que substituye a una enzima. Este tipo de seleccin depende de la expresin de los
genes en husped extrao, la cual no siempre se efecta, especialmente cuando se trata de genes
eucariticos
Incorporados a bacterias. Esto se debe a que los mecanismos de expresin difieren, y tambin a que
los genes eucariticos pueden contener secuencias interpuestas denominadasintrones.
3.9.9 Bacterifagos
Los bacterifagos (fagos) son virus bacterianos que se usan como vectores. Ellos infectan capas
bacterianas y presentan algunas ventajas sobre los plsmidos. La caracterstica principal es que
pueden contener fragmentos grandes de DNA recombinante, lo cual reduce el nmero de aislados
necesarios para representar a los genes de los eucariotas superiores.
El fago , como sus derivados, se usa mucho, y hasta un tercio de su DNA se puede reemplazar con
DNA extrao. El DNA circular de una sola hebra, el cual se puede obtener del fago M13, y sus
derivados, tambin se usan frecuentemente en el mtodo didesoxi (Sanger) para el anlisis de la
secuencia de DNA.
En el fago hay secuencias especificas de DNA denominadas sitios cos que permiten el
empaquetamiento del DNA. Dichos sitios se han clonado en plsmidos para producir csmidos.
Estos vectores contienen diferentes sitios de restriccin y marcadores de resistencia a antibiticos.
Los csmidos pueden llevar fragmentos de DNA grandes de 30 a 45 kilobases cuando el DNA est
empaquetado en forma similar al DNA del fago . Los csmidos contienen el potencial para llevar
molculas de DNA grandes.
3.9.10 Virus
64

Los virus eucariticos se usan como vectores de clonacin, este es el caso del virus SV40 usado con
algunas clulas de mamferos.
3.911 Sistemas husped para DNA recombinante
Las manipulaciones de DNA recombinante se efectan en bacterias (E. coli), pero en ocasiones los
gens pueden ser transferidos de nuevo a otros huspedes. En algunos casos, se han creado vectores
de va colateral que pueden funcionar en dos tipos de husped. Un ejemplo se encuentra en la
levadura Saccharomyces cerevisiae, en el cual una parte del plsmido pBR322 y otra parte del
plsmido denominado 2m (de la levadura), se entrelaza con un gen de levaduras. Esto puede
funcionar en E. coli con la seleccin de bacterias que llevan plsmidos en base a la resistencia a los
antibiticos y en las levaduras por la presencia de genes, para los cuales la clula de levadura
husped es defectuosa. Esto permite que las clulas de levadura que llevan plsmido sean
seleccionadas, ya que ste deja que ellas crezcan.
Existen plsmidos vectores para otras bacterias y levaduras, as como para algas, plantas y clulas de
mamfero. Estos vectores son de importancia prctica, ya que muchos organismos proporcionan
caractersticas novedosas que se optimizan mejor in situ, en vez de tratar de llevarlas a un sistema
extrao (heterlogo). Otra caracterstica de E. coli, es que no se utiliza en ninguna fermentacin
industrial tradicional. Las bacterias que se acostumbra usar son: Bacillus sp, para la produccin de
enzimas, actinomicetos para la produccin de antibiticos o corineformes para la obtencin de
aminocidos.
Existen sistemas de vectores para Bacillus subtilis, que incluyen vectores de va colateral E. coli-B
subtilis y otros semejantes para Streptomyces. El inters en las ltimas especies se debe a que con
ellas se produce mayor variedad de antibiticos. Se espera mejorar los rendimientos de estos
antibiticos y modificarlos. Las especies de Pseudomonas tambin son recomendables como
huspedes para los plsmidos recombinantes. Estos organismos son de inters debido a su capacidad
para degradar muchos contaminantes de la atmosfera.
3.9.12 Huspedes eucariticos
Ha surgido gran inters en cuanto a los sistemas de gran clonacin de levaduras, tanto para la
produccin de compuestos de importancia comercial como para el mejoramiento de la utilizacin de
substratos. Las tcnicas tambin han demostrado ser muy valiosas en el uso de levadura como un
sistema modelo para el anlisis de clulas eucariticas. En cuanto a la aplicacin prctica, se ha
puesto mucho inters en el uso de la levadura como husped para la produccin de compuestos
valiosos por medio de la ingeniera gentica, debido a la experiencia acumulada que existe para la
fermentacin de levaduras.
Se han obtenido varios tipos de vectores para levaduras, los cuales tambin se replican con E. coli
(ver figura).

65

Cuatro plsmidos de levaduras. Un plsmido integrante contiene un marcador que las levaduras eligen
pero ningn origen de la replicacin para ellas. Estos plsmidos sern estables solamente si se integran
en los cromosomas de las levaduras. Un plsmido episomal contienen un marcador elegible para las
levaduras y un segmento de DNA del circulo 2m. El DNA de este crculo contiene el origen de la
replicacin y tambin los genes rep, los cuales mantienen estables al plsmido extracromosmico a un
nmero de copias relativamente bajo. Un plsmido replicante contiene un segmento de DNA (la
secuencia ARS) que le permite replicarse de manera autnoma en clulas de levaduras; sin embargo, las
secuencias ARS que contienen plsmidos no son estables, ya que no existe un mecanismo para mantener
tales plsmidos extracromosmicos a alto nmero de copias durante la mitosis. Su estabilidad se logra
al aadir
una secuencia
un segmento
de uno
de los
levadura
se unen ala
Las
manipulaciones
delCEN,
DNA
se hacen de
en DNA
E. coli,
donde
lacentrmeros
seleccin sedebasa
en laque
resistencia

antibiticos. Los plsmidos tienen sitios diana nicos para varias enzimas de restriccin, as como
marcadores elegibles para las levaduras, los cuales pueden rescatar por complementacin clulas
huspedes mutantes.
Los plsmidos episomales de levaduras (YEp), contienen una parte del plsmido 2m de la levadura
unida al plsmido bacteriano y al marcador elegible para la levadura. En una clula hay
aproximadamente 50 a 100 copias del plsmido 2m; los vectores hbridos tambin estn presentes
como plsmidos en copias mltiples que son mantenidos bajo seleccin. Los vectores de este tipo
tienen una alta diferencia de transformacin.
Tambin se han obtenido los plsmidos constitutivos de las levaduras (YIp), los cuales carecen de
secuencias del plsmido 2m pero contienen secuencias para el rescate de mutantes, as como para
la seleccin y replicacin en E. coli. Debido a que no tienen un origen de replicacin transforman las
clulas de levadura mediante integracin en DNA cromosomal, y realizan la transformacin a una
rapidez que es varias rdenes de magnitud menor que la de los plsmidos YEp.
En contraste, la transformacin mediante vectores YIp es estable y, por lo general, el nmero de
vectores en las clulas transformadas es 1.
Se han obtenido plsmidos replicantes de levaduras (YRp), que contienen secuencias de estas, lo
cual les confiere la capacidad de replicarse de manera autnoma. En otros aspectos, estos vectores
son semejantes a los vectores YIp. El nmero de copias de los vectores YRp en clulas
transformadas es bajo (aproximadamente 10) y son inestables.
Los cromosomas contienen una regin denominada centrmero, la cual es importante en la
distribucin efectiva de los cromosomas con las clulas hijas en la divisin celular. Los plsmidos
centromricos de las levaduras VCp contienen centrmeros, as como secuencias, que permiten la
replicacin en las levaduras y en E. coli. El nmero de copias de estos plsmidos circulares es bajo y
son estables aunque no tanto como los cromosomas lineales naturales.
3.9.13 Vectores de expresin
Las secuencias de nucletidos ubicadas a cada lado de las secuencias codificantes de los genes,
contienen estructuras importantes para la expresin y regulacin de este. En la regin 5de las
clulas eucarioticas y procarioticas esta las secuencias de DNA que enlazan a las protenas. Estas
incluyen a las secuencia Pribnow, o bien TATAAT de los procariotas, donde empieza la
transcripcin, la cual va precedida por la secuencia TTGACA, que es el sitio de reconocimiento de
la RNA polimerasa. Las regiones 5se conocen como promotores y la posicin de estos elementos es
crucial para la expresin del gen. En los eucariotas opera un sistema similar que consiste en una
66

secuencia TATAAAA/T de Goldberg-Hogness a unos 25 pb hacia arriba del sitio de iniciacin, con
un segundo elemento CAAT ubicado a unos 80 pb hacia arriba, que tambin puede ser importante.
En los procariotas, la secuencia AGGAGGU, conocida como secuencia de Shine-Delgarno, es
importante en la colocacin correcta del mRNA en los ribosomas.
Las secuencias hacia abajo del gen tambin son importantes para la expresin. En los procariotas, la
terminacin de la transcripcin ocurre en secuencias especficas que pueden formar una estructura
secundaria rizada. En los eucariota es importante una secuencia AAUAA, ya que se aade un
extremo poli-A de aproximadamente 100 a 200 residuos, sin embargo, se tiene que saber ms acerca
de las seales de terminacin.
La importancia de las regiones 3 (hacia abajo) y en particular, las regiones 5 (hacia arriba) de los
genes, ha dado como resultado la incorporacin de tales elementos en los denominados vectores de
expresin. La regin 5hacia arriba contiene elementos que dan por resultado la expresin
caracterstica de los genes. Estas regiones han sido tomadas de genes altamente expresados y se han
usado para expresar otras protenas incluyendo protenas de importancia comercial.
En las levaduras, estas han sido usadas, por ejemplo, con el promotor de la 3-fosfo-glicerato cinasa
para expresar el interfern alfa del hombre. Las concentraciones de las protenas no son tan altas
como lo serian si estuviese presente en el vector el gen PGR de las levaduras, debido a que la carga
de la clula de producir grandes cantidades de tales protena que, entre otras cosas, pueden afectar la
viabilidad.
Idealmente, la secuencia promotora usada debe ser controlable de modo que la sntesis de protena
en concentracin alta se accione en el momento adecuado. Este tipo de regulacin se puede obtener
usando, por ejemplo, promotores de protenas de choque trmico, o bien, como se ha logrado en las
levaduras, un promotor de fosfatasa acida, el cual funciona a 28 C pero no a 35 C. Esto permite
obtener suficiente biomasa antes de pasar a la sntesis del producto.
3.9.14 Vectores de secrecin
Otra caracterstica de aplicacin potencial es el uso de vectores de secrecin que permiten exportar
el producto y su recoleccin a partir de caldo de fermentacin ms que la masa celular. Esto tiene
aplicacin posible en sistemas celulares inmovilizados.
Estos vectores de secrecin se pueden desarrollar en muchos sistemas. En las levaduras, se basan en
todas las protenas secretadas conocidas e incorporan la terminal amino principal de tales protenas
que se requiere para el proceso previo a la secrecin. La hormona sexual de levaduras, denominada
factor alfa, se ha utilizado para lograr la secrecin, pero parece ser que las levaduras tambin pueden
reconocer y procesar seales de secrecin colocadas en genes de interfern de eucariotas superiores.
La levadura que ms se usa y se estudia es la Saccharomyces cerevisiae, sin embargo, recientemente
se han creado sistemas de transformacin para otras levaduras como Schizosaccharomyces pombe,
klyveromyces lactis, klyveromyces fragalis, Hansenula polymorpha. Algunas de estas especies
pueden ser ms adecuadas en la expresin de ciertos genes o bien, pueden serlo usando substratos
ms baratos. Por ejemplo Hansenula polymorpha puede crecer en metanol y Klyveromyces con
lactosa (suero) como fuentes de carbono.
En comparacin con las levaduras, hubo un menor avance de los sistemas de clonacin gnicos en
hongos filamentosos.
67

La transformacin se ha logrado con varios hongos filamentosos y es de inters en cuanto a la

secrecin de producto en alta concentracin.
En las plantas, tambin se han obtenido sistemas de clonacin de genes. Se han construido
plsmidos que se replican autnomamente para la alga verde unicelular Chlamydomonas reinhardii.
Este sistema promete la produccin por medio de un crecimiento fotosinttico. En los ltimos dos
aos hubo un avance rpido en los sistemas de clonacin en plantas superiores. Este problema se
soluciono al investigar vectores posibles basados en virus y plsmido vegetales. La solucin que se
basa en los plsmidos Ti de la bacteria Agrobacterium tumefaciens, inductora de tumores vegetales
parte de este plsmido y se incorpora en el DNA vegetal; el DNA extrao incorporado en esta parte
del plsmido usando enzimas de restriccin y la DNA ligasa se incorporan junto con el DNA Ti.
Esto ha abierto amplias posibilidades para el mejoramiento de los vegetales, no obstante, el
plsmido Ti solo se puede insertar de manera natural en un nmero limitado de especies vegetales,
las cuales no incluyen algunos de los cultivos ms importantes. Los sistemas de vectores para estas
especies aun se encuentran en investigacin y entre sus posibles aplicaciones se encuentran la
manipulacin de vas biosintticas, la incorporacin de resistencia y el mejoramiento del valor
nutricional de las cosechas.
Se puede introducir DNA extrao en el DNA de las clulas de mamfero mediante la microinyeccion
directa en el embrin. La obtencin de sistemas de clonacin de genes en cultivos de clulas de
mamfero es de la mayor importancia ya que pueden ser la base de procesos de fermentacin
comerciales.
Las clulas transformantes pueden ser detectadas con facilidad luego de la incubacin con DNA
total si existe una forma de seleccionarlas. La deteccin de transformantes se baso inicialmente en la
complementacin de clulas deficientes en una funcin determinada, con el gen activo
correspondiente. La cotransformacion de un gen deseable unido a un marcador seleccionable, por
ejemplo, de resistencia a antibiticos, puede superar este problema y permitir la integracin en los
cromosomas.
En la actualidad se cuenta con vectores virales para clulas de mamfero, la mayora se basa en el
virus circular SV40. Se han obtenido derivados que contienen un replicn de E. coli unido al suyo
que contiene de expresin en el cual se pueden insertar y expresar los genes extraos. Estos vectores
de va colateral pueden usar de nuevo E. coli para manipulaciones de DNA con transferencia de
lneas de clulas de mono, en las cuales se efecta el anlisis de su expresin o efecto. La funcin
episomal de este y otros vectores virales limita el nmero de huspedes, pero se puede usar para la
integracin cromosmica en otras clulas.
RESUMEN

La tecnologa de la ingeniera gentica depende de la fragmentacin del NA mediante las

enzimas de restriccin y de su unin en combinaciones distintas como los vectores.
Los genes se clonan mediante el aislamiento de vectores que llevan genes normales, capaces
de rescatar o complementar clulas defectuosas. En forma alternativa, es posible aislar
mRNA y producir una copia de DNA usando transcriptasa inversa.
El anlisis de DNA se puede realizar mediante el examen de mapa de los sitios de la enzima
de restriccin usando electroforesis en gel para separar fragmentos de DNA de diferente
tamao, examinando la homologa entre secuencias de nucletidos mediante la hibridacin
de una sonda de DNA, marcada radiactivamente con DNA unido a filtros; analizando la
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secuencia con base en la interrupcin de las hebras de DNA es posiciones de bases conocidas
y determinndolas por diferencias de tamao en geles de poliacrilamida.
Los vectores se usan para mover el DNA de una clula a otra por el proceso de
transformacin.
La seleccin de transformantes puede efectuarse por la recuperacin del plsmido o por
resistencia a una toxina celular.
Existen sistemas de clonacin para bacterias, levaduras, hongos filamentosos, algas, plantas
superiores y clulas de mamferos. Para la explotacin biotecnolgica de la ingeniera
gentica es importante el refinamiento de la tcnica para ampliar la variedad de huspedes, el
control de la expresin de genes y el nmero y la estabilidad de los plsmidos.

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