Anda di halaman 1dari 9

MARTINUS TUGAS KULTUR JARINGAN

Oleh
Nama

: MARTINUS GILI LALU

NIM : 15.01.283
Kelas

: Transfer A

SEKOLAH TINGGI ILMU FARMASI


MAKASSAR
2016

Organogenesis Secara Langsung pada Tanaman


Pakan Ternak Trifolium alexandrium L.

Bhowal M.*, Cherian K. J. and Das L.

PENDAHULUAN
Alexandrium Trifolium L. umumnya dikenal sebagai Berseem atau Clover
adalah polongan tanaman pakan ternak musim dingin penting. Itu dihargai sebagai
tanaman hijauan karena isinya protein tinggi, daun lembut, batang lembut, daun tinggi
untuk membendung rasio dan juga pertumbuhan yang cepat. Dibandingkan dengan
kacang lainnya dan rumput, Clover memberikan pakan dengan nilai gizi yang tinggi
dan kualitas. Hal ini juga disebut Mesir Clover. Hal ini umumnya ditaburkan di bulan
Oktober, terutama di bawah irigasi dan menghasilkan sekitar 100 sampai 150 ton
materi hijau per hektar tanah di 5-6 stek hingga April dan Mei. Genus Trifolium
mengandung sekitar 240 sp. dan dibagi menjadi 8 bagian. Namun, hanya 10 sp.
dianggap pertanian penting di dunia. Dari jumlah tersebut 10 sp, 5 sp. adalah semusim
dan 5 sp. adalah tanaman keras. Mereka biasa disebut clover. Clover (= Trifolium sp.)
Merupakan tanaman hijauan yang sangat baik karena memiliki nilai gizi yang tinggi dan
merupakan pakan ternak. Hal ini tumbuh di daerah beriklim sedang dan subtropis di
dunia. Tanaman ini umumnya tumbuh dari biji tetapi reproduksi vegetatif dengan stolon
juga dilaporkan di Trifolium repense. Taksa adalah agronomis yang sangat berharga
karena mereka menambahkan sejumlah besar nitrogen nitrogen tanah menggunakan
terdegradasi diperbaiki oleh Rhizobium trifoli di akar. Semanggi putih Belanda (T.
repense) menunjukkan fitur yang tidak biasa yang vivipar perkecambahan 2. Trifolium
Alexandrium juga salah satu hijauan tanaman yang paling sering dipelajari dari sudut
pandang kultur jaringan. Kemajuan yang signifikan telah dibuat dengan menggunakan
metode rekayasa genetika untuk meningkatkan nilai gizi dan untuk meningkatkan
toleransi terhadap cekaman biotik. Kultur jaringan atau kultur in vitro memberikan
pendekatan yang terbaik untuk pelestarian dan perbanyakan tanaman dalam waktu
singkat tanpa variabilitas genetik dan dalam ruang terbatas. Oleh karena itu, ia merasa
perlu untuk mengembangkan protokol regenerasi dari meristem de-novo, dengan
frekuensi yang lebih tinggi dari regenerasi. Telah diamati bahwa organogenesis
memiliki 2 cara jalan yang melalui callusogenesis dan organogenesis langsung. Dalam
makalah ini kami miliki, fokus perhatian kita pada cara jalan kedua karena memberikan
garis murni yang akan ditebang metode konvensional tumbuh tanaman dengan
menabur dan pertumbuhan selanjutnya dan dapat digunakan untuk perbaikan genetik
tanaman.
Sebuah tinjauan singkat dari organogenesis yang diberikan di bawah ini: Phillips dan Collins (5) telah melakukan kultur jaringan dari Trifolium buatan dan
mereka telah mengembangkan media. Organogenesis diinduksi dalam jaringan kalus
dan tanaman regenerasi ditanam hingga dewasa.
Sebuah prosedur yang sederhana dan cepat untuk organogenesis langsung
dari bintil akar seperti struktur alfalfa dilakukan oleh Sarul et al. (6).
Organogenesis langsung dari Trifolium buatan meristem untuk tujuan
pemuliaan dilakukan oleh Carrillo et al (7). Menurut mereka meristem batang
menunjukkan hasil yang lebih baik daripada mahkota meristem. L2 menengah
menunjukkan kinerja yang lebih baik dari B dan MS Media. Plantlet regenerasi melalui
beberapa induksi tunas 5 di Medicago sativa dilakukan oleh Kumar et al (7). Mereka
menggunakan 5-6 hari tip menembak sebagai eksplan dan diinokulasi mereka pada

MS + BAP + KN 75% jaringan mengangkat tanaman menunjukkan kelangsungan


hidup setelah transfer ke tanah. Demirbag et al (9). Belajar regenerasi in-vitro dari
Trifolium panonicum. Mereka menggunakan media MS yang mengandung BAP dan
NAA. Eksplan yang digunakan adalah hipokotil, kotiledon simpul dan basis kotiledon.
Hipokotil eksplan menanggapi terbaik dengan regenerasi 100% menembak.
Sebuah protokol untuk regenerasi tanaman dan in-vitro berbunga dari ujung
pucuk Basilicum polystachyon dikembangkan oleh Amutha et al (10). Li et al.
mengembangkan protokol untuk di-vitro organogenesis langsung dan regenerasi
Medicago sativa. Protokol ini telah berhasil diterapkan untuk delapan genotipe
Medicago sativa dengan frekuensi regenerasi mulai 63,8-82,5%. Rincian studi in-vitro
organogenesis secara langsung sejauh dilakukan disajikan dalam makalah ini.

TINJAUAN PUSTAKA
Uraian Tanaman
Trifolium alexandrinum (semanggi Mesir, Clover Berseem) [1] adalah semanggi
tahunan dibudidayakan terutama di irigasi daerah sub-tropis, dan digunakan sebagai
pakan ternak, terutama untuk sapi dan susu kerbau. Itu adalah tanaman musim dingin
penting di Mesir kuno, dan diperkenalkan ke India utara pada awal abad kesembilan
belas. Hal ini juga tumbuh di Amerika Serikat dan Eropa. tanaman mencapai 30
sampai 60 cm (12 sampai 24 in) tinggi dengan tegak atau naik batang.
Klasifikasi
Kingdom

: Plantae Plants

Subkingdom : Tracheobionta Vascular plants


Superdivision : Spermatophyta Seed plants
Division

: Magnoliophyta Flowering plants

Class

: Magnoliopsida Dicotyledons

Subclass

: Rosidae

Order

: Fabales

Family

: Fabaceae Leguminosae Pea family

Genus

: Trifolium L. clover

Species

: Trifolium alexandrinum L. Egyptian clover

BAHAN DAN METODE


Bahan tanaman dan sterilisasi permukaan
Benih yang dibeli dari pasar Nagpur. Benih yang permukaan disterilkan dengan
fungisida Bavistin selama 7 menit (1gm / L air suling) dan kemudian mereka dicuci
dengan air suling steril (3X) (masing-masing selama 1 menit) dan ditempatkan untuk
perkecambahan di tanah kebun.
Setelah 5 hari eksplan seperti ujung akar, simpul kotiledon tanpa kotiledon, kotiledon
dan hypocotyledon yang dipotong dan digunakan untuk organogenesis langsung.

Sterilisasi eksplan dilakukan dengan berbagai disinfektan. Prosedur sterilisasi eksplan


adalah sebagai berikut
a) Perlakuan permukaan sterilisasi eksplan di laboratorium
Eksplan dicuci dengan air suling steril (3X) masing-masing selama 1 menit.
kemudian mereka dicelupkan ke dalam fungisida Bavistin (0,1%) solusi untuk
1min., lanjut mereka dicuci dengan air suling steril selama 1 menit untuk
menghilangkan jejak fungisida. Setelah itu mereka dicelupkan ke dalam Tween
80 (1 tetes / 100 ml) larutan selama 1 menit. dan akhirnya dicuci dengan air
suling steril.
b) Perlakuan permukaan sterilisasi eksplan dalam kondisi aseptik
Di bawah laminar aliran udara dengan tepat kondisi aseptik eksplan dicuci
dengan air suling steril (sekali untuk 1 menit) diikuti dengan pengobatan
hipoklorit sodium selama 1 menit (1ml / 100ml steril air suling). Eksplan lagi
dicuci dengan air suling steril dan diperlakukan dengan 0,1% merkuri klorida
selama 30 detik. Akhirnya eksplan dicuci dengan air suling steril (3X) masingmasing selama 1 menit. Ukuran eksplan untuk eksperimen in-vitro bervariasi
masing-masing 0,6-1 cm.
c) Media kultur dan kondisi ruang biakan
Berbagai jenis media kultur tersedia untuk percobaan in-vitro. Dua jenis media
yang digunakan seperti MS dan L2. Media yang dilengkapi dengan kombinasi
hormon yang berbeda. Sebuah studi kritis ini media yang berbeda
menunjukkan bahwa L2 merupakan media yang paling cocok; Oleh karena itu,
media ini digunakan untuk studi in-vitro. Media itu disterilisasi dalam autoklaf
selama 20 menit pada tekanan 15 lbs. Media dituangkan dalam tabung reaksi
dan setelah pemadatan mereka diinokulasi wit h tip menembak, simpul
kotiledon tanpa kotiledon, kotiledon dan hypocotyledon. 50 eksplan yang
digunakan pada satu waktu. Tabung kultur disimpan di ruang kultur dan periode
foto dipertahankan selama 14-16 jam dengan 2.500 intensitas Lux. kelembaban
relatif dipertahankan pada 60% suhu an dipertahankan pada 25 2 C. Di
bawah kondisi terkontrol ini pertumbuhan dan induksi kalus dipelajari. Respon
eksplan dipantau setiap hari selama 4 minggu.

HASIL DAN PEMBAHASAN


Seperti disebutkan sebelumnya empat eksplan yang berbeda diinokulasi pada L2,
dilengkapi dengan 1 mg / l BAP + 0,1 mg / l IAA untuk organogenesis langsung. Ujung
tunas ditemukan untuk menjadi yang terbaik eksplan responsif untuk organogenesis
langsung (Gbr. 1). Dalam hal ini 75% dari eksplan diinokulasi terbentuk tunas
langsung, dalam waktu 5 hari (Gambar. 2). Hal ini diikuti oleh simpul kotiledon tanpa
kotiledon yang menunjukkan hasil 42% pada hari ke-7 setelah inokulasi eksplan.
Tanggapan hypocotyledon adalah 20% pada hari 9 setelah inokulasi eksplan. Hal ini
diikuti oleh kotiledon dan respon dari kotiledon tidak memuaskan, itu 6% dan inisiasi
tertunda dan itu terjadi setelah hari 13. Dalam semua eksplan sifat menembak hijau
dan sehat (Tabel 1 dan 3 Gambar.). Setelah 18 hari sepenuhnya dikembangkan
beberapa tunas diperoleh (Gbr. 4).
Usia bibit dari mana eksplan berasal juga mempengaruhi respon eksplan. Oleh karena
itu, setelah menentukan yang terbaik eksplan responsif, usia yang tepat dari eksplan
yang standar. Dalam penelitian ini eksplan terbaik yaitu pucuk dipanen dari bibit awal
usia yang berbeda dari 3-7 hari dan diinokulasi pada media yang sama. Menembak tip
dari 3 dan 4 hari bibit tua tidak membentuk organ. Ujung tunas dari 5 hari umur

ditemukan untuk menjadi yang terbaik untuk inisiasi langsung organ. Dalam eksplan
tersebut yang organogenesis langsung dimulai pada hari ke-5 dan 75% eksplan
membentuk organ langsung. Eksplan bibit berumur 6 dan 7 hari tidak digunakan,
karena persentase respon kurang, itu ditemukan sekitar 35% dan 12% masing-masing
pada tanggal 7 dan hari 12 masing-masing (Tabel 2).
Setelah menentukan eksplan terbaik dan usia terbaik dari eksplan, itu diinokulasi pada
L2 media yang dengan konsentrasi yang berbeda dari pengatur tumbuh (BAP dan IAA)
untuk mengetahui pengaruh zat pengatur tumbuh untuk organogenesis langsung. BAP
saja tidak memberikan respon yang memuaskan. Kombinasi dua hormon pertumbuhan
ini yang BAP dan IAA diadili. Tanggapan optimum adalah 75% pada hari ke-5 dengan
tunas hijau dan sehat, pada melengkapi L2 Media dengan 1 mg / L BAP dan 0.1mg / L
IAA. Ketika L2 + 1.5mg / LBAP + 0.15mg / L IAA dan L2 + 2 mg / LBAP + 0.2mg / L IAA
yang digunakan dalam media tanggapan adalah 60% dan masing-masing 35% pada 7
dan 12 hari dan dalam kedua tunas kasus yang hijau dan sehat. Ketika L2 Media
dilengkapi dengan 2,5 mg / L BAP dan 0,25 / L IAA tanggapan adalah 14% pada hari
ke-14 dan tunas yang hijau dan sehat, hasil ini tidak memuaskan. Diamati bahwa
dengan meningkatkan konsentrasi dari kedua hormon persentase organogenesis
langsung berkurang dan durasi waktu respon meningkat. (Tabel 3).
Diamati dari in vitro studi Trifolium Alexandrium bahwa ujung tunas berumur 5 hari
adalah yang terbaik eksplan responsif untuk organogenesis langsung. L2 Media
dengan 1 mg / L BAP dan 0.1mg / L IAA adalah media terbaik untuk organogenesis
langsung. Tanggapan penembakan langsung adalah 75%.
Sarul et al. mampu untuk mendapatkan pembentukan tunas langsung dari bintil akar
semu dari Medi cago sativa. Mereka menggunakan media B5 tanpa ZPT. Produktif
inisiasi tunas adventif diamati pada media ini. tunas yang diregenerasi berakar mudah
dan menunjukkan nodul seperti struktur. Menurut mereka penampilan menembak
spontan berkorelasi dengan sitokinin tinggi rasio auksin.
Organogenesis langsung diamati dari segmen hipokotil dari Tamarindus indica oleh
Sonia et el. Mereka menggunakan bibit berumur 12 hari dari eksplan hipokotil pada MS
Media dengan atau tanpa pengatur tumbuh. Media MS dengan BAP menghasilkan 3
sampai 4 tunas per eksplan. Akar diproduksi pada media yang mengandung IBA.
Planlet dapat ditransfer ke tanah.
Carrilo et al. telah mempelajari optimasi untuk organogenesis langsung dari Trifolium
kepura-puraan. Mereka menggunakan meristem batang dan mahkota meristem (apex)
untuk pembentukan kalus dan organogenesis. Menurut mereka sedang L2 memberi
hasil yang lebih baik daripada media B5 dan MS. Pengamatan serupa adalah dengan t
ia aut hor untuk L2 media organogenesis langsung di T. Alexandrium.
Kumar et al. plantlet regenerasi diamati melalui beberapa induksi tunas di kultivar India
Medicago sativa. 5-6 hari tunas pucuk lama digunakan sebagai eksplan untuk
beberapa induksi tunas pada media MS dengan sitokinin. Kami menggunakan 3-7 hari
tip menembak tua sebagai eksplan dan di antara mereka 5 hari tip menembak tua
ditemukan eksplan terbaik responsif. Di sisi lain kita bisa mendapatkan hanya
organogenesis ketika kombinasi sitokinin (BAP) dan auksin (IAA) yang digunakan.

KESIMPULAN
Tujuan utama dari penelitian ini adalah untuk menginduksi organogenesis langsung di
Trifolium Alexandrium. Selama proyek penelitian eksplan yang berbeda seperti ujung
akar, simpul kotiledon tanpa kotiledon, kotiledon dan Hypocotyledon digunakan. L2
Media dengan 1 mg / L BAP 0,1 mg / L IAA ditemukan untuk menjadi yang terbaik
untuk organogenesis langsung dari ujung pucuk. Ini memberi hasil 75% pada 5 hari.
Sedangkan dari eksplan lainnya node kotiledon tanpa kotiledon memberi respon 42%
pada 7 hari.

DAFTAR PUSTAKA
1. Khan A. G., Survey, Pakistan Agriculture Research Council (PARC), Islamabad,
(1993).
2. Yamada T. and Higuchi S., In-vitro culture of genus Tri f ol i um germpl asm and
plant regeneration, J. Jap. Grassl. Sc., 36(1), 47-55, (1990).
3. Majumdar S., Banerjee S. and De K. K., Vivipary in white clover (Trifolium
repens L.), Cur. Sc., 86(1), 29-30, (2004).
4. Lauzer D. and Laublin et . al., In vit ro propagation and cytology of wild yams,
Di oscorea abyssi ni ca Hosh and D. mangetotiane Miege Plant cell tissue
organ culture, 28, 215-223, (1992).
5. Phillips C.G. and Collins B.G., In-Vitro tissue culture of select ed Legumes and
plant regeneration from callus cultures of Red Clover, Crop Sc., 19(1), 59-64,
(1979).
6. Sarul P. , Vlahova M. , Ivonova A. and Atanassov A., Direct shoot formation in
spontaneously occurring root pdeudonodules of Alfalfa (Medicago sativa L.) invitro cell, Dev. Biol., 31(1), 21-25, (1995).
7. Carrillo J. C., Ojeda V. A., Compos-De Quiroz H. A. and Ortega F. A.,
Optimization of a protocol for direct organogenesis of red clover (Trifolium
repense L.) meristem for breeding purposes, Biol. Res., 37(2), 45-51, (2004).
8. Kumar S., Chandra A. and Gupta M. G., Plant let regeneration via multiple
shoot induction in Indian cultivars of Lucerne (Medicago sativa L.), J. Plant
Biochem. Biotech., 17(2), (2008).
9. Demirbag N. S., Kendir H., Khawar K. M. and Asim M., In-vitro regeneration of
Turkish endemic Tri f ol i um pannonocum Jacq. Subsp. Elongatum(wild),
Biotech. Biotech. EQ, 22(4), 921-924, (2008).
10. Amutha R., Jawahar M. and Paul R. S., Plant regeneration and in-vitro
flowering from shoot tip of Basilicum polystachycon (L.), moench an important
medicinal plant, J. Agri. Tech., 4(2), 117-123, (2008).
11. Li J. J., Wu Y., M., Wang T. and Liu J. X, Invitro direct organogenesis and
regeneration of Medicago sativa, Biol. Plant. 53(1), 325-328, (2009).
12. Datta S., Pesticide causes deformity in the organogenesis of the late-embryonic
stages of chick, J. Environ. Res. Develop., 3(3), 706-711, (2009).
13.Sonia Jaiwal P. K., Gulati A. and Dahiya S., Direct organogenesis in hypocotyls
cultures of Tamarindus indica, Biol. Plant, 41(3), 331-337, (1998).