Biologia

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EMVZ-FACICOLORACIONES

I. INTRODUCCIN
En general, las clulas son transparentes, lo que dificulta su estudio cuando los exmenes se
realizan en preparados en fresco. Por eso para distinguirlos del medio es necesario hacer una coloracin
(tinciones simples) o utilizando microscopios especiales como el de contraste de fases, la mezcla de
tinciones simples tambin sirve para contrastar o realzar distintas caractersticas morfolgicas o estructurales
de las clulas (tinciones diferenciales). Los preparados en fresco o en seco, son mtodos de anlisis que
nos van a permitir, gracias al microscopio y otras herramientas de laboratorio, la visualizacin de una
complejidad de elementos que a simple vista no son captados por el ojo humano.
La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos que tienen alguna afinidad especfica por
algn componente celular. Existen varios tipos de colorantes, pero los ms usados en microbiologa son: las
sales colorantes y los colorantes liposolubles
Las Sales colorantes ms comnmente usados son sales de tipo cido o bsico, trminos que no
indican necesariamente su pH en solucin, sino que una parte significativa de la molcula sea aninica o
catinica. Los colorantes bsicos consisten en un catin coloreado unido a un anin incoloro. Ejm: clorhidrato
(-) de azul de metileno (+). Los colorantes cidos tienen el catin incoloro unido a un anin coloreado. Ej:
eosinato (-) de sodio (+). Los colorantes se combinan qumicamente con el protoplasma bacteriano; si la
clula no ha muerto, el proceso de tincin la mata. Los colorantes cidos no tien la clula y por lo tanto,
pueden usarse para impartir al fondo un color de contraste (coloracin negativa).
Desde el punto de vista prctico entonces, los colorantes bsicos tien estructuras de naturaleza
cida, como la cromatina nuclear de las clulas eucariotas y procariotas; los colorantes cidos reaccionan
con sustancias bsicas, como las estructuras citoplasmticas de las clulas eucariotas.
Las Colorantes liposolubles se combinan con los componentes lipdicos de la clula, usndose a menudo
para revelar la localizacin de los depsitos de grasa. Ej. Negro Sudn. En algunos casos se usan
mordientes con la finalidad de engrosar estructuras muy finas, con el propsito de hacerlas visibles al
microscopio ptico.
Los tipos de coloraciones son: SIMPLES, cuando se usa un solo colorante, DIFERENCIAL cuando
se usa ms de un colorante y ESPECIALES como la tincin negativa que colorea el medio que rodea a la
bacteria permaneciendo sta sin teir.
Los tipos de colorantes ms usados son los BSICOS que consisten en un catin coloreado unido a
un anin incoloro. Tien estructuras cidas de la clula (cidos nucleicos y polisacridos cidos), Ej: azul de
metileno. la fucsina bsica, el cristal violeta, hematoxilina, etc. CIDOS tienen el catin incoloro unido a un
anin coloreado. Tien estructuras citoplasmticas de las clulas eucariotas (Rx bsicas), No tien la clula
bacteriana, pueden usarse como color de contraste (coloracin negativa). Ej; eosina, la fucsina cida y el rojo
Congo
Para la realizacin de una coloracin se debe realizar tres pasos: frotis o extensin, fijacin y
coloracin. La primera consiste en colocar la muestra en la lmina portaobjetos, si es frotis es haciendo uso
de dos laminas portaobjetos limpias y desengrasados, una hace que toda la muestra se disperse en forma
paralela desde un extremo al otro; la extensin consiste en que la muestra colocada en el centro de la lmina
se disperse en forma elptica desde el centro hacia afuera dela lmina portaobjetos. La segunda se refiere a
la forma de como adherir las clulas a la lmina portaobjetos, que puede ser por fijacin fsica (calor) y
fijacin qumica (metanol, formalina 5%, licor de Hoffman, etc. Y el tercer paso consiste en cubrir la muestra
ya fijada con un colorante que puede ser simple, diferencial o especial
OBJETIVOS
Interpretar el fundamento de las coloraciones en la prctica de biologa.
Practicar la preparacin de muestras en fresco y n seco
Ejercitar las tcnicas de coloracin simple y compuesta.

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II. MATERIALES
M. biolgico: clulas procariotas y eucariotas
M. de laboratorio: lminas portaobjetos y cubreobjetos, goteros, pipetas, baguetas, microscopios, mechero,
bistur, etc.
Reactivos: alcohol abs, agua destilada, soluciones colorantes (hematoxilina, eosina, Wright, azul de metileno
set de Gram, etc), soluciones buffer.
III. PROCEDIMIENTO:
3.1 TIPOS DE PREPARACIONES
A) preparado en fresco
- Tomar y recortar una muestra de hoja de geranio y extraerle la epidermis.
- Colocar la muestra en la lmina portaobjetos y agregarle una gota de agua
- Luego cubrirla una laminilla cubreobjetos, evitando que se forme burbujas.
- Llevar el preparado a la platina del microscopio y observarla con objetivo de menor a mayor aumento (4X y
de 10X).
B) preparado en seco
- Con la ayuda de un hisopo, hacer un raspado de la cara interna de la boca.
- Luego el hisopado extenderlo en una lmina portaobjetos.
- Esta extensin dejarlo secar a temperatura ambiente o con la ayuda de un mechero,
- Una vez secado, se realiza la coloracin respectiva, que en este caso ser azul de metileno.
3.2 TIPOS DE COLORACIONES
A) Coloracin. SIMPLE: Positiva o negativa
- hacer un preparado de la muestra, que puede ser en fresco o en seco y luego fijarlo.
- Cubrir la muestra fijada con un colorante con un solo colorante ejm azul de metileno, eosina hematoxilina,
etc. Y dejarlo por tres minutos.
- descartar el exceso de colorante y luego secar al ambiente o con la ayuda del mechero.
- Llevar a observar al microscopio con objetivos en seco los diferentes tipos de colorantes agregados.

B) Coloracin DIFERENCIAL
Coloracin de Wright
- Hacer un raspado de la cara interna de la boca con un hidopo.
- Luego extenderlo en una lmina portaobjetos.
- Secar a temperatura ambiente o con la ayuda de un mechero,
- Agregarle la solucin de colorante de Wright por 3 minutos
- En seguida agregarle una solucin de buffer o agua destilada por 3 minutos
- Observar al microscopio con 4X, 10X y 40X
- Dibujar lo observado
IV. RESULTADOS
V. DISCUSIN
VI. CONCLUSIONES
VII. CUESTIONARIO

1.
2.
3.
4.
5.
6.

Que diferencias encontr en la coloracin simple y coloracin diferencial?

Esquematice una clula animal, vegetal y procariota con sus partes
Cules son las diferencias entre una clula eucariota y una clula procariota?
Dibuje los protozoos de agua dulce que podemos encontrar en el agua de charco
Cules son las diferentes clulas eucariotas de los vertebrados? Explique sus funciones y
que tejidos y sistemas forman.

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VIII. BIBLIOGRAFA

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