Full

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
VALIDASI METODE SPEKTROFOTOMETRI VISIBEL UNTUK

PENETAPAN KADAR AMOKSISILIN MENGGUNAKAN
PEREAKSI ASETILASETON DAN FORMALIN
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi
oleh:
Margareta Sunarto
NIM : 038114004
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2007
God didnt promise day without pain,

Laughter without sorrow, sun without rain
But He promises strength for the day,
Comfort for the tears, and light for the way.
Disappointments are like road humps, they slow you.

Down a bit, but youll enjoy the smooth road afterwords.
Dont stay on the humps too long, move on!
When you feel down, because you didnt get what you want,
Just sit tight and be happy.
Because God must has something better to be given to you.
When something happens to you,

Good or bad, consider what it means.
Theres always a purpose in lifes events,
To teach you how to laugh more,
Or not to cry too hard.
Kupersembahkan karya ini untuk
Papa dan Mama
Sebagai rasa terima kasih dan baktiku
Andre dan Ita
Yang kucintai dan kusayangi
Almamaterku
KATA PENGANTAR
Syukur dan terima kasih kepada Bapa di surga, Tuhan Yesus, dan Bunda
Maria atas berkat dan penyertaan-Nya, penulis dapat menyelesaikan penelitian yang
berjudul Validasi Metode Spektrofotometri Visibel Untuk Penetapan Kadar
Amoksisilin Menggunakan Pereaksi Asetilaseton dan Formalin. Skripsi ini
disusun untuk memenuhi salah satu syarat dalam mencapai gelar Sarjana Farmasi
(S.Farm.) pada Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.
Pada kesempatan ini, penulis ingin menyampaikan terima kasih yang tulus
kepada:
1. Rita Suhadi, M.Si., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas
Sanata Dharma.
2. Prof. Dr. Sudibyo Martono, M.S., Apt. selaku dosen pembimbing.
Terima kasih untuk masukan, bimbingan, dorongan, waktu, pengertian
dan perhatian yang begitu besar, serta semangat yang selalu diberikan
selama penelitian dan penyusunan skripsi ini
3. Dra. A. Nora Iska Harnita, M.Si., Apt. selaku dosen penguji, terima
kasih atas dukungan, saran, dan waktu yang diberikan.
4. Drs. Sulasmono, Apt. selaku dosen penguji, terima kasih atas dukungan
saran, dan waktu yang diberikan.
5. Segenap dosen Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.
6. Papa, Mama, Andre, Ita, buat semua doa, cinta, dukungan, perhatian,
pengertian, kesabaran, canda, dan tawa yang buat Cici selalu kuat.
Makasih banyak ya.. I love you all...
7. Pak Bambang dan Bu Kis, laboratorium analisis obat dan makanan
Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada, yang selalu menemani dan
membantu selama penelitian. Terima kasih banyak ya Pak, Bu
8. Segenap laboran di Universitas Gadjah Mada dan Universitas Sanata
Dharma. Terima kasih untuk waktu dan bantuannya.
9. Arnie, Eta, teman seperjuanganku. Inget slogan kita: gagal itu biasa,
tetapi berhasil itu luar biasa Makasih banyak teman buat dukungan,
bantuan, dan kerjasamanya.
10. Mas Isun, kakak dan sahabatku, terima kasih untuk semua keceriaan,
kesedihan, semangat, harapan, kekecewaan, dan semua hal yang pernah
aku alami dengan adanya persahabatan kita. Hope our friendship will
last forever. Aku belajar banyak hal dari persahabatan kita.. Overall,
thanks for eveything.. I Love you brother..
11. Temen-temen Eternal Choir dan Koor Gregorius Caecilia buat semua
kebersamaan, kegilaan, kekompakkan, keceriaan, dan pengertiannya.
Thanks a lot..
12. Gurit buat editan dan ilmu-ilmu komputernya, Leli buat terjemahannya.
Makasih ya..
13. Vita, Mitul, BleQ, Shyu, Nandut, Jevi, Yeyen, Reni, Asep, buat curhatcurhat, gossip, dukungan, dan masukan buat aku.
14. Temen-temen kelompok A dan temen-temen Kelas A 2003, buat

dukungan, kekompakan dan kebersamaan kita selama ini.
15. Mas Bowo, Mas Fahrul, buat diskusinya.
16. Semua pihak yang tidak dapat saya sebutkan satu per satu yang telah
membantu dalam penelitian dan penyusunan skripsi ini.
Penulis menyadari bahwa skripsi ini sangat sederhana dan masih banyak
kekurangannya. Oleh karena itu, saran serta kritik yang membangun sangat
diharapkan untuk kesempurnaan skripsi ini di masa yang akan datang.
Yogyakarta, Januari 2007
Penulis
INTISARI
Amoksisilin memiliki kemiripan struktur dengan sefaleksin yang juga
memiliki gugus amin primer. Oleh karena itu, metode spektrofotometri visibel untuk
penetapan kadar sefaleksin menggunakan pereaksi asetilaseton dan formalin
diharapkan dapat juga digunakan untuk penetapan kadar amoksisilin.
Penelitian ini merupakan jenis penelitian non eksperimental dengan
rancangan penelitian deskriptif. Pada penelitian ini dilakukan optimasi waktu reaksi,
pH, dan volume yang menghasilkan serapan maksimum. Hasilnya kemudian
digunakan dalam validasi metode. Selain itu, dilakukan pula aplikasi metode
penetapan kadar tersebut pada sediaan tablet amoksisilin.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa reaksi mulai stabil setelah menit ke50 selama 30 menit, volume optimum pereaksi adalah 7 ml dan pH optimum adalah
4. Warna kuning yang terbentuk memberikan serapan maksimum pada panjang
gelombang 401 nm. Untuk validasi metode, didapat data sebagai berikut: koefisien
variansi sebesar 0,56%, perolehan kembali sebesar 104,09%, dan koefisien korelasi
(r) persamaan garis linier kurva baku sebesar 0,9995. Aplikasi metode penetapan
kadar pada sediaan amoksisilin menunjukkan hasil yang baik dengan kadar rata-rata
amoksisilin dalam tablet adalah 589,56 mg. Dari seluruh data yang diperoleh, dapat
disimpulkan bahwa metode penetapan kadar amoksisilin secara spektrofotometri
visibel menggunakan pereaksi asetilaseton dan formalin memiliki akurasi dan presisi
yang baik, namun akurasinya kurang baik.
Kata kunci: amoksisilin, asetilaseton, formalin, spektrofotometri visibel.
ABSTRACT
The structure of amoxicillin is similar to that of cephalexin which is also
has primary amine groups. For that reason, it is hoped that visible spectrophotometric
method in determining the amount of cephalexin by using acetylacetone and formalin
can also be used to determine the amount of amoxicillin.
This research is a non-experimental descriptive research. In this research,
the reaction time, the pH and the volume of the reagent have been optimized to
obtain the maximum absorption. Then, its result is used in the validation method. In
addition, the methods developed is applied to determine the amount of amoxicillin
in the tablets.
The research result shows that the reaction begin to stable from the fiftieth
minutes for 30 minutes, the optimal volume of the reagent is 7 ml, and the optimal
pH is 4. The yellow chromophore is scanned and showed 401 nm as a maximum
wavelength. From the validation method, the coefficient of variation is 0.56%, the
recovery is 104.09%, and the correlation coefficient (r) is 0.9995. The application of
the methods developed in determining amoxicillin in tablet showed a good result
with the average amount of amoxicillin is 589.56 mg/tablet. From the result it can be
concluded that visible spectrophotometric method to determine the amount of
amoxicillin by using acethylacetone and formalin gives a good precision and
linearity, but not the accuracy.
Key word: amoxicillin, acetylacetone, formalin, visible spectrophotometric
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL .............................................................................................
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ...................................................
ii
HALAMAN PENGESAHAN................................................................................
iii
HALAMAN PERSEMBAHAN ...........................................................................
iv
KATA PENGANTAR ..........................................................................................
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ............................................................... viii

INTISARI...............................................................................................................
ix
ABSTRACT ............................................................................................................
DAFTAR ISI .........................................................................................................
xi
DAFTAR TABEL ................................................................................................. xiv

DAFTAR GAMBAR ............................................................................................
xv
DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................... xvi

BAB I PENGANTAR .........................................................................................
A. Latar Belakang .................................................................................
1. Perumusan masalah ....................................................................
2. Keaslian penelitian .....................................................................
3. Manfaat penelitian ......................................................................
B. Tujuan Penelitian .............................................................................
BAB II PENELAAHAN PUSTAKA ..................................................................
A. Amoksisilin ......................................................................................
B. Asetilaseton ......................................................................................
C. Formalin ...........................................................................................
D. Spektrofotometri UV-Vis .................................................................
10
1. Definisi spektrofotometri UV-Vis ..............................................
10
2. Konsep dasar radiasi elektromagnetik ........................................
10
3. Tipe transisi elektron ..................................................................
11
4. Interaksi molekul dengan radiasi elektromagnetik ....................
13
5. Analisis kuantitatif secara spektrofotometri UV-Vis..................
13
6. Serapan suatu larutan ..................................................................
14
7. Kesalahan fotometrik ..................................................................
15
8. Syarat-syarat penggunaan Hukum Beer......................................
16
9. Penggunaan spektrofotometri UV-Vis dalam metode analisis ...
18
E. Pengembangan Metode Spektrofotometri.........................................
18
F. Validasi, Kesalahan, dan Parameter Metode Analisis .....................
20
1. Validasi metode analisis .............................................................
20
2. Kesalahan metode analisis .........................................................
22
3. Parameter-parameter validasi metode analisis ...........................
23
G. Landasan Teori .................................................................................
24
H. Hipotesis ...........................................................................................
24
BAB III METODOLOGI PENELITIAN ...........................................................
25
A. Jenis dan Rancangan Penelitian .......................................................
25
B. Definisi Operasional ........................................................................
25
C. Alat-alat Penelitian ...........................................................................
25
D. Bahan-bahan Penelitian ....................................................................
26
E. Tata Cara Penelitian .........................................................................
26
1. Pembuatan larutan uji .................................................................
26
2. Optimasi penetapan kadar amoksisilin ......................................
27
3. Pembuatan kurva baku ...............................................................
28
4. Aplikasi metode penetapan kadar amoksisilin pada tablet AM .
29
5. Validasi metode...........................................................................
30
F. Analisis Hasil ...................................................................................
30
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .............................................................
31
A. Pembuatan Larutan Baku Amoksisilin .............................................
31
B. Penetapan Waktu Reaksi dan Operating Time .................................
31
C. Penetapan pH Optimum Pereaksi .....................................................
36
D. Penetapan Volume Optimum Pereaksi .............................................
38
E. Penetapan Panjang Gelombang Serapan Maksimum .......................
39
F. Pembuatan Kurva Baku ...................................................................
41
G. Penetapan Kadar Amoksisilin dalam Tablet .....................................
44
H. Validasi Metode Analisis .................................................................
45
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ..............................................................
48
A. Kesimpulan ......................................................................................
48
B. Saran .................................................................................................
48
DAFTAR PUSTAKA ...........................................................................................
49
LAMPIRAN ..........................................................................................................
52
BIOGRAFI.............................................................................................................
60
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel I.
Parameter Analisis yang Diperlukan Untuk Kesahihan Pengukuran
23
Tabel II.
Hasil Penetapan Waktu Reaksi .........................................................
35
Tabel III.
Hasil Penetapan pH Optimum Pereaksi ............................................
38
Tabel IV.
Hasil Penetapan Volume Optimum Pereaksi ....................................
39
Tabel V.
Hasil Penetapan Kurva Baku Amoksisilin........................................
42
Tabel VI.
Hasil Modifikasi Kurva Baku Amoksisilin.......................................
43
Tabel VII.
Hasil Penetapan Kadar Amoksisilin dalam Tablet AM ....................
44
Tabel VIII. Data Hasil Penetapan Perolehan Kembali.........................................
46
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1.
Struktur Sefaleksin ...........................................................................
Gambar 2.
Struktur Amoksisilin .........................................................................
Gambar 3.
Reaksi Antara Sefaleksin dengan Pereaksi Asetilaseton

dan Formalin ....................................................................................
Gambar 4.
Struktur Asetilaseton ........................................................................
Gambar 5.
Struktur Formalin .............................................................................
10
Gambar 6.
Diagram Tingkat Energi Elektronik .................................................
12
Gambar 7.
Usulan Mekanisme Reaksi Pembuatan Pereaksi

Asetilaseton-Formalin .......................................................................
Gambar 8.
Gambar 9.
33
Usulan Mekanisme Reaksi Antara Pereaksi Asetilaseton-Formalin

dan Amoksisilin ................................................................................
35
Hasil Penetapan Operating Time ......................................................
36
Gambar 10. Reaksi Eliminasi Pada Reaksi Antara Amoksisilin dengan Asetilaseton
dan Formalin Pada Suasana Asam dan Basa ....................................
37
Gambar 11. Spektra Panjang Gelombang Serapan Maksimum Amoksisilin

Konsentrasi 0,084 mg/ml (a), 0,117 mg/ml (b), dan 0,151 mg/ml (c)
Hasil Reaksi dengan Asetilaseton dan Formalin ..............................
40
Gambar 12. Gugus pada senyawa hasil reaksi yang memberikan serapan pada
panjang gelombang 335 nm ..............................................................
41
Gambar 13. Hubungan Konsentrasi Amoksisilin dengan Serapan Senyawa Hasil

Reaksi Antara Amoksisilin dengan Asetilaseton dan Formalin........
43
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1.
Data Penimbangan Baku Amoksisilin ...........................................
52
Lampiran 2.
Data Penetapan Kadar Sampel .......................................................
53
Lampiran 3.
Data Hasil Penetapan Perolehan kembali ......................................
54
Lampiran 4.
Contoh Perhitungan........................................................................
55
Lampiran 5.
Spektrum Baku Amoksisilin 0,005M.............................................
59
BAB I
PENGANTAR
A.
Latar Belakang
Saat ini, penggunaan antibiotik sebagai sarana pengobatan infeksi semakin

berkembang dalam masyarakat terutama pada pengobatan penyakit yang disebabkan
oleh mikroorganisme. Banyaknya penyakit yang ditimbulkan oleh mikroorganisme
menyebabkan antibiotik menduduki peringkat yang tinggi dalam peresepan.
Antibiotik merupakan suatu produk metabolik (zat kimia) yang dihasilkan oleh
mikroorganisme tertentu, yang dalam jumlah amat kecil bersifat merusak atau
menghambat mikroorganisme lain (Pelczar and Chan, 1988).
Amoksisilin merupakan antibiotik golongan -laktam yang menduduki
peringkat tertinggi dalam peresepan, diantaranya dapat ditunjukkan dengan survei
yang berjudul Jenis-Jenis Antibiotika yang Diresepkan dan Masuk di Beberapa
Apotek Wilayah Kotamadya Yogyakarta, antibiotik -laktam tersebut menduduki
peringkat tertinggi dengan persentase 69,25%, sedangkan jika dilihat jenis
antibiotiknya, amoksisilin menduduki peringkat tertinggi dengan persentase 31,59%
(Kusuma, 2000). Selain itu, menurut Wiratih (2002) dalam penelitiannya yang
berjudul Gambaran Resep Antibiotik di Apotek-Apotek yang Terletak di Perbatasan
Bagian Utara Kotamadya Yogyakarta dan Kabupaten Sleman, antibiotik -laktam
juga menduduki peringkat tertinggi dengan persentase 52,64%, sedangkan jika
dilihat jenis antibiotiknya, amoksisilin menduduki peringkat tertinggi dengan
persentase 51,37%.
Agar dapat berefek maksimal, suatu obat harus memiliki dosis yang tepat.
Oleh karena itu, harus dilakukan pengawasan untuk menjamin mutu, khasiat, dan
keamanan penggunaan obat tersebut. Salah satu caranya adalah dengan melakukan
penetapan kadar zat aktif untuk menjamin ketepatan dosis yang akan diterima oleh
konsumen.
Amoksisilin dapat ditetapkan kadarnya dengan metode kromatografi cair
kinerja tinggi (KCKT) dan metode titrasi iodometri (Anonim, 1995). Kedua metode
tersebut memiliki kelebihan dan kekurangan. Metode KCKT memberikan hasil yang
cepat karena tidak memerlukan pemisahan terlebih dahulu, tetapi operasionalnya
mahal, sedangkan metode titrasi iodometri membutuhkan biaya yang lebih sedikit,
tetapi kurang sensitif untuk analisis dalam jumlah kecil.
Menurut Patel dkk. (1992), sefaleksin (gambar 1) dapat ditetapkan
kadarnya secara spektrofotometri visibel berdasarkan reaksi antara gugus amin
primernya dengan hasil kondensasi antara 2 mol asetilaseton dan 1 mol formalin.
COOH
CH3
O
H
N
N
H
. H 2O
NH2
Gambar 1. Struktur sefaleksin
Gugus amin primer

Maka, amoksisilin (gambar 2) yang juga memiliki gugus amin primer diharapkan
dapat ditetapkan kadarnya dengan cara seperti pada cara penetapan sefaleksin
menggunakan pereaksi asetilaseton dan formalin.
COOH
CH3
O
HO
N
N
H
CH3
. 3H2O
NH2
Gugus amin primer
Gambar 2. Struktur amoksisilin
Dari penelitian ini diharapkan dapat dikembangkan suatu metode analisis

yang mudah, murah, sederhana, sensitif, serta memiliki akurasi, presisi, dan linearitas
yang baik untuk menetapan kadar amoksisilin.
1. Perumusan masalah
Berdasarkan latar belakang, maka diperoleh permasalahan sebagai berikut :
a.
apakah metode spektrofotometri visibel untuk penetapan kadar amoksisilin

menggunakan pereaksi asetilaseton dan formalin memenuhi parameter
validasi metode analisis yang meliputi akurasi, presisi, dan linearitas?
b.
apakah metode spektrofotometri visibel untuk penetapan kadar amoksisilin

menggunakan pereaksi asetilaseton dan formalin dapat diaplikasikan pada
sediaan obat tablet amoksisilin?
2. Keaslian penelitian
Sepengetahuan peneliti, belum pernah ada penelitian tentang validasi
metode penetapan kadar amoksisilin dengan pereaksi asetilaseton dan formalin
secara spektrofotometri visibel. Penetapan kadar amoksisilin yang pernah dilakukan
antara lain titrasi iodometri hasil hidrolisis amoksisilin secara coulometri (Hidayat,
1999) dan penetapan kadar penisilin sebagai pengotor pada produk obat yang beredar
di pasaran secara KCKT-spektrometri massa (Takada dkk., 2005).
Selain itu, telah dilakukan beberapa penelitian tentang penetapan kadar
yang mirip dengan metode penetapan kadar amoksisilin dengan pereaksi asetilaseton
dan formalin secara spektrofotometri, antara lain penelitian Patel dkk. (1992) tentang
penetapan kadar sefaleksin dalam berbagai sediaan secara spektrofotometri visibel
menggunakan pereaksi asetilaseton dan formalin, penelitian Rianti (2005) tentang
penetapan kadar sefadroksil secara spektrofotometri visibel menggunakan pereaksi
etilasetoasetat dan formalin, penelitian Rofie (2005) tentang penetapan kadar
sefadroksil secara spektrofotometri ultraviolet menggunakan pereaksi etilasetoasetat
dan asetaldehid, penelitian Mirmayanti (2007) tentang penetapan kadar sefadroksil
secara spektrofotometri visibel menggunakan pereaksi asetilaseton dan formalin, dan
penelitian Roosita (2007) tentang penetapan kadar ampisilin secara spektrofotometri
visibel menggunakan pereaksi asetilaseton dan formalin.
3. Manfaat penelitian
Penelitian ini diharapkan akan memberikan manfaat untuk pengembangan
metode analisis yang mudah, murah, sederhana, sensitif, serta memiliki akurasi,
presisi, dan linearitas yang baik untuk menetapkan kadar amoksisilin.
B. Tujuan Penelitian
1. untuk mengetahui apakah metode spektrofotometri visibel untuk penetapan kadar

amoksisilin menggunakan pereaksi asetilaseton dan formalin memenuhi
parameter validasi metode analisis yang meliputi akurasi, presisi, dan linearitas.
2. untuk mengetahui apakah metode spektrofotometri visibel untuk penetapan kadar
amoksisilin menggunakan pereaksi asetilaseton dan formalin dapat diaplikasikan
pada sediaan tablet amoksisilin.
BAB II
PENELAAHAN PUSTAKA
A. Amoksisilin
Amoksisilin (gambar 2) adalah antibiotik golongan -laktam turunan
aminopenisilin yang bersifat bakterisid, bekerja dengan menghambat sintesis dinding
sel bakteri (Petri, 2001). Tanpa adanya dinding sel, bakteri tidak dapat bertahan
terhadap pengaruh luar. Selain itu, kerusakan membran dapat mengganggu
pertukaran zat aktif yang penting untuk kehidupan bakteri (Wattimena dkk., 1997).
Antibiotik ini mempunyai spektrum kerja yang luas, dapat mengalami absorpsi cepat
dan sempurna dari saluran pencernaan, serta tahan dalam suasana asam sehingga
dapat diberikan secara oral (Petri, 2001).
Amoksisilin berupa serbuk hablur, putih, praktis tidak berbau. Amoksisilin
sukar
larut
dalam air
dan
metanol, tidak
larut
dalam benzen,
dalam
karbontetraklorida, dan dalam kloroform (Anonim, 1995). Larutan yang mengandung

amoksisilin 2 mg/ml mempunyai pH antara 3,5 sampai 6,0 (Anonim, 2005). Baku
pembanding yang digunakan adalah amoksisilin Baku Pembanding Farmakope
Indonesia (BPFI), tidak boleh dikeringkan sebelum digunakan. Amoksisilin harus
disimpan dalam wadah tertutup rapat pada suhu kamar terkendali (Anonim, 1995).
Tablet amoksisilin mengandung tidak kurang dari 90,0% dan tidak lebih
dari 120,0% C16H19N3O5S jumlah yang tertera pada etiket. Tablet amoksisilin harus
disimpan dalam wadah tertutup rapat pada suhu kamar terkendali (Anonim, 2005).
Amoksisilin dapat ditetapkan kadarnya dengan berbagai cara, antara lain
(Bird, 1994):
1. Metode titrimetri yang meliputi iodometri dan potensiometri. Pada penetapan

kadar menggunakan kedua metode tersebut, amoksisilin harus dihidrolisis
terlebih dahulu menjadi asam penisiloat. Selanjutnya, pada metode iodometri
hasil hidrolisis tersebut akan bereaksi dengan iodium atau kalium iodat,
sedangkan pada metode potensiometri dengan litium-metoksid, asam perklorat,
merkuri nitrat, atau kupri sulfat.
2. Metode spektrofotometri yang meliputi spektrofotometri ultraviolet dan visibel.
Pada penetapan kadar menggunakan metode spektrofotometri ultraviolet,
amoksisilin harus diderivatisasi agar memberikan serapan yang cukup.
Sementara itu, pada metode spktrofotometri visibel amoksisilin akan bereaksi
dengan suatu senyawa membentuk warna yang kemudian diukur serapannya pada
daerah cahaya tampak. Salah satu contohnya adalah reaksi antara gugus karbonil
pada cincin -laktam amoksisilin dengan hidroksilamin dan ion ferri membentuk
kompleks warna ungu yang kemudian diukur serapannya pada panjang
gelombang 480 nm.
3. Metode kromatografi yang meliputi kromatografi lapis tipis, kromatografi cair
kinerja tinggi menggunakan fase gerak campuran larutan kalium fosfat dalam air
dan asetonitril (96:4) dan fase diam oktadesilsilan, serta kromatografi gas.
Khusus untuk kromatografi gas, amoksisilin harus diderivatisasi terlebih dahulu
agar mudah menguap dan stabil pada suhu tinggi.
4. Metode lainnya seperti elektroforesis, polarografi, fluoresensi, mikrobiologi
(menggunakan Sarcina lutea atau Bacillus subtilis), dan Enzyme Linked
Immunosorbent Assay (ELISA).
Menurut Patel dkk. (1992), sefaleksin (gambar 1) dapat ditetapkan

kadarnya secara spektrofotometri visibel berdasarkan reaksi antara gugus amin
primernya dengan hasil kondensasi antara 2 mol asetilaseton dan 1 mol formalin.
Reaksi secara singkat dapat dilihat pada gambar 3 berikut:
H3COCCH2
H3C
H3C
CH2COCH3
C
CH
C
H2
CH3
C
O O
H3C
CH
HCHO
CH3
H
N
R
CH3
sefaleksin
kromofor
COOH
O
R=
CH3
N
N
H
Gambar 3. Reaksi antara sefaleksin dengan pereaksi asetilaseton-formalin

(Patel dkk., 1992)
Maka, amoksisilin (gambar 2) yang juga memiliki gugus amin primer diharapkan
dapat ditetapkan kadarnya dengan cara tersebut.
B. Asetilaseton
Asetilaseton (gambar 4) atau CH3.CO.CH2.CO.CH3 (BM = 100,211)

merupakan cairan tidak berwarna atau kuning lemah, barbau harum, dan mudah
terbakar. Satu bagian asetilaseton larut dalam delapan bagian air, dapat campur
dengan alkohol, benzen, kloroform, eter, aseton, dan asam asetat glasial (Anonim,
1989). Asetilaseton mendidih pada suhu 138-139 oC (Anonim, 1995).
O
H3C
O
C
H2
CH3
Gambar 4. Struktur Asetilaseton
C. Formalin
Formalin merupakan larutan 37% uap formalin (gambar 5) atau HCHO
(BM = 30,03) di dalam air. Formalin berupa cairan jernih, tidak berwarna atau
hampir tidak berwarna, bau menusuk, serta memiliki uap yang merangsang selaput
lendir hidung dan tenggorokan. Jika disimpan di tempat dingin formalin akan
menjadi menjadi keruh. Formalin dapat bercampur dengan air, alkohol, dan aseton
(Anonim, 1989). Sebaiknya disimpan dalam wadah tertutup baik, terlindung dari
cahaya, pada suhu di atas 20o (Anonim, 1995).
O
H
Gambar 5. Struktur Formalin
D. Spektrofotometri UV-Vis
1. Definisi spektrofotometri UV-Vis

Spektrofotometri UV-Vis adalah anggota teknik spektroskopik yang
menggunakan sumber radiasi elektromagnetik ultraviolet dekat (190 380 nm) dan
sinar tampak (380 780 nm) dengan instrumen spektrofotometer. Spektrofotometri
UV-Vis melibatkan energi elektronik yang cukup besar pada molekul yang dianalisis
sehingga spektrofotometri UV-Vis lebih banyak dipakai untuk analisis kuantitatif
dibandingkan kualitatif (Mulja dan Suharman, 1995).
Secara umum, spektrofotometri UV-Vis terbagi menjadi dua metode, yaitu
direct spectrophotometry UV-Vis dan indirect spectrophotometry UV-Vis. Pada
direct spectrophotometry serapan energi cahaya didasarkan oleh ikatan rangkap
terkonjugasi pada senyawa tersebut. Sementara pada indirect spectrophotometry,
pengukuran serapan energi cahaya dapat dilakukan setelah senyawa mengalami
reaksi kimiawi atau modifikasi gugus kromofor (Schimer, 1982).
2. Konsep dasar radiasi elektromagnetik

Panjang gelombang cahaya ultraviolet ataupun sinar tampak yang diserap
suatu senyawa bergantung pada mudahnya terjadi promosi elektron pada senyawa
tersebut. Molekul-molekul yang memerlukan lebih banyak energi untuk promosi
elektron akan menyerap pada panjang gelombang yang lebih pendek. Molekul yang
memerlukan energi lebih sedikit akan menyerap pada panjang gelombang yang lebih
panjang (Fessenden dan Fessenden, 1994). Hal tersebut sesuai dengan teori yang
dikemukakan oleh Max Planck bahwa cahaya merupakan suatu paket energi diskret
yang disebut foton. Kuantitas energi yang diserap oleh suatu senyawa berbanding
terbalik dengan panjang gelombang radiasi. Rumusan energi sebuah foton

dinyatakan sebagai (Mulja dan Suharman, 1995):
E=h.v=h.
=h.c. v
Keterangan:
E
= energi yang diabsorpsi (J)
h
= konsatante Planck sebagai faktor pembanding
= 6,63 x 10-27 erg.detik atau 6,63 x 10-34 Joule detik
v
= frekuensi radiasi (Hz)
c
= kecepatan cahaya
= 3 x 1010 cm/detik
= panjang gelombang (cm)

v
= bilangan gelombang (cm-1)
3. Tipe transisi elektron
Suatu senyawa dapat menyerap radiasi dalam daerah UV-Vis karena
mempunyai elektron, baik berpasangan maupun sendiri, yang dapat dieksitasikan ke
tingkat energi yang lebih tinggi (Skoog, 1985).
Ada tiga macam distribusi elektron di dalam suatu senyawa organik secara
umum, yang selanjutnya dikenal sebagai orbital elektron pi (), sigma (), dan
elektron tidak berpasangan (n). Transisi yang dapat terjadi adalah (Skoog, 1985):
a. transisi *. Pada transisi tipe ini, suatu elektron di dalam orbital
molekul bonding akan dieksitasikan ke orbital anti bonding sehingga molekul berada
dalam bentuk excited state. Untuk mengeksitasikan elektron yang berada dalam
suatu ikatan kovalen tunggal terikat kuat (orbital ) diperlukan radiasi berenergi
tinggi atau panjang gelombang pendek. Oleh karena itu, serapan maksimum yang
disebabkan oleh transisi * tidak pernah teramati dalam daerah ultraviolet dekat.
Transisi * memberikan serapan maksimum pada daerah ultraviolet jauh.
b. transisi n *. Senyawa-senyawa jenuh yang mengandung atom-atom

dengan elektron-elektron tak berpasangan (elektron non bonding) mempunyai
kemampuan untuk mengadakan transisi n *. Pasangan elektron bebas tersebut
akan dieksitasikan ke tingkat energi yang lebih tinggi karena elektron non bonding
tidak terikat terlalu kuat seperti elektron bonding , sehingga serapannya terjadi pada
panjang gelombang yang lebih besar. Akibatnya, transisi ini memerlukan energi
yang lebih kecil daripada transisi * dan dapat disebabkan oleh radiasi di daerah
antara 150-250 nm, dengan kebanyakan puncak absorpsi tampak pada panjang
gelombang di bawah 200 nm.
c. transisi n * dan *. Umumnya penggunaan spektroskopi serapan
pada senyawa-senyawa organik didasarkan pada transisi elektron n dan ke *.
Energi yang dibutuhkan cukup rendah yaitu pada daerah sekitar 200-700 nm.
Diagram tingkat energi elektronik dapat dilihat pada gambar 6 berikut:
*
Anti bonding
Anti bonding
Non bonding
Bonding
Bonding
Gambar 6. Diagram tingkat energi elektronik
4. Interaksi molekul dengan radiasi elektromagnetik

Radiasi elektromagnetik dapat berinteraksi dengan molekul dalam berbagai
cara. Jika interaksinya menghasilkan transfer energi dari sumber radiasi kepada
molekul maka dinamakan absorpsi (Pecsok dkk., 1976). Agar dapat mengabsorpsi
radiasi UV-Vis, suatu molekul membutuhkan gugus yang dinamakan kromofor yang
merupakan suatu gugus kovalen tak jenuh terkonjugasi yang bertanggungjawab
untuk absorpsi radiasi UV-Vis (Fell, 1986). Selain itu, dikenal pula auksokrom yang
merupakan gugus yang mengandung heteroatom yang memberikan transisi n *.
Terikatnya gugus auksokrom oleh gugus kromofor secara langsung akan
mengakibatkan pergeseran pita absorpsi menuju ke yang lebih panjang, disertai
peningkatan atau penurunan intensitas (Mulja dan Suharman, 1995).
5. Analisis kuantitatif secara spektrofotometri UV-Vis

Analisis kuantitatif zat tunggal dilakukan dengan mengukur nilai serapan
(A) pada panjang gelombang yang memberikan serapan maksimum. Nilai serapan
(A) digambarkan oleh suatu hukum yang disebut hukum Lambert-Beer.
a. Hukum
Lambert
menyatakan
bahwa
intensitas
cahaya
yang
ditransmisikan menurun secara eksponensial sesuai dengan kenaikan tebal zat

penyerap.
b. Hukum Beer menyatakan bahwa intensitas cahaya yang ditransmisikan
menurun secara eksponensial sesuai dengan kenaikan konsentrasi zat penyerap.
Kombinasi kedua hukum tersebut menghasilkan hukum Lambert-Beer yang
menyatakan hubungan antara logaritma intensitas sinar yang masuk dengan sinar
yang keluar sebagai fungsi tebal zat penyerap dan konsentrasi zat penyerap,
dirumuskan sebagai berikut:
Log Io/I = a.c.b = A
Dengan:
a = daya serap
c = konsentrasi larutan
b = tebal kuvet
A = serapan
Io = intensitas energi yang mencapai cuplikan
I = intensitas pancaran yang dikeluarkan dari cuplikan.
Nilai a atau daya serap menggambarkan nilai serapan yang spesifik dan
sering disebut
1%
1cm
yang artinya serapan larutan dengan konsentrasi 1% b/v dengan
pelarut tertentu pada kuvet setebal 1 cm adalah suatu angka yang spesifik (Fell,
1986).
6. Serapan suatu larutan

Serapan adalah karakteristik untuk suatu larutan senyawa pada suatu
panjang gelombang. Hubungan serapan dengan daya serap molar digambarkan
dengan rumus = a . M, dimana M adalah berat molekul senyawa (Silverstein dkk.,
1991).
Penyinaran senyawa organik tidak selalu diikuti oleh eksitasi elektron baik
dari orbital ikatan atau pasangan elektron bebas ke orbital non ikatan. Pernyataan ini
dapat dituang dalam persamaan berikut ini:
= 0,87 x 1020 x P x a
keterangan:
P
= probabilitas transisi elektron dengan nilai antara 0-1
a
= panjang kromofor
Kromofor dengan panjang gelombang 1 nm akan memberikan nilai daya
serap molar () sebesar 105. Pada prakteknya kromofor yang menyerap cahaya
dengan diikuti terjadinya transisi penuh akan memiliki nilai daya serap molar ()
lebih dari 10.000, sedang yang probabilitas transisinya rendah akan memiliki daya
serap molar () yang kurang dari 1000 (Williams dan Fleming, 1980). Nilai serapan
jenis adalah karakteristik penyerapan molekul pada pelarut dan panjang gelombang
tertentu, dan tidak tergantung konsentrasi serta lamanya radiasi (Pecsok dkk., 1976).
7. Kesalahan fotometrik
Ketepatan dan ketelitian pembacaan intensitas sinar yang sampai pada
detektor digambarkan sebagai nilai kesalahan fotometrik. Ketepatan fotometrik
berkurang pada nilai serapan rendah maupun pada nilai serapan tinggi. Pada serapan
yang rendah, intensitas sinar yang ditransmisikan baik ada maupun tidak ada sampel
hampir sama sehingga kemungkinan terjadinya kesalahan sangat besar. Hal tersebut
karena ada keterbatasan kepekaan detektor. Pada serapan yang tinggi, intensitas sinar
yang sampai pada detektor sangat rendah sehingga tidak dapat diukur dengan tepat
(Pecsok dkk., 1976).
Untuk pembacaan serapan (A) atau transmitan (T) pada daerah terbatas,
kesalahan penentuan kadar hasil analisis dinyatakan sebagai:
C
0,4343 T
x
=
C
log T
T
T adalah nilai rentang skala transmitan terkecil dari alat yang masih dapat terbaca
pada analisis dengan metode spektrofotometri UV-Vis. Nilai T untuk setiap

spektrofotometer UV-Vis biasanya bervariasi 0,2-1% dan selalu dicantumkan
sebagai spesifikasi instrumen. Dari rumus tersebut di atas dapat diperhitungkan
kesalahan pembacaan A atau T pada analisis dengan metode spektrofotometer UVVis. Pembacaan A (0,2-0,8) atau %T (15-65%) akan memberikan prosentase
kesalahan analisis yang dapat diterima yaitu sebesar 0,5-1% untuk T = 1 (Mulja
dan Suharman, 1995).
Apabila pengukuran dilakukan di luar rentang A (0,2-0,8) atau %T (1565%), maka sebaiknya dalam pengukuran digunakan panjang gelombang yang paling
tepat dan menggunakan sel dengan pencahayaan paling tepat. Hal ini untuk
menghindari besarnya kesalahan pembacaan serapan, yang berakibat pada kesalahan
penetapan kadar (Pecsok, 1976).
8. Syarat-syarat penggunaan Hukum Beer (Skoog, 1985)
a. syarat konsentrasi.
Penyimpangan Hukum Beer dapat disebabkan dari nilai yang
tergantung dari indeks bias larutan. Hubungan tersebut dapat dilihat dari
persamaan berikut (Willard dkk., 1988):
Besar penyimpangan =
.n
(n + 2) 2
2
Keterangan:
= daya serap molar
n = indeks bias larutan
Pada konsentrasi < 0,01 M, indeks bias larutan relatif konstan tetapi
pada konsentrasi tinggi indeks bias ternyata berubah sehingga perlu dikoreksi
agar diperoleh nilai serapan yang sesuai.
Pada konsentrasi tinggi, jarak rata-rata diantara zat-zat pengabsorpsi
menjadi kecil sehingga masing-masing zat mempengaruhi distribusi muatan
tetangganya. Interaksi ini dapat mengubah kemampuan untuk mengabsorpsi
cahaya pada panjang gelombang yang diberikan. Oleh karena interaksi ini
bergantung
pada
konsentrasi,
maka
peristiwa
ini
menyebabkan
penyimpangan dari kelinieran hubungan antara absorpsi dengan konsentrasi.

Pengaruh serupa kadang-kadang terjadi di dalam larutan yang mengandung
konsentrasi zat pengabsorpsi yang rendah tetapi konsentrasi zat nonpengabsorpsinya tinggi, terutama elektrolit. Interaksi elektrostatis ion-ion
yang berdekatan dengan zat pengabsorpsi akan mempengaruhi nilai
absorptivitas molar. Pengaruh ini dapat dihindari dengan cara pengenceran.
b. syarat kimia.
Zat pengabsorpsi tidak boleh terdisosiasi, berasosiasi, atau bereaksi
dengan pelarut menghasilkan suatu produk pengabsorpsi spektrum yang
berbeda dari zat yang dianalisis.
c. syarat cahaya.
Hukum Beer hanya berlaku untuk cahaya yang betul-betul
monokromatik (cahaya yang mempunyai satu macam panjang gelombang).
d. syarat kejernihan.
Kekeruhan larutan misalnya yang disebabkan oleh partikel-partikel
koloid akan menyebabkan penyimpangan hukum Beer. Sebagian cahaya akan
dihamburkan oleh partikel-partikel koloid akibatnya kekuatan cahaya yang
diabsorpsi berkurang dari yang seharusnya.
9. Penggunaan spektrofotometri UV-Vis dalam metode analisis
Spektrofotometri UV-Vis dapat digunakan untuk analisis kuantitatif dan

kualitatif suatu senyawa. Analisis kuantitatif dengan metode spektrofotometri UVVis dapat digolongkan menjadi tiga macam (Mulja dan Suharman, 1995) yaitu:
a. analisis kuantitatif zat tunggal (analisis satu komponen)

b. analisis kuantitatif campuran dua macam zat (analisis dua komponen)
c. analisis kuantitatif campuran tiga macam zat atau lebih (analisis multi
komponen).
Analisis kualitatif dengan metode spektrofotometri UV-Vis hanya dipakai
untuk data sekunder atau data pendukung. Pada analisis kualitatif dengan metode
spektrofotometri UV-Vis yang dapat ditentukan ada dua yaitu:
a. pemeriksaan kemurnian spektrum UV-Vis
b. penentuan panjang gelombang serapan maksimum.
(Mulja dan Suharman, 1995)
E. Pengembangan Metode Spektrofotometri
Salah satu bentuk pengembangan metode spektrofotometri adalah dengan

reaksi
pembentukan
warna.
Reaksi
tersebut
umumnya
dilakukan
dengan
memodifikasi kromofor dari suatu molekul sehingga dapat dideteksi di daerah visibel
(Fell, 1986). Kadarnya kemudian ditetapkan dengan membandingkan serapannya
dengan kurva baku yang dibuat menggunakan baku pembanding (Rooth dan
Blaschke, 1994).
Keuntungan utama reaksi pembentukan warna adalah bahwa metode ini
dapat menambah sensitivitas dan selektivitas spektroskopi absorpsi (Fell, 1986).
Kriteria untuk reaksi pembentukan warna yang baik adalah sebagai berikut
(Vogel, 1978):
1. kespesifikan reaksi warna
Sangat sedikit reaksi yang spesifik untuk zat-zat tertentu. Oleh karena itu,
harus diupayakan agar reaksi yang terjadi spesifik untuk zat tertentu. Caranya antara
lain mereaksikan zat dengan reagen yang spesifik, mengubah kondisi percobaan, dan
mengendalikan pH.
2. kesebandingan antara warna dan konsentrasi
Intensitas warna larutan hendaknya meningkat secara linier dengan naiknya
konsentrasi zat yang akan ditetapkan.
3. kestabilan warna
Warna yang dihasilkan hendaknya cukup stabil dalam waktu tertentu untuk
memungkinkan pembacaan yang tepat.
4. reprodusibilitas
Hasil yang didapat harus dapat diulang jika dilakukan pada kondisi yang
sama.
5. kejernihan larutan
Larutan harus bebas dari endapan agar tidak menghamburkan ataupun
menyerap cahaya.
6. kepekaan tinggi
Diharapkan reaksi warna sangat peka bahkan untuk zat dalam jumlah kecil.
F. Validasi, Kesalahan, dan Parameter Metode Analisis
1. Validasi metode analisis
Validasi metode analisis diartikan sebagai suatu prosedur yang digunakan

untuk membuktikan apakah suatu metode analisis memenuhi persyaratan yang
ditentukan (Anonim, 2005).
Pedoman-pedoman validasi metode analisis didukung oleh parameterparameter sebagai berikut :

a.
ketepatan. Ketepatan (accuracy) berarti kedekatan hasil analisis yang
diperoleh dengan menggunakan metode tersebut terhadap nilai sebenarnya. Accuracy

dinyatakan dengan persen perolehan kembali (recovery) dari penambahan zat yang
diketahui kadarnya (Anonim, 2005). Untuk kadar analit 10% biasanya disepakati
perolehan kembali harus masuk dalam rentang 98-102% (Yuwono dan Indrayanto,
2005).
b.
ketelitian. Ketelitian (precision) berarti ukuran kedekatan masing-
masing hasil analisis dari beberapa pengukuran di bawah kondisi analisis yang sama.
Ketelitian biasanya dinyatakan dengan standar deviasi atau relatif standar deviasi
(koefisien variasi) (Anonim, 2005).
Presisi dapat dibedakan menjadi tiga, yaitu (Anonim, 2005):
1). repeatability adalah presisi yang dihasilkan dari pengujian suatu metode yang
dilakukan oleh individu yang sama dengan menggunakan prosedur yang sama
dan dikerjakan dalam waktu yang singkat.
2). intermediate precission adalah presisi yang dihasilkan dari pengujian suatu
metode yang dilakukan oleh individu yang berbeda dengan menggunakan
prosedur dan instrumen yang sama.
3). reproducibility adalah presisi yang dihasilkan dari pengujian suatu metode
analisis yang dikerjakan pada laboratorium yang berbeda.
Untuk kadar analit 10% biasanya disepakati koefisien variasi tidak boleh
lebih dari 2,7% (Yuwono dan Indrayanto, 2005).
c.
limit of detection (LOD). Limit of Detection adalah kadar terkecil
analit yang dapat terdeteksi tetapi tidak perlu secara kuantitatif. Penentuan LOD
dilakukan dengan cara membandingkan respon pengukuran analit dengan blangko.
Rasio signal-to-noise yang diterima untuk LOD adalah 2:1 atau 3:1 (Anonim, 2005).
d.
limit of quantitation (LOQ). Limit of Quantitation adalah konsentrasi
terkecil analit dalam sampel yang dapat diukur dengan ketelitian dan ketepatan yang
diterima di bawah kondisi percobaan yang ditetapkan metode tersebut. Rasio signalto-noise yang diterima untuk LOQ adalah 10:1 (Anonim, 2005).
e.
spesifisitas. Spesifisitas merupakan kemampuan pengukuran analit
secara akurat dan spesifik dengan kehadiran komponen lain (zat aktif, eksipien,
pengotor, dan produk degradasi) dalam matriks sampel (Anonim, 2005).
f.
linearity. Linearity adalah kemampuan suatu metode analisis untuk
secara langsung atau melalui perhitungan matematika mendapatkan hasil uji yang
sebanding dengan kadar analit dalam sampel (Anonim, 2005).
g.
range. Range suatu metode analisis diartikan sebagai interval antara
kadar terendah sampai tertinggi analit yang dapat diukur secara kuantitatif
menggunakan metode analisis tertentu dan menghasilkan ketelitian dan ketepatan,
dan linearitas yang mencukupi (Anonim, 2005).
2. Kesalahan metode analisis
Ada dua macam kesalahan pada analisis kimia menurut Mulja dan
Suharman (1995) yaitu:
a. Kesalahan sistematik. Kesalahan ini merupakan hasil analisis yang

menyimpang secara tetap dari nilai sebenarnya karena proses pelaksanaan prosedur
analisis. Kesalahan sistematik ini dapat diketahui sebabnya sehingga dapat
dikendalikan oleh peneliti. Beberapa cara untuk memperkecil kesalahan ini antara
lain dengan melakukan kalibrasi instrumen secara berkala, pemilihan metode dan
prosedur standar dari badan resmi, pemakaian bahan kimia dengan derajat untuk
analisis, serta peningkatan pengetahuan dari peneliti yang bekerja di laboratorium
analisis.
b. Kesalahan tidak sistematik. Kesalahan ini disebut juga penyimpangan
tidak tetap dari hasil penentuan kadar menggunakan instrumen yang disebabkan
fluktuasi dari instrumen yang dipakai (derau). Penyebab kesalahan ini tidak
diketahui. Salah satu cara untuk mengatasi kesalahan ini adalah dengan
menggunakan instrumen dengan kualitas yang baik.
3. Parameter-parameter validasi metode analisis
Uji yang paling umum dan prosedur pengukuran dapat dibagi menjadi
empat kategori, yaitu (Anonim, 2005):
a. Kategori I. Kategori ini meliputi metode analisis untuk kuantifikasi
komponen terbesar dalam obat atau zat aktif (termasuk pengawet) dalam sediaan.
b. Kategori II. Kategori ini meliputi metode analisis untuk penentuan

pengotor dalam obat atau senyawa degradasi dalam sediaan, termasuk pengukuran
kuantitatif dan uji batas.
c. Kategori III. Kategori ini meliputi metode analisis untuk penentuan
sifat-sifat fisik lain dari obat seperti uji disolusi dan uji pelepasan.
d. Kategori IV. Kategori ini meliputi metode analisis untuk uji identifikasi.
Parameter-parameter yang diperlukan untuk metode analisis dapat dilihat
pada tabel I berikut:
Tabel I. Parameter analisis yang diperlukan untuk kesahihan pengukuran
Parameter
analisis
Kategori I
Accuracy
Precision
Specificity
LOD
LOQ
Linearity
Range
Ya
Ya
Ya
Tidak
Tidak
Ya
Ya
Kategori II
Kuantitatif
Uji batas
Ya
Ya
Ya
Tidak
Ya
Ya
Ya
*
Tidak
Ya
Ya
Tidak
Tidak
*
Kategori III
Kategori IV
*
Ya
*
*
*
*
*
Tidak
Tidak
Ya
Tidak
Tidak
Tidak
Tidak
* = mungkin diperlukan tergantung dari jenis uji
(Anonim, 2005)
G. Landasan Teori
Amoksisilin memiliki kemiripan struktur dengan sefaleksin. Penetapan

kadar amoksisilin diharapkan dapat dilakukan secara spektrofotometri visibel
menggunakan pereaksi asetilaseton dan formalin, seperti yang pernah dilkakukan
pada sefaleksin. Prinsip penetapan kadar tersebut adalah berdasarkan reaksi antara
amoksisilin dengan hasil kondensasi antara satu mol formalin dan dua mol
asetilaseton membentuk warna kuning yang intensitasnya kemudian diukur
menggunakan spektrofotometri visibel pada panjang gelombang serapan maksimum.
H. Hipotesis
Amoksisilin dapat ditetapkan kadarnya secara spektrofotometer visibel

dengan
menggunakan
pereaksi
asetilaseton
dan
formalin.
Metode
yang
dikembangkan tersebut memenuhi parameter validasi yaitu akurasi, presisi, dan

linearitas serta dapat diaplikasikan pada sediaan tablet amoksisilin.
BAB III
METODOLOGI PENELITIAN
A. Jenis dan Rancangan Penelitian
Penelitian ini merupakan jenis penelitian non eksperimental dengan

rancangan penelitian deskriptif, sebab pada penelitian ini tidak dilakukan manipulasi
terhadap subjek uji. Penelitian hanya mendeskripsikan keadaan yang ada.
B. Definisi Operasional
1. Validasi metode analisis merupakan serangkaian prosedur yang digunakan untuk

membuktikan apakah suatu metode analisis memenuhi persyaratan yang
ditentukan, meliputi ketepatan, ketelitian, dan linearitas.
2. Spektrofotometri visibel adalah anggota teknik spektroskopik yang menggunakan
sumber radiasi elektromagnetik sinar tampak (380 780 nm) dengan instrumen
spektrofotometer.
3. Kadar amoksisilin ditetapkan dalam satuan mg/tablet.
C. Alat-alat Penelitian
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah spektrofotometer

ultraviolet visibel (Spectronic Genesys 5, MILTON ROY), pH meter (Hanna
Instrument pH 209), neraca analitik (Precisa 125 A.SCS Swiss Quality), penangas air,
termometer, kertas saring, dan alat-alat gelas yang lazim.
D. Bahan-bahan Penelitian
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini meliputi tablet amoksisilin 500
mg dari suatu pabrik (kode=AM), standar amoksisilin (Brataco Chemika).
Asetilaseton, formalin, asam asetat glasial, natrium asetat (p.a., E. Merck), dan
akuades (Fakultas Farmasi UGM).
E. Tata Cara Penelitian

1. Pembuatan larutan uji
a. pembuatan larutan natrium asetat 0,2 M.

Sebanyak 16,4 g natrium asetat ditimbang seksama, dimasukkan ke dalam
labu ukur 1 liter kemudian dilarutkan dengan akuades sampai tanda.
b. pembuatan larutan asam asetat 0,2 M.
Sebanyak 12,5 ml asam asetat 96% dipipet, kemudian diencerkan dengan
akuades sampai volume 1,0 liter.
c. pembuatan larutan NaOH 1M.
Ditimbang seksama 0,4 g NaOH kemudian dilarutkan dalam akuades bebas
CO2 sampai volume 10,0 ml.
d. pembuatan larutan HCl 2M.
Sebanyak 17,0 ml asam klorida pekat dipipet, kemudian diencerkan dengan
akuades sampai volume 100,0 ml.
e. pembuatan larutan pereaksi (Patel dkk., 1992).
Sebanyak 16,0 ml natrium asetat 0,2 M dan 34,0 ml asam asetat 0,2 M
dicampur dengan 7,8 ml asetilaseton dan 15,0 ml formalin. Panaskan 5 menit
di atas waterbath pada suhu 80 oC, dinginkan, pH diatur sampai (4,3),
kemudian diencerkan dengan akuades sampai 100,0 ml.
f. pembuatan larutan baku amoksisilin.
Ditimbang seksama 209,7 mg baku amoksisilin kemudian dilarutkan dengan

akuades sampai 100,0 ml hingga diperoleh konsentrasi 0,005 M.
2. Optimasi penetapan kadar amoksisilin (Patel dkk., 1992)
Pada penelitian ini dilakukan optimasi berbagai kondisi percobaan yaitu pH

pereaksi, volume pereaksi, operating time, dan panjang gelombang serapan
maksimum amoksisilin.
a. penentuan operating time.
Sebanyak 2,0 ml larutan baku amoksisilin 0,005 M dimasukkan ke
dalam labu ukur 25 ml, ditambahkan larutan pereaksi pH 4 sebanyak 4
ml. Diencerkan dengan akuades sampai tanda. Diukur serapan larutan
pada panjang gelombang 400 nm, sampai diperoleh serapan yang stabil
pada rentang waktu tertentu. Dilakukan juga pengukuran blangko.
b. penetapan nilai pH yang menghasilkan serapan maksimum.
Nilai pH larutan pereaksi dibuat bervariasi, yaitu pH 3, 4, 5, 6, dan 7.
Untuk masing-masing nilai pH dipipet sebanyak 4 ml, dimasukkan ke
dalam labu ukur 25 ml, ditambahkan 2,0 ml larutan baku amoksisilin
0,005 M, didiamkan selama operating time pada suhu 35 oC kemudian
encerkan dengan akuades sampai tanda. Diukur serapan larutan pada
panjang gelombang 400 nm. Dilakukan juga pengukuran blangko. Nilai
pH optimum adalah pH larutan pereaksi yang menghasilkan serapan
paling besar.
c. penetapan volume larutan pereksi yang menghasilkan serapan
maksimum.
Dari larutan pereaksi dengan pH optimum dipipet masing-masing 1, 2,

3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, dan 10 ml, dimasukkan ke dalam labu ukur 25 ml,
ditambahkan 2,0 ml larutan baku amoksisilin 0,005 M, didiamkan
selama operating time pada suhu 35 oC, dan diencerkan dengan akuades
sampai tanda. Diukur serapan larutan pada panjang gelombang 400 nm.
Dilakukan juga pengukuran blangko. Volume optimum adalah volume
larutan pereaksi yang menghasilkan serapan paling besar.
d. Penentuan panjang gelombang serapan maksimum.
Sebanyak 1,0; 1,4; dan 1,8 ml larutan baku amoksisilin 0,005 M
masing-masing dimasukkan ke dalam labu ukur 25 ml, ditambahkan
larutan pereaksi dengan volume dan pH hasil optimasi. Diamkan selama
operating time pada suhu 35 oC . Diencerkan dengan akuades sampai
tanda. Larutan tersebut kemudian discan antara panjang gelombang 380
hingga 450 nm. Dilakukan juga pengukuran blangko. Panjang
gelombang serapan maksimum adalah panjang gelombang yang
memberikan serapan maksimum.
3. Pembuatan kurva baku (Patel dkk., 1992)
Larutan baku amoksisilin dipipet sebanyak 0,8; 1,0; 1,2; 1,4; dan 1,6 ml,
masing-masing dimasukkan ke dalam labu ukur 25 ml, ditambahkan pereaksi dengan
pH dan volume hasil optimasi. Didiamkan selama operating time pada suhu 35 oC,
diencerkan dengan akuades sampai tanda. Kemudian diukur serapannya pada
panjang gelombang serapan maksimum. Dilakukan juga pengukuran blangko. Dibuat
kurva hubungan kadar vs serapan dan ditentukan persamaan regresi linier serta
koefisien korelasinya.
4. Aplikasi metode penetapan kadar amoksisilin pada tablet AM (Patel dkk.,

1992)
a. pengambilan sampel.
Sampel yang digunakan terdiri dari 1 merek tablet yang mengandung 500 mg
amoksisilin yang beredar di pasaran (tablet AM). Tablet amoksisilin yang
dipilih adalah tablet dengan nomor batch yang sama.
b. penentuan bobot rata-rata tablet.
Ditimbang 20 tablet satu persatu, kemudian dihitung bobot rata-rata tiap
tablet.
c. penetapan kadar amoksisilin dalam tablet AM (Patel dkk., 1992).
Ditimbang seksama sejumlah serbuk dari 20 tablet yang setara dengan 209,7
mg amoksisilin. Dimasukkan ke dalam labu ukur 100 ml, diencerkan dengan
akuades sampai tanda. Dipipet 1,0 ml, dimasukkan ke dalam labu ukur 25 ml,
ditambahkan pereaksi dengan pH dan volume hasil optimasi. Didiamkan
selama operating time pada suhu 35 oC, diencerkan dengan akuades sampai
tanda. Kemudian diukur serapannya pada panjang gelombang serapan
maksimum Dilakukan juga pengukuran blangko
5. Validasi metode
a. akurasi (dinyatakan dengan perolehan kembali).
Ditimbang seksama sejumlah serbuk dari 20 tablet yang setara dengan 104,85
mg amoksisilin dan 104,85 mg baku amoksisilin. Dimasukkan ke dalam labu
ukur 100 ml, diencerkan dengan akuades sampai tanda. Dipipet 1,0 ml,
dimasukkan ke dalam labu ukur 25 ml, ditambahkan pereaksi dengan pH dan
volume hasil optimasi. Didiamkan selama operating time pada suhu 35 oC,
diencerkan dengan akuades sampai tanda. Kemudian diukur serapannya pada
panjang gelombang serapan maksimum. Dilakukan juga pengukuran blangko.
Setelah itu dihitung jumlah perolehan kembali sampel.
b. presisi (dinyatakan dengan koefisien variasi).
Penetapan koefisien variasi dilakukan dengan menggunakan data kadar
amoksisilin dalam tablet AM.
c. linearitas (dinyatakan dengan koefisien korelasi).
Penetapan koefisen korelasi dilakukan dengan menggunakan koefisien
korelasi korva baku amoksisilin.
F. Analisis Hasil
Analisis hasil penelitian berupa analisis validitas metode yang meliputi

linearitas dengan taraf kepercayaan 99%, akurasi, dan presisi. Selain itu, dilakukan
juga analisis kuantitatif berupa kadar amoksisilin yang dihitung dengan
menggunakan persamaan kurva baku.
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Pembuatan Larutan Baku Amoksisilin
Larutan baku yang digunakan dalam penelitian ini adalah larutan baku
amoksisilin 0,005 M dalam akuades. Larutan ini dibuat dengan cara melarutkan
209,7 mg baku amoksisilin dalam 100,0 ml akuades. Pelarut yang digunakan adalah
akuades karena amoksisilin larut dalam akuades (Anonim, 1995).
B. Penetapan Waktu Reaksi dan Operating Time (OT)
Waktu reaksi merupakan waktu yang dibutuhkan agar reaksi berlangsung

sempurna, sehingga pada pengukuran yang terbaca adalah semua amoksisilin yang
telah bereaksi.
Pereaksi yang digunakan dalam penelitian ini adalah pereaksi campuran
asetilaseton-formalin. Pereaksi tersebut dibuat dengan cara mencampurkan
asetilaseton dan formalin di dalam bufer asetat yang terdiri dari asam asetat dan
natrium asetat. Bufer asetat berfungsi menjaga pH pereaksi agar stabil di sekitar pH
4. Setelah dicampur, larutan dipanaskan selama 5 menit pada suhu 80 oC untuk
mempercepat reaksi. Kemudian larutan didinginkan, dan dilakukan penyesuaian pH
dengan menggunakan larutan HCl atau larutan NaOH.
Seperti yang disusulkan oleh Rofie (2005), mekanisme reaksi pembentukan
pereaksi asetilaseton-formalin dapat dilihat pada gambar 7 berikut:
O
H 3C
C
H2
CH3
H3C
OH
-H
H
C
CH3
asetilaseton
O
H 3C
OH
C
H
CH3
enol asetilaseton
O
H3C
O
O
C
CH
C
H3C
CH2
CH2
karbonil tak jenuh a,
- H2O
CH3
-H
H3C
C
C
-hidroksi karbonil
HC
CH2
formalin
H3C
H3C
enol asetilaseton
H3C
C
H
H3C
OH
C
H2
C
CH3
enol asetilaseton
H3C
CH
O O
CH3
CH3
H3C
p.s.
C
CH
C
H2
CH
C
H3C
CH3
C
O
CH3
3,5-diasetil-2,6-heptanadion
Gambar 7. Usulan mekanisme reaksi pembuatan pereaksi asetilaseton-formalin
Setelah selesai dibuat, pereaksi asetilaseton-formalin tersebut kemudian

ditambahkan ke dalam sejumlah larutan baku amoksisilin, lalu didiamkan pada suhu
35 oC selama waktu tertentu hingga terbentuk warna kuning yang stabil. Mekanisme
reaksi yang diusulkan dapat dilihat pada gambar 8 di bawah ini:
H3 C
C
CH
C
H2
C
H3 C
CH3
CH
O O
H3C
C
CH
CH3
H3 C
CH
C
H2
H3C
C
NH
H
COOH
O
R = HO
N
N
H
OH
Amoksisilin
CH3
CH3
S
CH3
H3C
H C
p.s.
CH
C
C
H2
-H2O
CH
C
H2
-H
H3C
H3C
H3C
CH3
H3C
O
HN
OH2
CH3
CH3
H3C
O
H3C
CH3
H2
C
C
CH
CH
C
H2
H
O
C
C
C
C
CH3
H2C
C
N
CH3
O
H
H3C
p.s.
H3C
H2
C
CH3
-H2O
-H
N
OH2
R
CH3
CH3
R
CH3
kromofor
Gambar 8. Usulan mekanisme reaksi antara pereaksi asetilaseton-formalin dengan amoksisilin
Hasil penetapan waktu reaksi dapat dilihat pada tabel II berikut:

Tabel II. Hasil penetapan waktu reaksi
Waktu Reaksi
(menit)
Rep. 1
Serapan*
Rep. 2
Rep. 3
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
70
75
80
0,530
0,581
0,625
0,662
0,680
0,695
0,724
0,739
0,742
0,748
0,744
0,745
0,749
0,538
0,585
0,598
0,654
0,667
0,686
0,695
0,701
0,703
0,716
0,724
0,729
0,724
0,525
0,574
0,630
0,669
0,697
0,714
0,732
0,748
0,746
0,762
0,764
0,770
0,763
*) Serapan senyawa hasil reaksi antara amoksisilin dengan asetilaseton dan formalin
Dari penelitian didapat bahwa reaksi stabil setelah menit ke-50, berarti
pembentukan reaksi warna telah selesai pada menit ke-50 tersebut. Selanjutnya,
untuk mengetahui stabilitasnya , dilakukan penetapan OT yang merupakan rentang

waktu saat suatu senyawa memberikan serapan yang stabil.
Setelah didiamkan selama 50 menit pada suhu 35 oC larutan dibaca
serapannya menggunakan spektrofotometer selama 30 menit. Ternyata selama itu
serapan larutan masih stabil. Hasilnya dapat dilihat pada gambar 9 berikut:
Gambar 9. Hasil penetapan operating time
C. Penetapan pH Optimum Pereaksi
pH optimum pereaksi adalah pH larutan pereaksi yang memberikan serapan

maksimum. Penetapan pH Optimum pereaksi bertujuan untuk menentukan pH
dimana reaksi antara amoksisilin dengan pereaksi dapat berlangsung secara
optimum. Hal tersebut karena reaksi antara amoksisilin dengan pereaksi asetilasetonformalin ini adalah reaksi yang sangat tergantung pada pH. Pada tahap pertama
terjadi reaksi adisi amina pada gugus karbonil (gambar 8). Bila larutan terlalu asam,
akan terjadi reaksi sebagai berikut:
RNH2 (pada amoksisilin) + H+
RNH3+
Akibatnya, konsentrasi amina menjadi menjadi kecil sekali bahkan dapat diabaikan.
Sehingga reaksi akan menjadi lambat. Tahap kedua dalam reaksi itu adalah eliminasi
gugus H2O (gambar 8). Berbeda dengan reaksi tahap pertama, laju reaksi ini akan
bertambah dengan meningkatnya keasaman. Jika suasana larutan terlalu basa, gugus
-OH2+ tidak akan terbentuk. Sebagai gantinya, akan terbentuk gugus OH yang
merupakan gugus pergi yang kurang baik dibandingkan dengan gugus -OH2+
(gambar 10).
H3C
H C
CH
C
H3C
C
H2
H3C
CH3
H3C
H C
CH
C
C
OH2
H3C
O
HN
suasana asam
C
H2
H3C
CH3
C
C
OH
HN
suasana basa
Gambar 10. Reaksi eliminasi pada reaksi antara amoksisilin dengan asetilaseton dan formalin
pada suasana asam dan basa
Jika hal tersebut terjadi, maka reaksi tahap kedua tidak akan berlangsung sehingga
reaksi tidak sempurna. Dari kedua tahap reaksi tersebut dapat disimpulkan bahwa
bertambahnya keasaman akan menyebabkan reaksi tahap dua berjalan cepat
sedangkan reaksi tahap satu berjalan lambat, demikian pula sebaliknya. Jadi perlu
dicari pH optimum yang memberikan laju reaksi paling cepat (Fessenden dan
Fessenden, 1994).
Hasil penetapan pH optimum pereaksi dapat dilihat pada tabel III berikut:
Tabel III. Hasil penetapan pH optimum pereaksi
pH Pereaksi
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
Rep. 1
Serapan*
Rep. 2
Rep. 3
0,586
0,746
0,447
0,274
0,258
0,608
0,750
0,487
0,265
0,250
0,592
0,740
0,458
0,269
0,252
Dari penelitian didapat bahwa pH optimum adalah pH 4. Untuk selanjutnya,

pH pereaksi yang digunakan adalah pH 4.
.
D. Penetapan Volume Optimum Pereaksi
Volume optimum pereaksi adalah volume larutan pereaksi yang

memberikan serapan maksimum. Penetapan volume optimum pereaksi bertujuan
untuk menentukan volume pereaksi agar semua amoksisilin dapat habis bereaksi.
Jika pereaksi yang ditambahkan kurang, dikhawatirkan belum semua amoksisilin
bereaksi sehingga pada saat pengukuran belum semua amoksisilin yang terbaca
sehingga tidak menggambarkan kadar yang sebenarnya.
Penetapan volume pereaksi dilakukan dengan menambahkan pereaksi pH 4
dengan volume yang bervariasi. Serapan kemudian diukur pada panjang gelombang
400 nm. Hasil penetapan volume optimum pereaksi dapat dilihat pada tabel IV
berikut:
Tabel IV. Hasil penetapan volume optimum pereaksi

Vol. Pereaksi (ml)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Rep. 1
Serapan*
Rep. 2
Rep. 3
0,439
0,619
0,708
0,758
0,771
0,787
0,800
0,797
0,793
0,759
0,440
0,617
0,709
0,760
0,774
0,785
0,799
0,798
0,804
0,800
0,442
0,620
0,707
0,761
0,772
0,788
0,802
0,796
0,799
0,799
Dari penelitian didapat bahwa serapan amoksisilin stabil saat direaksikan dengan 7
ml hingga 10 ml pereaksi. Untuk selanjutnya volume pereaksi yang digunakan
adalah 7 ml.
E. Penetapan Panjang Gelombang Serapan Maksimum (max)
Panjang gelombang serapan maksimum adalah panjang gelombang suatu

senyawa yang memberikan serapan yang paling besar. Pengukuran kadar dengan
metode spektrofotometri umumnya dilakukan pada panjang gelombang serapannya
maksimum. Hal tersebut karena pada panjang gelombang serapan maksimum
perubahan serapan untuk setiap perubahan konsentrasi adalah paling besar sehingga
menghasilkan sensitifitas dan akurasi yang lebih besar. Selain itu, pada panjang
gelombang serapan maksimum absorptivitas molar senyawa relatif konstan sehingga
didapat kurva kalibrasi konsentrasi vs serapan yang linear (Pecsok dkk., 1976).
Dalam penelitian, penentuan panjang gelombang dimulai dari 380 hingga
450 nm. Hal tersebut karena menurut Patel dkk. (1992), reaksi antara gugus amin
primer sefaleksin dengan hasil kondensasi antara satu mol formalin dan dua mol
asetilaseton akan menghasilkan senyawa berwarna kuning yang memberikan serapan

paling besar pada panjang gelombang 400 nm. Gugus pada sefaleksin yang berperan
dalam pembentukan senyawa berwarna tersebut adalah gugus amin primer (gambar
3). Penetapan kadar amoksisilin dalam penelitian ini juga didasarkan pada reaksi
antara gugus amin primer amoksisilin dengan hasil kondensasi antara satu mol
formalin dan dua mol asetilaseton (gambar 8). Dengan demikian, diperkirakan
panjang gelombang serapan maksimum reaksi penetapan kadar ini juga berada di
sekitar 400 nm.
Untuk penentuan panjang gelombang serapan maksimum digunakan tiga
konsentrasi yang bertujuan untuk melihat apakah dengan perubahan konsentrasi akan
terjadi perubahan panjang gelombang serapan maksimum.
Hasil penetapan panjang gelombang serapan maksimum dapat dilihat pada
gambar 11 (a, b, dan c) berikut:
a.
b.
c.
Gambar 11. Spektra panjang gelombang serapan maksimum amoksisilin konsentrasi

0,084 mg/ml (a), 0,117 mg/ml (b), dan 0,151 mg/ml (c) hasil reaksi dengan
asetilaseton dan formalin
Berdasarkan percobaan didapat panjang gelombang maksimum adalah

401,0 nm. Disamping itu, adanya perubahan konsentrasi tidak merubah panjang
gelombang serapan maksimum gambar 11 (a, b, dan c).
Selain itu, pada spektrum terlihat bahwa senyawa hasil reaksi juga
memberikan serapan pada panjang gelombang nm. Diperkirakan, serapan tersebut
adalah serapan gugus fenol pada amoksisilin (gambar 12).
COOH
O
HO
C
O
C
C
H2
N
N
H
CH3
S
CH3
CH3
H3C
H3C
Gugus yang memberikan serapan

C
CH3
Gambar 12. Gugus pada senyawa hasil reaksi yang diperkirakan memberikan serapan pada
panjang gelombang 335 nm
F. Pembuatan Kurva Baku
Pembuatan kurva baku bertujuan untuk memperoleh persamaan garis regresi

yang selanjutnya digunakan untuk menghitung kadar amoksisilin. Dalam pembuatan
kurva baku sebaiknya digunakan suatu seri larutan amoksisilin baku dengan
konsentrasi yang berbeda yang memiliki serapan dalam rentang 0,2-0,8 pada panjang
gelombang serapan maksimum. Pembacaan serapan dalam rentang 0,2-0,8 akan
memberikan prosentase kesalahan analisis yang dapat diterima yaitu 0,5-1,0%. Hal
ini dilakukan untuk meminimalkan kesalahan sistematiknya (Mulja dan Suharman,
1995).
Pada penelitian ini, penetapan kurva baku dilakukan dengan menggunakan 5

seri konsentrasi amoksisilin yaitu 0,067; 0,084; 0,101; 0,117; dan 0,134 mg/ml
dengan replikasi sebanyak tiga kali.
Adapun hasil kurva baku dari 3 kali replikasi dapat dilihat pada tabel V
berikut:
Tabel V. Hasil penetapan kurva baku amoksisilin
Konsentrasi
Amoksisilin
(mg/ml)
0,067
0,084
0,101
0,117
0,134
Serapan*
Rep. 1
Rep. 2
Rep. 3
0,384
0,461
0,546
0,615
0,687
A = 0,0807
B = 4,5516
r = 0,9995
= 77,60o
Vx
0 = 1,009%
0,386
0,462
0,539
0,615
0,678
A = 0,0921
B = 4,4127
r = 0,9993
= 77,23o
Vx
0 = 1,721%
0,384
0,460
0,542
0,614
0,682
A = 0,0846
B = 4,4912
r = 0,9995
= 77,44o
Vx
0 = 1,269%
Seluruh persamaan regresi linier pada tabel V di atas menghasilkan nilai

koefisien korelasi (r) hitung yang lebih besar dari koefisien korelasi (r) tabel dengan
taraf kepercayaan 99% dan derajat bebas 3 yaitu 0,959 (Cann, 2003). Dapat
dikatakan ada korelasi bermakna antara serapan dan konsentrasi amoksisilin.
Persamaan regresi yang digunakan untuk menghitung kadar amoksisilin dalam
penelitian ini adalah persamaan y = 4,5516x 0,0807 (replikasi 1) karena nilai r
yang diperoleh paling mendekati satu dan nilai koefisien variasi fungsi (Vx0) yang
paling kecil.
Dari data terlihat bahwa yang didapat terlalu besar sehingga jika
digambarkan hampir membentuk garis tegak lurus dengan sumbu x. Oleh karena itu,
dilakukan modifikasi satuan konsentrasi larutan baku sehingga didapat data yang
dapat dilihat pada tabel VI berikut:
Tabel VI. Hasil modifikasi kurva baku amoksisilin
Konsentrasi Amoksisilin
Baku (mg/ml)
Konsentrasi Amoksisilin
Baku (mg/5ml)
Serapan*
0,067
0,084
0,101
0,117
0,134
0,335
0,420
0,505
0,585
0,670
0,384
0,461
0,546
0,615
0,687
Persamaan kurva baku hasil modifikasi diperoleh dengan memplotkan konsentrasi

baku (mg/5 ml) vs serapan. Didapat: y = 0,9103x + 0,0807 dengan nilai r adalah
0,9995 dan = 42,31o (gambar 13). Dengan demikian, persamaan garis tersebut
dapat digunakan untuk menetapkan kadar amoksisilin yang direaksikan dengan
Amoksisilin dengan Asetilaseton dan Form alin
Serapan Senyawa Hasil Reaksi Antara
asetilaseton dan formalin.
0,8
0,7
y = 0,9103x + 0,0807
0,6
0,5
0,4
0,3
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
Kadar Amoksisilin (mg/5ml)
Gambar 13. Hubungan konsentrasi amoksisilin dan serapan senyawa hasil reaksi antara
amoksisilin dengan asetilaseton dan formalin
G. Penetapan Kadar Amoksisilin dalam Tablet
Penetapan kadar amoksisilin dalam tablet dilakukan dengan 3 kali

penimbangan dan masing-masing penimbangan dilakukan replikasi pemipetan 3 kali.
Replikasi pemipetan bertujuan untuk mengetahui reprodusibilitasnya.
Tablet amoksisilin yang digunakan adalah tablet dari suatu pabrik dengan
nomor batch yang sama. Dengan nomor batch yang sama, diharapkan variasi yang
terjadi pada saat formulasi dapat diminimalkan sehingga jika keragaman hasil benarbenar menggambarkan ketelitian metode ini.
Dari hasil penelitian didapat data yang disajikan pada tabel VII berikut:
Tabel VII Hasil penetapan kadar amoksisilin dalam tablet AM
Penimbangan
Sampel (mg)
150,0
150,0
150,0
Serapan*
Kadar (mg)
Per tablet
% kadar
Dlm tablet
0,533
0,530
0,528
0,536
0,526
0,529
0,532
0,532
0,532
592,24
588,42
585,80
596,29
583,18
586,99
591,04
591,04
591,04
118,45
117,68
117,16
119,26
116,64
117,40
118,21
118,21
118,21
x =589,56
x =117,91
KV (%)
0,55
1,14
0
KV =0,56
Dari data didapat kadar rata-rata amoksisilin dalam tablet adalah 589,56 mg
atau sekitar 117,91%. Hasil tersebut masih memenuhi syarat karena tablet
amoksisilin mengandung tidak kurang dari 90,0% dan tidak lebih dari 120,0%
amoksisilin dari jumlah yang tertera pada etiket (Anonim, 2005), karena menurut
etiket, tablet amoksisilin yang digunakan (tablet AM) mengandung zat aktif
amoksisilin 500 mg/tablet.
H. Validasi Metode Analisis
Validasi metode analisis diartikan sebagai suatu prosedur yang digunakan

untuk membuktikan apakah suatu metode analisis memenuhi persyaratan yang
ditentukan (Anonim, 2005).
Penetapan kadar amoksisilin yang dilakukan dalam penelitian ini termasuk
ke dalam kategori I yaitu untuk penetapan kadar komponen terbesar dalam sediaan.
Menurut Anonim (2005), parameter yang perlu ditetapkan dalam analisis kategori I
adalah akurasi, presisi, spesifisitas, linearitas, dan range.
Dalam penelitian ini, beberapa parameter yang ditetapkan adalah:
1. akurasi.
Akurasi adalah kedekatan hasil analisis yang diperoleh menggunakan suatu
metode dengan nilai sebenarnya. Akurasi dinyatakan dengan perolehan kembali
dari penambahan zat yang diketahui kadarnya (Anonim, 2005).
Pada penelitian ini, penetapan perolehan kembali dilakukan dengan
menimbang sejumlah sampel yang mengandung amoksisilin kemudian ditambah
dengan sejumlah baku amoksisilin. Kadar yang didapat kemudian dibandingkan
dengan kadar yang sebenarnya.
Dari hasil penelitian didapat data yang disajikan pada tabel VIII berikut:
Tabel VIII. Data hasil penetapan perolehan kembali
Kadar
Sebanarnya
(mg/ml)
2,29
2,28
2,28
Serapan*
Kadar didapat
(mg/ml)
Perolehan Kembali
(%)
0,515
0,510
0,518
0,514
0,516
0,509
0,516
0,510
0,513
2,39
2,36
2,40
2,38
2,39
2,35
2,39
2,36
2,38
104,37
103,06
104,80
104,39
104,82
103,07
104,82
103,06
104,39
x = 104,09
KV = 0,76%
Dari data dapat dilihat bahwa rata-rata perolehan kembali yang didapat
adalah 104,09%. Hal tersebut tidak memenuhi syarat karena untuk kadar analit
10% biasanya disepakati perolehan kembali harus masuk dalam rentang 98-102%
(Yuwono dan Indrayanto, 2005). Berarti metode penetapan amoksisilin secara
spektrofotometri visibel menggunakan pereaksi asetilaseton dan formalin
memiliki akurasi yang kurang baik.
2. presisi.
Presisi adalah kedekatan masing-masing hasil analisis dari beberapa
pengukuran di bawah kondisi analisis yang sama. Presisi biasanya dinyatakan
dengan persen simpangan baku atau simpangan baku relatif (koefisien variasi)
(Anonim, 2005).
Pada penelitian ini, penetapan presisi dilakukan dengan menggunakan data
penetapan kadar amoksisilin dalam tablet AM. Dari tabel V terlihat bahwa rata-
rata koefisien variasi yang didapat adalah 0,56%. Hal tersebut masih memenuhi
syarat karena untuk kadar analit 10% biasanya disepakati koefisien variasi
tidak boleh lebih dari 2,7% (Yuwono dan Indrayanto, 2005). Berarti metode
penetapan amoksisilin secara spektrofotometri visibel menggunakan pereaksi
asetilaseton dan formalin memiliki presisi yang baik.
3. linearitas.
Linearitas ditentukan dengan melihat nilai koefisien korelasi (r) hitung pada
persamaan regresi linier kurva baku. Dari hasil penentuan kurva baku, didapat
persamaan y = 0,9103x + 0,0807 dengan r = 0,9995. Nilai koefisien korelasi (r)
hitung tersebut lebih besar dari koefisien korelasi (r) tabel dengan taraf
kepercayaan 99% dan derajat bebas 3 yaitu 0,959 (Cann, 2003). Dapat dikatakan
ada korelasi bermakna antara serapan dan konsentrasi amoksisilin. Selain itu,
didapat nilai koefisien variasi fungsi (Vx0) sebesar 1,009%. Menurut Mulja dan
Hanwar (2003), nilai Vx0 tidak boleh lebih dari 2%. Berarti metode penetapan
amoksisilin secara spektrofotometri visibel menggunakan pereaksi asetilaseton
dan formalin memiliki linearitas yang baik.
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
I. Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan sebagai berikut:

1. metode
spektrofotometri
visibel
untuk
penetapan
kadar
amoksisilin
menggunakan pereaksi asetilaseton dan formalin memiliki presisi dan linearitas

yang baik, namun akurasinya kurang baik.
2. aplikasi metode ini pada sediaan tablet amoksisilin memberikan hasil yang baik
dengan kadar rata-rata amoksisilin dalam tablet sebesar 589,56 mg.
J. Saran
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang suhu yang menghasilkan

kecepatan reaksi dan serapan yang optimum.
DAFTAR PUSTAKA
Anonim, 1989, The Merck Index An Encyclopedia of Chemicals, Drugs, and

Biologicals, 11th ed., 81, 4261, Merck & Co. Inc., Rahway N. J., USA.
Anonim, 1995, Farmakope Indonesia, Edisi IV, 95-96, 1136, 1157, Departemen
Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta.
Anonim, 2005, The United States Pharmacopeia, 28th ed., 138-139, 141, 143, 144,
146, United States Pharmacopeia Convention, Rockville.
Bird, A. E., 1994, Amoxicillin in Analytical Profiles of Drug Substances and
Excipients, 23, 4-44, Academic Press Inc., California.
Cann, A. J., 2003, Maths from Scratch for Biologist, 213, John Wiley & Sons Ltd.,
England.
Fell, A. F., 1986, Ultraviolet, Visible, and Flourescence in Clarkes Isolation and
Identification of Drugs in Pharmaceuticals Body Fluid and Post Mortem
Material, 2nd ed., 221-232, The Pharmaceutical Press, London.
Fessenden, R. J. dan Fessenden, J. S., 1994, Kimia Organik, Diterjemahkan oleh
Pudjaatmaka, A. H., Edisi ketiga, Jilid I, 23, 67-129, Penerbit Erlangga,
Jakarta.
Harmita, 2004, Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara Perhitungannya,
Majalah Ilmu Kefarmasian, I (3):117-135.
Hidayat, R., 1999, Titrasi Iodometri Hasil Hidrolisis Amoksisilin Secara Coulometri,
http://fa.lib.itb.ac.id/go.php?id=jbptitbfa-gdl-sl-1999-rahmathida-223.,
diakses pada 8 April 2006.
Kusuma, 2000, Jenis-jenis Antibiotika yang Diresepkan dan Masuk di Beberapa
Apotek Wilayah Kotamadya Yogyakarta, Skripsi, Fakultas Farmasi
Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
Mirmayanti, B., 2007, Validasi Metode Penetapan Kadar Sefadroksil dengan
Pereaksi Asetilaseton dan Formaldehid secara Spektrofotometri Visibel,
Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
Mulja, M. dan Hanwar, D., 2003, Prinsip-Prinsip Cara Berlaboratorium yang Baik,
Majalah Farmasi Airlangga, III (2): 71-76.
Mulja, M. M. dan Suharman, 1995, Analisis Instrumental, 6-10, 26-48, Airlangga
University Press, Surabaya.
Patel, I. T., Devani, M. B., and Patel, T. M., 1992, Spectrophotometric Method for
Determination of Cephalexin in Its Dosage Forms, J. of AOAC Int., 75 (6):
994-998.
Pelczar, M. J. and Chan, E. C. S., 1988, Elements of Microbiology, Ed III, 561,
Diterjemahkan oleh Ratna Siri Hadi Oetomo, Penerbit UI, Jakarta.
Pecsok, R. L., Shields L. D., Cairns, T. Mc. and William, T. G., 1976, Modern
Methods Of Chemical Analysis, 2nd ed., 117, 139, 142-143, 226-235, John
Wiley & Sons Inc., New York.
Petri, W. A., 2001, Antimicrobial Agents Penicillins, Cephalosporins, and Other Lactam Antibiotics in Goodman and Gilmans The Pharmalogical Basis of
Therapeutics, 10th ed., Mc-Graw-Hill Companies Inc., USA.
Rianti, A., 2005, Penetapan Kadar Sefadroksil Secara Spektrofotometri Visibel
dengan Pereaksi Etilasetoasetat dan Formaldehid, Skripsi, Fakultas Farmasi
Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Rofie, F., 2005, Penetapan Kadar Sefadroksil dalam Kapsul Menggunakan Metode
Spektrofotometri Ultraviolet dengan Pereaksi Etilasetoasetat dan
Asetaldehid, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada,
Yogyakarta.
Roosita, A., 2007, Validasi Metode Penetapan Kadar Ampisilin dengan Pereaksi
Asetilaseton dan Formaldehid secara Spektrofotometri Visibel, Skripsi,
Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
Roth H. J. and Blaschke G., 1994, Pharmazeutische Analytik, diterjemahkan oleh
Sarjono Kisman dan Slamet Ibrahim, 359-361, Gadjah Mada University
Press, Yogyakarta.
Schirmer, R. E., 1982, Modern Methods of Pharmaceuticals Analysis, I: 60-74, CRC
Press Inc., Florida.
Silverstein, R. M., Bassler, G. C., and Morrill, T. C., 1991, Spectrometric
Identification of Organic Compounds, 5th ed, 292, John Wiley & Sons Inc.,
Canada.
Skoog, D. A., 1985, Principles of Instrumental Analysis, 3rd ed., 67, 164-168, 185186, Saunders College Publishing, Japan.
Takada, W., Adachi, T., Kihara, N., Kitamura, S., Kitagawa, T., Mifune, M., and
Saito, Y., 2005, Quantitative Determination Method for Trace Amount of
Penicillin Contaminants in Comercially Available Drug Product by HPLC
Coupled with Tandem Mass Spectrometry, Chem. Pharm. Bull., 53 (2):
172-176.
Vogel, A. I., 1978, A Textbook of Quantitative Inorganic Analysis, 4th ed., 809-810,
846-849, The English Language Book Society, Richard Clay Ltd., Bungay.
Wattimena, J. R., Sugiarso, W. C., Widianto, M. B., Sukandar E. Y., dan Setiadi, A.
R., 1997, Farmakodinamik dan Terapi Antibiotik, 56-61, 66, Gadjah Mada
University Press, Yogyakarta.
Williams, D. H. dan Fleming, I., 1980, Spectroscopic Methods in Organic Chemistry,
3rd ed., 4, McGraw Hill Book Company, United Kingdom.
Willard, H. H., Merritt, L. L., Dean, J. A., and Settle, F. A., 1988, Instrumental
Methods of Analysis, 7th ed., 162, Wadsworth Publishing Company,
Belmont, California.
Wiratih, 2002, Gambaran Resep Antibiotik di Apotek-apotek yang Terletak di
Perbatasan Bagian Utara Kotamadya Yogyakarta dan Kabupaten Sleman,
Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
Yuwono, M. dan Indrayanto, G., 2005, Validation of Chromatographic Methods of
Analysis, Profiles of Drug Substances, Excipients, and Related
Methodology, 32: 243-259.
LAMPIRAN
Lampiran 1. Data Penimbangan Baku Amoksisilin
Kertas + zat (mg)
506,6
Kertas + sisa (mg)
297,0
Zat (mg)
209,6
Lampiran 2. Data Penetapan Kadar Sampel
a. Perhitungan Bobot Rata-Rata Tablet

Bobot tablet (g)
0,7245
0,7161
0,7166
0,7040
0,7058
0,7155
0,7131
0,7149
0,7125
0,7100
x = 0,71526 gram
0,7187
0,7183
0,7176
0,7110
0,7095
0,7219
0,7194
0,7239
0,7100
0,7219
b. Penimbangan Sampel
Kertas + zat (g)
Kertas + sisa (g)
Zat (g)
Rep, 1
0,4276
0,2776
0,1500
Rep, 2
0,4516
0,3016
0,1500
Rep, 3
0,4514
0,3014
0,1500
Lampiran 3. Data Hasil Penetapan Perolehan Kembali
a. Perhitungan kadar amoksisilin dalam sampel

Dari data penetapan kadar, didapat rata-rata kadar amoksisilin per 150 mg sampel
adalah 123,64 mg
Kadar amoksisilin dalam sampel =
123,64
x 100% = 82,43%
150
b. Penimbangan baku + sampel

Baku
Kertas+zat
Kertas+sisa
zat
Rep. 1
Sampel
0,4091 g
0,3043 g
0,1048 g
0,4596 g
0,3095 g
0,1501 g
Baku
Rep. 2
Sampel
0,4091 g
0,3043 g
0,1048 g
0,4593 g
0,3094 g
0,1499 g
Kadar amoksisilin dalam 150,1 mg sampel (rep. 1) =

Kadar sebenarnya
Baku
0,4091 g
0,3043 g
0,1048 g
= 228,53 mg
= 228,53 mg/100ml
= 2,29 mg/ml
0,4602 g
0,3104 g
0,1498 g
82,43
x 150,1 = 123,73 mg
100
= kadar amoksisilin dalam sampel + kadar baku

= 123,73 mg + 104,8 mg
Rep. 3
Sampel
Lampiran 4. Contoh Perhitungan
a. Pembuatan Kurva Baku Amoksisilin

Perhitungan konsentrasi baku amoksisilin:
Baku amoksisilin yang ditimbang = 209,6 mg, dilarutkan dalam 100 ml aquadest.
Konsentrasi baku amoksisilin =
209,6
= 2,096 mg/ml
100
Dibuat seri kurva baku dengan mempipet:

0,8 ml
v1 . c = v2 . c1
0,8 . 2,096 = 25 . c1
c1 = 0,067 mg/ml
1,0 ml
v1 . c = v2 . c2
1,0 . 2,096 = 25 . c2
c2 = 0,084 mg/ml
1,2 ml
v1 . c = v2 . c3
1,2 . 2,096 = 25 . c3
c3 = 0,101 mg/ml
1,4 ml
v1 . c = v2 . c4
1,4 . 2,096 = 25 . c4
c4 = 0,117 mg/ml
1,6 ml
v1 . c = v2 . c5
1,6 . 2,096 = 25 . c5
c5 = 0,134 mg/ml
Seri kadar tersebut kemudian diplotkan vs serapan yang diperoleh sehingga diperoleh
persamaan kurva baku yang akan digunakan dalam penetapan kadar.
b. Penetapan Kadar Sampel
Serapan yang didapat = 0,533, dimasukkan ke dalam persamaan kurva baku
0,533 = 0,9103x + 0,0807
x = 0,4967 mg/5 ml
x = 2,484 mg/ml
x = 2,484 x 50 ml
x = 124,2 mg dalam 50 ml sampel
x = 124,2 mg dalam 150 mg sampel
kadar anoksisilin dalam tablet =
124,2
x 715,26 = 592,24 mg
150,0
% kadar amoksisilin dalam tablet =
592,24
x 100% = 118,45%
500
c. Penetapan Recovery
Kadar sebenarnya = kadar amox dalam sampel + kadar amox baku
Kadar sebenarnya = 123,73 mg + 104,8 mg
Kadar sebenarnya = 228,53 mg
Serbuk tersebut kemudian dilarutkan dalam aquadest 100 ml
Kadar sebenarnya =
228,53
= 2,29 mg/ml
100
dari larutan tersebut, diambil 1 ml kemudian dimasukkan ke dalam labu 25 ml

sehingga konsentrasinya:
v1 . c = v2 . c2
1 . 2,29 = 25 . c2
c2 = 0,0916 mg/ml
Kadar yang didapat dihitung dengan memasukkan serapan yang diperoleh ke dalam
persamaan kurva baku.
Serapan yang didapat = 0,515, dimasukkan ke dalam persamaan kurva baku
0,515 = 0,9103x + 0,0807
x = 0,4771 mg/5 ml
x = 0,0954 mg/ml
% recovery =
0,0954
x 100% = 104,15%
0,0916
c. Perhitungan Vx0
Vx0 dapat dihitung menggunakan rumus sebagai berikut (Harmita, 2004):
( y1 y1 ) /( N 2)
Sy =
Di mana y1 = Bx + A
Sx0 =
Sy
; Sx0 = standar deviasi fungsi
B
Vx0 =
Sx0
; Vx0 = koefisien variasi fungsi
x1
Persamaan Kurva baku replikasi 1: y = 4,5516x + 0,0807

y1
0,384
0,461
0,546
0,615
0,687
y1
0,386
0,463
0,540
0,613
0,691
Sy =
6,4.105 / 3 = 4,619 x 10-3
Sx0 =
4,619.103
= 1,015 x 10-3
4,5516
1,015.10 3
Vx0 =
x 100% = 1,009%
0,1006
y1 )
-2 x 10-3
-2 x 10-3
6 x 10-3
2 x 10-3
-4 x 10-3
(y1 -
y1 )2
4 x 10-6
4 x 10-6
3,6 x 10-5
4 x 10-6
1,6 x 10-5
= 6,4 x 10-5
(y1 -
x1
0,067
0,084
0,102
0,117
0,133
x1 = 0,1006
Lampiran 5. Spektrum Baku Amoksisilin 0,005 M
BIOGRAFI
Penulis
skripsi
Spektrofotometri
yang
Visibel
berjudul
Untuk
Validasi
Penetapan
Metode
Kadar
Amoksisilin Menggunakan Pereaksi Asetilaseton dan

Formalin ini bernama Margareta Sunarto. Penulis lahir di
Garut pada tanggal 14 Januari 1985. Anak pertama dari tiga
bersaudara dari pasangan Sunarto Yosep Tjitrahadi dan
Catharina Lena Tanzil ini mengawali pendidikannya di TK
Daya Susila Garut pada tahun 1988. Kemudian penulis melanjutkan pendidikannya
di SD Daya Susila Garut pada tahun 1991. Selanjutnya, pada tahun 1997 penulis
menempuh pendidikan di SLTP Yos Sudarso Garut. Setelah lulus, pada tahun 2000
penulis melanjutkan pendidikan di SMU Negeri 2 Yogyakarta. Lalu, pada tahun
2003 penulis melanjutkan pendidikan di Fakultas Farmasi Universitas Sanata
Dharma Yogyakarta. Selama kuliah, penulis pernah menjadi asisten dosen untuk
mata kuliah praktikum spektroskopi.

Full

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Full

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

VALIDASI METODE SPEKTROFOTOMETRI VISIBEL UNTUK

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

God didnt promise day without pain,

Disappointments are like road humps, they slow you.

When something happens to you,

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

14. Temen-temen kelompok A dan temen-temen Kelas A 2003, buat

Yogyakarta, Januari 2007

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

HALAMAN JUDUL .............................................................................................

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ...................................................

HALAMAN PERSEMBAHAN ...........................................................................

KATA PENGANTAR ..........................................................................................

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ............................................................... viii

DAFTAR ISI .........................................................................................................

DAFTAR TABEL ................................................................................................. xiv

DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................... xvi

A. Latar Belakang .................................................................................

1. Perumusan masalah ....................................................................

2. Keaslian penelitian .....................................................................

3. Manfaat penelitian ......................................................................

B. Tujuan Penelitian .............................................................................

BAB II PENELAAHAN PUSTAKA ..................................................................

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

D. Spektrofotometri UV-Vis .................................................................

1. Definisi spektrofotometri UV-Vis ..............................................

2. Konsep dasar radiasi elektromagnetik ........................................

3. Tipe transisi elektron ..................................................................

4. Interaksi molekul dengan radiasi elektromagnetik ....................

5. Analisis kuantitatif secara spektrofotometri UV-Vis..................

6. Serapan suatu larutan ..................................................................

7. Kesalahan fotometrik ..................................................................

8. Syarat-syarat penggunaan Hukum Beer......................................

9. Penggunaan spektrofotometri UV-Vis dalam metode analisis ...

E. Pengembangan Metode Spektrofotometri.........................................

F. Validasi, Kesalahan, dan Parameter Metode Analisis .....................

1. Validasi metode analisis .............................................................

2. Kesalahan metode analisis .........................................................

3. Parameter-parameter validasi metode analisis ...........................

G. Landasan Teori .................................................................................

BAB III METODOLOGI PENELITIAN ...........................................................

A. Jenis dan Rancangan Penelitian .......................................................

B. Definisi Operasional ........................................................................

C. Alat-alat Penelitian ...........................................................................

D. Bahan-bahan Penelitian ....................................................................

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

E. Tata Cara Penelitian .........................................................................

1. Pembuatan larutan uji .................................................................

2. Optimasi penetapan kadar amoksisilin ......................................

3. Pembuatan kurva baku ...............................................................

4. Aplikasi metode penetapan kadar amoksisilin pada tablet AM .

F. Analisis Hasil ...................................................................................

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .............................................................

A. Pembuatan Larutan Baku Amoksisilin .............................................

B. Penetapan Waktu Reaksi dan Operating Time .................................