ESCUELA SUPERIOR POLITCNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE CIENCIAS QUMICAS
CARRERA DE QUMICA
GUA DE LABORATORIO DE BIOLOGA
LUGAR DE REALIZACIN DE LA PRCTICA:
LABORATORIO DE PARASITOLOGA
PRCTICA N7
IDENTIFICACIN DE CLULAS PROCARIOTAS (GRAM POSITIVAS Y GRAM NEGATIVAS)
1. DATOS GENERALES:
NOMBRE: Erika Laln
FECHA DE REALIZACIN:
16/06/19

CDIGO: 202
FECHA DE ENTREGA:
16/06/26

2. OBJETIVOS:
Objetivo general
Identificar clulas procariotas en muestra biolgicas.
Objetivos Especficos:
- Preparar las muestras biolgicas para observar al microscopio.
- Identificar la morfologa de la clula.
- Analizar los microorganismos presentes en las muestras.
3. METODOLOGA:
El desarrollo de esta prctica nos permitir identificar las caractersticas de las clulas
procariotas, para lo cual analizaremos muestras de agua de estanque y muestras biolgicas
que mediante el uso del microscopio nos permitir observar los microorganismos
procariticos.
4. FUNDAMENTO TERICO:
Organismo procariticos
Se llama procariota o procarionte a las clulas sin ncleo celular definido, es decir, cuyo
material gentico se encuentra disperso en el citoplasma, reunido en una zona denominada
nucleoide. Por el contrario, las clulas que s tienen un ncleo diferenciado del citoplasma, se
llaman eucariotas, es decir aquellas cuyo ADN se encuentra dentro de un compartimento
separado del resto de la clula.
Adems, el trmino procariota hace referencia a los organismos pertenecientes al imperio
Prokaryota, cuyo concepto coincide con el reino Mnera de las clasificaciones de Herbert
Copeland o Robert Whittaker que, aunque anteriores, continan siendo an populares.
Casi sin excepcin los organismos basados en clulas procariotas son unicelulares
(organismos consistentes en una sola clula).
Se cree que todos los organismos que existen actualmente derivan de una forma unicelular
procariota (LUCA). Existe una teora, la endosimbiosis seriada, que considera que a lo largo
de un lento proceso evolutivo, hace unos 1500 millones de aos, los procariontes derivaron
en seres ms complejos por asociacin simbitica: los eucariontes.

Clasificacin de los procariticos

La Gram positiva: son ms gruesas y est compuesta por una capa de glucopeptidos.
La Gram negativa: compuesta por dos capas, una de glucopeptidos rodeada de una bicapa
fosfolipdica, lipoprotenas y glucolipdica. Son ms resistentes a los antibioticos.
Segn la forma de conseguir materia orgnica se dividen en:
- Auttrofas: Producen materia orgnica a partir de materia inorgnica ingerida y la energa
captada del ambiente, por ello tambin se denominan littrofas.
- Hetertrofas: Ingieren materia orgnica extrayendo de ella la energa. Estas adems
pueden ser.
- Bacterias saprobiontes: Obtienen la materia orgnica de organismos muertos.
- Bacterias comensales: Obtienen la materia orgnica de seres vivos a los que no causan
daos ni beneficios.
- Bacterias simbiontes: Consiguen su materia orgnica asocindose a otros seres vivos a
los que aporta algn beneficio a cambio.
Adems, las bacterias pueden necesitar oxgeno en su metabolismo, aerobias o no,
anaerobias. Entre las anaerobias, algunas pueden vivir en presencia de oxgeno e incluso
utilizarlo anaerobias facultativas, pero para otras el oxgeno resulta venenoso anaerobias
estrictas.

Segn la forma de conseguir materia orgnica se dividen en:

- Auttrofas: Producen materia orgnica a partir de materia inorgnica ingerida y la energa
captada del ambiente, por ello tambin se denominan littrofas.
- Hetertrofas: Ingieren materia orgnica extrayendo de ella la energa. Estas adems
pueden ser.
- Bacterias saprobiontes: Obtienen la materia orgnica de organismos muertos.
- Bacterias comensales: Obtienen la materia orgnica de seres vivos a los que no causan
daos ni beneficios.
- Bacterias simbiontes: Consiguen su materia orgnica asocindose a otros seres vivos a
los que aporta algn beneficio a cambio.
Adems, las bacterias pueden necesitar oxgeno en su metabolismo, aerobias o no,
anaerobias. Entre las anaerobias, algunas pueden vivir en presencia de oxgeno e incluso
utilizarlo anaerobias facultativas, pero para otras el oxgeno resulta venenoso anaerobias
estrictas.
Segn la fuente de energa que utilizan las bacterias pueden ser:
- Fotosintticas: Si usan la energa luminosa. Pueden ser:
Organismos fotolittrofos: Son organismos fotosintticos, ya que obtienen energa
qumica (ATP) a partir de energa luminosa, y son littrofos porque su fuente de carbono
es el CO2. Pertenecen a este grupo los vegetales superiores, las algas, las
cianobacterias, las bacterias purpreas del azufre y las bacterias verdes del azufre.
Organismos fotoorgantrofos o fotohetertrofos: Son organismos fotosnteticos,
organtrofos por obtener el carbono a partir de sustancias orgnicas. Pertenecen a este
grupo las bacterias purpreas no sulfreas.
- Quimiosintticas: Si utilizan la energa que desprenden ciertos compuestos al oxidarse.
Que a su vez, pueden ser:
Organismos quimiolittrofos: Son quimiosintticos, ya que obtienen energa qumica (ATP)
a partir de la energa que se desprende en reacciones de oxidacin de sustancias
inorgnicas, y littrofos, ya que su fuente de carbono es el CO2. Pertenecen a este grupo
algunas bacterias, como las bacterias incoloras del azufre, las bacterias nitrificantes, etc.

Organismos quimioorgantrofos o quimiohetertrofos: Obtienen la energa qumica (ATP)

a partir de la energa que se desprende en las reacciones de oxidacin de compuestos
orgnicos, es decir, mediante procesos catablicos. Existen dos tipos de catabolismo: la
respiracin y la fermentacin. Son organtrofos, ya que obtienen el carbono a partir de
materia orgnica. Pertenecen a este grupo los animales, los protozoos, los hongos y la
mayora de las bacterias.
Las bacterias son un numeroso grupo de seres vivos, con caractersticas muy diversas. En la
clasificacin aparecen dos grupos de Procariotas, el Dominio Archaea (arqueobactereas),
que engloba a los organismos ms antiguos del Planeta, y el Dominio Bacteria, en el que se
encuentran la gran mayora de los organismos bacterianos actuales, tambin conocidos con
el nombre de Eubacterias.
- Arqueobacterias: (Actualmente, se las considera fuera del grupo de las bacterias, y se las
coloca en un dominio diferente, Arqueas, ya que presentan diferencias con las bacterias y
afinidades con el dominio Eucariota). Son bacterias consideradas "fsiles vivientes" pues
viven en habitas que parecen corresponder con los que existieron en la Tierra primitiva.
La mayora son anaerobias, se encuentran en ambientes termales donde se alcanzan
temperaturas por encima del punto de ebullicin del agua (termoflicas), en fumarolas,
aguas extremadamente salinas (halfilas), y medios con pH extremos.
Estos procariotas poseen una membrana plasmtica cuyos lpidos carecen de cidos
grasos y en vez de ellos tienen hidrocarburos que se unen a la glicerina. El genoma de las
arqueobacterias est formado por una sola molcula de ADN circular, ms pequeo que
el de las eubacterias, mientras que su metabolismo es idntico que el de las eubacterias.
Tipos de Arqueobacterias:
- Arqueobacterias halfilicas: que viven en aguas hipersalinas como las del mar muerto.
- Arqueobacterias termfilicas: que viven en aguas termales o hbitats volcnicos ricos en
azufre.
- Arqueobacterias metangenas: que viven en condiciones de anaerobiosis, como por
ejemplo el tracto intestinal de los animales, y son capaces de producir metano a partir de
diferentes sustratos como el CO2.
- Eubacterias: Son las bacterias tpicas. Por ejemplo Escherichia coli., adaptadas a vivir en
cualquier ambiente, terrestre o acutico, pues en las diferentes estirpes bacterianas
pueden observarse todas las formas de nutricin conocidas.
La mayor parte de las bacterias adoptan formas caractersticas, aunque en ocasiones la
configuracin puede verse influida por las condiciones del medio de cultivo. Son unicelulares,
pero tambin aparecen agrupadas cuando se mantienen unidas tras la biparticin.
Pese a ser organismos muy simples con pocas estructuras internas y con solo cuatro formas
externas, presentan una gran variabilidad de metabolismos, siendo los organismos ms
pequeos que disponen de todos los elementos y dispositivos metablicos necesarios para la
obtencin y transformacin de la materia en cualquier medio, para crecer y para replicarse.
Tipos de eubacterias:
La clasificacin de las eubacterias es una labor extremadamente complicada, puesto que hay
que acudir a detalles no solo morfolgicos sino tambin fisiolgicos y ecolgicos. Los
principales grupos de bacterias segn el manual de Bergey son:
- Bacterias purpreas y verdes: Son bacterias fotosintticas anaerobias que poseen un
pigmento muy parecido a la clorofila a, denominado bacterioclorofila y un solo fotosistema
en sus mecanismos fotosinttico. Las bacterias purpreas deben su color a la
combinacin de la bacterioclorofila, verde, con carotenoides, de color rojizo o naranja. El
fotosistema de las bacterias purpreas se encuentra asociado a sistemas membranosos
de forma laminar o tubular conectados a la membrana plasmtica, mientras que en las
bacterias verdes se encuentran en los clorosomas, sistemas membranosos de forma
cilndrica y tambin unidos a la membrana plasmtica. Las bacterias purpreas y las
verdes se denominan sulfurosas si utilizan el H2S como fuente de hidrgenos, mientras
que se consideran no sulfurosas si utilizan para ello molculas orgnicas.
- Cianobacterias: Se llaman tambin cianofceas o algas verde-azuladas y son eubacterias
fotosintticas aerobias. su nombre hace referencia a la presencia de un pigmento azul
llamado ficocianina, que se suma a la clorofila a. Pueden presentarse como clulas

aisladas o formar colonias filamentosas. El tamao de las clulas de cianobacterias puede

oscilar desde 1mm hasta 60 micrmetros en el caso del gnero Oscillatoria.
Las cianobacterias presentan una capa gelatinosa externa que permite la formacin de
colonias. Cada clula presenta una pared celular similar a la de las bacterias Gram
negativas. el citoplasma aparece dividido en dos zonas: una central de aspecto
translcido denominada centroplasma, que es el lugar en donde est el ADN de la clula,
y el resto del citoplasma, que se denomina cromoplasma, debido a la presencia de unos
sculos en los cuales estn los pigmentos fotosintticos (clorofila a, carotenoides,
dicocianina y ficoeritina). El cromoplasma contiene adems ribosomas, grnulos de
volutina, vacuolas de gas (en especies m arinas) y carboxisomas, que contienen enzimas
que fijan el dixido de carbono.
- Proclorfitas: Son eubacterias fotosintticas que contienen clorofilas a y b. La posesin de
membranas internas tipo tilacoides hace que se parezcan a los cloroplastos de las clulas
eucariotas. La mayora de las especies conocidas viven como endosimbiontes en el
interior del procordados (Son animales marinos que incluye a todos los cordados carentes
de crneo, encfalo (sin cabeza diferenciada) y columna vertebral, y por tanto, deben
considerarse invertebrados.) del grupo ascidias.
- Bacterias nitrificantes: Son eubacterias quimioauttrofas capaces de formar compuestos
orgnicos gracias a la energa liberada en reacciones de oxidacin de compuestos
nitrogenados inorgnicos. Hay dos grupos de bacterias nitrificantes: las bacterias
oxidantes de amonio (NH4+), como las del gnero Nitrosomonas, que transforman el
amonio en nitrito (NO2-), y las bacterias oxidantes de nitritos, como el gnero Nitrobacter,
que oxidan nitritos a nitratos (NO3-). Las bacterias nitrificantes viven en los suelos y en
los sedimentos marinos y son muy importantes, puesto que transforman los nutrientes
inorgnicos en sustancias de las que se pueden aprovechar las plantas.
- Bacterias fijadoras de nitrgeno: Son bacterias aerobias Gram negativas capaces de fijar
el nitrgeno de la atmsfera. Son bacterias que viven perfectamente en los suelos, como
las del gnero Azotobacter y Rhizobium; este ltimo suele establecer simbiosis con
plantas leguminosas.
- Espiroquetas: Son eubacterias delgadas, largas y ligeramente onduladas. Presentan
fibrillas internas que, al rotar, proporcionan movimiento de torsin o flexin a la bacteria.
Son muy frecuentes en los medios acuticos; otras especies producen enfermedades en
los animales y en la especie humana, como Treponema pallidum, causante de la sfilis.
- Bacterias del cido lctico: son bacterias anaerbias tolerantes al oxgeno. grampositivas
y fermentativas, que producen cido lctico como producto final. Entre los gneros ms
importantes se encuentran Streptococcus y Lactobacillus.
- Micoplasmas: Son pequeas bacterias sin pared bacteriana pero cuya membrana
plasmtica contiene esteroles, que le confieren una gran estabilidad. Pueden tener forma
de diminutos cocos o formar filamentos parecidos a los de los hongos. La mayora de los
micoplasmas son patgenos, produciendo enfermedades en plantas y en la especie
humana, como, por ejemplo, la neumona atpica.
Morfologa bacteriana:
Entre las formas ms comunes destacan las siguientes:
- Bacilos: alargados y cilndricos, en forma de
bastn.
- Cocos: de aspecto redondeado, que aparecen
aislados o en grupos de dos, diplococos, otras
veces
forman
cadenas
arrosariadas,
estreptococos,
grupos
arracimados,
estafilococos.
- Vibrios: son muy cortos y curvados, en forma de
coma.
- Espirilos: con forma de hlice o espiral.

Algunas bacterias tambin forman agrupaciones de individuos ya

que, al dividirse, las bacterias hijas se mantienen unidas mediante
sus capsulas, siendo estas divisiones celulares lineales en los
bacilos, mientras que en los cocos presentas diversas agrupaciones:
estreptococos (cuando forman cadenas), estafilococos (cuando
forman
racimos),
sarcinas
(cuando
forman
asociaciones
tridimensionales), ttradas, diplococos,
Caractersticas de los organismos procariticos
No todas las clulas poseen el mismo grado de organizacin. Las primeras clulas que
surgen en el curso de la evolucin son clulas muy simples y primitivas, sus representantes
actuales son las bacterias y algas verde-azuladas, ambas constituyen el nivel procariota,
poseen de acuerdo con su nombre un ncleo muy sencillo, formado por material gentico no
rodeado por envoltura nuclear.
- Las bacterias constituyen un grupo algo especial entre los protistos. Vistas al microscopio
generalmente aparecen como esferas o como bastones rectos o curvos. La longitud
promedio de la clula bacteriana es aproximadamente 5 micras.
- Hay ms bacterias en nuestra boca que en la tierra, pero no todas las bacterias producen
enfermedades, solamente el 1% de ellas, las dems bacterias tienen funciones tiles para
la vida. Nos ayudan a digerir los alimentos. Se devoran los venenos que existen en el aire
y el agua. Los cientficos usan bacterias vivas para tratar problemas musculares y hasta
para quitar arrugas. Producen los huecos en el queso suizo conocido como gruyere y le
dan distintos sabores a los quesos.
- Las bacterias son la forma de vida ms antigua de la Tierra, sobreviven y prosperan en los
ambientes ms rigurosos, en manantiales, en pozos de cido, en grietas de la tierra, sin
luz, sin aire y en temperaturas hasta de 250C.
Estructura de una bacteria:
- Cpsula: Capa gelatinosa de naturaleza glucoproteica,
rodea por la parte externa a algunas bacterias. Es una
proteccin contra la accin de los anticuerpos y la
fagocitosis y evita la prdida de humedad. Las bacterias
con cpsula son ms virulentas (patgena).
- Pared celular: Es una envoltura rgida y fuerte que da
forma a las clulas bacterianas. Evita los posibles daos
que producen cambios de presin osmtica. Existen dos
tipos:
- La Gram positiva: son ms gruesas y est compuesta
por una capa de glucopeptidos.
- La Gram negativa: compuesta por dos capas, una de
glucopeptidos rodeada de una bicapa fosfolipdica,
lipoprotenas y glucolipdica. Son ms resistentes a los
antibiticos.
- Membrana plasmtica: Es una envoltura que rodea al
citoplasma bacteriano. Su estructura y composicin es similar a la membrana de
eucariotas. Controla el intercambio de sustancias con el medio y presenta ciertas
evaginaciones, llamadas mesosomas (Prolongaciones internas de la membrana
plasmtica que contienen enzimas respiratorios y colaboran en el proceso de la divisin
celular).
- Citoplasma: Medio celular limitado por las membranas, muy semejante al de la clula
eucariota. En l se realizan la mayora de las reacciones metablicas de la bacteria.
- Ribosomas: Son orgnulos globulares encargados de sintetizar protenas a partir de la
informacin gentica que les llega del ADN.
- Cromosoma (nucleoide): es una regin irregular que contiene una molcula de ADN
circular y doble no asociado a histonas. Contiene la informacin gentica. Suele haber un
cromosoma accesorio, llamado plsmido o episoma, que contiene la informacin
necesaria para la formacin de pilis, la resistencia a antibiticos, la degradacin de
sustancias naturales.

Pilis (Pelos): Filamentos protenicos derivados de la pared que funcionan como

estructuras de fijacin. Algunos estn huecos y permiten el intercambio de material
gentico en el mecanismo parasexual.
- Flagelos: Son prolongaciones cuya longitud es varias veces la de la bacteria. Aparecen en
nmero entre 1 y 100. Intervienen en el desplazamiento y su estructura no es homloga a
la de los flagelos de eucariotas.
5. EQUIPOS Y MATERIALES:
- Mandil
- Cuaderno de anotaciones
- Lpiz
- Microscopio
- Mascarilla
- Guantes
- Gorro
- Muestra de bacterias
- Porta y cubreobjetos
- Safranina
- Cristal Violeta
- Lugol
- Alcohol Cetona
- Mechero Bunce
- Asa de Platino
6. PROCEDIMIENTO:
- Con ayuda del asa estril, tomar muestra del cultivo bacteriano y extenderla en un
portaobjetos Realizar el mismo procedimiento para diferentes tipos de cultivos bacterianos
- Esperar por lo menos 2 minutos sosteniendo las placas cerca de la llama del mechero, y
luego fijar la muestra haciendo pasar la placa 3 veces por la llama (de modo que la placa
corte la llama).
- Cubrir la muestra con cristal violeta por 1 minuto
- Lavar con agua
- Colocar lugol por 45 segundos
- Lavar la placa con agua
- Aadir alcohol acetona por 30 segundos
- Lavar con agua
- Cubrir con Safranina o fucsina durante 1 minuto
- Lavar con agua y dejar secar
- Colocar 1 gota de aceite de inmersin en la muestra
- Colocar la muestra en el microscopio sujetndola con la pinza de la platina
- Observar con el lente objetivos de 100x
- Dibujar lo observado en el lente e identificar si son bacterias Gram positivas o Gram
negativas

7. OBSERVACIONES:

GRAM POSITIVO

GRAM NEGATIVO

100
X

Listar las actividades o etapas en forma secuencial para el desarrollo de la prctica,

generalmente se utilizar entre otras:
- Observacin y reconocimiento de instrumentos y equipos
- Manejo de instrumentos y equipos
- Toma y recoleccin de datos
- Ordenamiento y procesamiento de datos
- Clculos y resultados
- Anlisis, graficacin e interpretacin de resultados
- Observaciones
8. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES:
Conclusiones:
- Se llama procariota o procarionte a las clulas sin ncleo celular definido, es decir, cuyo
material gentico se encuentra disperso en el citoplasma, reunido en una zona
denominada nucleoide.
- Las bacterias son causantes de infecciones y enfermedades.
- Algunas de estas bacterias son tiles para: la agricultura, industria, salud e investigacin.
- Para distinguir los diferentes tipos de organismos procariticos se utiliza la tincin de
Gram.
- Pudimos distinguir los tipos de bacterias como cocos, bacilos.
- En una muestra de cultivo bacteriano se puede verificar la existencia de flora bacteriana
mixta.
Recomendaciones:
- Es indispensable el uso del equipo de proteccin personal: guantes, mascarilla, gorro,
mandil, para evitar infecciones mientras se trabaja en el laboratorio.
- Seguir estrictamente las indicaciones que presenta el docente.
- Siempre trabajar en los mesones, as evitaremos manchas, derrames, adems que
tenemos la ventaja de estar cerca del suministro de agua.
9. BIBLIOGRAFA:
- Cecie Starr, Ralph Taggart 2006, Biologia/ Biology: La unidad y diversidad de la vida
-

D.Male; J. Brostoff; D. Broth;I. Roitt. Inmunologa. Espaa. Sptima edicin. Editor

Elsevier Mosby, 2007. 535 p.

Patrick.R.Murray. Microbiologa Mdica. Espaa, 5ta edicin. Editor Elsevier Mosby 2006 .
963 p.

Patrick R. Murray, Ken S. Rosenthal, Michael A, Pfaller. Microbiologia Medica, 6ta Edicion
2009 Elsevier Espaa, S.L

10. ANEXOS:
Cuestionario de evaluacin
1. Qu son las clulas procariotas?
Se llama procariota o procarionte a las clulas sin ncleo celular definido, es decir, cuyo
material gentico se encuentra disperso en el citoplasma, reunido en una zona
denominada nucleoide.
2. Dibuje una bacteria con sus partes y hable brevemente de cada una de ellas:

Pili y flagelos: compuesto por polisacridos y lipopolisacridos, su funcin es para el

movimiento y la conjugacin sexual.
Membrana celular: la biocapa est compuesta por un 40% de lpidos y 60% de protenas,
su funcin es la entrada y salida de sustancias.
Mesosomas: compuesta por protenas y carbohidratos y funciona para la replicacin del
ARN.
Nucleoide: compuesta por ADN y cromatina, su funcin es almacenar la informacin
gentica.
Ribosomas: compuesta por complejo de ARN y protenas, es el sitio de sntesis de
protenas.
Citoplasma: compuesta por molculas pequeas de protenas solubles, enzimas,
nutrientes y sales inorgnicas disueltas en solucin y es la regin donde se efectan
muchas reacciones metablicas.

3. Consulte las diferencias entre las bacterias Gram positivas y Gram negativas

4. Realice

un dibujo que
esquematice
la
membrana celular de Gram positivas y en otro la membrana de Gram negativas.
Identifique en ambos dibujos los componentes principales de cada una de ellas.

5. Cul es el fundamento de la tincin Gram?

Tincin Gram
La tincin Gram es una prueba potente y
rpida que nos permite diferenciar dos clases
de
bacterias
estas
son:
Bacterias
grampositivas y las gramnegativas.
Las grampositivas se tien de morado ya que
el colorante se queda atrapad en la capa
gruesa de peptidoglucanos que rodea a la
clula
Las gramnegativas tienen una capa de
petidoglucano mucho ms delgada es por ello
que no retiene el violeta cristal y por esto las
clulas se tien con safranina y las
observamos rojas.

Bacterias Escherichia coli vistas al microscopio tras ser teidas con la

tincinde Gram

6. Qu tipo de bacteria son las ms patgenas para el hombre las Gram positivas o
las Gram negativas y por qu?
La Gram negativa: compuesta por dos capas, una de glucopeptidos rodeada de una
bicapa fosfolipdica, lipoprotenas y glucolipdica. Son ms resistentes a los antibioticos.
Causan enfermedades. Algunos cocos gramnegativos causan la gonorrea (Neisseria
gonorrhoeae), la meningitis (Neisseria meningitidis) y sntomas respiratorios (Moraxella
catarrhalis), entre otros. Los bacilosgramnegativos incluyen un gran nmero de especies.
Algunos de ellos causan principalmente enfermedades respiratorias (Haemophilus
influenzae, Klebsiella pneumoniae , Legionella pneumophila,Pseudomonas aeruginosa),
enfermedades urinarias (Escherichia coli,Proteus mirabilis, Enterobacter cloacae, Serratia
marcescens) y enfermedades gastrointestinales (Helicobacter pylori, Salmonella
enteritidis, Salmonella typhi). Otros estn asociadas a infecciones nosocomiales
(Acinetobacter baumanii).