Tipos de cultivos celulares

Generalidades
Curso Introduccin al Cultivo de Clulas
Eucariotas
Ao 2015
Dra. Romina Manarin

Y as comenz todo
Wilhem Roux
1885

Ross Harrison
1907

Alexis Carrel
1913

Cultivo celular
Abarca al conjunto de tcnicas que permiten el
mantenimiento de las clulas in vitro,
vitro,
conservando al mximo sus propiedades
fisiolgicas, bioqumicas y genticas.

Existen 3 formas principales de iniciar un cultivo celular:

CULTIVO DE
RGANOS
EXPLANTES
PRIMARIOS

CLULAS
DISGREGADAS

Cultivo de rganos
El tejido se coloca sobre una
rejilla situada en la interfase
lquido-gas de un medio del que
obtiene los nutrientes.
Representa una buena rplica
del tejido de origen ya que se
conservan las interacciones
histolgicas.
El crecimiento es limitado.
Se necesita un nuevo explante
para cada experimento.

Explantes primarios
Constituidos por fragmentos pequeos de
tejidos u rganos que se adhieren a una
superficie en la que generalmente crecen
las clulas de la periferia del explante.
til para pequeas cantidades de tejidos,
como biopsias de piel.
Cultivo de un Explante primario de
carcinoma de piel de ratn
explante

crecimiento temprano de
clulas (3 dpe)

crecimiento celular luego de

la remocin del explante
(7dpe)

Cultivo de clulas disgregadas

Este tipo de cultivo est formado por clulas
dispersas disgregadas de un tejido vivo, de un
cultivo primario, o de una lnea celular, mediante
distintos sistemas mecnicos, qumicos o
enzimticos.
Las clulas crecen en suspensin o adheridas a una
superficie.
Generalmente son cultivos que contienen un nico
tipo de clula y stas suelen ser homogneas
genticamente.
Es el tipo de cultivo ms utilizado en la actualidad
debido a su capacidad de propagacin, es decir de
crecimiento mantenido.

Propiedades de los tipos de cultivos

Mecanismos de disgregacin
Enzimtica
1.tripsina fra
2.tripsina caliente
3.colagenasa
Mecnica

Tripsina caliente
Pequeas porciones
de tejido se incuban
con tripsina a 37C y
las clulas disociadas
deben recolectarse
por centrifugacin
cada media hora. La
tripsina se neutraliza
con suero en medio
de cultivo.

Tripsina fra
Las porciones de
tejido se incuban en
tripsina a 4C
durante 6-18 hs
permitiendo la
penetracin con una
mnima actividad
trptica y la digestin
se puede hacer en
un tiempo corto de
20-30 min a 37C.

Disgregacin por colagenasa

Disgregacin mecnica
SCRAPING O RASCADO

DISGREGACIN CON LA
JERINGA

TAMIZADO
PIPETEO

Inicio de un cultivo celular

Puede derivar del crecimiento de las clulas disgregadas.
El cultivo primario es lo primero de una serie de
procesos selectivos que finalmente darn origen a una
lnea celular.

Los cultivos celulares son los ms utilizados

MONOCAPA

SUSPENSIN

clulas hematopoyticas, clulas madres

Cultivos primarios

CULTIVO PRIMARIO
Cuando las clulas o tejidos
procedentes de un ser vivo crecen
sin haber pasado previamente por
una fase de crecimiento in vitro.

CULTIVO
SECUNDARIO
Cuando el cultivo procede
de una fase previa de
crecimiento in vitro

LNEA CELULAR

Subcultivos en monocapas

Tripsinizacin

Cundo hacer un Subcultivo o Pasaje

1. Alta densidad del
cultivo.
2. Agotamiento del
medio de cultivo.
3. Tiempo desde el
ltimo pasaje.

El origen de una lnea celular

Algunos Conceptos
LINEA CELULAR- CEPAS
Con los sucesivos pasajes o subcultivos, un cultivo
primario forma una lnea celular. Este trmino
implica la presencia de varios linajes celulares de
fenotipos similares o distintos.
As, al seleccionar uno de los linajes celulares por
clonado o por separacin celular fsica o por
cualquier otra tcnica de seleccin, para tener
ciertas propiedades especficas que han sido
identificadas en la masa de clulas del cultivo, esta
lnea celular se transforma en lo que se conoce
como cepa celular (o cell strain).

Evolucin de una lnea celular

Lneas celulares finitas y continuas

Normalmente, las lneas celulares tienen una vida finita que, segn el tipo
de clula, se puede prolongar entre 20 y 80 generaciones. Superado ese
lmite, las clulas entran en senescencia en la que pierden su capacidad
de proliferar, supuestamente por el acortamiento de los telmeros, y
mueren.
Sin embargo, algunas clulas (como las clulas de roedores y las clulas
tumorales) evitan la senescencia y dan lugar a lneas celulares continuas,
que crecen indefinidamente. Estas clulas pueden surgir de forma
espontnea (exposicin a radiaciones ionizantes o a carcingenos
qumicos) o inducida (infeccin vrica o transfeccin de ADN) y son el
resultado de un cambio genotpico denominado transformacin.
Las clulas transformadas se caracterizan porque son inmortales (crecen
indefinidamente); su crecimiento es aberrante (se pierde la inhibicin por
contacto, la limitacin de la densidad celular durante la proliferacin y la
dependencia del anclaje); son malignas (invaden tejidos y dan lugar al
crecimiento de tumores); son genticamente inestables y presentan
aberraciones cromosmicas.

Lneas celulares ms frecuentemente

utilizadas

Clulas en cultivo

fibroblastos

mioblastos

Clulas de tabaco

Epimastigotes de T. cruzi
Clulas VERO

Clulas RAW 264.7

Ventajas de los cultivos celulares

Ventajas de los cultivos celulares

Desventajas de los cultivos celulares

Desventajas de los cultivos celulares

Bancos y colecciones de cultivos

celulares
Los 2 bancos de lneas celulares ms importantes son:
- American Type Culture Collection (ATCC)
- European Collection of Cell Cultures (ECACC)
En Argentina:
- Asociacin Banco Argentino de Clulas (ABAC)
- Asociacin Argentina de Bancos de Tejidos (para
transplantes)
- Centro de Investigaciones en Qumica Biolgica
de Crdoba (ciquibic)

Servicios de ABAC
Venta de lneas celulares
Control de Micoplasma en Muestras de
Clulas
Depsito de Ampollas en Nitrgeno Lquido
Manual de ATCC

Designacin de lneas celulares

Las nuevas lneas celulares deberan tener:
un cdigo o designacin. Por ej. normal human brain, NHB
una clase celular o nmero de lnea celular . Si varias lneas
celulares fueron obtenidas de la misma fuente. Por ej. NHB1, NHB2,
etc.)
un nmero de clon. Por ej. NHB2-1, NHB2-2, etc.
el nmero de duplicaciones de la poblacin ( para lneas celulares
finitas), debera ser estimado e indicado despus de una barra. Por
ej. NHB2/2.
el nmero de pasaje desde el ltimo descongelamiento (para una
lnea celular continua) Por ej. HeLa-S3/p4).
Es esencial que la designacin de la lnea celular sea nica, para evitar
confusiones en distintos trabajos de la literatura. Los bancos de clulas eliminan
este inconveniente dando a cada lnea celular un nmero de acceso.

Consideraciones al elegir una lnea celular

Lnea celular finita o continua

Clulas normales o transformadas
Especie
Caractersticas de crecimiento
Disponibilidad
Validacin
Expresin fenotpica
Lnea celular control
Estabilidad

Muchas gracias