PRAKTIKUM FRAKSINASI

TUJUAN PRAKTIKUM:
Memisahkan golongan-golongan senyawa pada tumbuhan hingga diperoleh zat
murni menggunakan metode fraksinasi corong pisah dan kromatografi kolom
TINJAUAN PUSTAKA
Fraksinasi
Fraksinasi merupakan suatu prosedur yang digunakan untuk memisahkan
golongan utama kandungan yang satu dari kandungan golongan utama yang
lainnya. Fraksinasi merupakan prosedur pemisahan komponen-komponen
berdasarkan perbedaan kepolaran tergantung dari jenis senyawa yang terkandung
dalam tumbuhan.
Dalam metode fraksinasi pengetahuan mengenai sifat senyawa yang terdapat
dalam ekstrak akan sangat mempengaruhi proses fraksinasi. Oleh karena itu, jika
digunakan air sebagai pengekstraksi maka senyawa yang terekstraksi akan bersifat
polar, termasuk senyawa yang bermuatan listrik. Jika digunakan pelarut non polar
misalnya heksan, maka senyawa yang terekstraksi bersifat non polar dalam
ekstrak. Pada prakteknya dalam melakukan fraksinasi digunakan dua metode yaitu
dengan menggunakan corong pisah dan kromatografi kolom.
Corong pisah adalah peralatan laboratorium yang digunakan dalam ekstraksi caircair untuk memisahkan komponen-komponen dalam suatu campuran antara dua
fase pelarut dengan densitas yang berbeda yang tak tercampur.
Umunya salah satu fase berupa larutan air dan yang lainnya berupa
organiklipofilik seperti eter, MTBE, diklorometana, kloroforom, ataupun

etilasetat. Kebanyakan pelarut organik berada di atas fase air kecuali pelarut yang
memiliki atom dari unsur halogen. Pemisahan ini didasarkan pada tiap bobot dari
fraksi, fraksi yang lebih berat akan berada pada bagian dasar sementara fraksi
yang lebih ringan akan berada di atas. Tujuannya untuk memisahkan golongan
utama kandungan yang satu dari kandungan yang lain. Senyawa yang bersifat
polar akan masuk ke pelarut polar dan senyawa non polar akan masuk ke pelarut
non polar.
Corong pemisah berbentuk kerucut yang ditutupi setengah bola, mempunyai
penyumbat di atasnya dan di bawahnya. Corong pemisah yang digunakan dalam
laboratorium terbuat dari kaca borosilikat dan kerannya terbuat dari kaca ataupun
teflon. Ukuran corong pemisah bervariasi antara 50 ml sampai 3 L. Dalam skala
industri, corong pemisah bisa berukuran sangat besar dan dipasang sentrifuge.
Untuk memakai corong ini, campuran dan dua fase pelarut dimasukkan kedalam
corong dari atas dengan corong keran ditutup. Corong ini kemudian ditutup dan
digoyang dengan kuat untuk membuat dua fase larutan tercampur. Corong ini
kemudian dibalik dan keran dibuka untuk melepaskan tekanan uap yang
berlebihan. Corong ini kemudian didiamkan agar pemisahan antara dua fase
berlangsung. Penyumbat dan keran corong kemudian dibuka dan dua fase larutan
ini dipisahkan dengan mengontrol keran corong.
Kromatografi Kolom
Terjadinya proses pemisahan dapat dengan cara :
1. Adsorpsi - Adsorpsi komponen atau senyawa diantara permukaan padatan
dengan cairan (solid liquid interface) - Agar terjadi pemisahan dengan baik, maka

komponen-komponen tersebut harus mempunyai afinitas yang berbeda terhadap

adsorben dan ada interaksi antara komponen dengan adsorben
2. Partisi - Fase diam dan fase gerak berupa cairan yang tidak saling bercampur Senyawa yang akan dipisahkan akan berpartisi antara fase diam dan fase gerak.
Karena fase diam memberikan daerah yang sangat luas bagi fase gerak, maka
pemisahan berlangsung lebih baik.
Penyiapan kolom
Pemilihan ukuran kolom a. Tergantung jumlah sampel yang akan dipisahkan,
perbandingan adsorben-cuplikan (30:1) b. Perbandingan panjang dengan diameter
kolom (10-15:1) c. Untuk sampel yang multikomponen yang mempunyai afinitas
yang sama terhadap adsorben maka dipilih kolom yang panjang, sedangkan untuk
komponendengan afinitas yang berbeda terhadap adsorben maka dipilih kolom
yang pendek.
Cara melakukan adsorben ke dalam kolom: 1. Metode kering 2. Metode basah 3.
Metode bubur/lumpuran
Penggunaan kolom
1. Sebelum dilakukan elusi, kolom dibasahi dulu dengan sejumlah fase gerak yang
akan digunakan.
2. Sampel dimasukkan ke dalam kolom dalam bentuk padat maupun cair Sampel
bentuk padat : Dicampur dengan adsorben sampai merata, kemudian dengan
hati-hati dimasukkan ke dalam kolom yang sudah berisi adsorben Pada
kromatografipartisi, sampel dilarutkan dalam fase diam, kemudian dicampur
dengan bahan penyangga, baru ditempatkan di atas adsorben Sampel bentuk cair :

Dilarutkan/dicampur dengan fase gerak, kemudian dengan hati-hati dimasukkan

ke dalam kolom yang sudah berisi adsorben.
3. Setelah sampel masuk kolom, biasanya dilakukan pencucian terlebih dahulu
baru dielusi dengan fase gerak. Untuk mendapatkan hasil elusi yang baik, umunya
kecepatan fase gerak diatur 1-5 ml/menit.
4. Setelah elusi selesai, kromatogram dapat dideteksi dengan : - Berdasarkan
warna sampel, bila yang dielusi berwarna - Dengan sinar UV 366nm - Disemprot
dengan larutan/reagen penampak bercak
ALAT DAN BAHAN
A. Alat:
1. Corong pisah
2. Kolom kromatografi 3. Gelas ukur
4. Beaker glass
5. Erlenmeyer
6. Batang pengaduk
7. Kapas
8. Pipet 9. Botol vial
B. Bahan: 1. Ekstrak Temu Giring (Curcuma heyneana val.)
2. Metanol
3. Pelarut n-heksan
4. Pelarut etil asetat
5. NH4OH
6. Eluen (n-heksan:etil asetat = 1:1)

7. Adsorben silika gel GF 60

8. H2SO4
9. CHCl3
Prosedur Kerja :
A. Corong pisah
1. Cara kerja seperti pada bagan : 2. Semua proses dilakukan dalam corong pisah
3. Setelah didapat beberapa fraksi, fraksi-fraksi tersebut disimpan dalam botol vial
4. Simpan di lemari es.
B. Kromatografi Kolom
1.Siapkan kolom kromatografi, lalu bagian bawah kolom dimampatkan dengan
kapas secukupnya
2.Masukkan adsorben ke dalam kolom dengan cara kering yaitu dengan
memasukkan silika gel GF 60 sedikit demi sedikit ke dalam kolom sampai padat
3.Masukkan pelarut/eluen n-heksan:etil asetat (1:1) sebanyak 9 ml ke dalam
kolom perlahan-lahan jangan sampai terbentuk rongga
4.Kemudian masukkan ekstrak ke dalam kolom, akan terjadi elusi hingga senyawa
terpisahkan dan terbentuk pita-pita senyawa yang berwarna
5.Pita senyawa dikeluarkan dari kolom kemudian tampung ke dalam vial masingmasing sebanyak 3 ml
6.Simpan di lemari es.
HASIL DAN PEMBAHASAN

Berdasarkan tabel 4.1.2 terlihat bahwa Fraksi I didapat cairan keruh berwarna
kuning kehijauan dengan volume 10 mL. Fraksi II didapat cairan bening berwarna
merah darah dengan volume 20 mL. Fraksi III didapat cairan bening berwarna
kuning kehijauan dengan volume 15 mL.

Berdasarkan tabel 4.1.3 terlihat bahwa Fraksi I didapat Cairan berwarna merah
darah atau merah tua, Fraksi II didapat Cairan berwarna merah agak orange,
Fraksi III didapat cairan berwarna orange, Fraksi IV didapat cairan berwarna
kuning tua, Fraksi V, VI, VII didapat cairan berwarna kuning muda, dengan
jumlah volume masing-masing fraksi sebanyak 3 ml.
Berdasarkan tabel 4.1.2 terlihat bahwa Fraksi I didapat cairan keruh berwarna
kuning kehijauan dengan volume 10 mL. Fraksi II didapat cairan bening berwarna
merah darah dengan volume 20 mL. Fraksi III didapat cairan bening berwarna
kuning kehijauan dengan volume 15 mL. Fraksi I didapat dengan cara
menambahkan ekstrak yang terdapat di corong pisah dengan penambahkan 5 mL
H2SO4, 5 mL n-heksan, dan 5 mL Etil Asetat. Fraksi I didapat setelah dilakukan

pengocokan selama 15 menit kemudian corong pisah didiamkan sehingg terdapat

dua lapisan. Lapisan atas merupakan lapisan n-heksan yang berwarna kuning susu
kehijauan bersifat non polar karena n-heksan tersebut akan melarutkan atau
menarik zat-zat yang bersifat non polar. Sesuai literature metode penapisan
fitokimia bahwa fraksi hasil ekstrak adalah senyawa terpenoid dan fenol. Fraksi II
diperoleh dengan mengekstraksi lapisan asam atau lapisan bagian bawah dari hasil
ekstraksi pertama yang berwarna kuning jernih dengan cara menambahkan
NH4OH hingga diperoleh pH 10, tambahkan n-heksan dan methanol (3:1). Fraksi
II didapat setelah dilakukan pengocokan selama 15 menit. Setelah itu akan
terbentuk dua lapisan. Lapisan bawah merupakan lapisan air-asam yang berwarna
merah darah. Dalam literatur penapisan fitokimia, ekstrak tersebut adalah ekstrak
yang bersifat polar yaitu alkaloid kuartener dan n-oksida. Fraksi III diperoleh dari
lapisan yang berada di atas yang merupakan lapisan n-heksan methanol
berwarna kuning kehijauan bening. Dalam literatur penapiasan fitokimia, ekstrak
tersebut adalah ekstrak basa yang bersifat semi polar yang kebanyakan adalah
alkaloid.
Berdasarkan table 4.1.3 terlihat bahwa Fraksi I didapat Cairan berwarna merah
darah atau merah tua, Fraksi II didapat Cairan berwarna merah agak orange,
Fraksi III didapat cairan berwarna orange, Fraksi IV didapat cairan berwarna
kuning tua, Fraksi V, VI, VII didapat cairan berwarna kuning muda, dengan
jumlah volume masing-masing fraksi sebanyak 3 ml. Dari hasil yang diperoleh
dapat dilihat bahwa Fraksi I merupakan fraksi yang memiliki daya kelarutan yang
tinggi terhadap fase gerak dan kurang terserap atau terabsorbsi pada fase diam

sehingga fraksi tersebut lebih cepat bergerak keluar melalui kolom. Dan
sebaliknya untuk Fraksi VII merupakan fraksi yang kurang larut dalam fase gerak
dan lebih kuat terserap atau terabsorbsi pada fase diam sehingga fraksi tersebut
lebih lambat bergerak keluar melalui kolom.
Fraksi-fraksi

tersebut

didapat

dengan

metode

pemisahan

menggunakan

kromatografi kolom secara basah yaitu dengan cara cairan fase gerak dimasukkan
terlebih dahulu ke dalam kolom kemudian ditambahkan fase diam berupa zat
padat. Setelah itu masukan ekstrak temugiring yang ingin dipisahkan dan diamkan
sampai terbentuk fraksi atau pita-pita dalam kolom tersebut. Pada praktikum kali
ini kami menggunakan cara basah agar meminimalkan resiko terjadinya keretakan
fase diam akibat kekeringan atau kurang ratanya penyerapan fase gerak bila
dibandingkan cara kering maupun bubuh atau lumpuran. Pada saat menuangkan
fase diam ke dalam corong usahakan agar serbuk tersebut tidak menempel pada
dinding kolom dan tidak terbentuk rongga udara yang mengakibatkan pemisahan
berjalan tidak sempuna.
Disusun Oleh :
KELOMPOK 5 (LIMA)
KONVERSI 2012 - XA
G.A.P MARLIANA NIM 1204017021
PUTRI MUTIARA LESTARI NIM 1204017041
SELVI DWI CAHYANINGSIH NIM 1204017044
TUTI SURAHMAN NIM 1204017051
YULIANI PRATIWI NIM 1204017056

FAKULTAS FARMASI DAN SAINS

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PROF. DR. HAMKA
2012