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FACULDADE DE MEDICINA CENTRO DE CINCIAS DA VIDA PUC-Campinas

DISCIPLINA DE BASES MORFOFISIOLGICAS DO SISTEMA NERVOSO, SENSORIAL E LOCOMOTOR


BIOQUMICA A AULA PRTICA 9 (16 e 18 de maio)
Profa. Dra. Celene Fernandes Bernardes

AVALIAO DA ATIVIDADE DA ENZIMA AMILASE SALIVAR EFEITO DO pH E DA TEMPERATURA


A enzima -amilase salivar, em condies especficas de pH 6.8 e temperatura 37 C, catalisa a
hidrlise das ligaes osdicas -1-4 da cadeia glicosdica do polissacardeo amido. A hidrlise do amido,
catalisada pela -amilase, considerada parcial e os produtos resultantes so uma mistura de molculas de
glicose, maltose e dextrina limite.
Dextrina limite um tipo de glicosana no degradvel pela ao catalisadora da -amilase salivar
devido apresentar ligaes osdicas do tipo -1,6 nas extremidades das cadeias. A hidrlise das ligaes osdicas
-1,6 pode ser catalisada pela enzima intestinal especfica amilo-1,6-glicosidase.
A hidrlise do amido pode ser evidenciada na presena de iodo. Devido hidrlise, o tamanho da
cadeia glicosdica do amido diminui e a reao com o iodo no ocorre, deixando de ser evidente a colorao
azul arroxeada caracterstica de amido na presena de iodo.
Amido + iodo cor azul
Amilodextrina + iodo cor roxa
Eritrodextrina + iodo cor vermelha
Acrodextrina + iodo cor amarela escuro
Maltose + iodo cor amarela
Glicose + iodo cor amarela
A atividade enzimtica de hidrlise do polissacardeo amido, pela enzima amilase salivar, pode ser
evidenciada em condies ideais de temperatura (37 C) e pH 6,8.
O efeito da temperatura sobre a velocidade das reaes enzimticas duplo. A velocidade da
reao aumenta com o aumento da temperatura at que um mximo seja atingido, num mecanismo
denominado de ativao trmica. Acima da temperatura de atividade enzimtica mxima, ocorre diminuio da
velocidade da reao devido ao processo de desnaturao protica.
As enzimas apresentam atividade mxima em um determinado valor ou faixa de pH, denominado
de pH timo. A variao do pH afeta o carter inico dos grupos carboxila e amina dos aminocidos, o que pode
acarretar alterao da conformao da molcula e impedir a ligao do substrato no stio ativo da enzima,
alterando a atividade.
Procedimentos e resultados
Parte A - Coleta da enzima: Coletar 1,0 mL de saliva e diluir na proporo 1:4 com tampo fosfato pH 6.8 (1,0
mL de saliva + 3,0 mL de tampo). Reservar a saliva diluda para ser utilizada em etapas posteriores.
Parte B - Caracterizao de padres:
1. Identificar 2 tubos de ensaio e proceder conforme esquema abaixo:

3.
4.
5.
6.

RESULTADOS
Tubo 1
2,0 mL de
2 gotas do
Padro de no hidrlise
amido
Reativo de Lugol
Tubo 2
2,0 mL de
2 gotas do
Padro de hidrlise total
glicose
Reativo de Lugol
Homogeneizar e observar.
Colorao azul-arroxeada evidencia a formao de complexo de iodo com o polissacardeo amido,
caracterizando um padro indicativo de que no ocorreu hidrlise .
Colorao amarela caracteriza padro de hidrlise total do amido.
Reservar os tubos para comparao com a anlise das amostras a seguir.

Parte C - Avaliao do efeito do pH na atividade enzimtica


1.

Identificar 3 tubos de ensaio e proceder conforme esquema abaixo:


Tubo 1

Tubo 2

Tubo 3

2,0mL amido

2,0mL amido

2,0mL amido

2,0mL tampo fosfato pH6,8

2,0mL HCl

2,0mL NaOH

500 L saliva

500 L saliva

500 L saliva

20 minutos em banho-maria a 37 C
2 gotas reativo lugol

2.
3.

2 gotas reativo lugol

2 gotas reativo lugol (ou


quantidade suficiente para
observar colorao)

Agitar e observar a colorao.


Comparar com a colorao das solues padres e verificar a hidrlise de cada amostra.
Tubos

Condies Experimentais

RESULTADOS

amido + enzima pH 6,8 37 C

amido + enzima pH cido - 37 C

amido + enzima pH bsico 37 C

Parte D - Avaliao do efeito da temperatura na atividade enzimtica


1.

Identificar 3 tubos de ensaio e proceder conforme esquema abaixo:


Tubo 1

2.
3.

Tubo 2

Tubo 3

2,0mL amido

2,0mL amido

2,0mL amido

2,0mL tampo fosfato pH6,8

2,0mL tampo fosfato pH6,8

2,0mL tampo fosfato pH6,8

5 minutos a 37 C

5 minutos gelo

5 minutos gua fervente

500 L saliva

500 L saliva

500 L saliva

20 minutos a 37 C

20 minutos gelo

20 minutos gua fervente

2 gotas reativo lugol

2 gotas reativo lugol

2 gotas reativo lugol

Agitar e observar a colorao.


Comparar com a colorao das solues padres e verificar a hidrlise de cada amostra.

Tubos

Condies Experimentais

amido + saliva - 20 minutos pH 6,8 37 C

amido + saliva - 20 minutos pH 6,8 gelo

amido + saliva - 20 min. pH 6,8 gua fervente

RESULTADOS