Instituto

Tecnolgico de
Orizaba
INSTITUTO TECNOLGICO DE ORIZABA

MTRO. TITULAR: Ing. Mario Campos Andrade

MTRO. AUXILIAR: Ing. Flix Cortes Carrera

PRESENTA EL ESTUDIANTE:
Cabrera Rangel Ernesto
Prctica No.: 3

NOMBRE DE LA PRCTICA:

MTODOS ANALTICOS UTILIZADOS EN

FISICOQUMICA.
ESPECTROFOTOMETRO.
GRUPO: 7c2B
Lun-jue-vie; 15-17 HRS; SALON; LFQ
FECHA DE REALIZACIN: Febrero 18, 2014

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PRCTICA No. 3
MTODOS ANALTICOS UTILIZADOS EN
FISICOQUMICA.
ESPECTROFOTOMETRO.

OBJETIVO.
Obtener la curva de calibracin Absorbencia-Fraccin molar para sistemas
binarios.
FUNDAMENTOS.
De acuerdo a la Ley de Beer la absorbancia vara de acuerdo a la concentracin de
las soluciones.
INTRODUCCIN.
Cuando un haz de energa radiante monocromtica incide sobre una capa
homognea de una sustancia, parte de la energa es absorbida, otra parte es transmitida y una
pequea parte reflejada, por lo que, ignorando las prdidas debidas a reflexiones y disipacin,
la fraccin de la radiacin absorbida es una funcin de la concentracin de la sustancia en la
trayectoria de la luz y del espesor de la muestra. La ley que rige la concentracin y la cantidad
de luz o radiacin absorbida es la Ley de Beer o Ley de Lambert Beer.
LEY DE BEER.- Establece que la intensidad de un rayo de luz monocromtica decrece de
manera exponencial al aumentar la concentracin de una disolucin a travs de la
cual pasa.
Para la Ley de Beer son importantes los conceptos de transmitancia y absorbencia.
TRANSMITANCIA ( T ).- Es la relacin de las intensidades de la radiacin no absorbida,
con relacin a la muestra testigo, y de la radiacin incidente.
I
T =
Io
I = Poder de la radiacin no absorbida.
Io = Poder de la radiacin incidente. I

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ABSORBANCIA ( A ).- Es el logaritmo decimal de la recproca de la transmitancia.

1
1
A = -------- = - ----------log T
log Io
El porcentaje de Transmitancia es 100T; el porcentaje de Absorcin es 100(1-T)
Al pasar un haz de fotones por un sistema de una especie absorbente, el grado de
absorcin con respecto a la distancia atravesada es directamente proporcional al poder del haz
de fotones, la reduccin de la intensidad ( -dl ), puede enunciarse matemticamente como:
- dl
= kI
dx
k = Constante de proporcionalidad caracterstica de la especie absorbente y de la energa de
fotones.
x = Distancia en el medio absorbente o grosor de la capa del medio absorbente.
Reordenando y separando variables, el enunciado matemtico de que la fraccin
del poder de radiacin absorbida es proporcional al espesor atravesado queda:
dI
-

= - d(ln I) = k dx
I

Estipulando que Io es el poder de la radiacin al inicio de la capa de sustancia

absorbente, es decir a una distancia cero, x = 0, y que I representa el poder radiante de la
radiacin transmitida que emerge del medio absorbente a x = b.

Io

0
b
Fig. 3.1.- Intensidad del haz de fotones que pasa a travs de una capa de solucin.

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La ecuacin puede integrarse con respecto al total del trayecto de la radiacin,

quedando:

d ln I = k d x
Io
0

Obteniendo:
Io
ln Io ln I = ln

= kb
I

Beer tambin relacion la intensidad de la luz transmitida con la concentracin de

las soluciones, para ello determin que, al aumentar la concentracin del absorbente se
produce el mismo efecto que un aumento proporcional en la longitud del trayecto de
absorcin de la radiacin. As la constante de proporcionalidad k, es a su vez, proporcional a
la concentracin de la solucin absorbente, esto es:
k = aC
usando logaritmos de base 10 en vez de naturales queda:
Io
ln

= abC
I

donde a incorpora el factor de conversin de base diez, es decir, 2.303

Si la longitud del trayecto en la muestra se expresa en centmetros y la
concentracin en gramos de absorbente por litro de solucin, la constante a, llamada
absorbencia relativa especfica o coeficiente de absorcin, tiene por unidades litro/ gr. Cm
Si se desea especificar C en trminos de concentraciones molares, manteniendo b
en centmetros, entonces la ecuacin anterior se escribe:
Io
ln

= bC

I
donde , en unidades de lt / mol cm, se llama absorbencia molar o coeficiente molar de
absorcin.

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Para comprobar lo anterior se puede utilizar un espectrofotmetro. Las escalas de

lectura y de medicin de los espectrofotmetros estn calibradas para leer Absorbencias y
Transmitancias.
Una grfica de la TRANSMITANCIA en funcin de la concentracin ser una
curva como lo muestra la Fig.3.2
Una grfica de la ABSORBANCIA en funcin de la concentracin ser una lnea

recta que pase por el origen, como lo muestra la Fig. 3.3.

Fig. 3.2.- Grfica Transmitancia Concentracin

Fig. 3.3.- Grfica Absorbancia Concentracin

La Fig.3.4 muestra la comparacin de las escalas de Absorbancia y Transmitancia.

TRANSMITANCIA %

ABSORBANCIA

100

90

0.05

80

70

60

50

0.1 0.15 0.2

0.3

40

30

0.4 0.5 0.6

20

10

0.8 1

Fig. 3.4.- Comparacin de las escalas de ABSORBANCIA Y TRANSMITANCIA.

Generalidades:
En un espectrofotmetro, la luz blanca que proviene de una fuente de luz (una bombilla)
atraviesa un monocromador, de donde sale la luz de la longitud de onda (color) seleccionada.
Esta luz pasa a continuacin a travs de una solucin contenida en la celda ptica, llamada
cubeta. La solucin absorbe una fraccin de la luz y un detector mide la reduccin de

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intensidad de luz resultante (la absorbancia). Cuanto ms intenso sea el color de la solucin,
mayor ser la medida de absorbancia.

Las cubetas ms comnmente utilizadas tienen una longitud de 1cm y requieren un volumen
mnimo de 3 ml de solucin para obtener medidas satisfactorias. El objetivo principal de un
espectrofotmetro de uso general es la medida exacta y precisa de la absorbancia. Por tanto, la
seleccin de la longitud de onda debe ser lo ms exacto posible y la luz altamente
monocromtica (es decir de un estrecho rango de longitudes de onda). Consecuentemente la
construccin de un aparato de este tipo es complicada y poco obvia para un usuario tpico, el
instrumento es caro.
MTODOS FOTOMTRICOS DE ANLISIS
1.

NATURALEZA DE LA RADIACIN ELECTROMAGNTICA

La Radiacin Electromagntica es una forma de Energa radiante que se propaga en forma de

ondas. En este fenmeno ondulatorio se define:
a)
Longitud de onda (l): es la distancia entre dos mximos de un ciclo completo del
movimiento ondulatorio. Se expresa, segn el S.I. en nanmetros (nm) y sus equivalencias
son: 1nm = 1mm =10 A0 = 10-9 m.
b)
Frecuencia (n): es el nmero de ciclos por segundo. Es inversa a la longitud de
onda. Su frmula es: n = c/l, y se mide en ciclos por segundo o hertzios.
c)
Fotones: la luz est formada por fotones, y estos son paquetes discontinuos de
E. La E de un fotn depende de la frecuencia y de la longitud de onda, segn la siguiente
expresin: E = h xn = h x c/n (h = Cte. de Planck = 6,62.10-27erg/seg.). La Energa
Electromagntica se mide el Ergios. La relacin entre la longitud de onda y la Energa es
inversa, por lo tanto a menor longitud de onda mayor Energa y viceversa.
d)
Espectro Electromagntico: cubre un amplio intervalo de E radiante, desde los
rayos g de longitud de onda corta hasta las ondas de radio, de longitud de onda larga. Se
divide en varias regiones, las ms interesantes para nosotros son:

Regin Ultravioleta: l = 10-380 nm

Regin Visible: l = 380-780 nm

Regin Infrarroja: l = 780-30.000 nm

En la Regin Visible, la luz se descompone en colores. La luz blanca contiene todo el
espectro de longitudes de onda. Si interacciona con una molcula puede ser dispersada o
absorbida.

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2.

FENMENOS DE INTERACCIN ENTRE LUZ Y MATERIA

A.
FENMENO DE ABSORCIN
Cuando una partcula que se encuentra en estado de reposo o estado fundamental interacciona
con un haz de luz, absorbe E y se transforma en una partcula en estado excitado. La molcula
absorbe la E de la onda y aumenta su energa, y ese aumento de energa es igual a la E de la
Radiacin Electromagntica absorbida (E = h.n). La partcula en estado excitado tiende a
volver de forma espontnea a su estado de reposo desprendiendo la E absorbida en forma de
calor.
Espectro de Absorcin. Cada especie absorbente, que recibe el nombre de cromgeno, tiene
un determinado espectro de absorcin. El espectro de absorcin es un grfico donde se
representa en ordenadas la Absorbancia y en abcisas la longitud de onda. La medida de la
cantidad de luz absorbida por una solucin es el fundamento de la espectrofotometra de
absorcin.
Por eso es importante trabajar a la longitud de onda a la que la sustancia estudiada absorbe la
mayor cantidad de luz (a mayor cantidad de luz, mayor cantidad de sustancia).
B.

FENMENO DE EMISIN

Algunos compuestos, tras ser excitados por la luz, vuelven al estado fundamental produciendo
la emisin de energa radiante. En este caso, lo que se mide es la energa emitida y, en este
fenmeno se basa la fotometra de llama o la fluorescencia.
3.

LEYES DE ABSORCIN

Cuando un haz de luz pasa a travs de un medio, se registra una cierta prdida de intensidad,
debido a la absorcin por parte de la sustancia.
Se llama TRANSMITANCIA (T) a la relacin entre la luz incidente y la luz transmitida:
T = Is / I0 ; %T = (Is / I0 ) x 100.
Se puede perder intensidad por la interaccin con la cubeta o el solvente. Para evitar este error
se hace una primera medida con una solucin de referencia o BLANCO, que contiene todos
los posibles compuestos que intervienen en la lectura menos el que vamos a medir. Todas las
medidas que se hagan con posterioridad sern referidas a esta medida inicial y se harn en la
misma cubeta que se utiliz en la medida del blanco.
La Transmitancia se usa poco, se emplea ms la Absorbancia (A) porque la relacin entre A
y la concentracin de una solucin es directamente proporcional y la de la T es inversamente
proporcional.
La relacin entre la absorbancia y la transmitancia es la siguiente:
Si el %T = 100
A = 2-log T = 2-log 100 = 0
Si el %T = 0
A = 2-log 0 =
En los aparatos que se usan actualmente se presentan absorbancias, pero el aparato lo que
mide realmente es %T que luego transforma a absorbancia.
3.1. LEY DE BEER
La absorbancia de una solucin es directamente proporcional ala concentracin y a la
longitud del paso de la luz.
A = e . b. c
Siendo:

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A: absorbancia. No tiene unidades.

e: el coeficiente de extincin molar, tambin llamado coeficiente de absorcin. Es constante
para un compuesto dado siempre que se fijen condiciones de longitud de onda, de pH, de
temperatura, de solventes, etc. Sus unidades son 1/ (mol/cm).
b: es la longitud de paso de la luz, en cm.
c: es la concentracin del absorbente. Se mide en mol/L.
La aplicacin prctica de la Ley de Beer es, que conociendo la absorbancia de una sustancia
podemos averiguar su concentracin y esto lo podemos hacer de dos formas:
1.
Por comparacin con una solucin conocida: si tenemos 2 soluciones,
una problema (P) y una estndar (S), podemos establecer la siguiente relacin matemtica
entre ellas:
2.
A travs de una curva de calibracin: la curva de calibracin es la
representacin grfica en un eje de coordenadas de la Absorbancia (eje de ordenadas) frente
a la Concentracin (eje de abcisas). Se ensayan varias soluciones de concentracin conocida y
se determinan sus A, construyndose la curva de calibrado, que es una recta. Una vez
ensayadas las soluciones problemas, su concentracin se averigua por interpolacin de las A
de las soluciones problema en la curva de calibracin.
Hay que tener en cuenta la LINEALIDAD, que es el intervalo de concentraciones del
cromgeno entre las cuales existe una relacin lineal entre Absorbancia y Concentracin.
Cuando la concentracin del cromgeno sobrepasa los lmites de linealidad se deja de
cumplir la Ley de Beer, convirtindose la recta en una curva. La lectura de la
Absorbancia fuera de los lmites de linealidad se traduce en una concentracin falsamente
baja de cromgeno. En esta situacin, hay que diluir la muestra para que su concentracin
entre en los lmites de la linealidad.

Empleo de los Factores de Calibracin: Para

reactivos estables y sistemas fotomtricos estables, este factor se puede mantener constante,
siendo slo necesario ensayar las muestras problema multiplicando la A resultante por el
factor F.
4. ESPECTROFOTMETRO
Se distinguen dos tipos de aparatos:
Fotmetro o Colormetro: se caracterizan porque utilizan filtros que solo permiten el paso
de una determinada longitud de onda.
Espectrofotmetros: utilizan cromadores. Con ellos se obtiene un haz de luz monocromtico
cuya longitud de onda se vara a voluntad. Los monocromadores pueden ser de dos tipos:
prismas y redes de difraccin.
2.2.
COMPONENTES DEL ESPECTROFOTMETRO
1. Fuente de luz: proporciona energa radiante en forma de luz visible o no visible.

Tipos de lmparas:
Lmparas de filamento de tungsteno: se utilizan para longitudes de
onda del espectro visible y el ultravioleta prximo. Son fuentes de un espectro continuo de
energa radiante entre 360-950 nm.
Lmparas de filamentos de haluros de tungsteno: son de mayor
duracin y emiten energa radiante de mayor intensidad.
Lmparas de Hidrgeno y Deuterio: producen un espectro continuo
en la regin ultravioleta entre 220-360 nm.

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Lmparas de vapores de Mercurio: Emiten un espectro discontinuo o

espectro de lneas que se utilizan para calibracin de longitudes de onda, se emplean solo para
espectrofotmetros y cromatografa HPLC.
Precauciones:
- Las subidas y bajadas bruscas de tensin producen sufrimiento de la lmpara y cambios en
las lecturas de la Absorbancia.
- La lmpara tiene una vitalidad limitada y se debe vigilar para que funcione bien el aparato.
(03/10/01)
2. Rendija de entrada: tiene como funcin reducir al mximo la luz difusa y evitar que la luz
dispersa entre en el sistema de seleccin de longitud de onda.
3. Monocromadores. Pueden ser:
Prismas: son fragmentos con forma de cua de un material que
permite el paso de la luz. Ej. De vidrio para trabajar en el espectro visible o cuarzo para
trabajar en el ultravioleta lejano.
Redes de difraccin: son un gran nmero de lneas paralelas
situadas a distancias iguales entre s y son hendiduras sobre un vidrio o una superficie
metlica. Cada una de estas hendiduras se comporta como un pequeo prisma.
4. Rendija de salida: tiene como funcin impedir que la luz difusa atraviese la cubeta de la
muestra, que provocara desviaciones a la Ley de Beer.
5. Cubeta: es el recipiente donde se coloca la muestra para la medicin. Pueden ser de
distintos tipos y tamaos (cuadradas, rectangulares, redondas). Se obtienen mejores resultados
usando cubetas de bordes paralelos. Si se utilizan cubetas redondas se deben marcar e
introducir en el aparato siempre en la misma posicin. Suelen estar fabricadas en vidrio o en
plstico.
6. Detector. Puede ser de dos tipos:
Fotoclulas o clulas fotovoltaicas:
Es una lmina de Cobre sobre la que se extiende una capa de Selenio o de xido de Cobre. A
sto se le conoce como semiconductor. Sobre el semiconductor hay una capa de metal
transparente que sirve de electrodo. La luz incide sobre el Selenio y ste desprende electrones,
que pasan a la placa de Cobre originando una diferencia de potencial por existir carga
negativa sobre el Cobre y positiva sobre el Selenio. El conjunto se conecta a un ampermetro
que seala el paso de corriente.
Caractersticas: son resistentes; econmicas; sensibles desde el ultravioleta hasta los 1.000
nm. de longitud de onda; no se requiere batera externa, ni vaco,...; la corriente producida es
directamente proporcional a la Energa que llega y tienen efecto fatiga, es decir, que
presentan una subida inicial de corriente, que luego decrece progresivamente hasta el
equilibrio. Por eso hay que esperar entre 30-60 segundos entre una lectura y otra.
Fototubos multiplicadores:
Un fototubo multiplicador es un tubo que contiene un ctodo que emite electrones de forma
proporcional a la Energa que incide sobre l. Tiene un nodo que recoge los electrones y la
corriente se multiplica varias veces al chocar los electrones sobre sucesivos nodos que van
teniendo un voltaje superior al precedente. La seal se amplifica en cientos o miles de veces.
Caractersticas: el tiempo de respuesta es muy rpido, no tienen efecto fatiga tan altos como
la anterior y son muy sensibles.
7. Medidor: son sistemas de lectura de la Energa elctrica que recoge el detector y que puede
ser lectura directa (se utiliza una clula fotovoltaica) o puede ser amplificadores de seal
como en el caso del fototubo multiplicador. Los actuales aparatos incorporan lectura digital y
clculos automticos de concentraciones con relacin a las curvas de calibracin.

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4.2 TIPOS DE APARATOS

ESPECTROFOTMETRO DE HAZ SIMPLE: es igual que la descripcin dada para el
espectrofotmetro en general. Consta de los mismos elementos (Ej. Bilirrubinmetro: para
determinar bilirrubina directa en capilar).
ESPECTROFOTMETRO DE DOBLE HAZ EN EL ESPACIO: todos los componentes
estn duplicados, menos la lmpara y el medidor. Dos haces de luz pasan al mismo tiempo por
los distintos componentes separados en el espacio. Esto compensa las variaciones de
intensidad de luz y de absorbancia.
ESPECTROFOTMETRO DE HAZ DOBLE EN EL TIEMPO: utilizan los mismos
componentes que el espectrofotmetro de haz simple. Dos haces de luz pasan por los mismos
componentes pero no al mismo tiempo. Emplean un Chopper consistente en un interruptor
rotativo del haz luminoso colocado a continuacin de la rendija de salida. Un sistema de
espejos dirige la porcin de luz reflejada por el chopper a travs de una cubeta de referencia
y de ah al detector comn. El detector lee alternativamente el haz procedente de la muestra y
el de la cubeta de referencia. Esto compensa la variacin de energa radiante.

SEGURIDAD EN EL LABORATORIO.
Los reactivos utilizados son solventes altamente inflamables por lo que se debe
tener cuidado al manejarlos.
MATERIAL Y EQUIPO
1 Espectrofotmetro UV
2 Foto-celdas
24 Frasquitos con tapn.
2 Soportes.
4 Buretas
2 Pinzas dobles para bureta.
4 Vasos de p.p. de 100 ml.
Etiquetas.

REACTIVOS
50 ml.
50 ml.
50 ml.
50 ml.

Metanol
Agua destilada
Acetona.
Cloroformo.

PROCEDIMIENTO.
1. Conecte el espectrofotmetro de la Fig.3.5.
2. Encienda el espectrofotmetro, usando el botn de POWER que est en el lado derecho
del tablero de control.
3. Ajuste la posicin de la lmpara de Deuterio (UV), tirando hacia fuera de la palanca,
hasta que llegue al tope.
4. Mueva el switch de energa de la lmpara de DEUTERIO-UV, oprima el botn
STARTER aproximadamente 2 segundos y sultelo. Deje que se caliente durante 30 min.

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5. Seleccione la longitud de onda deseada con el selector (para el sistema metanol-agua es

260 para el sistema acetona-cloroformo es 320).
6. Abra la cubierta del compartimiento de la muestra.
7. Llene la celda con una solucin en blanco (es la muestra del frasco 1) e insrtelo dentro
del compartimento para la muestra. Cirrelo.
8. Seleccione el modo de operacin: ABSORBANCIA usando el selector de MODO
9. Fije en LO (BAJO) la perilla de SENSIBILIDAD localizada en el centro de la parte de
abajo del frente del aparato.
10. Fije 100% TRANSMITANCIA- 000% ABSORBANCIA para el blanco usando el botn
de control 100 %T / 0% A localizado en el lado izquierdo de la parte baja del frente del
aparato. Si no se puede fijar 100 %T- 000% A para el blanco, mueva la perilla de
SENSIBILIDAD a la M (MEDIO) o, si es necesario, a la posicin HI (ALTO),
Asegrese de ajustar el 100 %T / 0% A cada vez que ajuste la SENSIBILIDAD.
11. Retire el blanco
12. Llene en la misma forma la cubeta o celda, con cada una de las muestras a medir.
Determine y anote la ABSORBANCIA para cada una en la Tabla de Datos Experimentales.

FIG. 3.5. ESPECTROFOTMETRO.

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TABLA DE DATOS EXPERIMENTALES. SISTEMA AGUA METANOL.

MUESTRA

VH2O
ml

VCH3-OH
Ml

4.7

0.3

4.5

0.5

3.5

1.5

2.5

2.5

1.5

3.5

10

11

0.5

4.5

12

ABSORBANCIA

0
0.002
0.004
0.004
0.022
0.026
0.028
0.029
0.038
0.040
0.042
0.050

F. MOLAR
X

MOLES
DE H2O

MOLES DE
METANOL

0.0000

0.2769

0.0000

0.0277

0.2603

0.0074

0.0472

0.2493

0.0123

0.1003

0.2216

0.0247

0.1604

0.1939

0.0370

0.2291

0.1662

0.0494

0.3083

0.1385

0.0617

0.4007

0.1108

0.0741

0.5098

0.0831

0.0864

0.6407

0.0554

0.0988

0.8005

0.0277

0.1111

1.0000

0.0000

0.1234

TABLA DE DATOS EXPERIMENTALES. SISTEMA TOLUENO ACETONA.

MUESTRA

VACETONA
ML

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11

5
4.7
4.5
4
3.5
3
2.5
2
1.5
1
0.5

VTOLUENO
F.
ABSORBANCIA
ML
MOLAR
0
0.3
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
4
4.5

0
0.798
1.125
1.52
1.8
1.98
1.998

0.0000
0.0425
0.0717
0.1481
0.2296
0.3167
0.4101
0.5105
0.6186
0.7355
0.8622

MOLES
DE
ACETONA

MOLES
DE
TOLUENO

0.0677
0.0636
0.0609
0.0541
0.0474
0.0406
0.0338
0.0271
0.0203
0.0135
0.0068

0.0000
0.0028
0.0047
0.0094
0.0141
0.0188
0.0235
0.0282
0.0329
0.0376
0.0423

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12

1.0000

0.0000

0.0470

CLCULOS Y GRFICAS:
1.

Para el sistema agua-metanol use la fraccin molar de la prctica anterior y para el de

cloroformo acetona calcule la fraccin molar con respecto a la acetona:
Moles de acetona
Xacetona =
Moles de acetona + Moles de tolueno

2.

Construya una curva de calibracin para cada sistema, colocando la Absorbancia en el

eje Y y la Fraccin molar de cada muestra en el eje X.

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OBSERVACIONES.
Se presentaron inconvenientes en la realizacin de esta prctica para nuestro equipo.
nicamente se obtuvieron 7 lecturas de absorbancia. Decidimos realizar la grfica con
solo estas 7 lecturas, debido a que nos permita obtener una curva regular.
NOTA: Hacer las anotaciones y agregar fotos de las observaciones pertinentes.
CONCLUSIONES.
Obtuvimos una grfica regular, permitindonos observar la variacin de la absorbancia
con respecto a la fraccin molar.

BILBIOGRAFIA.
1. GONZALES,Sergio,Espectrofotometria,2001,http://perso.wanadoo.es/sergioram1/esp
ectrofotometria.htm [Consulta: sbado 15 de Febrero del 2014]
IDENTIFICACIN Y TRATAMIENTO DE RESIDUOS GENERADOS.
No se generaron residuos