Curso Rotinas Laboratoriais

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Portal Educao
P842r
Rotinas laboratoriais / Portal Educao. - Campo Grande: Portal Educao,

2013.
148p. : il.
Inclui bibliografia
ISBN 978-85-8241-700-3
1. Qumica - laboratrio. 2. Bioqumica princpios. I. Portal Educao. II.
Ttulo.
CDD 542.1
SUMRIO
INTRODUO ..........................................................................................................................7
REGRAS DE SEGURANA NO LABORATRIO ...................................................................8
2.1
SEGURANA NO TRABALHO ..................................................................................................8
2.1.1 Risco Fsico ................................................................................................................................8

2.1.2 Risco Qumico ............................................................................................................................9
2.1.3 Risco Biolgico ..........................................................................................................................10
2.1.4 Grupos de Riscos Biolgicos .....................................................................................................11
2.2
CDIGO DE PRTICAS ...........................................................................................................12
2.2.1 Normas de Acesso ....................................................................................................................12

2.2.2 Normas de Proteo Individual ..................................................................................................14
2.2.3 Normas de Procedimento ..........................................................................................................16
2.2.4 Controle da Segurana Biolgica ..............................................................................................17
3
O LABORATRIO CLNICO ....................................................................................................19
3.1
INSTALAES .........................................................................................................................19
3.2
EQUIPAMENTOS E MATERIAIS DE LABORATRIO .............................................................22
PRINCPIOS DE BIOQUMICA .................................................................................................44
4.1
CARBOIDRATOS ......................................................................................................................44
4.1.1 Monossacardeos ......................................................................................................................44

4.1.2 Polissacardeos .........................................................................................................................46
4.2
PROTENAS .............................................................................................................................48
4.2.1 Aminocidos ..............................................................................................................................49

4.2.2 Peptdeos e Protenas ...............................................................................................................50
4.2.3 Enzimas .....................................................................................................................................52
4.3
LIPDIOS ...................................................................................................................................53
3
4.3.1 cidos Graxos ...........................................................................................................................54

4.3.2 Triglicerdeos .............................................................................................................................54
4.3.3 Fosfolipdios ..............................................................................................................................55
5
PRINCPIOS DE MICROBIOLOGIA .........................................................................................57
5.1
ESTRUTURAS PROCARIONTES .............................................................................................58
5.1.1 Membrana Citoplasmtica .........................................................................................................58

5.1.2 Parede Celular...........................................................................................................................59
5.1.3 Clios e Flagelos ........................................................................................................................60
5.1.4 Material Gentico ......................................................................................................................61
5.1.5 Componentes citoplasmticos ...................................................................................................61
5.2
NUTRIO E METABOLISMO .................................................................................................62
5.3
CRESCIMENTO MICROBIANO ................................................................................................63
5.3.1 Ciclo de Crescimento................................................................................................................64

6
PRINCPIOS DE HEMATOLOGIA ............................................................................................66
6.1
PLASMA ....................................................................................................................................66
6.2
HEMCIAS ................................................................................................................................66
6.3
LEUCCITOS ..........................................................................................................................68
6.4
PLAQUETAS .............................................................................................................................69
PRINCPIOS DE IMUNOLOGIA ................................................................................................70
7.1
IMUNIDADE INATA ...................................................................................................................70
7.1.1 Fatores Fsicos ..........................................................................................................................70

7.1.2 Fatores Qumicos ......................................................................................................................71
4
7.1.3 Fatores Biolgicos .....................................................................................................................71
7.2
IMUNIDADE ADQUIRIDA .........................................................................................................72
7.3
ANTICORPOS E ANTGENOS .................................................................................................72
INTRODUO ..........................................................................................................................77
TCNICAS DE PIPETAGEM E MICROPIPETAGEM ...............................................................78
9.1
PIPETAS ...................................................................................................................................78
9.2
MICROPIPETAS .......................................................................................................................81
9.2.1 Pipetagem Direta .......................................................................................................................83

9.2.2 Pipetagem Reversa ...................................................................................................................84
10
USO DE CAPELA E CABINES DE SEGURANA BIOLGICA..............................................86
10.1 CAPELA ....................................................................................................................................86

10.2 CABINES DE SEGURANA BIOLGICA .................................................................................87
10.2.1 CBS Classe I.............................................................................................................................87
10.2.2 CBS Classe II............................................................................................................................88
10.2.3 CBS Classe III...........................................................................................................................90
10.3 TRABALHANDO COM CABINES DE SEGURANA BIOLGICA............................................91
10.3.1 Luz ultravioleta ..........................................................................................................................91
10.3.2 Limpeza ....................................................................................................................................91
10.3.3 Cuidados durante operao CBS .............................................................................................92

10.3.4 Resumo de Utilizao de CBS ..................................................................................................93
11
QUALIDADE E AUTOMAO NO LABORATRIO DE ANLISES CLNICAS .....................96
12
PREPARO DE SOLUES .....................................................................................................101

5
12.1 DEFINIES............................................................................................................................101
12.2 CLCULOS ..............................................................................................................................102
12.2.1 Percentual (%) .........................................................................................................................102
12.2.2 Concentrao (g/l) ...................................................................................................................103
12.2.3 Molaridade (M) .........................................................................................................................104
12.2.4 Diluio ....................................................................................................................................105
12.2.5 Mistura de Solues ................................................................................................................106
12.3 CUIDADOS NA PREPARAO DE SOLUES ....................................................................107
12.4 ROTEIRO ILUSTRATIVO .........................................................................................................108
13
PREPARO DE MEIOS DE CULTURA .....................................................................................111
13.1 CLASSIFICAO QUANTO AO ESTADO FSICO ..................................................................111

13.2 CLASSIFICAO QUANTO A CONSTITUIO .....................................................................112
13.3 CLASSIFICAO QUANTO A FINALIDADE ...........................................................................113
13.4 PROCEDIMENTOS GERAIS PARA PREPARO DE MEIO DE CULTURA...............................116
13.4.1 Preparao e Distribuio ........................................................................................................116
13.4.2 Controle de Qualidade .............................................................................................................117
14
LAVAGEM E ESTERILIZAO...............................................................................................119
14.1 LAVAGEM ................................................................................................................................119
14.2 EMBALAGEM ...........................................................................................................................121

14.3 ESTERILIZAO .....................................................................................................................122
14.3.1 Mtodos Fsicos .......................................................................................................................123
14.3.1.1 Calor Seco ............................................................................................................................123
6
14.3.1.2 Calor mido ..........................................................................................................................125
14.3.1.3 Filtrao ................................................................................................................................127
14.3.1.4 Radiao ...............................................................................................................................127
14.3.2 Mtodos Qumicos ...................................................................................................................128
14.3.2.1 xido de Etileno ....................................................................................................................128
14.3.2.2 Formaldedo ..........................................................................................................................129
14.3.2.3Composto de amnia .............................................................................................................129
14.3.2.4 cido Paractico ...................................................................................................................130
15
ORGANIZAO DO AMBIENTE DE TRABALHO..................................................................131
15.1 FLUXO DE TRABALHO ...........................................................................................................131

15.2 EQUIPAMENTOS .....................................................................................................................131
15.3 CONTROLE DE ESTOQUE .....................................................................................................132
15.4 REGISTROS ............................................................................................................................135
REFERNCIAS ..................................................................................................................................146
1 INTRODUO
O trabalho em um laboratrio extremamente prazeroso e traz muito conhecimento aos

colaboradores atuantes nesta rea. Porm, tambm existem vrias regras e conhecimentos
especficos necessrios para a realizao de um trabalho de qualidade e seguro.
Ter comprometimento e perfil para assumir um lugar nesta rotina so os pr-requisitos
desta rea. O funcionrio deve ser detalhista, paciente, saber trabalhar em equipe, ser
habilidoso, criativo e interessado em aprender.
O trabalho em um laboratrio no como em um escritrio, onde se pode parar quando
chegar o horrio do fim do expediente. As clulas e microrganismos no esperam. preciso
obedecer ao tempo deles.
Por isso a organizao um dos elementos fundamentais para uma rotina bemsucedida. Programar os ensaios e atividades a chave do sucesso para a organizao eficiente
do tempo.
Alm disso, como se comportar em um laboratrio, quais so os instrumentos
disponveis para o trabalho neste ambiente, os porqus e como das tcnicas usadas nas
anlises, tudo isso abordaremos aqui neste curso.
Com informaes importantes para o dia a dia de um analista e com informaes
tericas sobre o curso Rotinas Laboratoriais visa trazer ao aluno conhecimentos da vida prtica
de um laboratrio e introduzi-lo vida no laboratrio.
2 REGRAS DE SEGURANA NO LABORATRIO
2.1 SEGURANA NO TRABALHO

8
A presena de materiais perfurocortantes, vidrarias que podem se quebrar e causar

cortes, solues qumicas, materiais biolgicos potencialmente contaminados, alm de inmeros
outros fatores presentes em um laboratrio podem levar a um acidente de trabalho. Por isso
necessrio que haja procedimentos especficos predeterminados e difuso desse conhecimento
dentro da equipe tcnica para a preveno de acidentes e manuteno da qualidade do
ambiente de trabalho. Para a manuteno da Segurana do Laboratrio preciso avaliar fontes
e fatores de risco sade do trabalhador e promover condies e procedimentos para minimizar
acidentes de trabalho.
Vamos inicialmente conhecer os riscos possveis dentro de um ambiente laboratorial:
2.1.1 Risco Fsico
So os riscos causados por fontes que gerem danos fsicos ao operador, dentre esses
podemos citar:
Perfurocortantes
So provocados por instrumentos ou materiais perfurocortantes, como por exemplo,

perfuraes com agulhas, lancetas ou cortes com bisturi, tesoura ou vidraria quebrada.
Radiaes (Luz ultravioleta, infravermelho)
Exposio a fontes de radiao. Existem mtodos de desinfeco e esterilizao que
utilizam radiaes com luz infravermelho, luz ultravioleta e raio gama. Estas em contato com o
operador, sem proteo especfica, podem gerar danos fsicos e at mutagnicos.
Calor
O laboratrio biolgico rico em fontes de calor que podem causar acidentes: bico de
Bunsen, fornos de esterilizao, estufas, autoclaves, so todas fontes que chegam a altas
temperaturas que sem o devido cuidado podem provocar srios acidentes.
2.1.2 Risco Qumico
Existem muitos produtos qumicos que podem causar danos e estes podem ser
inflamveis, txicos, carcinognicos ou custicos.
FIGURA 1
10
FONTE: Disponvel em: <http://commons.wikimedia.org>. Acesso em: 22 fev. 2012.
As solues qumicas sempre trazem em seu rtulo o fator de risco presente e as

condies de armazenagem necessrias, por isso importante sempre ler o rtulo antes de
guardar os reagentes e de manipul-los.
2.1.3 Risco Biolgico
No caso de um laboratrio de anlises clnicas, por exemplo, esta a principal fonte de

risco. Alguns exemplos so Culturas clulas, Micro-organismos, Parasitas e Toxinas produzidas
por micro-organismos. So necessrios procedimentos especiais para a manipulao e descarte

dos materiais biolgicos.
2.1.4 Grupos de Riscos Biolgicos
Os agentes biolgicos so divididos de acordo com os seguintes critrios: grau de

patogenicidade, alterao gentica, estabilidade, virulncia, modo de transmisso, endemicidade
e disponibilidade de medidas profilticas e tratamento eficaz. A ANVISA divide os agentes
biolgicos em 5 classes, levando em conta o risco para o ser humano, animais, meio ambiente e
consequncias epidemiolgicas e a OMS possui uma classificao especfica para trabalho
laboratorial, com 4 Grupos de Riscos. Por nosso curso se tratar de Rotinas laboratoriais
utilizaremos o critrio de classificao da OMS.
Grupo de Risco 1 (nenhum ou baixo risco individual e coletivo)
Um microrganismo que provavelmente no pode causar doena no homem ou em um
animal.
Grupo de Risco 2 (risco individual moderado, risco coletivo baixo)

Um agente patognico que pode causar uma doena ao homem ou animais, mas que
improvvel que constitua um perigo grave para o pessoal dos laboratrios, comunidade, o
gado ou o ambiente. A exposio a agentes infecciosos no laboratrio pode causar uma infeco
grave, mas existe um tratamento eficaz e medidas de preveno e o risco de propagao de
infeco limitado.
11
Grupo de Risco 3 (alto risco individual, baixo risco coletivo)

Um agente patognico que causa geralmente uma doena grave no homem ou no
animal, mas que no se propaga habitualmente de uma pessoa a outra. Existe um tratamento
eficaz, bem como medidas de preveno.
12
Grupo de Risco 4 (alto risco individual e coletivo)
Um agente patognico que causa geralmente uma doena grave no homem ou no
animal e que se pode transmitir facilmente de uma pessoa para outra, direta ou indiretamente.
Nem sempre est disponvel um tratamento eficaz ou medidas de preveno.
2.2 CDIGO DE PRTICAS
Cada laboratrio possui um Cdigo especfico, de acordo com riscos conhecidos e

potenciais presentes. Porm, algumas normas so essenciais para a manuteno das Boas
Prticas Laboratoriais e aqui descreveremos uma lista bsica de requisitos para o trabalho em
laboratrio biolgico.
2.2.1 Normas de Acesso
FIGURA 2
13
FONTE: Manual de Segurana Biolgica em Laboratrio OMS.
1. O smbolo internacional de risco biolgico (Figura acima) devem estar expostos nas
portas das salas onde se esto a manusear microrganismos do Grupo
de Risco 2 ou acima.
2. S o pessoal autorizado deve entrar nas reas de trabalho do laboratrio.
3. As portas do laboratrio devem permanecer fechadas.
4. proibida a presena de pessoas no autorizadas nas reas do laboratrio.
5. O acesso aos compartimentos de animais requer autorizao especial.
6. Nenhum animal deve entrar no laboratrio, alm dos necessrios aos procedimentos.
2.2.2 Normas de Proteo Individual

14
FIGURA 3
FONTE: Disponvel em: <http://biomedicinaemicro.blogspot.com>. Acesso em: 22 fev. 2012.
1. Uso obrigatrio de jalecos, aventais ou uniformes exclusivos ao trabalho no laboratrio.
2. PROIBIDO uso do avental fora do laboratrio (cantina, cafetaria, escritrios, biblioteca,

salas do pessoal e banheiros). Ele deve ser considerado potencialmente contaminado
podendo, portanto, contaminar o ambiente externo e tambm o inverso, trazer
contaminaes do ambiente externo para dentro do laboratrio.
3. Obrigatrio uso de luvas de procedimento em todos os trabalhos com contato direto ou

potencial com sangue, fluidos corporais, materiais ou animais potencialmente
infecciosos ou infectados. Aps utilizao, devem tirar-se as luvas sem tocar a parte
externa destas e lavar as mos. Se necessrio, utilizar dois pares de luvas de
procedimentos.
4. Uso de mscara. As mscaras de proteo so necessrias para a proteo tanto da

amostra quanto do operador. No caso de manipulao amostras potencialmente
contaminadas ou com presena confirmada de agentes biolgicos do grau de risco 3
e/ou 4 a mscara dever possuir sistema de filtrao.
5. Lavagem das mos antes e depois dos procedimentos tcnicos e antes de sair do
laboratrio. A lavagem das mos deve ser feita nas palmas, costas e embaixo das unhas
e depois do enxgue, usar uma toalha ou papel para fechar a torneira.
6. Uso de culos de segurana, viseiras ou outros dispositivos de proteo, sempre que

for necessrio proteger rosto e olhos contra impactos, produtos qumicos, radiao e
manipulao de material biolgico potencialmente contaminado.
7. Obrigatrio o uso de sapato fechado. Sandlias e chinelos no devem ser utilizados

nos laboratrios.
8. proibido comer, beber, fumar e colocar lentes de contato nas reas de trabalho do
laboratrio.
15
9. proibido guardar alimentos nas reas de trabalho do laboratrio.
10. A roupa de proteo laboratorial utilizada no laboratrio no deve ser guardada nos
mesmos locais da roupa normal.
16
11. proibida a utilizao de acessrios tais como: anis, brincos, colares e de
maquiagem.
2.2.3 Normas de Procedimento
1. Proibido pipetagem com a boca.
2. Nenhum material deve ser colocado na boca ou cheirado.
3. Todos os procedimentos tcnicos devem ser efetuados de forma a minimizar a formao

de aerossis e gotculas.
4. A utilizao de agulhas e seringas hipodrmicas deve ser limitada, essas no devem ser
utilizadas como substitutos de pipetas ou qualquer outro fim, alm de injees ou
aspirao de fluidos de animais de laboratrio.
5. Qualquer derrame, acidente, exposio efetiva ou potencial a materiais infecciosos deve

ser notificado ao supervisor do laboratrio. Deve manter-se um registro escrito de tais
acidentes e incidentes.
6. Devem ser elaboradas normas escritas para a limpeza destes derrames e devidamente
aplicadas.
7. Os lquidos contaminados devem ser (qumica ou fisicamente) descontaminados antes

de serem lanados nos esgotos sanitrios. Pode ser necessrio um sistema de
tratamento de efluentes, segundo a avaliao de riscos do agente manuseado.
8. O laboratrio deve estar arrumado, limpo e sem materiais que no sejam pertinentes
para as suas atividades.
9. As superfcies de trabalho devem ser descontaminadas aps qualquer derrame de

material potencialmente perigoso e no fim de um dia de trabalho.
10. Todos os materiais contaminados, espcimes e culturas devem ser descontaminados

antes de serem descartados ou reutilizados.
11. A embalagem e o transporte devem obedecer aos regulamentos nacionais e/ou

internacionais pertinentes.
2.2.4 Controle da Segurana Biolgica
O trabalho com materiais biolgicos deve sempre ser controlado para a segurana
tanto da amostra analisada, para a garantia da qualidade do diagnstico, quanto para preservar
a sade do operador. Para tanto necessria adoo de algumas medidas para controle da
segurana biolgica dentro de um laboratrio.
17
Em um laboratrio sempre h um diretor ou um supervisor que ir nomear, se no for

ele prprio, um Responsvel Tcnico pelo Laboratrio. Este ser o colaborador responsvel pela
tomada de decises no dia a dia, por implantar e atualizar os procedimentos e pela elaborao e
manuteno de um plano para garantia da segurana. Este plano pode ter vrios nomes,
dependendo de cada empresa, mas aqui chamaremos de Plano de Controle de Segurana
Biolgica.
O responsvel tcnico do laboratrio pode designar um outro colaborador a seu critrio
para a elaborao deste plano. Todos os funcionrios so responsveis pela manuteno da
Qualidade e Segurana dentro de um laboratrio e por isso necessrio o treinamento e
atualizao de todos os envolvidos para o laboratrio ser um ambiente mais seguro.
preciso ter um Manual de Segurana e/ou Operacional, com todas as regras e
procedimentos que devem ser adotados. imprescindvel que todos realmente saibam e sigam
este manual e por isso so necessrios treinamentos peridicos destas normas. Para no se
tornar maante e para melhor entendimento das informaes e conceitos do Manual podem ser
realizados alm dos treinamentos, cursos de reciclagem e aperfeioamento para toda a equipe.
O Manual de Segurana deve ser conhecido por todos e disponvel dentro do laboratrio, para
ser consultado sempre que necessrio.
A manuteno da limpeza do laboratrio obrigatria e deve ser realizada
frequentemente, alm de sua higienizao tambm necessria desinfeco do ambiente com
produtos antimicrobianos. Tambm necessrio um controle para evitar a entrada e presena
de pragas como roedores e de artrpodes, que podem atuar como fonte de contaminao para o
ambiente. recomendado o laboratrio ter portas e janelas com vedao ou com sistemas que
impeam a invaso de artrpodes, como por exemplo, telas e um programa de dedetizao
peridico.
18
3 O LABORATRIO CLNICO
A funo principal do trabalho de um Laboratrio Clnico fornecer subsdios clnicos

aos mdicos para que possam confirmar ou rejeitar um diagnstico e/ou monitorar pacientes em
tratamento. Dessa forma, a obteno de um resultado laboratorial apenas uma parte da rede
necessria para um diagnstico e/ou tratamento de um paciente. Trata-se de uma importante
etapa, pois se houver algum erro, por motivos tcnicos ou de manipulao, pode haver uma falsa
interpretao pelo mdico e consequente ineficcia no tratamento ou prejuzos maiores ainda. O
trabalho dentro do laboratrio exige uma srie de procedimentos que devem ser padronizados e
sempre reavaliados quanto sua eficcia, alm de passar por constante controle de qualidade
de todas as etapas envolvidas: equipamentos, insumos, amostras, procedimentos e equipe
tcnica. Alis, a responsabilidade e execuo de atividades de um laboratrio sempre
desenvolvida e pensada como um trabalho em equipe.
A equipe do Laboratrio Clnico composta por vrios profissionais como: Mdicos,
Bilogos, Biomdicos, Tcnicos, Auxiliares, Secretrias e Equipe de limpeza. Sem o mdico o
paciente no pode ter uma receita para continuar seu tratamento e sem a faxineira, por exemplo,
o ambiente no mantm as condies de limpeza e qualidade necessrias para a realizao dos
exames. Por isso que todos os membros da equipe so necessrios e importantes para a
garantia da qualidade do resultado final.
Um laboratrio clnico pode contar com diversos setores ou atuar com um ou mais
tipos de exames em um ambiente nico. Algumas das especialidades encontradas so:
Citologia, Hematologia, Bioqumica, Imunologia, Parasitologia e Biologia Molecular. Em todas
essas especialidades necessria uma estrutura bsica
3.1 INSTALAES
19
FIGURA 4
20
FONTE: Disponvel em: <http://miltonkennedy.blogspot.com/2011_04_01_archive.html>.

Acesso em: 12 mar. 2012.
As instalaes laboratoriais, alm de compatveis com as regulamentaes municipais,

estaduais e federais, devem ser de acordo com o grau de segurana biolgica necessria para o
trabalho. Isto , dependendo do grupo de risco do material manipulado o nvel de segurana
exigido para o laboratrio. Segundo a ANVISA so quatro os nveis de Biossegurana: NB-1,
NB-2, NB-3 e NB-4 e esses esto relacionados com os requisitos crescentes de segurana para
o manuseio de agentes biolgicos, de acordo com o grau de risco. O nvel de Biossegurana
exigido para um ensaio determinado pelo agente biolgico de maior classe de risco envolvido
no laboratrio e quando o potencial patognico desconhecido preciso ser feita uma anlise
de risco para saber em qual nvel de segurana dever ser manipulado o agente. Independente
do nvel de segurana biolgica alguns critrios so os mesmos e os descreveremos a seguir.
Voc sabia? Que para entrar nos Laboratrios de Biossegurana

nveis NB-3 e NB-4 preciso trocar de roupa e para sair preciso
tomar banho?
A instalao deve ter paredes e piso lisos, no porosos, com cantos arredondados,
com acabamentos impermeveis e resistentes a produtos qumicos, para facilitar a limpeza e a
descontaminao da rea. O cho deve ser de material antiderrapante e proibido encerar o
cho. Tambm proibido o uso de carpetes, cortinas, persianas ou similares e quando
necessrio utilizar pelculas protetoras ou outras formas para proteo solar. As janelas e as
portas devem ser de materiais que facilitem a limpeza e a manuteno e com acabamentos que
retardem o fogo. As instalaes fsicas devem estar de acordo com as regulamentaes de
segurana do Corpo de Bombeiros em relao proteo contra incndio e as rotas de fuga e
sadas de emergncia devem estar identificadas e conhecidas por todos. Os laboratrios devem
possuir portas para o controle do acesso ao pblico. As portas devem ser mantidas fechadas e
possuir visores, exceto quando haja recomendao contrria.
Pisos e bancadas devem ser nivelados e a bancada tambm deve ser de material liso,
impermevel e de fcil limpeza, resistente a calor moderado e ao de solventes orgnicos,
cidos, lcalis e solventes qumicos. O mobilirio deve ser robusto e de fcil limpeza, a
circulao dentro do laboratrio deve ser facilitada com espaamento entre bancadas, cabines e
equipamentos. Todos os equipamentos, bancada e mobilirio devem ter espao na parte inferior
para facilitar a limpeza e descontaminao. O ambiente deve ser bem iluminado e possuir
circulao de ar mesmo que artificial e temperatura amena. Prevendo casos de falta de energia
eltrica a instalao deve ser equipada com um sistema de iluminao de emergncia e fonte de
energia alternativa (gerador, no-break) para abastecimento de equipamentos de uso contnuo
essencial como: congeladores, geladeiras, estufas entre outros.
Deve haver pia separada, para lavagem e higienizao das mos, e ambientes, fora do
laboratrio, para descanso, alimentao e guarda de objetos pessoais como, bolsas, carteiras e
roupas.
Resumo Caractersticas Fsicas Laboratrio:
21
1.
Paredes, cho e bancadas lisos, impermeveis e fceis de limpar e
descontaminar;
2.
Cho e bancadas niveladas;
3.
Espao entre mobilirio e bancadas para circulao do pessoal;
4.
Cho antiderrapante;
5.
Ambiente bem iluminado;
6.
Boa circulao de ar;
7.
Sistema de gerao de energia em casos de falta de luz;
8.
Sistemas de segurana contra incndios;
9.
Sistema de controle de acesso de pessoas ao laboratrio;
10. Local separado para: lavagem das mos, descanso e alimentao.
3.2 EQUIPAMENTOS E MATERIAIS DE LABORATRIO
H vrios equipamentos e materiais para o auxlio das tcnicas no Laboratrio, e a

cada dia so desenvolvidos e aperfeioados para facilitar o dia a dia do operador e tornar a
rotina mais gil e eficaz. A seguir est uma relao dos equipamentos e materiais mais comuns.
Capela
uma cabine com sistema de exausto para o trabalho com reagentes txicos e
volteis. Existe uma barreira, de vidro ou acrlico, entre o operador e o material manipulado.
considerado um Equipamento de Proteo Coletiva.
22
FIGURA 5
23
FONTE: Disponvel em: < http://www.nalgon.com.br/imagens/prod3700.jpg >.

Cabines de Segurana Biolgicas
So usadas para proteo do operador e/ou da amostra manipulada. Existem vrios

tipos de Cabines de Segurana Biolgicas (CBS) e esses variam de acordo com o grau de risco.
A mais simples a Cabine de Fluxo Laminar que usada apenas para a proteo do material
manipulado como no caso de preparo de meios de cultura e solues estreis. Outros modelos
de Cabines de Segurana Biolgica variam da classe I a III, onde protegem amostra e operador,
e a cada nvel que aumenta possuem mais filtros e dispositivos de segurana.
FIGURA 6
24
FONTE: Disponvel em: <

http://www.sotelab.com.br/produtos/imagens/cabines/cabine_de_seguranca.png />.
Estufa
FIGURA 7
Pode ser utilizada tanto para secagem de amostras e materiais ou para cultura
bacteriolgica (no a mesma estufa, uma para cada finalidade). Chega
a temperaturas altas, geralmente em torno de 150C. Existem
variaes destas estufas com mais recursos, como controle de
umidade e de CO2.
FONTE: grupo tch qumica
FIGURA 8
Forno Pasteur
Forno utilizado para esterilizao a seco.

25
Chega a altas temperaturas, entre 250 e 300C.
FONTE: Disponvel em:

<laboratorioscolasticocde.myblog.it>.
Acesso em: 10 jan 2012.
FIGURA 9
FONTE: Disponvel em: <

http://www.tecmed.ind.br/autoclaves/img%27s/P23avs.gif >. Acesso
em: 12 mar. 2012.
Autoclave
Equipamento usado para esterilizao mida. Funciona como uma grande panela de
presso, utiliza temperaturas em torno de 120C e 1 a 1,5 atm de presso.
Centrfuga
FIGURA 10
26
Equipamento utilizado para acelerar a decantao (sedimentao)

de amostras e solues. Existem variaes quanto ao tipo e tamanho de
tubo utilizado - podem ter rotores com capacidade para tubos de 100 ml a
100ul - capacidade de tubos - de 4 a 100 tubos, por exemplo
velocidade rotacional - de 100 rpm (rotao por minuto) a 10.000rpm e
com ou sem refrigerao.
FONTE: Disponvel em: <www.eppendorf.com>.
Agitadores
Usado para homogeneizao de amostras lquidas. H grande variedade de modelos:

FIGURA 11
FONTE: Disponvel em: <www.analiticaweb.com.br>. Acesso em: 12 mar. 2012.
Vortex: tem por princpio a agitao do tubo
FIGURA 12
27
Agitador orbital: possui uma agitao mais delicada, onde uma

bandeja faz movimentos planos.
FONTE: Disponvel em: <www.analiticaweb.com.br>.

Acesso em: Acesso em: 12 mar. 2012.
Agitador magntico: dentro do frasco (balo, erlenmeyer, etc.) colocada uma barra magntica
e o im na plataforma do agitador movimenta esta barra em movimentos circulatrios.
FIGURA 13
Barra magntica
FONTE: Disponvel em: <www.analiticaweb.com.br>.

Microscpio
Um instrumento essencial para grande parte das tcnicas laboratoriais clnicas,

sobretudo as citolgicas e hematolgicas. Existem muitos tipos de microscpios, porm os mais
conhecidos so:
Microscpio ptico: tipo mais comum usa luz para iluminar as estruturas e a
observao feita atravs de lentes de refrao e oculares de vidro. Uma variao o
Microscpio Fluorescente, que possui o mesmo princpio porm usa um comprimento de onda
diferente. Tambm existe uma verso de Microscpio ptico digital onde uma cmera de
vdeo associada para visualizao em monitor.
FIGURA 14
Microscpio ptico digital

Microscpio ptico comum
FONTE: Disponvel em: <http://www.biomedicinapadrao.com>.

Microscpio Eletrnico: Utiliza eltrons para tornar a estrutura visvel. Existem

microscpios eletrnicos que produzem imagem em 2D (Transmisso) e em 3D (Varredura).
28
FIGURA 15
Microscpio eletrnico
Imagem vrus da poliomielite por

um microscpio de transmisso
Imagem de gros de plen por um

microscpio de varredura
FONTE: Disponvel
em:
<commons.wikimedia.org>. Acesso em: 12
mar. 2012.
Banho-maria
Equipamento para aquecimento e incubao de amostras, solues e cultura. Existem

modelos com funes adicionais como, timer, agitao ou suportes acoplados para frascos
especficos.
FIGURA 16
FONTE: Disponvel em: <www.cial-paulinia.com.br>.

29
Bico de Bunsen
a fonte de calor mais comum usada em laboratrio. Consiste em um bico de gs com

30
uma vlvula para controle da intensidade da chama.
FIGURA 17
Entrada de ar
(janela)
Entrada de gs
FONTE: Disponvel em: <www.rapidonline.com>. Acesso em:

Para ligar o bico de bunsen a entrada de ar (janela) deve estar fechada, para evitar que
entre acidentalmente uma chama pela tubulao de gs. Quando a janela est fechada o bico
produz uma chama amarela chama fria, pouco oxidante e inadequada para o aquecimento e
quando a janela est aberta, devido entrada de ar que alimenta a chama, ela torna-se azul e
chamada de quente por possuir maiores temperaturas. Considera-se a rea ao redor da chama
cerca de 30 cm como zona estril.
FIGURA 18
Chama amarela
Chama azul
fria
quente
FONTE: Disponvel em: <commons.wikimedia.org>.

Acesso em:: 12 mar. 2012.
Balana analtica e semianaltica
As balanas mais utilizadas so as analticas e semianalticas. A diferena entre elas o

grau de preciso na medio. Enquanto a semianaltica tem uma preciso de at trs casas
decimais (0,001g) a analtica chega at quatro a cinco casas decimais. O tipo de balana
encontrada ento depender da necessidade de preciso nas tcnicas utilizadas. Existem vrios
detalhes envolvidos para a realizao de uma medio tcnica adequada: a bancada deve estar
nivelada e sem pessoas circulando perto ou trabalhando na mesma bancada para evitar
vibraes que alterariam o valor do resultado medido, deve haver uma verificao da calibrao
com pelo menos 1 hora de antecedncia ao primeiro uso do dia, o prato e cabine devem ser
limpos com um pincel para retirada de sujidades e resduos antes da pesagem, o operador
deve utilizar luvas durante todo o procedimento para no deixar resduos de gordura na
vidraria utilizada e evitar, assim, alterao da medida entre outros inmeros detalhes tcnicos.
31
FIGURA 19
32
FONTE: Disponvel em: <www.splabor.com.br>. Acesso

em: 12 mar. 2012.
FIGURA 20
Tubos de Ensaio: utilizados para fazer reaes qumicas em pequena escala e

para aquecer solues.
<www.sxc.hu>. Acesso em:
12 mar. 2012.
FIGURA 21
Bquer: utilizado para preparo de solues.
FONTE: Disponvel em: <www.cdcc.sc.usp.br>. Acesso

em: 12 mar. 2012.
FIGURA 22
Erlenmeyer: usado para titulaes.
FONTE: Disponvel em: <www.sxc.hu>. Acesso em:

12 mar. 2012.
33
FIGURA 23
Kitassato: parte de conjunto usado para filtraes a vcuo.
FONTE: Disponvel em: <www.cdcc.sc.usp.br>.

FIGURA 24
Balo Volumtrico: frasco calibrado de preciso utilizado

para diluir e preparar solues.
FONTE: Disponvel em: <www.onixmetrologia.com.br>. Acesso em:

12 mar. 2012.
FIGURA 25
Balo de fundo redondo: usado para aquecer lquidos e

realizar reaes
34
que envolvam desprendimento de gases.
FONTE: www.pro-analise.com.br>.
FIGURA 26
Proveta: usado para medidas aproximadas de volumes lquidos.
FONTE: Disponvel em: <www.cdcc.sc.usp.br>.

Bureta: Serve para dar escoamento a volumes variveis de lquidos. FIGURA 27

uniformemente calibrada, graduada em dcimos de mililitro.
Possui uma torneira que permite o controle de escoamento.
FONTE: boj.pntic.mec.es>. Acesso

em: 09 fev. 2012.
Pipetas
Graduada: usada para medir volumes de lquidos.
FIGURA 28
35
FONTE: Disponvel em: <noticias.vidrado.com>. Acesso em: 09 fev. 2012.
Volumtrica: usada para medidas precisas de variados lquidos.
FIGURA 29
FONTE: Disponvel em: <www.jpdiagnostica.com.br>. Acesso

em: 10 fev. 2012.
Funil: usado para transferncia de lquidos e para filtraes.
FIGURA 30
36
FONTE: Disponvel em: <www.fcf.usp.br>. Acesso em: 05

fev. 2012.
Vidro de relgio: recipiente usado para pesagens.
FIGURA 31
FONTE: Disponvel em: <www.cdcc.sc.usp.br>. Acesso em: 10 fev. 2012.
Placa de Petri: usado principalmente para cultivo clulas,

bactrias, fungos, etc.
FIGURA 32
FONTE: Catlogo Brand
37
Basto de vidro: usado para homogeneizao e transferncia de lquidos.
FIGURA 33
FONTE: Disponvel em: <www.frascolex.com.br>. Acesso em:

09 fev. 2012..
Dessecador: Recipiente de vidro resistente que contm em seu interior substncias que so
higroscpicas (absorvem a umidade de outras substncias).
utilizado para esfriar ou preservar algum material ou reagente sem
que haja absoro de umidade.
FIGURA 34
38
FONTE: Disponvel em: <nalgon.com.br>. Acesso em: 12 mar.

2012
FIGURA 35
Almofariz e pistilo: Usado para triturar slidos, pulverizar e

homogeneizar mistura e slidos.
FONTE: Grupo Tch Qumica
FIGURA 36
Tela de amianto: usada para distribuir uniformemente o calor

FONTE: www.agracadaquimica.com.br>.
Acesso em: 10 fev 2012.
durante um aquecimento.
Suporte universal, mufa e garra: usados na sustentao de peas para diversos fins.
FIGURA 37
39
FONTE: Disponvel em: <www.cgomes.uac.pt>. Acesso

em: 12 mar. 2012
Trip: usado como suporte de telas de amianto em processos de aquecimento com o bico de
Bunsen.
FIGURA 38
FONTE: www.cap-lab.com.br>. Acesso em: 12 mar. 2012.
Pina de madeira: usada para segurar tubos de ensaio.
FIGURA 39
40
FONTE: images.linuxidx.com>. Acesso em: 12 mar. 2012.
Pipetador ou pera: instrumento de suco para auxlio na pipetagem.
FONTE: www.cdcc.sc.usp.br>. Acesso em: 12 mar. 2012.
FIGURA 40
FIGURA 41
Pisseta: de plstico, usado para

lquidos de uso constante como: gua destilada, lcool 70%.
41
FONTE: www.cdcc.sc.usp.br>. Acesso em: 12 mar. 2012.
Ala para inoculao: Para inoculao em meios de cultura.

Podem ser de metal (platina) ou descartveis
FIGURA 42
Capilar: tubos de vidro extremamente finos, aberto em ambas s extremidades. Utilizado em

tcnicas que necessitam de pequenos volumes lquidos.
FIGURA 43
42
Exerccios de Fixao:
1 Quais dos critrios abaixo descritos so usados para a classificao dos Grupos de Riscos dos
agentes biolgicos?
a) Patogenicidade, modo de transmisso, medidas profilticas e tratamentos disponveis.
b) Grau de sujidade da amostra, nmero de agentes biolgicos envolvidos, tempo de exposio,

tempo de tratamento.
c) Modo de transmisso, tipo de micro-organismo, capacidade de infeco do agente,
d) Medidas de controle do agente, grau de sujidade da amostra, capacidade de proliferao.
e) Nmero de agentes biolgicos envolvidos, capacidade de proliferao, medidas profilticas e

de tratamento disponveis.
2 Assinale verdadeiro ou Falso: Como deve ser a estrutura de um laboratrio?
( ) Cor clara, cho e paredes de azulejo, bancadas largas e corredores estreitos para melhor
aproveitamento do espao.
( ) Piso e paredes de azulejo, bancadas fixas na parede com armrios embutidos e centro livre
da sala livre.
( ) Cho e paredes lavveis e com cantos arredondados, cho e bancada nivelados e espao
para circulao de pessoas e limpeza do ambiente.
( ) Muitas bancadas distribudas, cho e paredes brancos lavveis e equipamentos em todas as

paredes.
Resp.
1A
2 F; F; V; F; F
43
4 PRINCPIOS DE BIOQUMICA
4.1 CARBOIDRATOS
44
Os carboidratos so as biomolculas mais abundantes na natureza. A celulose, os

acares e amidos, so todos carboidratos. Existem carboidratos em toda nossa volta e por isso
a seguir veremos sua estrutura e quem so.
4.1.1 Monossacardeos
Os monossacardeos com quatro, cinco, seis e sete tomos de carbono em seus

esqueletos so chamados de tetroses, pentoses, hexoses e heptoses. A cada um destes
comprimentos de cadeia existem aldoses e cetoses correspondentes, por exemplo: aldotetroses,
cetopentoses e assim por diante.
FIGURA 44
Grupo cetose
Grupo
aldedo
45
ALDOSE
CETOSE
FONTE: Adaptado de Lehninger
So exemplos de hexoses bastante familiares glicose, a galactose, a manose e a

frutose.
FIGURA 45
aldedos
cetose
FONTE: Adaptado de Lehninger
Alm dos monossacardeos simples existem os derivados, nos quais um grupo

hidroxila trocado por outro grupo substituinte.
FIGURA 46
46
FONTE: Lehninger
4.1.2 Polissacardeos
Os dissacardeos so constitudos por dois monossacardeos unidos covalentemente

entre si por uma ligao glicosdica.
FIGURA 47
47
Ligao
glicosdica
FONTE: Adaptado de Lehninger.
Quando uma hidroxila (OH) da molcula de um monossacardeo reage com o tomo de

carbono da outra molcula de acar, h a formao da ligao glicosdica com a liberao de
H2O. Os oligossacardeos so pequenos polmeros que possuem vrios monossacardeos. J os
polissacardeos possuem uma grande quantidade de monossacardeos ligados, so polmeros
de mdia at alta massa molecular. Tambm so conhecidos como glicanos. Os polissacardios
podem ser compostos por um (Homopolissacardeos) ou por mais tipos de monossacardeos
(Heteropolissacardeos) e podem estar ligados entre si em cadeias lineares ou ramificados.
FIGURA 48
48
FONTE: Lehninger
O amido e o glicognio, que servem como reserva energtica para a maioria dos seres
vivos, so homopolissacardeos e suas molculas de glicose esto unidas por ligaes do tipo
(alfa) j a celulose e quitina, tambm so homopolissacardeos, porm, as molculas de glicose
esto unidas por ligaes do tipo (beta).
4.2 PROTENAS
Protenas so macromolculas biolgicas que esto presentes em todas as clulas,

fazem parte da estrutura dos seres vivos e so os instrumentos moleculares pelos quais a
informao gentica expressa. So variveis quanto ao tamanho e funo, porm todas so

constitudas pelo mesmo conjunto de aminocidos.
49
4.2.1 Aminocidos
As protenas so polmeros de aminocidos. Comumente, so encontrados 20

aminocidos diferentes. Todos esses possuem uma estrutura geral em comum e so aminocidos, pois possuem um grupo carboxila e um grupo amino ligados ao mesmo tomo de
carbono (o carbono ). O grupo R (cadeias laterais) ligado ao carbono o que difere em cada
aminocido.
Esses, no podem ser sintetizados pelo nosso organismo e podem apenas ser obtidos
atravs da alimentao (animal ou vegetal), so chamados de aminocidos essenciais. Alm
destes existem outros, que podem ser produzidos pelo corpo, so conhecidos como aminocidos
no essenciais.
FIGURA 49
carbono
FONTE: Lehgninger
AMINOCIDOS ESSECIAIS
AMINOCIDOS NO ESSENCIAIS
Fenilalanina
cido Asprtico
Isoleucina
cido Glutmico
Leucina
Alanina
Lisina
Arginina
Metionina
Asparagina
Treonina
Cistena
Triptofano
Glicina
Valina
Glutamina
Histidina
Prolina
Serina
Tirosina
4.2.2 Peptdeos e Protenas
Os aminocidos podem se unir por ligaes peptdicas, formando peptdeos e

protenas. Quando h a unio de poucos aminocidos so considerados oligopeptdeos e
quando muitos esto unidos o produto chamado de polipeptdeo. As protenas podem ter
milhares de aminocidos e so distinguidas dos polipeptdeos por seu alto peso molecular.
50
A sequncia de aminocidos, em uma protena, caracterstica para cada protena e

esta chamada de sua estrutura primria. H vrios nveis de estrutura proteica, podendo
chegar at a estrutura quaternria. A cada nvel estrutural a protena se dobra, enovela, ficando
mais compactada e com uma estrutura mais complexa.
51
FIGURA 50
FONTE: Lehgninger
Estas estruturas so mantidas por foras e ligaes qumicas entre as molculas e

dependem de condies especiais para manterem esta conformao estrutural. Condies
diferentes, como por exemplo, elevao de temperatura, resulta em perda da estrutura
tridimensional e denominada de desnaturao. A funo de uma protena depende de sua
forma estrutural, ou seja, a forma como a estrutura secundria, terciria e/ou quaternria esto
dobradas. Desse modo, se por algum motivo a protena perder sua forma ela tambm deixar de
ter sua funo.
4.2.3 Enzimas
Uma das qualidades bsicas e fundamentais para a manuteno e sucesso da vida a

capacidade de uma clula, ou ser vivo, realizar reaes qumicas. fcil entender esta relao
ao lembrar que para a vida existir necessrio energia. E para a obteno, armazenamento e
liberao de energia so necessrias inmeras reaes qumicas. E onde as enzimas entram
neste contexto? Bem, algumas reaes no ocorreriam espontaneamente na natureza, ou ento
demorariam horas ou at mesmo anos para acontecer. E a que as enzimas entram, elas so as
catalizadoras destas reaes, ou seja, so aceleradoras de todo este processo.
As enzimas, com exceo de um pequeno grupo de molculas de RNA, so protenas. E
sua funo, assim como de todas as protenas, depende de sua forma. Desse modo, se uma
enzima for desnaturada tambm perder sua funo.
Muitas enzimas tm seu nome de acordo com o substrato em que age ou o tipo de
atividade. Em geral sempre terminam com o sufixo ase lpase, amilase, protease. As enzimas
so classificadas de acordo com as reaes que catalisam, abaixo podemos ver a Classificao
internacional de enzimas e o tipo de reao catalisada por cada grupo de enzimas.
52
FIGURA 51
53
FONTE: Lehgninger
4.3 LIPDIOS
Os lipdios so a principal forma de reserva energtica em muitos organismos.

Tambm podem agir como cofatores (auxiliando enzimas nas reaes), como sinalizadores e at
como pigmentos. Porm, sua principal funo estrutural, como componente das membranas
celulares, que so bicamadas lipdicas. So insolveis na gua e possuem estruturas qumicas
diversificadas que podem ser extrados por solventes no polares.
4.3.1 cidos Graxos
As gorduras e leos so derivados de cidos graxos. Os cidos graxos, como seu

prprio nome j diz, possuem em sua composio um cido carboxlico com uma cadeia de
hidrocarboneto associada (grupo R).
FIGURA 52
cido carboxlico
Grupo R
FONTE: Lehgninger
A cadeia de hidrocarbonetos varia de 4 a 36 tomos de carbono. Em alguns casos essa

cadeia no ramificada e saturada, isto , no contm ligaes duplas entre os carbonos.
Alguns, poucos, contm ramificaes ou grupos hidroxila.
4.3.2 Triglicerdeos
54
Os lipdios mais simples que possuem cidos graxos em sua composio so os

trigliceris, popularmente chamados por triglicerdeos. So compostos por 3 molculas de
cido graxo unidas por uma ligao do tipo ster a uma molcula de glicerol.
55
FIGURA 53
Glicerol
Triglicerdeos
FONTE: Lehgninger
4.3.3 Fosfolipdios
Tambm chamados de glicerofosfolipdios, so os lipdios que compem a membrana

celular. Sua estrutura feita de dois cidos graxos ligados a um cido fosfatdico. Sua
caracterstica principal, e o que torna possvel como membrana, o fato de possuir um grupo
polar (grupo fosfato), hidroflico e um grupo apolar (cidos graxos) hidrofbico.
56
5 PRINCPIOS DE MICROBIOLOGIA
A Microbiologia a cincia que estuda os micro-organismos, sua bioqumica, biologia e

interao com outros seres vivos. Os micro-organismos compreendem um imenso grupo com
membros que podem ser encontrados em clulas nicas ou em agrupamentos celulares e que
podem existir em praticamente todos os tipos de ambientes. Os membros deste grupo de estudo
so todos seres microscpicos que podem ser encontrados nos Reinos Monera (bactrias) e
Protista (protozorios), alguns no Reino Fungi (leveduras e bolores). Os micro-organismos
podem ser diferenciados dos organismos multicelulares por serem autnomos realizando todos
os seus processos vitais e se multiplicar, mesmo consistindo em uma nica clula.
Voc sabia? Que vrios autores no consideram os vrus como seres vivos. Isto porque
os vrus usam a maquinaria celular de outros seres vivos para reproduo e produo da
prpria constituio da partcula viral.
A clula a unidade bsica do ser vivo, separa-se de outras pela membrana celular,
que consiste em uma barreira fsica que separa o interior da clula do exterior e atua tambm
como selecionador do que deve ou no entrar na clula, atravs de vrios mecanismos de
permeabilidade. Dentro da clula encontra-se o material gentico, o DNA, que fica no ncleo ou
nucleoide, e possui todas as informaes para a formao e manuteno celular. Ocupando o
interior da clula est o citoplasma, onde ficam todas as organelas que compem a maquinaria
celular. Essa a composio bsica de qualquer clula.
57
FIGURA 54
Membrana Celular
DNA
Organelas
Citoplasma
58
FONTE: arquivo pessoal.
5.1 ESTRUTURAS PROCARIONTES
Dependendo do tipo de ser vivo, sero encontradas estruturas e composies

diferentes. Existem basicamente dois tipos de organizaes celulares: eucariotos e procariotos.
A diferena entre eles o modo como o material gentico se encontra. No caso dos seres
eucariotos o DNA est organizado em um ncleo. J nos procariontes o ncleo encontra-se
desorganizado, na realidade nem existe um ncleo propriamente dito, mas apenas o DNA solto
no citoplasma, so os seres vivos mais primitivos. O nosso foco sero as clulas procariotas, j
que as bactrias, grupo dominante na microbiologia clnica, so procariontes.
5.1.1 Membrana Citoplasmtica
Fina e flexvel a barreira que separa a parte interna da clula do meio exterior. A
espessura gira em torno de 8nm, e se rompida clula morre. As membranas biolgicas so
feitas de duas camadas de fosfolipdios, intercaladas por protenas. O fosfolipdio considerado

um lipdio complexo porque tem associado ao lipdio uma molcula de fsforo, isso o torna
anfiptico, ou seja, tem uma parte hidrofbica (lipdio) e uma hidroflica (fsforo).
FIGURA 55
59
fosfolipdeos
Molcula fosfolipdeo
protenas
FONTE: Microbiologia de Brock
5.1.2 Parede Celular
A parede celular a parte externa da clula procarionte. Sua estrutura mais resistente
do que a membrana, oferece proteo e quem d a forma bacteriana. Quanto forma, as
bactrias podem ser: cocos, bacilos, cocobacilos, vibrio, espirilo ou espiroqueta. Podem ser
encontradas sozinhas ou em arranjos, quando em grupos. Veja a seguir algumas formas e
arranjos comuns de bactrias.
FIGURA 56
60
FONTE: Alterado de <http://little-monsters-espaa.blogspot.com.br/2010/11/bacterias.html>
5.1.3 Clios e Flagelos
Essas so as estruturas responsveis pela locomoo de grande parte dos microorganismos. So muito finos, parecendo um fio de cabelo. Podem ser compridos e nicos (ou em
pequeno nmero), no caso dos flagelos, ou curtos e numerosos, como os clios. Um microorganismo pode possuir apenas um ou os dois tipos de estrutura e ao baterem milhares de
vezes por minuto e em alta velocidade causam o deslocamento da bactria.
FIGURA 57
clios
flagelos
FONTE: Alterado de http://pathmicro.med.sc.edu/fox/coli1.jpg. Acesso em: 16 mar.2012.
5.1.4 Material Gentico

DNA bacteriano
plasmdeos
61
FIGURA 58

<http://pt.wikipedia.org/wiki/Wikip%C3%A9dia:Artigos_de
stacados/arquivo/Plasm%C3%ADdeo>. Acesso em: 26
mar. 2012.
O nucleoide, tambm conhecido por DNA bacteriano, consiste em uma nica grande
molcula de DNA com protenas associadas, sem delimitao por membrana.
Nas bactrias, ainda como material gentico, existem os plasmdeos, que so
molculas circulares de DNA capazes de se reproduzir independentemente do DNA
cromossmico.
5.1.5 Componentes citoplasmticos
O citoplasma uma soluo aquosa que preenche o interior da clula bacteriana. Nele
est o DNA, ribossomos e demais organelas. Os ribossomos so partculas de RNA e protena
e atuam na sntese proteica. Existem tambm grnulos ou incluses, que podem variar de
bactria para bactria quanto composio, mas basicamente so reservas de energia ou de
constituintes estruturais.
5.2 NUTRIO E METABOLISMO
Para que um ser vivo cresa, replique e tenha energia para todos os processos
envolvidos em sua manuteno so necessrias vrias reaes qumicas que podem ser
chamadas de metabolismo. As reaes metablicas ocorrem tanto para a produo de energia
Catabolismo quanto para o consumo de energia Anabolismo. E com base nestes
conhecimentos que o cultivo celular em laboratrio ocorre. Assim como ns precisamos de
alimentos para nosso corpo ter energia e manter o metabolismo, as bactrias tambm. Para a
manuteno de uma cultura de bactrias precisamos aliment-las com nutrientes. Nem todos os
nutrientes so necessrios nas mesmas quantidades, alguns so necessrios em grandes
quantidades Macronutrientes enquanto outros, apenas com traos, so suficientes
Micronutrientes. A seguir esto alguns exemplos de Macro e Micronutrientes.
62
FIGURA 59
MACRO Nutrientes
Funo celular
Carbono (C)
50% da constituio celular
Nitrognio (N)
12% da constituio celular (aminocidos)
Fsforo (P)
Componente dos cidos nuclicos e fosfolipdios
Enxofre (S)
Componente de aminocidos
Potssio (K)
Componente de vrias enzimas
Magnsio (Mg)
Componente de membranas, cidos nuclicos e enzimas
Clcio (Ca)
Componente de membranas e esporos.
Ferro (Fe)
Papel chave na respirao, nos citocromos e protenas.
MICRO Nutrientes
Funo celular
Cobalto (Co)
Constituio de vitaminas
Cobre (Cu)
Participao na respirao
Mangans (Mn)
Ativador de enzimas
Zinco (Zn)
Atuao na replicao celular
5.3 CRESCIMENTO MICROBIANO
63
Em microbiologia, crescimento pode ser entendido como aumento no nmero de

clulas. A clula bacteriana capaz de se duplicar e na maioria dos micro-organismos ocorre
por fisso binria. A medio desse crescimento por unidade de tempo chamada de taxa de
crescimento. Cada clula gera outras duas novas clulas, este intervalo de tempo chamado
de gerao e, o tempo necessrio para que isso ocorra de tempo de gerao. Este tempo
varivel de um organismo para outro, algumas bactrias levam dias para se dividir enquanto
outras, em questo de minutos se multiplicam, j a maioria das bactrias leva de 1 a 3 horas
para se duplicar. Este tempo tambm depende da qualidade e condies do ambiente. Em um
meio de cultura com os nutrientes adequados, quantidade suficiente, e com umidade e
temperaturas ideais, levaro a cultura de bactrias ao seu desenvolvimento mximo.
5.3.1 Ciclo de Crescimento
Como j vimos, cada clula d origem a 2 clulas filhas e por isso o padro de aumento
populacional exponencial. Entretanto, existem fases no crescimento bacteriano em que no
so to aceleradas. Quando uma populao microbiana inoculada em um novo meio (natural
ou em laboratrio), o crescimento no se inicia de imediato. Isso porque o organismo precisa de
um perodo para adaptao, a este perodo damos o nome de Fase lag. A fase seguinte a
Fase exponencial, onde as clulas encontram-se em seu pico de multiplicao. Depois de um
perodo de crescimento acelerado h certa estabilizao na populao microbiana e isso
acontece porque chega um perodo em que as clulas, assim como se dividem e nascem, outro
tanto de clulas tambm morrem e somado limitao da capacidade de nutrientes e espao
disponvel, o crescimento chega a uma Fase estacionria ou plat. Se uma populao que
atingiu a fase estacionria permanecer nestas condies sem acrscimo de nutrientes, depois de
um tempo haver um maior nmero de morte celular do que de novas clulas, a esta fase, d-se
o nome de Fase de morte ou declnio.
64
FIGURA 60
Nmero de
clulas
Fase estacionria
(plat)
65
Fase exponencial
Fase de morte
(declnio)
Tempo
Fase lag
FONTE: Arquivo pessoal.
6 PRINCPIOS DE HEMATOLOGIA
O sangue apresenta duas fases, uma lquida e uma slida. A fase lquida o plasma
e a fase slida composta pelos chamados elementos figurados, que so os glbulos
vermelhos e brancos e as plaquetas. De forma geral o sangue responsvel pela nutrio de
todas as clulas do corpo, pela defesa contra agentes desconhecidos e pela manuteno
estrutural dos tecidos (cicatrizao).
6.1 PLASMA
A parte lquida do sangue o plasma, um lquido denso amarelado com composio

de 90% de gua e 10% de protenas, carboidratos, cidos graxos, vitaminas, minerais,
hormnios e eletrlitos que possuem fundamental importncia para a nutrio e manuteno das
atividades celulares.
6.2 HEMCIAS
66
FIGURA 61
Fonte: Disponvel em:

<http://www.topnews.in/health/new-finding-may-paveway-improved-diabetes-treatment-23294>. Acesso em
26 mar. 2012.
As hemcias, tambm conhecidas por eritrcitos ou glbulos vermelhos, so as clulas mais

abundantes no sangue. devido hemoglobina, presente nas hemcias, que o sangue possui
sua cor vermelha caracterstica. ela tambm a responsvel pelo transporte do oxignio e gs
carbnico. A hemcia, nos mamferos, no possui ncleo e tem um formato de disco bicncavo.
Seu tamanho varia de 6 a 8,5 micrmetros. As hemcias, assim como todos os elementos
figurados do sangue, so produzidos pela medula ssea e sua vida mdia de 120 dias. A
escassez de glbulos vermelhos o motivo da anemia e o excesso destas clulas chamado de
policitemia.
Voc sabia?
Que os homens possuem mais hemcias do que as mulheres. Enquanto o
valor normal, para mulheres adultas, de 4 a 5 mil hemcias por microlitro de sangue os
homens podem ter at 6 mil hemcias por microlitro.
67
6.3 LEUCCITOS
Os leuccitos, ou glbulos brancos, so as clulas representantes do sistema imune do

organismo. So eles que defendem o corpo do ataque e presena de agentes agressores ou
txicos. Os leuccitos so divididos em dois principais grupos: granulcitos e agranulcitos, de
acordo com a presena ou no de grnulos no citoplasma. Os granulcitos, por sua vez, esto
divididos em: neutrfilos, eosinfilos e basfilos e os agranulcitos podem ser moncitos ou
linfcitos.
FIGURA 62
FONTE: Disponvel em: <ap-imune.webuda.com/>. Acesso em: 27 fev. 2012
Normalmente uma pessoa sadia apresenta de 6000 a 8000 leuccitos por ml de sangue.
Os leuccitos so produzidos e armazenados na medula ssea e so liberados na corrente
sangunea apenas quando necessrio e tem uma vida til de 2 a 3 dias.
68
6.4 PLAQUETAS
As plaquetas so pedaos de clulas com formato arredondado formados a partir de

um megacaricitos, que uma clula gigante produzida na medula ssea e fragmentada. A cada
ml so encontrados de 150 a 400 mil plaquetas em um indivduo saudvel, e cada plaqueta
possui uma vida mdia de 10 dias. Possuem papel fundamental na formao de cogulos,
graas a sua propriedade de adeso e agregao umas com as outras. Alm disso, liberam
outras substncias participantes do processo de coagulao sangunea, tais como enzimas e
hormnios com propriedades coagulantes e vasodilatadoras.
69
7 PRINCPIOS DE IMUNOLOGIA
Imunidade a proteo de nosso corpo contra doenas. O chamado sistema imune

atua contra qualquer invasor, que pode ser um microrganismo infeccioso ou mesmo uma
substncia estranha ao organismo, como macromolculas, protenas ou polissacardeos no
reconhecidos pelo sistema.
7.1 IMUNIDADE INATA
Logo no incio de uma infeco a imunidade inata ou natural quem reage em

defesa do organismo, isso porque ela j est presente no organismo antes de qualquer invasor
chegar. A imunidade inata consiste em mecanismos que existem antes da infeco, que so
capazes de rpidas respostas aos micro-organismos e que, reagem essencialmente do mesmo
modo s infeces repetidas. A imunidade inata ativada por estruturas comuns presentes nos
micro-organismos, que podem ser semelhantes a outras substncias estranhas.
So componentes deste tipo de imunidade fatores fsicos, qumicos e biolgicos.
7.1.1 Fatores Fsicos
70
So barreiras mecnicas invaso de agentes no desejados. A pele nossa primeira

linha de defesa, agindo como um muro de proteo devido sua impermeabilidade. A regio do
interior do nariz possui pelos que juntamente com o muco produzido agem como uma cola onde
partculas ficam presas.
71
7.1.2 Fatores Qumicos
Substncias antimicrobianas so secretadas pelo nosso organismo como sistema de

defesa. So exemplos deste mecanismo a presena de lisozimas e fosfolipases na lgrima,
saliva e muco nasal, que so inibidoras do crescimento bacteriano, o pH do estmago
altamente cido o que reduz drasticamente as condies de vida de microrganismos neste meio.
7.1.3 Fatores Biolgicos
Protenas do sangue regulam e coordenam atividades do sistema imunolgico e

existem tambm clulas brancas, neutrfilos e macrfagos, que fagocitam agentes intrusos,
alm de clulas matadoras naturais (natural killers) que matam as prprias clulas hospedeiras
quando invadidas por micro-organismos.
7.2 IMUNIDADE ADQUIRIDA
Aps este primeiro contato, o sistema imune tem outra resposta tardia, mais complexa
e especfica, a imunidade adquirida. Os componentes da imunidade adquirida so os linfcitos
e seus produtos. Esta imunidade especfica contra diferentes tipos de invasores e aumentada
a cada exposio repetida destes agentes porque possui uma memria imunolgica.
Existem dois tipos de resposta imune adquirida: imunidade humoral e imunidade
celular. A imunidade humoral mediada pelos anticorpos, que so produzidos pelos linfcitos B.
Os anticorpos reconhecem, se ligam aos agentes invasores, neutraliza-os e os marcam para
que sejam eliminados posteriormente. J a imunidade celular mediada pelos linfcitos T. Sua
ao consiste em destruir os micro-organismos que invadem os fagcitos e outras clulas do
hospedeiro.
A imunidade adquirida tambm pode ser dividida em imunidade ativa e passiva. A
imunidade ativa ocorre quando o sistema imune do indivduo entra em contato com o microorganismo ou substncia estranha, e reage produzindo anticorpos e clulas imunes. Esse tipo de
imunidade pode durar por vrios anos. A vacinao um exemplo de imunidade ativa. Quando
um anticorpo ou linfcito especfico transferido para o organismo este chamado de
imunidade passiva. Este tipo de imunidade produz uma ao temporria, com rpida e eficiente
proteo. Um exemplo desse tipo de imunidade a transferncia de anticorpos da me para o
feto. Esses dois tipos de imunidade geram proteo ao indivduo, porm, no caso da imunidade
passiva no h constituio de memria imunolgica, pelo fato dos anticorpos no terem sido
produzidos neste organismo.
7.3 ANTICORPOS E ANTGENOS
72
Os anticorpos so glicoprotenas produzidas pelos linfcitos B. Depois de sintetizados

os anticorpos, tambm conhecidos como imunoglubulinas, podem ficar presos aos linfcitos B ou
secretados. Os anticorpos ligados membrana do linfcito funcionam como mediadores da
imunidade humoral, servindo como ponte de ligao com os agentes infecciosos. Quando a
parte slida do sangue e o plasma so separados, resta o que chamamos de soro, que onde
ficam os anticorpos secretados pelos linfcitos, por isso, o estudo dos anticorpos e suas reaes
com antgenos chamada de sorologia.
So chamados de antgenos ou imungenos, as molculas ou macromolculas, que se
ligam especificamente aos anticorpos, desencadeando uma resposta imune do organismo. No
caso de antgenos macromoleculares a regio ou regies que se ligam ao anticorpo so os
eptopos. Estes eptopos podem ser uma protena, um carboidrato, um lipdio ou at mesmo um
cido nucleico.
A ligao antgeno-anticorpo funciona como um sistema de encaixe molecular, como
uma interao chave-fechadura altamente especfica. Apesar disso, podem ocorrer reaes
cruzadas, em que o anticorpo pode reconhecer uma molcula muito semelhante ao antgeno
original. Abaixo est uma figura representando um anticorpo e um antgeno ligados. Perceba
como apenas um dos antgenos exemplificados possui encaixe perfeito no stio de ligao do
anticorpo.
FIGURA 63
Antgenos
Antgeno
Stio de ligao
Ligao chave-fechadura
ANTICORPO
FONTE: Disponvel em: <wikipedia.org>. Acesso em: 27 fev.2012.
73
Exerccios de Fixao:
3 O termo que preenche corretamente a lacuna :
_____________ so macromolculas biolgicas que fazem parte da estrutura dos seres vivos,
esto em todas as clulas e so os instrumentos moleculares pelos quais a informao gentica
expressa.
a) Lipdios
b) Protenas
c) Carboidratos
d) Enzimas
e) Monossacardeos
4 Em relao aos conceitos aprendidos em microbiologia assinale verdadeiro ou falso dentre as

abaixo citadas.
( ) A diferena entre os eucariotos e procariotos que os procariotos possuem vacolos e os

eucariotos no.
( ) A membrana plasmtica fina e flexvel e se rompida a clula morre.
74
( ) Macronutrientes so assim chamados devido ao tamanho das molculas que os compem.
( ) Fase lag o perodo de tempo em que os micro-organismos esto com o crescimento mais
acelerado.
75
5 Faa a correlao correta:
a) Forma a fase lquida do sangue

b) Forma a fase slida do sangue
c) Clulas atuantes no sistema imunolgico
d) Pedaos de clulas que atuam na coagulao sangunea
I - plaquetas
II - leuccitos
III - plasma
IV - elementos figurados
6 Mltipla escolha
O que imunidade humoral?
a) A imunidade humoral aquela na qual os anticorpos se ligam aos agentes invasores,

neutraliza-os e os marcam para que sejam eliminados posteriormente.
b) A imunidade humoral aquela mediada pelos linfcitos T, e consiste na destruio dos microorganismos que invadem os fagcitos e outras clulas do hospedeiro.
c) A imunidade humoral aquela que ocorre quando o organismo est debilitado e os linfcitos T
atacam agentes invasores.
d) A imunidade humoral aquela onde um anticorpo ou linfcito especfico transferido para o

organismo.
Respostas
3B
4 F; V; F; F;
5 A plasma / B elementos figurados / C leuccitos / D plaquetas.
6A
76
8 INTRODUO
A qualidade de um resultado diretamente ligada s tcnicas empregadas no dia a dia.

Muitos so os fatores que podem alterar esta qualidade e at mesmo fornecer resultados
imprecisos e errados. A qualidade dos reagentes e da amostra colhida, a manuteno e
calibrao dos equipamentos e materiais utilizados, a tcnica utilizada e como o operador realiza
as anlises so exemplos destas variveis. No adianta um laboratrio ter uma boa quantidade
de amostra, os mais caros e avanados equipamentos se o operador, ou tcnico, estiver
destreinado realizando as anlises sem cuidado e tcnica apropriada. Por isso a seguir
estudaremos as tcnicas e modos corretos de operao dos equipamentos fundamentais
encontrados nos laboratrios.
77
9 TCNICAS DE PIPETAGEM E MICROPIPETAGEM
A coisa que mais fazemos em um laboratrio medir volumes. Existem inmeros

instrumentos para esta finalidade: balo volumtrico, bquer, erlenmeyer, mas os mais usados e
que exigem maior tcnica so as pipetas e micropipetas.
9.1 PIPETAS
Como j vimos no primeiro mdulo existem dois tipos de pipetas: graduadas e

volumtricas. As pipetas volumtricas possuem uma dilatao no centro do corpo da pipeta que
a torna mais precisa e possui apenas uma opo de volume, o volume total. As pipetas
graduadas so as mais comuns e possuem uma graduao indicativa do volume. Na parte
superior da pipeta esto informaes auxiliares como: volume total da pipeta, qual volume
corresponde cada trao da graduao e temperatura mxima que pode ser submetida. Nesta
pipeta da figura abaixo, por exemplo, uma pipeta de 25 ml onde cada trao corresponde a 0,1
ml e pode chegar at 20C sem problemas.
78
volumtrica
graduada
79
FIGURA 64
FONTE:
Disponvel
em:
<http://t.r4.com.br/templates/casaq/www.casadaquimica.com/SUB/detalhe/8321/>. Acesso em:

14 mar. 2012.
Esses so detalhes que precisamos prestar ateno antes de escolher a pipeta,

dependendo para que iremos utilizar. aconselhvel, antes de iniciar um procedimento, verificar
quais volumes tero de ser pipetados e escolher a pipeta com volume mais prximo e com a
graduao correta. No caso de em uma anlise for necessrio pipetar 3 ml de um reagente e 7
ml de outro ento o adequado usar uma pipeta de 5 ml e outra de 10 ml. Uma dvida
recorrente quando o volume necessrio quase o de uma pipeta, por exemplo, uma
pipetagem de 10,5 ml. O que fazer neste caso? O correto usar uma pipeta com volume maior
mais prxima. Se s tiver a de 20 ml, dever ser essa a opo. Algumas vezes a pipeta precisa
ser esterilizada, em autoclave, a temperatura chega a 121C, neste caso necessrio escolher
uma pipeta que resista tanto sua integridade quanto sua calibrao, a altas temperaturas.
Sempre use pipetas sem pontas ou partes quebradas, limpas e secas. Tambm se usa colocar
um pequeno chumao de algodo hidrofbico na extremidade superior da pipeta como uma

espcie de filtro de proteo.
A pipetagem consiste em aplicar uma presso negativa na abertura superior da pipeta
para a suco de lquidos. expressamente proibido pipetar com a boca e tambm nem h
necessidade, pois existem no mercado vrios tipos e modelos de dispositivos auxiliares para
80
pipetas.
FIGURA 65
Pipetador tipo pipetaid

Pra
Pipetador tipo pipump
FONTE: compresaude.com.br
FONTE: ciencor.com.br
FONTE: taroa.com.br
Ao pipetar uma soluo sempre se enche a pipeta at seu volume mximo e ento
feita a dispensa do lquido at ao volume desejado. O operador deve olhar de frente para a
marcao, em linha reta, para verificar se o volume est na marcao. Quando um lquido est
em um recipiente cilndrico ele no fica em linha reta, h uma espcie de curva, a parte inferior
desta o menisco. Quando medimos um lquido os olhos devem estar na altura do menisco e a
pipeta deve estar verticalmente reta.
FIGURA 66
81
FONTE: kontrol-kalidad.blogspot.com
FONTE: juntadeandalucia.es
9.2 MICROPIPETAS
As micropipetas so utilizadas para volumes pequenos, em torno de 1 a 1000ul

(microlitros). Existem micropipetas para diversas faixas de volume e usam ponteiras descartveis
para cada pipetagem. Existem as micropipetas monocanal que utilizam uma ponteira de cada
vez e micropipetas multicanal que so usadas para trabalhar em microplacas ou tiras de
microtubos, com vrias ponteiras (em geral de 8 a 12) de cada vez.
FIGURA 67
82
Micropipeta
Multicanal
Micropipeta
Monocanal
Micropipeta
Multicanal
FONTE: tudolab.com.br
Existem dois estgios no embolo da micropipeta que dependendo da modalidade de

pipetagem (direta ou reversa) usado.
FIGURA 68
embolo
1estgio
2estgio
Fonte: frilabo.pt
9.2.1 Pipetagem Direta
o modo padro de pipetagem, usada para amostras com viscosidade normal. Na

pipetagem direta, primeiro esvazia-se o ar da ponteira apertando o embolo at o 1 estgio e
leva-se a ponteira, com o embolo ainda apertado, at metade do lquido que ser pipetado. Em
seguida se solta lentamente o embolo at o preenchimento da ponteira. Para transferir, com o
recipiente receptor inclinado, colocar a ponteira at o meio do tubo e apertar o embolo at o final
(2 estgio), dispensando lentamente todo o lquido e s quando estiver fora do lquido, solta o
embolo.
FIGURA 69
83
PREPARAO
ASPIRAO
TRANSFERNCIA
ESGOTAMENTO
REPOUSO
1 estgio
2 estgio
84
Segurar o embolo
at o 1 estgio
fora do lquido
Soltar o embolo
dentro do lquido
Inserir ponteira
dentro do recipiente
receptor inclinado
Apertar o embolo at
o 2 estgio devagar
Soltar
completamente o
embolo fora do
lquido
Fonte: adaptado de Infotec - Labtest
9.2.2 Pipetagem Reversa
Esta modalidade de pipetagem utilizada mais frequentemente para amostras densas,

difceis de pipetar. Antes de imergir a ponteira no lquido aperta-se o embolo at o 2 estgio e
ento, dentro do lquido, solta-se o embolo totalmente. Colocar em seguida a ponteira dentro do
recipiente de transferncia ligeiramente inclinado e soltar o embolo at o 1 estgio, lentamente.
FIGURA 70
PREPARAO
ASPIRAO
TRANSFERNCIA
RE-ASPIRAO
REPOUSO
85
1 estgio
2 estgio
Segurar o embolo
at o 2 estgio
fora do lquido
Soltar o embolo
dentro do lquido
Inserir ponteira
dentro do recipiente
receptor inclinado e
apertar at o 1
estgio
Fonte: adaptado de Infotec - Labtest
Se for aspirar outro

lquido, manter
pressionado no 1
estgio
Depois de pipetar,
soltar
completamente o
embolo fora do
lquido e se no for
mais pipetar
descartar a ponteira
10 USO DE CAPELA E CABINES DE SEGURANA BIOLGICA
10.1 CAPELA
86
FIGURA 71
FONTE: Disponvel em: <http://www.lmf.df.ufscar.br/images/capela.JPG>. Acesso em: 15 mar.

2012.
Como j vimos anteriormente Capelas so cmaras para manipulao de reagentes e

substncias txicas e volteis. Os frascos contendo estes reagentes devem ser abertos apenas
dentro da Capela, com o sistema de exaustor ligado e com a tampa frontal parcialmente aberta,
com espao suficiente apenas para colocar os braos dentro. Apesar de estar trabalhando
dentro da capela com os reagentes txicos e perigosos ainda obrigatrio o uso de EPI para
este tipo de manipulao, como culos de segurana, luvas e dependendo do tipo de produto, se
muito concentrado e/ou txico, at mscara com sistema de filtrao.
87
10.2 CABINES DE SEGURANA BIOLGICA
As Cabines de Segurana Biolgica (CBS) tem por objetivo proteger o operador, o

meio ambiente e as amostras manipuladas. H vrios nveis de CBS que dependem do grau de
segurana necessrio e nvel de periculosidade dos agentes biolgicos envolvidos nas
atividades. A seguir conheceremos quais so os tipos existentes de Cabines de Segurana
Biolgica.
10.2.1 CBS Classe I
O ar sugado para a cabine atravs da abertura frontal, circula pelo seu interior e
depois eliminado por um condutor que fica na parte de trs da cabine, passando antes por um
filtro especial filtro HEPA. Quando manipulamos meios lquidos e amostras podemos gerar
aerossis que consiste no desprendimento de partculas microscpicas contendo os agentes
infecciosos vrus, bactrias, etc.
O sistema das cabines de segurana faz o ar no interior da cabine circular, evitando
dessa forma que estes aerossis e que os agentes infectantes permaneam na cabine.
FIGURA 72
88
A: Abertura frontal
B: Painel de observao
C: Filtro exaustor HEPA
FONTE: Manual de Segurana Biolgica OMS.
10.2.2 CBS Classe II
As cmaras da Classe II diferem das anteriores por proteger tambm o interior da

cabine de contaminaes externas. O ar que entra na cabine passa antes por um filtro do tipo
HEPA e assim tanto operador quanto amostras so protegidas de contaminaes. Neste sistema
70% do ar recirculado dentro da cabine e 30% expelido, depois de passar por outro filtro
HEPA. As CBS Classe II so adequadas para a manipulao de agentes dos grupos de rico 2 e
3.
FIGURA 73
A: Abertura frontal
C:Filtro exaustor HEPA
D:Conduta traseira
89
E:Filtro HEPA de abastecimento
Existem quatro tipos de CBS da Classe II : A1, A2, B1 e B2. A diferena entre eles est
na quantidade de ar recirculado e a velocidade de captao externa do ar. Sendo que as CBS
Classe II dos tipos B possuem no mximo 30% de recirculao do ar.
FIGURA 74
A: Abertura frontal
C:Filtro exaustor HEPA
D: Filtro
de admisso HEPA
10.2.3 CBS Classe III
Esse tipo de cabine oferece a maior proteo para o operador e o tipo indicado para
uso com agentes biolgicos do grupo de risco 4. O ar expelido da cabine passa por um sistema
de filtrao com 2 filtros HEPA e atua com presso negativa, ou seja, nenhum ar sai da cabine a
no ser pelo sistema de filtragem. A manipulao na CBS Classe III costuma ser realizada com
luvas grossas de borracha presas a mangas na parte frontal da cabine, sendo essa totalmente
vedada.
FIGURA 75
A: Porta-luvas (cobrindo o brao todo)

C: Filtros exaustores HEPA duplos
D: Filtros de admisso HEPA
90
10.3 TRABALHANDO COM CABINES DE SEGURANA BIOLGICA
Independente da Classe de segurana alguns cuidados so necessrios antes, durante

e aps a operao na Cabine de Segurana Biolgica, para a garantia da qualidade do trabalho
e segurana do meio ambiente e operador.
10.3.1 Luz ultravioleta
A maioria das cabines possui lmpadas de luz ultravioleta que servem para
esterilizao antes e aps o uso da cabine. Essa lmpada deve ficar acesa de 15 a 30 minutos
apenas. preciso ter uma planilha para anotao acumulativa das horas utilizadas, pois, este
tipo de lmpada possui um perodo de vida til e aps este tempo no tem mais o mesmo poder
de ao esterilizante. Tambm no se deve olhar diretamente para a luz ultravioleta e nem usar
a cabine com ela acessa, pois ela pode queimar a pele e crnea, sendo recomendado que
quando esta luz estiver acesa evitar ficar por perto.
10.3.2 Limpeza
91
A limpeza da cabine deve ser realizada antes do uso, antes de ligar a luz ultravioleta e
aps o uso, aps o perodo de esterilizao com a luz ultravioleta. A limpeza deve ser realizada
com algodo ou gaze embebido em lcool 70%. Em casos especiais, quando h uso com
agentes biolgicos de maior risco, deve-se primeiro efetuar uma limpeza com hipoclorito de
sdio diludo e depois um enxgue com gua no mnimo destilada, terminando a limpeza com
lcool 70%. Uma vez por semana, ou em menos tempo dependendo do uso da cabine, deve ser
feita uma limpeza mais profunda. Nesta limpeza profunda toda a rea de trabalho deve ser
lavada com gua e sabo neutro e enxaguada. Em qualquer processo de limpeza deve-se ter
muito cuidado para no molhar e estragar os filtros HEPA. O enxgue deve ser feito de forma
delicada, no jogando gua, mas sim com o auxlio de uma esponja ou pano, exclusivos para
esta finalidade ou com gaze e algodo.
10.3.3 Cuidados durante operao CBS
Depois de limpar, passar lcool 70% e ligar a luz ultravioleta, o motor da cabine deve
ser ligado e permanecer em repouso por 15 a 30 minutos antes do uso. Este repouso
necessrio para que haja uma renovao do ar dentro da cabine, garantindo desta forma que o
ar interno ao incio do procedimento esteja estril.
Todo o sistema da cabine tem como princpio a circulao de ar, h uma cortina de ar
na abertura frontal que evita a entrada de ar que no seja previamente filtrado. Por isso no
pode haver circulao de pessoas na frente da CBS, a cabine deve ser posicionada, dentro do
laboratrio, de forma a evitar este tipo de situao, evitando, por exemplo, coloc-la em frente a
uma porta. O operador tambm no pode trabalhar com movimentos bruscos, para evitar a
quebra desta cortina de ar, devendo, inclusive, aguardar alguns minutos depois de organizar os
materiais e j com as mos dentro da cabine.
92
Todo material que ser utilizado dentro da cabine deve ser previamente desinfetado de
alguma forma. O mais comum embeber todo o material com lcool 70% antes de coloc-los
dentro da cabine. As vidrarias e insumos embalados devem ser colocados fechados e passa-se
lcool no exterior da embalagem, sendo abertos apenas dentro da cabine, garantindo a
esterilidade at o momento do uso.
No obrigatrio o uso de luvas de procedimento para o uso da cabine biolgica,
sendo este condicionado ao tipo de manipulao e procedimento que sero realizados.
Independente do uso ou no de luvas, o operador deve sempre atentar para a esterilidade de
suas mos. Antes de iniciar qualquer trabalho as mos devem ser cuidadosamente lavadas e
antes de colocar as mos dentro da cabine, passar lcool 70% nas mos. comum utilizar um
algodo ou gaze embebidos com lcool 70% ao lado para limpeza das mos quando necessrio.
Todos os recipientes e materiais devem ser manipulados com cuidado para no encostar as
mos nas aberturas e dentro de tampas e em tampes. Outra coisa importante no passar
com a mo sobre frascos abertos, para evitar cair partculas e consequentemente
contaminaes dentro destes frascos.
10.3.4 Resumo de Utilizao de CBS
93
RESUMO: UTILIZAO DA CABINE DE SEGURANA BIOLGICA (CBS)
Cuidados Prvios
94
Limpeza da Cabine com lcool 70%.

Desinfeco do material de trabalho antes de colocar dentro da CBS.
Luz ultravioleta 15 a 30 minutos.
Cabine ligada em repouso por 15 minutos.
Organizao da rea de trabalho dentro da CBS.
Cuidados Durante a Operao
Movimentao dentro da CBS cuidadosa e lenta.

No encostar-se s bocas das pipetas, frascos e parte interna de tampas.
No passar a mo por cima de frascos abertos.
Cuidado constante com as mos, desinfeco com lcool 70% frequente.
Cuidados Ps-Operao CBS
Luz ultravioleta 15 a 30 minutos.
Limpeza com hipoclorito de sdio, se necessrio.

Limpeza com lcool 70%.
Anotar tempo de luz ultravioleta ligada e tempo de trabalho.
95
11 QUALIDADE E AUTOMAO NO LABORATRIO DE ANLISES CLNICAS
A exigncia do mercado e o desenvolvimento tecnolgico constante tm levado os

laboratrios busca de melhoria da qualidade a cada dia. A qualidade traz mais segurana
dentro do laboratrio, padronizao dos testes e gera resultados mais confiveis e rastreveis.
Existem sistemas de qualidade que direcionados especificamente aos laboratrios como a BPL
(Boas Prticas em Laboratrio) e ISO17025. Essas normas preveem que todo o processo seja
rastrevel, ou seja, deve ser possvel saber o que aconteceu com uma amostra desde o
momento da coleta at a sada do laudo final, para o paciente. Para que isso ocorra necessrio
que durante todo este percurso que a amostra passa, tenha registro e procedimentos
padronizados.
So algumas exigncias destes sistemas de qualidade que todos os procedimentos
sejam padronizados, escritos em forma de um documento chamado: POP (procedimento
operacional padro). Nesse documento devem constar os materiais e equipamentos necessrios
para a anlise ou teste e a tcnica detalhada com o passo a passo, para que qualquer
funcionrio habilitado seja capaz de realizar aquele procedimento. Esse, inclusive, um dos
objetivos do sistema de qualidade: que qualquer operador seja capaz de reproduzir as anlises
do mesmo modo e com igual eficincia, garantindo a igualdade e qualidade do produto final,
neste caso, o laudo laboratorial.
Alis, todos os funcionrios devem ser treinados nestes POPs de forma que todos
tenham a mesma capacidade de efetu-lo da mesma forma. H critrios tambm para a
contratao de um novo funcionrio ou quando um colaborador da equipe for realizar novas
atividades ou tcnicas. Alm do treinamento prvio comum a realizao de exames de
proficincia que podem ser realizados quando uma nova anlise adicionada ao escopo do
laboratrio ou quando uma nova equipe ou colaborador assume esta atividade. Este exame de
proficincia ocorre da seguinte forma: outro laboratrio, ou outro setor da instituio, envia uma
amostra para ser testada. O resultado comparado com o j conhecido pela unidade que enviou
a amostra e a equipe ento avaliada como aprovada ou no.
96
As empresas e laboratrios procuram utilizar recursos modernos para o aprimoramento

da qualidade, reduo de custos e otimizao do espao e tempo. Atualmente a tendncia a
automatizao completa ou parcial das anlises clnicas com o desenvolvimento de uma grande
quantidade de equipamentos e kits. Vrios kits com todos os insumos prontos para anlises
bioqumicas, imunolgicas ou microbiolgicas.
Abaixo esto dois exemplos deste tipo, o primeiro um kit de deteco preparado para
diagnstico de coliformes totais e E. coli. O conjunto contm todas as placas com meio de
cultura e instrues para a incubao e modo de leitura das colnias. E o segundo exemplo
trata-se de um Kit de Elisa, um teste imunolgico que detecta a presena de antgenos do vrus
da Hepatite B. Este kit possui uma microplaca e todos os reagentes necessrios para a anlise.
FIGURA 76
Kit Imunolgico (ELISA) para Deteco de vrus da Hepatite B
Kit para Deteco de Coliformes totais e E. coli
FONTE: Disponvel em:<alfakit.com.br>. Acesso em: 15

mar. 2012.
FONTE: Disponvel em:<portuguese.alibaba.com>.

Acesso em: 14 jan 2012.
97
Mais modernos so os sistemas de deteco microbiana automatizado para diversos

exames. Este, ilustrado abaixo, por exemplo, um sistema automatizado de hemocultura. A
coleta de sangue feita direto em frascos do kit, com o meio de cultura especfico e depois so
encaminhados a um equipamento que tem capacidade para anlise de at 240 frascos
simultaneamente. Durante um perodo de cinco dias o equipamento mantm as condies ideais
de incubao, realizando leituras a cada 10 minutos, por fluorescncia emitida pelos sensores no
equipamento.
Este equipamento possui um tempo de concluso do diagnstico muito mais rpido do
que o mtodo convencional que demoraria mais de uma semana e precisaria de um ou mais
funcionrios para realizar as tcnicas mais complexas para a manuteno e leitura do resultado.
FIGURA 77
FONTE:
Adaptado
http://catalog.bd.com/bdCat/attributeSearch.doCustomer?priority=0&categoryID=R55
de
98
Outro tipo de teste que j possui sistema automatizado o de sensibilidade a

antibiticos, com resultados expressos em MIC (concentrao inibitria mnima), so bastante
sensveis e o resultado muito mais rpido do que o convencional, podendo em alguns casos ter
um resultado final em 18 horas, um grande contraste comparado ao teste convencional que
precisa de sete dias para concluso. At testes mais clssicos como colorao, como a
colorao de Gram, vm sendo substitudos por equipamentos que realizam a diferenciao
entre bactrias Gram-positivas e negativas.
Exerccios de Fixao:
7 Em relao ao que foi aprendido no item Tcnicas de Pipetagem, responda objetivamente:
a) o modo padro de pipetagem, usada para amostras com viscosidade normal.

________________
b) Mtodo utilizado para pipetagem de lquidos densos e viscosos. _______________________
c) Possuem uma dilatao no centro do corpo da pipeta que a torna mais precisa e possui
apenas uma opo de volume. _____________________
d) So utilizadas para volumes pequenos, em torno de 1 a 1000ul microlitros.
_________________
8 Para a operao de uma cabine de segurana biolgica indique a ordem correta dos
procedimentos abaixo:
( ) Anotao do tempo de trabalho e de luz ultravioleta ligada

( ) Desinfeco material de trabalho com lcool 70%
( ) Movimentao dentro da CBS cuidadosa e lenta
99
( ) Cabine ligada em repouso durante 15 minutos
Respostas
100
7
A - Pipetagem Direta
B - Pipetagem Reversa
C - Pipeta volumtrica
D Micropipetas
8
4; 1; 3; 4
12 PREPARO DE SOLUES
de fundamental importncia a utilizao de reagentes com formulao e

concentrao correta em qualquer prtica biolgica. Para isso, necessrio saber princpios
tericos importantes para que o laboratorista mais do que tenha uma receita para o preparo de
uma soluo saiba como fazer uma soluo de acordo com sua necessidade. Vamos comear
entendendo os conceitos envolvidos.
12.1 DEFINIES
Soluo uma mistura homognea composta por: soluto e solvente. Soluto o

componente presente em menos quantidade enquanto que o solvente est presente em maior
quantidade. Quando dizemos que uma soluo aquosa porque seu solvente a gua, assim
como em uma soluo oleosa o solvente um leo.
Uma soluo pode ser insaturada, saturada ou supersaturada. Quando insaturada a
proporo de soluto e solvente ainda suficiente para que a soluo mantenha-se homognea,
ou seja, o soluto diludo no solvente. Uma soluo Homognea em equilbrio e em seu limite
mximo de soluto chamada de saturada. Se continuarmos a acrescentar soluto em uma
soluo em algum momento ela comear a ter soluto em excesso sobrando no fundo do
recipiente, tornando-se uma soluo saturada.
Concentrao a quantidade de soluto, em relao ao solvente, presente em uma
soluo. Existem vrios modos de expressar a concentrao, pode ser em unidades fsicas
como porcentagem - lcool 70% - ou a relao: peso do soluto por volume de soluo - Soluo
101
KCl 15 g/litro ou em unidades qumicas, como Molaridade (M), Molalidade (m) ou Normalidade
(N).
Soluo padro ou standard aquela que possui concentrao perfeitamente

definida, isto , com o grau de exatido requerido para uma anlise volumtrica.
12.2 CLCULOS
A primeira coisa a ser feita antes de preparar uma soluo fazer os clculos, para
saber quanto de cada reagente ser necessrio, quais vidrarias usar e assim por diante. Vamos
ver aqui os tipos mais comuns de clculos de concentraes.
12.2.1 Percentual (%)
a concentrao de soluto por volume total, expressa em porcentagem (%). O soluto

pode ser tanto slido (massa g) quanto lquido (volume ml). O clculo o seguinte:
onde:
%=
s
v
x 100
C: concentrao (%)
s: soluto (g ou ml)
v: volume total da soluo (ml)
102
Vejamos um clculo ilustrativo de 1 litro de soluo de etanol 70%:

%=
%: 70%
70 = s
s: ?
v: 1 l
x 100
x 100
s = 70 / 100
m = 0,70 l m = 700 ml
Portanto, sero necessrios 700 ml de soluto (etanol) para 1 litro de soluo.
12.2.2 Concentrao (g/l)
a concentrao comum e seu resultado expresso pela relao massa/volume. Sua

frmula bem simples:
onde:
C=
m
v
C: concentrao (g/l)
m: massa do soluto (g)
v: volume total da soluo (l)
103
Por exemplo, se eu precisar fazer meio litro (0,5 l) de soluo com concentrao 50 g/l
o clculo ser o seguinte:
C: 50 g/l
m: ?
v: 0,5 l
C=
m
v
ento:
50 = m
m = 50 x 0,5
m = 25 g
0,5
Ou seja, sero necessrios 25 g de soluto para 500 ml de soluo.
12.2.3 Molaridade (M)
Molaridade (M) o nmero de mols presentes por litro de soluo. Seu clculo ocorre
da seguinte forma:
onde:
M: molaridade (M)
M=
m: massa do soluto (g)
MM.v
MM: massa molar do soluto
v: volume total da soluo (l)
104
Ento, para fazer 1 litro de soluo de HCl 1M o clculo deve ser o seguinte:
M: 1M
M=
m
MM.v
m: ?
MM: 36 (H:1; Cl: 35)

1 = m
v: 1 litro
m = 1 x 36
m = 36 g
36.1
Ou seja, sero necessrios 36 g de soluto para 1 litro de soluo.
12.2.4 Diluio
Quando h necessidade de preparar uma soluo a partir de outra, com concentrao

menor do que uma soluo j pronta (soluo estoque) pode ser feita uma diluio, que nada
mais do que a adio de solvente. O clculo pode ser feito do seguinte modo:
Onde:
C1.V1 = C2.V2
C: Concentrao
V: volume
1:
soluo inicial
2:
soluo final
105
Tomando como exemplo a preparao de 1 litro de soluo de KCl 3M a partir de uma

soluo estoque de KCl 10M ficaria assim:
C1: 10M
v1: ?
C2: 3M
v2: 1 litro
C1.V1 = C2.V2
106
10.V1 = 3.1 V1 = 3/10 V1 = 0,3 l (= 300ml)
Ou seja, sero necessrios 300 ml da soluo mais concentrada (KCl 10M) para obter
1 litro de soluo de KCl 3M.
12.2.5 Mistura de Solues
Uma variao do caso acima, usada para o preparo de uma soluo feita a partir de
duas outras solues iguais (mesmo soluto), mas apenas com concentraes diferentes a
Mistura de Solues:
Onde:
C: Concentrao
C1.V1 + C2.V2 = Cf.Vf
V: volume
1:
soluo 01
2:
soluo 02
f:
soluo final
Vamos supor que foi feita uma mistura de 70 ml de soluo de HSO4 a 5M com 280 ml
de soluo de HSO4 a 1M. Aplicando esse clculo teramos o seguinte clculo:
C1: 5M
v1: 70 ml
C2: 1M v2: 280 ml
Cf:?
vf:
350
ml
(v1+v2)
107
C1.V1 + C2.V2 = Cf.Vf

5.70 + 1.280 = Cf.350 350Cf = 630 Cf = 630/350 Cf = 1,8M
Resultado, 350 ml de uma soluo de HSO4 com molaridade igual a 1,8.
12.3 CUIDADOS NA PREPARAO DE SOLUES
Para preparar qualquer tipo de soluo necessrio primeiro medir o soluto, seja
pesando ou medindo em proveta ou com pipeta. Nesta primeira etapa preciso tomar as
precaues necessrias, se for um reagente txico utilizar os EPIs correspondentes aos riscos
possveis (luvas, mscara) e se for o caso at proceder em capela.
Se for o caso do soluto ser um slido a pesagem dever ser feita em uma balana
analtica ou semianaltica, tomando cuidado para no sobrecarregar a balana, limpar o prato de
pesagem entre uma medio e outra e certificar-se que a balana est nivelada e previamente
calibrada.
Depois de pesado, o soluto deve ser colocado, com muito cuidado para no haver
perda de massa, no recipiente que ser usado para fazer a soluo. O frasco utilizado
depender da preciso necessria. Por exemplo, se for uma soluo que precisa ter o mnimo
erro possvel, como no caso de uma soluo padro, dever ser utilizada um balo volumtrico
do volume exato desejado para a soluo final. J no caso de uma soluo onde esse fator no
seja to crtico, pode ser usado outro recipiente com graduao, como uma proveta, um bquer
ou um erlenmeyer, apenas atentando para usar a vidraria com volume mais prximo do que ser
medido.
108
Com o soluto j medido ou pesado, e colocado na vidraria onde ser feita a soluo,
deve-se despejar o solvente, cuidadosamente, com auxlio de um funil ou basto de vidro para o
escoamento do lquido. O preenchimento at o volume final desejado deve ser feito, com a
observao do menisco.
12.4 ROTEIRO ILUSTRATIVO
Vamos tomar como exemplo ilustrativo a preparao de uma soluo de 50g de um

determinado soluto em 100 ml de soluo total:
Passo 1: Colocar sobre o prato da balana (analtica ou semianaltica) um vidro de

relgio ou um pedao de papel alumnio e zerar a balana
Passo 2: Medir 50 g do soluto
FIGURA 78
109
Fonte: www.profpc.com.br
FONTE: Disponvel em: <http://www.profpc.com.br/Solu%C3%A7%C3%B5es.htm>. Acesso em:

15 mar. 2012.
Passo 3: Transferir o soluto para um bquer. Adicionar uma pequena quantidade de

gua, suficiente para dissoluo do soluto. Usar uma pisseta para ir lavando o vidro de relgio,
para aproveitamento total do soluto.
FIGURA 79

<http://www.profpc.com.br/Solu%C3%A7%C3%B5es.h
tm>. Acesso em: 15 mar. 2012.
Passo 4: Transferir essa dissoluo para um balo volumtrico de 100 ml, adicionar
mais um pouco de gua destilada e homogeneizar a soluo invertendo o balo com a tampa
fechada.
FIGURA 80
110
<http://www.profpc.com.br/Solu%C3%A7%C3
%B5es.htm>. Acesso em: 15 mar. 2012.
Passo 5: Completar o volume com gua destilada at a marca do balo volumtrico.

Medir o volume completo pelo menisco. Homogeneizar novamente invertendo o balo.
FIGURA 81

<http://www.profpc.com.br/Solu%C3%A7%C3
%B5es.htm>. Acesso em: 15 mar. 2012.
13 PREPARO DE MEIOS DE CULTURA
Os meios de cultura fornecem o conjunto de nutrientes na quantidade adequada para a

manuteno dos micro-organismos simulando o ambiente original. Os micro-organismos so
capazes de se desenvolverem em muitos lugares diferentes, porm cada um deles tm algumas
particularidades quanto s necessidades nutricionais e condies fsicas para seu melhor
desempenho, por isso existem diferentes tipos de meios de cultura, que so produzidos de
acordo com a necessidade dos micro-organismos que se quer cultivar. Podemos classificar os
meios de cultura de acordo com vrios aspectos, veremos a seguir suas classificaes
recorrentes.
13.1 CLASSIFICAO QUANTO AO ESTADO FSICO
Os meios de cultura podem ser classificados de acordo com seu estado fsico em:
slidos, lquidos ou semisslidos. Os meios slidos possuem um agente solidificante, em geral
gar, em uma concentrao de 1 a 2 %. Os meios semisslidos so mais gelatinosos, em uma
consistncia intermediria com a presena de menos de 1% de agente solidificante. Essa menor
consistncia permite uma maior motilidade do micro-organismo em cultivo. Os meios lquidos
no possuem agentes solidificantes e so frequentemente usados em culturas iniciais, para
transferncia para outros meios (repiques) e em provas bioqumicas.
Meio
Semi-slido
111
FIGURA 82
Meio
Slido
Meio
Lquido
112

<dgfstoess.com

<farturaalimentos.org.br

<biomedicinaemicro.blogspot.com
13.2 CLASSIFICAO QUANTO A CONSTITUIO
Podem ser naturais ou sintticos. Quando naturais so compostos por extratos

vegetais ricos nutricionalmente como extrato de tomate e tubrculos ou extratos de origem
animal como caldo de carne, de fgado, crebro, entre outros. No caso dos meios de origem
sinttica a composio qumica de cada elemento constituinte conhecida e so selecionadas
criteriosamente de acordo com o micro-organismo alvo, em geral utilizado para diagnsticos e
pesquisa.
Tambm quando a composio pode ser classificada como bsicos ou especiais. Os
meios bsicos contm os nutrientes essenciais e permitem o crescimento de uma grande
variedade de micro-organismos. J os meios especiais so preparados de acordo com a
necessidade de alguma espcie em particular, em geral possui a mesma constituio de um
meio bsico com acrscimo de algum nutriente ou composto. Por exemplo, gar sangue, trata-se
de um meio de gar simples com adio de soluo sangunea ou meio Loeffler, que possui
apenas soro bovino em acrscimo.
13.3 CLASSIFICAO QUANTO A FINALIDADE
Outra classificao existente de acordo com o tipo de cultivo pretendido. Abaixo

esto descritos as principais categorias de meios usadas:
Meios de Transporte e Conservao: so usadas no incio de um cultivo. Por

exemplo, se queremos cultivar uma bactria que est em um alimento ou superfcie o primeiro
meio que usamos para dar condies da bactria tornar-se vivel caso o ambiente que ela se
encontrava originalmente fosse desfavorvel.
Exemplo: Meio Cary Blair, um meio formulado com pouco nitrognio para impedir a
multiplicao de micro-organismo sendo suficiente apenas para a manuteno dos j presentes.
Muito usado para o transporte de material fecal para anlise microbiolgica.
FIGURA 83

<extranet.fisher.co.uk>. Acesso em:10
fev 2012.
113
Meios de Enriquecimento: so meios com nutrientes para os micro-organismos mais

difceis de cultivar. So em geral especficos para o organismo alvo e alguns possuem agentes
inibidores de outros micro-organismos que poderiam atrapalhar o cultivo.
FIGURA 84
114
FONTE: Alterado de http://www.defendamoselagua.com.ar/tubos2.jpg>.
Exemplo: O Caldo Tetrationato, possui sais de bile que atuam como inibidores de
micro-organismos Gram-positivos e soluo de iodo, que inibe micro-organismos da flora
intestinal normal.
O tetrationato usado para cultivo de Salmonella sp.
FIGURA 85
Meios Diferenciais e Seletivos: esses meios so usados para cultivo diferencial

entre micro-organismos com caractersticas similares, favorecendo o crescimento de
apenas um deles, em geral com agentes inibidores de um dos grupos.
FONTE: Disponvel em: <andreslaboratorioclinico.blogspot.com>. Acesso em: 10
mar. 2012.
Exemplo: gar Citrato Simmons, que verifica a capacidade de utilizao do citrato de

sdio como nica fonte de carbono em um meio alcalino, usado para diferenciao de gneros e
espcies de enterobactrias e no fermentadores.
Meios de Triagem: so usados para anlise de atividade metablica, estratgia que
permite a identificao de alguns grupos de micro-organismos.
Exemplo: Meio enterococo, usado para a triagem de micro-organismos resistentes a
determinados antibiticos.
FIGURA 86
FONTE: Disponvel em: <esse-ene.com.br>.

Acesso em: 15 fev. 2012.
Meio de Identificao: parecidos com o de triagem, porm usados em provas

bioqumicas e usados para uma identificao de um grupo mais restrito de micro-organismos.
FIGURA 87
FONTE: Disponvel em: <andres-laboratorioclinico.blogspot.com>.

Acesso em: 15 fev. 2012.
Exemplo: Caldo Sim apresenta em sua formulao o triptofano que um aminocido

que pode ser transformado por certas bactrias em indol, aps adio de outros reagentes.
Usado para identificao de algumas enterobactrias.
115
13.4 PROCEDIMENTOS GERAIS PARA PREPARO DE MEIO DE CULTURA
Hoje o mais comum a utilizao de meios comerciais prontos e/ou semiprontos. A

preparao desses meios bastante simples consistindo basicamente em dissolv-lo como uma
gelatina e distribuir nos tubos ou placas de petri que sero usados. Porm, alguns cuidados
gerais devem ser usados para o preparo e validao dos meios de cultura.
FIGURA 88
FONTE: Disponvel em: <www.e-escola.pt>. Acesso em: 15 fev. 2012..
13.4.1 Preparao e Distribuio
A seguir segue uma descrio simplificada do procedimento de preparo de um meio de

cultura geral.
116
1. Pesar o gar (p) e colocar em um bquer ou erlenmeyer com capacidade maior do

que o volume que ser usado por exemplo, se for preparar um meio de 100 ml usar um
erlenmeyer de 250 ml.
2. Medir o volume de gua destilada necessrio em uma proveta. A adio da gua no
meio deve ser realizada colocando-se primeiro uma pequena quantidade de gua at que o meio
fique mido e depois acrescentar o restante devagar.
3. Homogeneizar o meio agitando o frasco devagar, com movimentos circulares.
4. Aquecer o frasco em micro-ondas ou em bico de bunsen, sobre uma tela de
amianto. Como preciso agitar constantemente recomendado uso de luvas trmicas. No caso
de uso do micro-ondas deve-se parar pelo menos na metade do tempo para homogeneizar o
frasco.
5. O meio no deve chegar fervura. Deve apenas ser aquecido at se fundir
completamente.
6. Os meios para diagnstico microbiolgico passam por algum processo de
esterilizao antes do uso. Pode ser em autoclave, por 15 minutos a 121C, ou por filtrao, com
filtro de porosidade de 0,22 micra.
7. A distribuio dos meios em tubos ou placas pode ser feita antes ou depois da
esterilizao. Se for feita antes, as placas podem ser no estreis, se for depois preciso usar
placas j esterilizadas.
8. Se for feita a autoclavao do meio, tanto distribudo em placas, tubos ou em maior
quantidade, deve ser feita com o recipiente semiaberto para a esterilizao completa e por igual.
13.4.2 Controle de Qualidade
117
Para a validao de um lote de meio de cultura preparado preciso retirar uma parcela
de tubos ou placas prontas, em geral 10% do lote, e submet-los a uma incubao a 35C
durante 24 horas. Depois deste perodo no deve haver nenhuma alterao do meio: nem de cor
ou presena de colnias. Se houver alguma modificao no meio o lote dever ser esterilizado
novamente e se persistir a contaminao, dever ser descartado.
Outro controle de qualidade que deve ser realizado o Controle de Crescimento. Para
esse controle so utilizadas cepas de referncia ou com origem definida e viabilidade
comprovada. A cepa deve ser inoculada no meio e aps o perodo de incubao, especfico para
a cepa usada, a leitura deve ser obrigatoriamente positiva.
118
14 LAVAGEM E ESTERILIZAO
14.1 LAVAGEM
119
Antes de colocar qualquer vidraria ou material novo em uso preciso uma lavagem
prvia. Os materiais devem ser lavados imediatamente aps seu uso, mas se no for possvel,
deve-se colocar de molho em gua, detergente neutro e no caso de materiais contaminados,
soluo de hipoclorito de sdio 5%.
Os materiais contaminados ou potencialmente contaminados, como sangue e fludos
corporais, devem ser esterilizados antes da lavagem. Esta esterilizao pode ser por fervura ou
em autoclave.
Se os materiais estiverem com resduos impregnados pode-se deixar de molho com
uma soluo 1 a 2% de detergente neutro ou enzimtico, quando forem resduos de sangue ou
material biolgico. Depois do molho, ensaboar e esfregar, cada vidraria e instrumento com
cuidado para no riscar e enxaguar abundantemente. muito importante que no sobre
resduos slidos, portanto deve ser esfregado at a limpeza completa do material, podendo
inclusive utilizar gua quente para facilitar o processo. Para remoo de gordura pode ser usado
uma soluo bem diluda de carbonato de sdio.
Deve ser usada uma esponja macia para evitar riscos na vidraria, o que dificultaria a
leitura das anlises. Para frascos de boca estreita como erlenmeyers, provetas e tubos em geral
so utilizados escovas especficas (cepilhos) que possuem cerdas macias e so encontradas em
diversos tamanhos.
FIGURA 89
120
FONTE: Disponvel em: <casalab.com.br>. Acesso em: 15 fev.
O enxgue deve ser minucioso j que resduos de detergente podem alterar resultados
de testes sorolgicos e atrapalhar o cultivo microbiolgico. Todo material deve ser enxaguado
em gua corrente. Em frascos e tubos, deve-se preencher alm da metade com gua corrente e
descartar por sete vezes, repetindo o procedimento no mnimo trs vezes com gua destilada.
No caso de vidrarias para testes sorolgicos, deve-se repetir o enxgue com gua destilada por
sete vezes.
As pipetas necessitam de cuidados especiais. Imediatamente aps seu uso devem ser
descartadas em uma cuba ou jarra alta ou desprezador de pipetas com soluo de hipoclorito de
sdio. No caso da jarra ou desprezador de pipetas deve ficar completamente imersa e com a
ponta voltada para baixo, por isso na parte inferior deste recipiente deve ter algum sistema de
amortecimento, como uma almofada de gaze ou pedao de isopor, para evitar a quebra da ponta
da pipeta. Depois de ficar de molho, drenar a gua do recipiente substituindo por gua corrente e
deixar gua da torneira correndo at que todos os traos de sujeira sejam removidos. Depois, as
pipetas devem ficar imersas em gua destilada durante pelo menos uma hora. Aps este molho
secar a parte externa e deixar secar em p com a ponta voltada para cima. Existem lavadoras
automticas ou semiautomticas de pipetas que ficam acopladas a uma torneira e realizam esse
processo, so ideais para laboratrios com grandes rotinas.
Os materiais podem ser secos naturalmente, em temperatura ambiente ou colocada

em estufa de secagem usada especificamente para esta finalidade. Deixar sempre a boca dos
tubos e frascos voltados para baixo e deve-se atentar para a compatibilidade do material com a
temperatura da estufa, por exemplo, uma vidraria ou instrumento de metal suporta mais calor do
que um recipiente plstico, que pode inclusive derreter com altas temperaturas.
As lminas e lamnulas devem ser lavadas, com gua e sabo ou detergente neutro,
com muito cuidado para no riscar, o que comprometeria a leitura em microscpio. Depois de
lavadas devem ser imersas em cido actico glacial durante 10 minutos e secas com leno de
papel macio. Imediatamente antes do uso as lminas e lamnulas devem ser lavadas com lcool
e secas com leno de papel macio, preferencialmente que no deixe fiapos.
14.2 EMBALAGEM
Depois de lavados o ideal embalar os materiais para proteo durante o perodo em

que ficarem armazenados antes do uso. Os materiais que no precisarem de esterilizao prvia
podem ser embalados apenas em papel alumnio ou em papel kraft, sendo que no caso de tubos
e frascos suficiente apenas tampar a boca.
121
FIGURA 90
FIGURA 91
FIGURA 92
122

<catalogohospitalar.com.br

<santaclara.ind.br

<pontociencia.org.br
Os materiais que precisem ser esterilizados devem ser embalados em papel alumnio e
depois em papel kraft ou em embalagem especial para esterilizao. No caso de autoclave,
deve-se ainda colocar uma fita especial, fita de verificao de autoclavagem, que muda de cor
ao atingir a temperatura esperada. Em todos os embalados, esterilizados ou no, deve conter o
nome do material, data de esterilizao ou embalagem e nome da pessoa responsvel por este
trabalho.
14.3 ESTERILIZAO
Em diagnsticos e estudos microbiolgicos muito importante que as vidrarias,

instrumentos e at os insumos estejam totalmente livres de qualquer outro micro-organismo. Por
isso necessrio esterilizao de tudo que for entrar em contato com a cultura em anlise.
Esterilizao a destruio total de micro-organismos, os modos de ao para matar os
micrbios podem ser por leso dos cidos nucleicos, ruptura da membrana, desnaturao de
protenas ou mesmo por inibio do metabolismo microbiano. Existem diversos mtodos, por
agentes fsicos ou qumicos, que podemos escolher de acordo com o tipo de micro-organismo ou
de material que queremos esterilizar.
123
14.3.1 Mtodos Fsicos
Os mtodos fsicos podem empregar o calor (seco ou mido), radiao ou remoo

mecnica de partculas microscpicas (filtrao). A seguir veremos em maiores detalhes cada
um dos tipos mencionados.
14.3.1.1 Calor Seco
FIGURA 93

<odontoup.com.br/category/microbiologia>. Acesso em: 15 mar.
2012.
realizado pelo simples aquecimento a altas temperaturas que promovem a

desnaturao proteica ou at mesmo a destruio total do micro-organismo. Esto includos
nesta categoria:
Flambagem: Consiste no aquecimento de um material de metal diretamente em uma

chama at que fique vermelho. Tem a vantagem de ser um mtodo muito simples, rpido e
barato, porm s possvel usar em instrumentos metlicos.
Incinerao: a queima total de um material. Costuma ser usado em grande escala,

mas s pode ser usado em material de descarte permanente, em lixo hospitalar/contaminado.
FIGURA 94
FONTE: Disponvel em: <portalsaofrancisco.com.br>. Acesso em: 10

fev. 2012
Forno Pasteur: Usado para esterilizao de materiais resistentes ao calor como vidros
especiais que aguentam altas temperaturas e instrumentos metlicos. O procedimento dura
cerca de 1 hora e chega at a 200C.
124
FIGURA 95
125
FONTE: Disponvel em: <laboratorioscolasticocde.myblog.it>.

Acesso em: 10 fev 2012.
14.3.1.2 Calor mido
O princpio desse mtodo a quebra das pontes de hidrognio e desnaturao de

protenas dos micrbios. Emprega altas temperaturas e s pode ser realizada com materiais que
possam ser molhados. Os mtodos nesta categoria so a Fervura e a Autoclavao.
Fervura: Consiste em ferver em gua a 100C por no mnimo 15 minutos. A

desvantagem que no elimina todos os tipos de micro-organismos e nem esporos e nem todos
os materiais podem ser molhados.
FIGURA 96
126
FONTE: Disponvel em: <macarraoenergia.com.br>. Acesso em: 16 fev. 2012.
Autoclavagem: Usa o mesmo princpio de uma panela de presso. Com alta presso
(1 atm) a 121C durante 30 minutos, capaz de eliminar grande parte dos micro-organismos.
Pode ser usada para esterilizao de vidrarias e de meios de cultura.
FIGURA 97
FONTE: Disponvel em: <ciencor.com.br>. Acesso em: 10 fev. 2102.
14.3.1.3 Filtrao
Mtodo mecnico de esterilizao onde se utiliza uma membrana filtrante que pode ter
porosidade de 0,3 a 0,01 micra. Muito til para meios de cultura, vacinas, antibiticos e produtos
127
com enzimas, que no podem ser aquecidos, pois perderiam suas propriedades biolgicas.
Existem filtros que podem ser acoplados em seringas para filtragem de pequenos volumes e
opes maiores com capacidade para filtrar litros de soluo.
FIGURA 98
FONTE: Disponvel em: <qumica.com.br>. Acesso em:

10 mar. 2012.
FIGURA 99
FONTE: Disponvel em: <fischersci.com>. Acesso em: 12

mar. 2012
14.3.1.4 Radiao
A radiao mata os micro-organismos causando uma leso no DNA. Existem as

radiaes ionizantes que utilizam os raios gama, x e catdico que so muito utilizados em
substratos biolgicos e materiais mdicos e as radiaes no ionizantes: micro-ondas, usado
para pequenos objetos, e raios ultravioleta, usado para ambientes fechados.
FIGURA 100
128
FONTE: Disponvel em: <comoquevocepensa.blogspot.com>. Acesso em: 14

fev. 2012.
14.3.2 Mtodos Qumicos
Em geral estes mtodos so utilizados em temperatura ambiente o que torna til para
materiais termossensveis e tambm so teis para materiais que no podem ser molhados.
Existem inmeros regentes que podem ser usados para essa finalidade, citaremos aqui apenas
os mais usuais na maioria dos laboratrios.
14.3.2.1 xido de Etileno
um gs incolor e solvel em gua. Sua ao lenta, demora de 4 a 18 horas, mas

bastante eficaz e por ser um gs penetra em todo o material sem danific-lo. Apesar disso
possui muitas desvantagens: alto custo, manipulao oneroso e txico ao meio ambiente e ao
homem.
129
FIGURA 101
FONTE: Disponvel em: <portalesmedico.com.br>. Acesso em: 10 fev.

2012.
14.3.2.2 Formaldedo
O formol usado tanto em soluo quanto na verso gasosa e possui amplo espectro
de ao, inclusive em vrus e esporos. Pode ser usado para esterilizao de materiais e de
ambientes (verso gasosa), porm altamente txico e carginognico.
14.3.2.3 Compostos de amnia
Bastante utilizado em laboratrios, principalmente para descarte de vidrarias

contaminadas e para deixar materiais de molho at a esterilizao por outro mtodo. Em geral
utiliza-se o hipoclorito de sdio a uma concentrao que varia de 2 a 5%.
130
14.3.2.4 cido Paractico
Pode ser usado na forma lquida ou em vapor quando combinado com perxido de
hidrognio ou uma mistura de gases (argnio, hidrognio e oxignio). Na forma lquida usado
em temperatura ambiente com o material imerso durante 20 a 30 minutos e a em forma gasosa
usada de 4 a 6 horas a 50C. A desvantagem que altamente txico e com custo elevado.
15 ORGANIZAO DO AMBIENTE DE TRABALHO
15.1 FLUXO DE TRABALHO

131
Para que o servio dentro de um laboratrio seja otimizado conveniente que a

disposio das salas, equipamentos e realizao de anlises siga um fluxo de trabalho lgico,
minimizando o risco de acidentes e contaminaes cruzadas. As atividades devem ser
separadas ou agrupadas de acordo com o tipo de risco ou de material manipulado. Atividades
como sorologia podem ser realizadas com menor rigor em termos de contaminao da amostra
enquanto a rea de microbiologia deve ter acesso controlado e menor circulao. A limpeza e
preparao de materiais do laboratrio devem ser realizadas em ambiente exclusivo,
preferencialmente com distino de duas reas: uma rea Suja usada para descontaminao
e manipulao de materiais sujos e contaminados e uma rea Limpa usada para a
embalagem e esterilizao de materiais limpos inclusive com o uso de pias, autoclaves e
demais equipamentos de esterilizao exclusivos para cada uma destas reas.
15.2 EQUIPAMENTOS
A quantidade de equipamentos deve ser condizente com a rotina laboratorial, para que
no ocorram desencontros na hora de utilizar um equipamento e consequentemente atrapalhar o
andamento das anlises. Nesse aspecto tambm importante o planejamento de uso e at um
sistema de agendamento de uso, no caso de equipamentos muito requisitados. Na ocasio de
compra de novos equipamentos deve-se atentar no apenas ao preo, mas tambm aos
benefcios que traro, a capacidade de amostras, facilidade de uso, assistncia tcnica no de
fcil acesso, conforto para o operador (menor rudo, caractersticas anatmicas), possvel
utilizao para vrias tcnicas ou reas. importante tentar achar o equilbrio de melhor custo x
benefcio para cada caso especfico porque nem sempre o equipamento mais caro o mais
adequado para sua necessidade.
Antes de usar um equipamento sempre verificar se est ligado tomada correta (110V
ou 220V), fazer uma limpeza superficial com lcool 70% (sem encharcar) e proceder o uso
conforme as instrues de trabalho. Ao trmino, sempre deixar limpo, descontaminado e
removendo eventuais sujidades, para o prximo uso. Alm da limpeza antes e aps a utilizao
rotineira recomendada uma limpeza mais profunda semanalmente ou mensalmente,
dependendo da quantidade de uso e do tipo de equipamento. A manuteno preventiva deve ser
realizada, preferencialmente por mo de obra especializada a cada semestre ou ano,
dependendo da especificao recomendada pelo fabricante.
Equipamentos novos devem ser instalados conforme as instrues do fabricante, em
alguns casos sendo necessria a instalao por equipe tcnica especializada. importante ler o
manual antes da instalao e do uso, conferindo recomendaes de instalao como, por
exemplo, espao que deve ser mantido para circulao de ar, tipo de tomada, tipo de suporte
que deve ser colocado para sustentao entre outros detalhes. Antes de iniciar o uso
aconselhvel nomear um responsvel para a manuteno do equipamento e haver um
treinamento para os funcionrios que iro oper-lo. Tambm deve ser feita uma instruo de
trabalho de como manusear o equipamento, escrito com uma linguagem de fcil compreenso e
com a explicao de procedimento passo a passo, que deve ficar prximo ao equipamento e
disponvel para todos os usurios.
15.3 CONTROLE DE ESTOQUE
132
Os reagentes devem ser armazenados em local separado do laboratrio, em ambiente

com boa iluminao, ventilao e baixa umidade. Deve haver em estoque a quantidade mnima
possvel dos reagentes que sejam txicos, explosivos e inflamveis e esses devem ficar em local
separado. Metais alcalinos, sensveis gua, e gases comprimidos devem ser armazenados
distante dos demais reagentes. Alguns compostos so incompatveis com outros, podendo
causar graves acidentes, abaixo est uma tabela simplificada de reagentes incompatveis
133
quimicamente:
cidos
Inorgnic
os
Oxidantes
Orgnic
os
lcalis
Oxidante
(Base
s)
Venenos
Reativo
Orgnic
s com
os
os
gua
Inorgnic
Solvent
es
orgnico
s
cidos
Inorgnic
XX
os
cidos
Oxidante
s
cidos,
Orgnico
s
lcalis
(Bases)
Oxidante
s
Venenos,
inorgnic
os
Venenos,
orgnico
XX
XX
s
Reativos
com
gua
Solvente
s
orgnico
Fora estas excees, os reagentes podem seguir algum critrio de organizao como
seguir ordem alfabtica ou separar em grupos, por exemplo, em cidos, bases e sais, ou ainda
separados por tipo de uso. A entrada e sada de reagentes devem ser controladas por escrito
para facilitar reposio. Ao utilizar um reagente deve-se colocar um volume aproximado em um
frasco separado que deve ser obrigatoriamente identificado.
recomendado guardar a soluo estoque o quanto antes possvel e nunca devolver

sobras no frasco original.
So considerados materiais consumveis todos os materiais descartveis e em geral
com utilizao em grande volume durante a rotina. Podemos citar as luvas para procedimento,
algodo, gaze, seringas e agulhas, capilares, ponteiras e todo material plstico. O ideal existir
uma espcie de almoxarifado para armazenamento e um controle de entrada e sada. Este
controle de entrada e sada serve tanto para previso para compra de material e assim evitar a
interrupo da rotina laboratorial, quanto para a previso de gastos, anual por exemplo.
134
15.4 REGISTROS
Todos os procedimentos e anlises realizados no laboratrio devem ser escritos em

forma de documentos (Procedimento Operacional Padro POP) e revisados periodicamente
para atualizao. Os colaboradores de cada rea devem ser treinados nestes POPs e passar por
reciclagens peridicas. Os POPs devem ter uma linguagem simples, preferencialmente possuir o
procedimento descrito em forma de passo a passo e estar disposio dos funcionrios para
uso durante as anlises.
Tudo o que ocorre dentro do laboratrio deve ser registrado, desde o momento da
coleta de material, com o cadastro do paciente, at o laudo final.
O cadastro do paciente deve conter os dados pessoais: nome, idade, endereo,
telefone, e outras informaes pertinentes para a interpretao do laudo como: medicao
usada, data da ltima menstruao, doenas conhecidas. O paciente recebe um nmero de
registro e este nmero acompanhar as amostras colhidas.
Este nmero deve ser nico, sem risco de confundi-lo com outra amostra ou paciente,
sendo possvel acompanh-lo durante todo o percurso da amostra dentro do laboratrio at a
emisso do laudo final e algumas vezes at mesmo anos depois da sada do resultado.
Todas as anlises devem ser registradas em livro de registro, formulrio especfico ou
sistema computadorizado, e qualquer incidente ou observao deve ser registrada por mais
insignificante que parea. Por exemplo, se acabar um determinado reagente no meio de uma
anlise e for substitudo por outro de um lote diferente, esta informao deve constar nos
registros, pois se eventualmente for observada algum problema na produo daquele lote ser
possvel rastrear quais amostras devero ser refeitas por este motivo.
Esta caracterstica, de conseguir acompanhar tudo o que aconteceu com uma amostra
durante todo o tempo dentro do laboratrio chamada de Rastreabilidade, e o que garante a
confiabilidade do laboratrio. Esto includos nesta propriedade no s os registros das anlises
diretas da amostra, mas tambm os procedimentos que interferem indiretamente na qualidade
135
como documentao de esterilizao dos materiais e meios usados, manuteno de

equipamentos, controle de qualidade de todos os insumos usados e toda a documentao de
qualidade e rastreabilidade de servios prestados por terceiros.
136
Exerccios de Fixao:
9 - Qual descrio abaixo corresponde definio de Soluo Padro?
137
a) uma mistura homognea composta por soluto e solvente.
b) Soluo cujo solvente gua.
c) Soluo cujo solvente leo.
d) Soluo com proporo de soluto e solvente que mantm a soluo homognea.
e) aquela que possui concentrao perfeitamente definida.
10 - Correlacione o tipo de meio de cultura com a descrio correta.
a)
So meios com nutrientes para micro-organismos mais difceis de cultivar.
b)
So usados para anlise de atividade metablica, estratgia que permite a identificao de

alguns grupos de micro-organismos.
c)
Contm os nutrientes essenciais e permitem o crescimento de uma grande variedade de

micro-organismos
d)
So gelatinosos, tem uma consistncia intermediria com a presena de menos de 1% de

agente solidificante, ideal para verificao de motilidade microbiana.
I - Meios de Triagem
II - Meios Semisslidos
III - Meios Bsicos
IV - Meios de Enriquecimento
11 - Marque as afirmativas a seguir como verdadeiras (V) ou falsas (F).
( ) Uma esterilizao pode ser feita de forma mecnica, com um filtro, e muito til para
esterilizar volumes pequenos de solues imunobiolgicas.
( ) Os materiais contaminados ou potencialmente contaminados, como sangue e fludos
corporais, no precisam ser esterilizados antes da lavagem.
( ) O xido de etileno um mtodo de esterilizao que utiliza alta presso (1 atm) e
temperatura a 121C para causar dano na parede dos micro-organismos.
( ) O local de lavagem e esterilizao de materiais laboratoriais deve ser exclusivo e contar com
uma rea suja, para materiais sujos e contaminados e uma rea limpa, para materiais j lavados
e para a esterilizao.
138
Respostas
9A
139
10
A - Meios de Enriquecimento
B - Meios de Triagem
C - Meios Bsicos
D - Meios Semisslidos
11 V; F; F; V.
Exerccios complementares
Responda:
1 Concentrao que indica o nmero de mols por litro de soluo:

a)
Porcentagem
b)
Molaridade
c)
Concentrao (g/L)
d)
Diluio
2 Para o preparo de uma soluo padro mais adequado utilizar:
a)
erlenmeyer
b)
proveta
c)
balo volumtrico
d)
pipeta volumtrica
3 Quando recomendado fazer uma diluio?

a)
menor do que uma soluo j pronta.

b)
Quando temos duas solues iguais com concentraes diferentes.
c)
maior do que uma soluo j pronta.

d)
Quando temos duas solues iguais com mesma concentrao e com volumes
diferentes.
4 Qual das opes abaixo no uma forma correta de expressar concentrao?

a)
b)
Molar (M)
c)
Normal (N)
d)
Ul
5 Meio de cultura:
a) um meio que oferece um conjunto de condies adequadas para a manuteno dos microorganismos simulando o ambiente original.
b) um meio que oferece um conjunto de nutrientes na quantidade adequada para a
manuteno dos micro-organismos simulando o ambiente original.
c) um meio slido onde os micro-organismos tem seu melhor desenvolvimento.
140
d) um meio ideal para o crescimento de bactrias, pois possui os nutrientes, temperatura e

umidade ideais.
6 Qual das opes abaixo no corresponde a um critrio de classificao dos meios de cultura?
a)
Estado Fsico
b)
Constituio
c)
Finalidade
d)
pH
7 O que significa dizer que um meio Bsico?

a) possui pH alcalino
b) contm os nutrientes essenciais e permitem o crescimento de uma grande variedade de
micro-organismos
c) meio usado apenas para o transporte e conservao de micro-organismos.
d) meio contendo apenas macronutrientes suficiente para a coleta e transporte de microorganismos.
8 Quanto ao preparo de um meio de cultura assinale a alternativa incorreta:

a) O frasco usado para o meio de cultura deve ter a capacidade exata para o volume que se
deseja preparar.
b) A adio da gua no meio deve ser realizada colocando-se primeiro uma pequena quantidade
de gua at que o meio fique mido e depois acrescentar o restante devagar.
c) O meio deve ser homogeneizado devagar, com movimentos circulares.
141
d) O meio no deve chegar fervura. Deve apenas ser aquecido at se fundir completamente.
9 O que deve ser feito se no for possvel lavar um material, no contaminado, logo aps o uso?
a) Deixar de molho em gua destilada.
142
b) Deixar de molho em gua, detergente neutro.
c) Deixar guardado em uma cuba fechada.
d) Deixar dentro da pia para ser lavado assim que possvel.
10 Qual alternativa abaixo possui apenas mtodos de esterilizao fsicos?

a)
Flambagem, Filtrao, Incinerao, Radiao e Fervura.
b)
Compostos de amnia, Autoclave, Filtrao, Incinerao e xido de etileno.
c)
Radiao, xido de etileno, Forno Pasteur, Autoclave e Fervura.
d)
Autoclave, Forno Pasteur, Incinerao, cido Peractico e Formol.
11 Qual o mtodo correto de lavar lminas e lamnulas?

a) Lavar com lcool 70% e secar com leno de papel macio.
b) Lavar com gua e detergente ou sabo neutro, imergir em cido actico glacial durante 10
minutos e secar com um leno de papel macio.
c) Lavar com gua e sabo neutro e secar com leno de papel macio.
d) Lavar com gua destilada e secar com leno de papel macio.
12 Qual mtodo de esterilizao que: quebra as pontes de hidrognio e desnatura as protenas

dos micrbios com altas temperaturas?
a)
Autoclavagem
b)
Forno Pasteur
c)
Incinerao
d)
xido de etileno
13 A diferena entre rea suja e rea limpa :

a)
rea Suja: usada para descontaminao e manipulao de materiais sujos e
contaminados
rea Limpa: usada para a embalagem e esterilizao de materiais limpos.
b)
rea Suja: rea do laboratrio propriamente dito, onde so feitas as anlises.
rea Limpa: usada para descontaminao, limpeza, embalagem e esterilizao de materiais

limpos.
c)
rea Suja: usada para descontaminao, limpeza, embalagem e esterilizao de
materiais limpos.
rea Limpa: rea do laboratrio propriamente dito, onde so feitas as anlises.
d)
rea Suja: rea externa do laboratrio, como a entrada, recepo, sala de caf e
escritrio.
rea Limpa: rea do laboratrio propriamente dito, onde so feitas as anlises.
14 O que deve ser feito quando chegar um equipamento novo no laboratrio?

a) Ligar imediatamente na tomada para testar e iniciar o uso nas anlises de rotina.
b) Ler o manual de instrues, verificar se h espao disponvel conforme o recomendado e se
necessrio chamar mo de obra especializada para a instalao.
c) A instalao deve ser feita exclusivamente pelo fabricante.
d) Instalar o equipamento, test-lo e depois estudar o manual de instrues.
143
15 Como devem ser estocados os reagentes qumicos?

a)
Os reagentes devem ser armazenados em local separado do laboratrio, em ambiente
com boa iluminao, ventilao e baixa umidade.

b)
Os reagentes devem ser armazenados prximo ao local de uso, em armrios fechados,
de preferncia embaixo da pia.

c)
Os reagentes devem ser armazenados em um almoxarifado especfico, longe do
laboratrio e ter um funcionrio exclusivo para controlar o estoque.

d)
Os reagentes no devem ser mantidos na bancada, com fcil acesso para a
manipulao.
16 Rastreabilidade:
a) o conhecimento de todos os dados pessoais e pertinentes, para anlise, dos pacientes.
b) a caracterstica de anotar todas as observaes das anlises.
c) a caracterstica de conseguir acompanhar tudo o que aconteceu com uma amostra durante
todo o tempo dentro do laboratrio.
d) a caracterstica de conseguir acompanhar como foram preparados todos os meios e
solues necessrios para uma anlise.
144
Respostas exerccios complementares:
1B
2C
145
3A
4D
5B
6D
7B
8A
9B
10 A
11 B
12 A
13 A
14 B
15 A
16 C
REFERNCIAS
ABBAS A.K, LICHTMAN A.H, PILLAI S. Imunologia Celular e Molecular. 5. ed. 2005.
146
ANVISA. Descrio dos meios de cultura empregados em exames microbiolgicos.

Braslia. 2009.
BRASIL. Ministrio da Sade. Secretaria de Cincia, Tecnologia e Insumos Estratgicos.

Diretrizes gerais para o trabalho em conteno com material biolgico / Ministrio da
Sade, Secretaria de Cincia, Tecnologia e Insumos Estratgicos Braslia: Ministrio da
Sade, 2004.
CONSELHO REGIONAL DE FARMCIA DO ESTADO DE SO PAULO. Anlises Clnicas e

Toxicolgicas. So Paulo. 2007.
EMBRAPA. Manual para preparo de meios de cultura da Embrapa Agrobiologia. Braslia,

1999.
FIOCRUZ. Disponvel em: <http://www.fiocruz.br>. Acesso em: 31 out. 2011.
GOLDANI, E.; DE BONI, L.A.B.; SANTOS, A.M. Manual para o preparo de reagentes e
solues. Rio Grande do Sul. 2008.
MADIGAN, M. T. et al. Microbiologia de Brock. 10. ed. 2005.

147
NELSON D.L e COX M.M. Lehninger Princpios de Bioqumica. 3. ed. 2002.
ORGANIZAO MUNDIAL DA SADE. Manual de Segurana Biolgica em Laboratrio. OMS.

3. ed. 2004.
ORGANIZAO MUNDIAL DA SADE. Manual de Segurana Biolgica em Laboratrio.

OMS. 3. ed. 2004.
SOUZA, M. H. L.; ELIAS D.O. Princpios de Hematologia e Hemoterapia. Centro de Estudos

Alfa Rio. 2. ed. 2005.
UNESP. Disponvel em: <http://www.rc.unesp.br>. Acesso em: 31 out. 2011.

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REGRAS DE SEGURANA NO LABORATRIO ...................................................................8

SEGURANA NO TRABALHO ..................................................................................................8

2.1.1 Risco Fsico ................................................................................................................................8

CDIGO DE PRTICAS ...........................................................................................................12

2.2.1 Normas de Acesso ....................................................................................................................12

O LABORATRIO CLNICO ....................................................................................................19

EQUIPAMENTOS E MATERIAIS DE LABORATRIO .............................................................22

PRINCPIOS DE BIOQUMICA .................................................................................................44

4.1.1 Monossacardeos ......................................................................................................................44

4.2.1 Aminocidos ..............................................................................................................................49

4.3.1 cidos Graxos ...........................................................................................................................54

PRINCPIOS DE MICROBIOLOGIA .........................................................................................57

ESTRUTURAS PROCARIONTES .............................................................................................58

5.1.1 Membrana Citoplasmtica .........................................................................................................58

NUTRIO E METABOLISMO .................................................................................................62

CRESCIMENTO MICROBIANO ................................................................................................63

5.3.1 Ciclo de Crescimento................................................................................................................64

PRINCPIOS DE HEMATOLOGIA ............................................................................................66

PRINCPIOS DE IMUNOLOGIA ................................................................................................70

IMUNIDADE INATA ...................................................................................................................70

7.1.1 Fatores Fsicos ..........................................................................................................................70

IMUNIDADE ADQUIRIDA .........................................................................................................72

ANTICORPOS E ANTGENOS .................................................................................................72

TCNICAS DE PIPETAGEM E MICROPIPETAGEM ...............................................................78

9.2.1 Pipetagem Direta .......................................................................................................................83

USO DE CAPELA E CABINES DE SEGURANA BIOLGICA..............................................86

10.1 CAPELA ....................................................................................................................................86

10.3.3 Cuidados durante operao CBS .............................................................................................92

QUALIDADE E AUTOMAO NO LABORATRIO DE ANLISES CLNICAS .....................96

PREPARO DE SOLUES .....................................................................................................101

PREPARO DE MEIOS DE CULTURA .....................................................................................111

13.1 CLASSIFICAO QUANTO AO ESTADO FSICO ..................................................................111

14.1 LAVAGEM ................................................................................................................................119

14.2 EMBALAGEM ...........................................................................................................................121

ORGANIZAO DO AMBIENTE DE TRABALHO..................................................................131

15.1 FLUXO DE TRABALHO ...........................................................................................................131

O trabalho em um laboratrio extremamente prazeroso e traz muito conhecimento aos

2 REGRAS DE SEGURANA NO LABORATRIO

2.1 SEGURANA NO TRABALHO

A presena de materiais perfurocortantes, vidrarias que podem se quebrar e causar

2.1.1 Risco Fsico

So provocados por instrumentos ou materiais perfurocortantes, como por exemplo,

2.1.2 Risco Qumico

FONTE: Disponvel em: <http://commons.wikimedia.org>. Acesso em: 22 fev. 2012.

As solues qumicas sempre trazem em seu rtulo o fator de risco presente e as

2.1.3 Risco Biolgico

No caso de um laboratrio de anlises clnicas, por exemplo, esta a principal fonte de

por micro-organismos. So necessrios procedimentos especiais para a manipulao e descarte

2.1.4 Grupos de Riscos Biolgicos

Os agentes biolgicos so divididos de acordo com os seguintes critrios: grau de

Grupo de Risco 2 (risco individual moderado, risco coletivo baixo)

Grupo de Risco 3 (alto risco individual, baixo risco coletivo)

2.2 CDIGO DE PRTICAS

Cada laboratrio possui um Cdigo especfico, de acordo com riscos conhecidos e

2.2.1 Normas de Acesso

FONTE: Manual de Segurana Biolgica em Laboratrio OMS.

2. S o pessoal autorizado deve entrar nas reas de trabalho do laboratrio.

3. As portas do laboratrio devem permanecer fechadas.

4. proibida a presena de pessoas no autorizadas nas reas do laboratrio.