PENDAHULUAN

Jenis-jenis bahan obat alam yg beredar di

Indonesia:
1. Jamu empiris
2. Sediaan herbal terstandar uji praklinik
3. Fitofarmaka uji praklinik dan klinik

APA ITU UJI PRA-KLINIK?

Uji pra-klinik adalah tahap penelitian yang dimulai sebelum uji klinis (uji pada
manusia) dimulai, dan selama ada kemungkinan penting, pengujian berulang
dan keselamatan (juga dikenal sebagai Good Laboratory Practice atau "GLP")
dimana data dikumpulkan.

Tujuan utama dari studi pra-klinik

untuk menentukan profil keamanan utama suatu produk.
Setiap kelas produk mungkin mengalami berbagai jenis penelitian
praklinis. Misalnya, obat-obatan dapat mengalami pengujian
farmakodinamika, farmakokinetika, ADME, dan pengujian toksisitas
terhadap hewan.memperkirakan dosis awal yang aman obat untuk uji
klinis pada manusia.
Dalam uji pra klinis, dapat ditentukan NOEL melalui uji toksisitas.

Definisi NOEL

NOEL = No Observable Effect Levels ('Tingkat Efek Tidak Teramati )

Dosis yang tidak memberikan efek dalam eksperimen pada hewan uji; dosis yang tidak
memiliki efek farmakologis atau efek toksisitas (toksisitas akut,
embryotoksisitas, karsinogenisitas, dll). [The Maximul Residue Limit (MRL): the regulation basis]
Konsentrasi terbesar atau sejumlah suatu zat yang ditemukan pada percobaan atau
pengamatan yang tidak menyebabkan perubahan
morfologi, kemampuan fungsional, pertumbuhan, perkembangan, atau rentang
kehidupan organisme sasaran yang diamati dengan organisme normal (kontrol) dari
spesies yang sama dan dibawah kondisi sama yang sudah ditentukan. [IUPAC Compendium
of Chemical Terminology 2nd Edition (1997)]

NOEL dinyatakan dalam miligram zat kimia per kilogram berat badan per hari (mg/kg
bb/hari) atau dalam ppm dalam makanan (dikonversi ke mg/kg bb dari senyawa
asupan yang telah diukur atau diperkirakan sebagai asupan makanan selama periode
penelitian) .

Pengamatan klinis
Hasil uji klinis merugikan (observasi) yang tercatat selama periode pengujian,
mungkin berkorelasi dengan titik akhir toksisitas atau proses penyakit
dapat digunakan sebagai bukti yang mendukung untuk hubungan dosisrespons dan dapat memainkan peran dalam penentuan NOEL.
Namun, tidak semua tanda-tanda klinis yang merugikan akan berkorelasi
dengan perubahan patologis atau morfologi pada organ atau jaringan.

Pendekatan NOEL pada dosis-respon

NOEL

Contoh : Dosis pada gambar di samping (10

mg/kg), peneliti gagal melihat kematian
pada eksperimen hewan ujinya (tidak
toksik) dan sekaligus menemukan dosis
tertinggi yang tidak menyebabkan inhibisi
enzim atau patologi kulit pada
penelitiannya, tidak memberikan respon
(tidak memberikan efek farmakologi).
NOEL ini di dapatkan pada uji pre klinis
(eksperimen pada hewan uji) yang dapat
dijadikan dosis terendah pada eksperimen
berikutnya untuk menemukan hubungan
dosis-respon.
Jadi, NOEL merupakan pengukuran yang
berguna
untuk ekstrapolasi risiko
dan konsentrasi paparan yang aman.

THE DETERMINATION OF SAFETY OF

MUHANSE M4 ,
A TRADITIONAL HERBAL PREPARATION USED
TO TREAT HIV/AIDS
HIV/AIDSRELATED CONDITIONS
AND DISEASES
IN TANZANIA
P.P. MHAME*, V.A. NYIGO, G.P. MBOGO, V.E. WIKETYE, G. KIMARO, A.
MDEMU, J.W.
OGONDIEK, C.P. IMEDA, S. KATANI, R. SUNGURUMA & N.A. KITUFE
National Institute for Medical Research, Department of Traditional
Medicine Research
P.O.Box 9653, Dar-es-Salaam, Tanzania

Pendahuluan
Human Immunodeficiency Virus/Aquired Immunodeficiency Syndrome
(HIV/AIDS) masih menjadi salah satu masalah kesehatan utama di SubSahara Afrika.
Di Tanzania, sekitar 63.000 kasus AIDS yang telah diperkirakan terjadi
pada tahun 2002 dan sekitar 786.000 kasus AIDS total kumulatif sejak
tahun 1893.
(National AIDS Control Program, 2002).
Selama beberapa tahun, orang yang hidup dengan HIV/AIDS tidak
memiliki obat yang tepat untuk pengelolaan penyakit ini sampai tahun
2004 ketika pemerintah mulai menyediakan obat antiretroviral untuk
sekitar 44.000 kasus AIDS.
Namun berbagai tanaman obat telah digunakan untuk pengobatan
HIV/AIDS di negara itu.

Pendahuluan
* Muhanse M4 adalah obat herbal tradisional yang terbuat dari
campuran pucuk daun, ranting dan akar 10 tanaman.
* Banyak orang di Dar es Salaam, Tanzania telah menggunakan Muhanse
M4 untuk terapi penyakit HIV / AIDS penyakit selama lebih dari satu
dekade sekarang. Namun, belum ada penelitian untuk memastikan
keamanannya. Karena alasan tersebut, penelitian ini dilakukan untuk
menentukan keamanan obat herbal tradisional Muhanse M4 pada
hewan coba.

Bahan dan Metode

Persiapan ekstrak air Muhanse M4 diikuti dengan pengujian toksisitas
pada mencit albino dan tikus.
500mg dari bubuk Muhanse M4 direndam pada suhu kamar dalam
air suling selama 48 jam. Ekstrak air dikeringkan dengan freeze-dried dan
diperoleh ekstrak kental 23,599g (4,72%).
Hewan diberikan ekstrak Muhanse M4 selama 14 hari.

Bahan dan Metode

Mencit jantan dewasa muda dan mencit betina dewasa muda(rata-rata
berat badan 20g) dibagi secara acak masing-masing 5 grup (total 10 per
grup) dan diberikan ekstrak Muhanse M4 melalui oral dengan dosis
mulai dari 30,342-1168,167mg/kg yang dilarutkan dalam air suling.
Demikian pula untuk dosis injeksi intraperitoneal mulai dari 30,342447,5445mg/kg diberikan untuk 9 kelompok mencit.
Tikus jantan dewasa dan tikus betina dewasa (rata-rata berat badan
250g) dibagi secara acak masing-masing 5 grup (total 10 per grup) dan
diberikan ekstrak Muhanse M4 melalui oral dengan dosis mulai dari
30.342-1957.059mg/kg yang dilarutkan dengan air suling. Demikian pula
untuk dosis injeksi intraperitoneal mulai dari 30,342 - 553.7415mg/kg
diberikan untuk 11 kelompok tikus.

Hasil
Dosis maksimum peroral diuji untuk kedua mencit dan tikus
3034,200mg/kg, adalah 100 kali dosis yang digunakan pada manusia per
hari (24 jam). Tidak ada mencit atau tikus mati selama pengujian.
Dosis maksimum intraperitonial adalah 606,840mg/kg berat badan,
yang 20 kali dosis yang digunakan pada manusia per hari. Dosis ini
menyebabkan 100% efek letal pada mencit.
Dosis injeksi intraperitonial yang menyebabkan 10%, 50%, dan 80% efek
letal pada mencit masing-masing 485,472mg/kg, 530,985mg/kg dan
576,498mg/kg.

Hasil
Pada tikus, maksimum dosis yang digunakan untuk pemberian
intraperitonial yaitu 758,550mg/kg, 25 kali dosis yang digunakan
pada manusia per hari, dosis ini menyebabkan efek letal 100%.
Dosis yang menyebabkan 10%, 50%, dan 80% efek letal masingmasing yaitu 591,669 mg / kg; 637,182mg/kg dan
713,037mg/kg. (Gambar 2).

Hasil

Gambar 2: Toksisitas Akut Muhanse M4 pada Mencit dan Tikus Pemberian Injeksi Intraperitoneal

Hasil
Pada mencit, dosis berulang maksimum pada pemberian oral yang diuji
adalah 1.168,167 mg / kg (38,50 kali dosis yang digunakan pada
manusia). Dosis NOEL yang didapat adalah 819,234mg/kg, yaitu (27
kali dosis manusia). LD10%, LD50% dan LD100% yang didapat masingmasing 910,26mg/kg, 1.092,312 mg / kg dan 1.168,167 mg / kg.
Pada tikus, dosis berulang maksimum pada pemberian oral yang diuji
adalah 1.957,059mg/kg berat badan (64,50 kali
yang digunakan dosis manusia). NOEL yang didapat adalah 1562,613mg/kg
(51,50 kali dosis yang digunakan manusia). LD10%, LD50% dan LD100%
yang didapat masing-masing 1.668.810mg/kg, 1.835,691 mg / kg dan
1.957,059 mg / kg.

Hasil

Gambar 4: Toksisitas Sub-akut Muhanse M4 Pemberian Oral pada Mencit dan Tikus

Hasil
Dosis berulang maksimum yang diberikan secara intraperitonial

pada mencit adalah 447,5445 mg/kg (14,75 kali dosis manusia).

NOEL yang didapat adalah 303.420 mg/kg. LD10%, LD50% dan
LD100% yang didapat masing-masing 364,104 mg/kg, 409,617
mg/kg dan
447,5445 mg/kg.
Pada tikus, dosis berulang maksimum yang diberikan secara
intraperitonial adalah 553,7415 mg/kg. NOEL yang didapat adalah
424,788mg/kg. LD10%, LD50% dan
LD100% yang didapat masing-masing 485,472mg/kg, 526,4337 mg
/ kg dan 553.7415mg/kg.

Hasil

Gambar 4: Toksisitas Sub-akut Muhanse M4 Pemberian Intraperitonial pada Mencit dan Tikus

Kesimpulan

Ekstrak Muhanse M4 dianggap aman dalam Laboratorium hewan.

ACUTE AND SUB-ACUTE TOXICITY STUDIES OF THE

ETHANOLIC EXTRACT OF THE AERIAL PARTS OF HILLERIA
LATIFOLIA (LAM.) H.
WALT. (PHYTOLACCACEAE) IN RODENTS

Wonder K.M. Abotsi*, George K. Ainooson, Eric Boakye Gyasi

Department of Pharmacology, Faculty of Pharmacy and
Pharmaceutical Sciences, College of Health Sciences,
Kwame Nkrumah University of Science and Technology,
Kumasi, Ghana

Pendahuluan
Hilleria latifolia adalah salah satu tanaman herbal yang
umum di gunakan di Ghania sebagai obat tradisional,
meskipun masih sedikit informasi mengenai keamanan
dari tanaman tersebut.
Tujuan penelitian : mengevaluasi toksisitas tanaman
tersebut.(mengunakan tikus sebagai hewan coba)
Meskipun beberapa bagian tanaman sudah cukup sering
digunakan diberbagai daerah, seperti daunnya utk terapi
reumatik, bunga untuk pengobatan asma dan telah byk
digunakan secara tradisional, tetap saja literatur
mengenai keamanan tanaman tersebut, belum cukup
banyak.

Bahan dan metode

Mengevaluasi potensial toksisistas dari ekstrak
etanol tanaman Hilleria latifolia (HLE) dalam
tingkat akut dan sub-akut menggunakan tikus
sebagai hewan coba.

Hewan coba

Tikus jantan Sprague-Dawley (200-230 g) ditempatkan dalam kelompok-kelompok

dari 5 di kandang stainless steel dengan serutan kayu lunak sebagai alas tidur.
Makanan dan minuman diet normal (GAFCO, Ghana), Semua prosedur dan teknik
yang digunakan dalam studi sesuai dengan prinsip-prinsip yang diakui di hewan
laboratorium Penggunaan dan perawatan (UE direktif Tahun 1986:
86/609/EEC).

Preparasi ekstrak
Tanaman dalam ruangan pengering selama tujuh
hari dan ditumbuk menjadi bubuk halus. Bubuk
diekstraksi oleh dengan perkolasi dingin etanol 70%
(v / v) sampai terbentuk ekstrak kental berwarna
hijau kental seperti sirup. Kemudian tekanan
dikurangi dengan suhu 60 C dalam rotary
evaporator. Kemudian dikeringkan dalam oven
udara panas pada 50 C selama seminggu dan
disimpan di lemari es sebelum digunakan. Hasil
panen adalah 19,67% (b / b). Dan digunakan
sebagai HLE atau ekstrak dalam penelitian ini.

TOKSISITAS AKUT
Tikus Jantan Sprague Dawley-secara acak dibagi menjadi tujuh
kelompok (n = 5) dan disimpan di lingkungan percobaaan untuk
periode aklimatisasi 1 minggu.
Hewan-hewan itu berpuasa semalam dan diberikan diobati oral
dengan ekstrak H. latifolia dalam dosis 0,30; 0,45 ;0,60;0,90,
1,20, dan 3,00 g/kg BB. Kelompok kontrol menerima 10ml/kg BB
p.o. saline. Tikus-tikus yang diamati sampai 24 jam untuk
perubahan perilaku dan fungsi fisiologis serta kematian.
Penilaian perilaku dan fungsi fisiologis dilakukan serupa dengan
pengamatan utama prosedur (Irwin test) awalnya 4 dijelaskan
oleh Irwin (1968).

Toksisistas sub akut

tikus jantan Sprague Dawley-, 5 tikus per kelompok, diberikan
HLE setiap hari selama 14 hari berturut-turut. Grup A sebagai
kontrol, menerima 10ml/kg BB p.o. setiap hari. Grup B, C dan D
diobati dengan dosis harian dari ekstrak masing-masing 0,3, 1,2
dan 3 g/kg BB. Ekstrak
dipersiapkan sedemikian rupa sehingga tidak lebih dari 2 ml.
Hewan-hewan itu dipantau secara ketat untuk tanda-tanda
toksisitas. Hasil pengamatan dan pola perilaku sehari-hari dinilai
dan setiap kelainan dari asupan makanan dan air dicatat.

Hasil
Toksisitas Akut
- Semua tikus bertahan selama periode penelitian (24 jam).
- Selama observasi, hewan pada dosis 0,3 g/kg
(NOEL) tidak menunjukkan tanda-tanda beracun. Namun pada
dosis 0,45; 0,60; 0,90; 1,20; dan 3,00 g/kg menunjukkan efek
asthenia, defekasi, air liur, dan buang air kecil meningkat, air liur
dibandingkan dengan kontrol tidak diobati (peningkatan aktifitas
kolinergik)(Tabel 1).

Hasil

Tosisitas sub-akut
Hasil :
Pada uji sub-akut, pengobatan selama 14 hari
dengan HLE dosis 0,3, 1,2 dan 3 g/kg BB dosis
tidak memprovokasi perubahan signifikan
dalam tubuh atau berat badan relatif atau
parameter hematologis tikus.

Efek ekstrak pada parameter

hematologi
Ada umumnya tidak ada perbedaan yang signifikan
dicatat antara kontrol dan kelompok perlakuan
untuk parameter diukur (Tabel 2). Efek ekstrak pada
parameter biokimia serum Tidak ada perbedaan
yang signifikan secara statistik antara kontrol dan
kelompok perlakuan untuk biokimia parameter
yang diukur kecuali untuk penurunan tingkat
albumin (F = 5,146, P <0,05), globulin (F = 16,28;
3,14 3,7 P <0,01), protein total (F = 6,34, P <0,01),
langsung bilirubin 3,16 (F = 10,43, P <0,01) dan
bilirubin total (F = 10,70; 3,8 3,8 P <0,01), Tabel 3.

Efek ekstrak pada tubuh dan berat organ dalam tikus

Umumnya, tikus di semua kelompok eksperimental

bertambah berat badan selama penelitian ini.
Perubahan persentase:
Berat badan lebih besar untuk kelompok diobati
dengan HLE (0,3 dan 1,2 g/kg) bila dibandingkan
dengan kontrol tetapi tidak signifikan secara
statistik (P> 0,05 dalam semua perbandingan;. ara
1). Ada juga tidak ada perbedaan statistik yang
signifikan dalam bobot relatif organ (ROW) antara
kelompok perlakuan dan kontrol (Gbr.2).

 Gambar 1 Pengaruh pemberian oral ekstrak

Hilleria latifolia pada berat badan absolut (a)
dan perubahan% pada bobot tubuh (b) dari
tikus dalam uji toksisitas sub-akut. Data
dinyatakan sebagai mean S.E.M. (n = 5).
diobati kelompok dibandingkan dengan kontrol
menggunakan ANOVA satu arah diikuti oleh
Newman-Keuls tes.

 Gambar 2 Efek sub-akut pemberian oral ekstrak

Hilleria latifolia pada organ bobot relatif (ROW)
pada organ: hati (a), limpa (b), ginjal (c) dan
perut (d). Data dinyatakan sebagai mean
S.E.M. (n = 5). diobati kelompok dibandingkan
dengan kontrol menggunakan ANOVA satu arah
diikuti oleh Newman-Keuls tes.

Perubahan histopatologis
Evaluasi organ terisolasi dari tikus dikorbankan di akhir percobaan
toksisitas sub-akut mengungkapkan tidak ada perubahan
patologis pada organ (hati, perut, limpa dan ginjal) dari hewan
kontrol. Signifikan ekstrak-terkait perubahan patologis hanya
diamati untuk perut dan ginjal dan sampel pada Dosis 3 g/kg.
Semua organ-organ lain menunjukkan sebagian besar fitur
histologis normal ketika dibandingkan dengan diobati kontrol
(Gbr. 3). Ada mukosa ringan erosi dalam sampel lambung dan
bukti fokal ringan tubular gips dan hyperaemia glomerulus
moderat
Sampel ginjal dari tikus diperlakukan dengan 3 g/kg (gbr. 4).

kesimpulan
toksisitas dari ekstrak etanol Hilleria latifolia
pemberian oral pada tikus yang rendah. Namun
penggunaaan untuk manusia perlu diperhatikan
terutama pada dosis yang tinggi.

Pertama kali diperkenalkan tahun

1957 oleh Joint Expert Committee on
Food Additives (JECFA), Food and
Agriculture Organization FAO, DAN
the World Health Organization
(WHO). Dan dicanangkan sebagai
proses yg vlid dalam penilaian resiko
suatu zat pada tahun 1987.

What is
Menurut The U.S. Department of
Agriculture's Food Safety and
Inspection Service (FSIS) :
ADI adalah jumlah obat yg dinyatakan
berdasarkan berat badan, yang dapat
dikonsumsi setiap hari oleh manusia
tanpa adanya resiko yang berbahaya
bagi tubuh, ( standar berat badan
orang dewasa = 60 kg).

Menurut U.S. Environmental Protection

Agency :
Jumlah maksimal bahan kimia yang terpapar pada
seseorang setiap hari selama jangka waktu tetentu tanpa
menderita efek buruk
Secara kimia: perkiraan dari jumlah suatu zat dalam
makanan atau minuman, yang dapat ditelan setiap hari
selama seumur hidup tanpa menimbulkan resiko
kesehatan, berdasarkan fakta fakta evaluasi pada
penelitian. Biasanya dinyatakan dalam miligram per
kilogram berat badan.
Perkiraan jumlah suatu zat yang dapat dikonsumsi setiap
hari untuk seumur hidup oleh manusia tanpa
menimbulkan resiko yang berbahaya untuk kesehatan,
berdasarkan bukti ilmiah saat ini
Perkiraan dosis paparan suatu zat setiap hari yang tidak
menimbulkan efek buruk jika paparan tersebut terjadi
seumur hidup.

Menurut U.S. National Library of

Medicine:
Perkiraan jumlah suatu zat dalam
makanan atau air minum, dihitung
berdasarkan massa tubuh ( biasanya
dalam mg/kg BB) yang dapat ditelan
setiap hari selama seumur hidup
oleh manusia tanpa adanya resiko
yang membahayakan.

Penilaian ADI didasarkan pada

review dari data semua toksikologi
dan pada identifikasi NOAEL.
Database toksikologi menghasilkan
banyak NOAEL, yang terendah
dianggap merugikan kemudian
dipilih sebagai dosis penting untuk
ekstrapolasi.

 Nilai NAOEL (No Observed Adverse Effect Level)

ditentukan pada hewan laboratorium, bukan
pada manusia. Oleh karena itu diperlukan
kebijaksanaan untuk menyesuaikan perbedaan
yang mungkin ada dengan asumsi bahwa
manusia lebih sensitive dibandingkan hewan uji
yang paling sensitif.
Uji toksisitas dibatasi oleh jumlah hewan yang
diuji. Tes tersebut tidak dapat mewakili
keseragaman populasi manusia, hanya beberapa
kelompok yang menunjukkan kepekaan yang
berbeda (misalnya anak-anak, orang tua, dan
orang sakit).
Oleh karena itu diperlukan ekstrapolasi dari
hewan ke manusia dengan faktor keamanan.

Faktor keamanan yang digunakan

adalah 100, didasarkan pada factor
10 kali lipat untuk perbedaan antara
hewan dan manusia rata-rata
(interspesies) dan 10 kali lipat untuk
perbedaan antara manusia rata-rata
dan individu yang sensitif
(intraspesies).

ADI setiap orang berbeda, dipengaruhi oleh :

Gen
- Gaya hidup
Jenis kelamin
- Umur
Proses metabolisme (ADME)
- Pemaikaian obat
Kehamilan

Konsep ADI
menggunakan dosis referensi (RFD)
yang diadopsi oleh FDA berdasarkan
prinsip Environmental Protection
Agency (EPA).
Penilaian ADI didasarkan pada review
dari semua data toksikologi yang
tersedia dan dari data identifikasi
NOAEL (No Oberved Adverse Effect
Level) .
ADI dinyatakan dalam mg/kg BB per
hari

Perhitungan ADI

Klasifikasi kontaminan dalam obat

obatan herbal

contoh ADI untuk logam Arsen dan

logam-logam berbahaya dalam obatobatan herbal

Acceptable Daily Intake (ADI) dan

dosis toksisitas akut untuk pestisida

Contoh ADI pada beberapa obat sintetik di

Australia

Sodium lauryl sulfate

ADI : 1.0 mg/kg bw

NOEL : 100 mg/kg bw
Data : 27 May 2010
Berdasarkan NOEL, 100 mg/kg bw/d
dari 28 hari percobaan oral pada
tikus dan menggunakan 100-fold
safety factor.

Streptomycin

ADI : 0.05 mg/kg bw

NOEL : 5 mg/kg bw
Data : 28 Jun 2001
2 tahun penelitian pada tikus;
berdasarkan kenaikan berat badan
pada dosis tertinggi adalah 10 mg/kg
bw/d

Contoh Herbal ADI

CURCUMIN

Sumber Jurnal
Judul

:Antioxidant activities of curcumin,

demethoxycurcumin and
bisdemethoxycurcumin

Oleh G.K. Jayaprakasha, L. Jaganmohan Rao *,

K.K. Sakariah
Central Food Technological Research Institute,
Mysore 570 020, India

 Curcumin is a major component of food

flavouring turmeric and has been used as a
herbal medicine.
Curcumin shows a variety of physiological and
pharmacological effects, and several studies
indicate curcumin to be anticarcinogenic and
antiinflammatory

Acceptable daily intake (ADI) for curcumin is

13 mg/kg body weight, based on the no
observed effect (NOE) level of 250320 mg/kg
body weight per day in the multi generation
study in rats and the application of a safety
factor of 100

LICORICE
Glycyrrhiza glabra

penggunaan
Perasa dalam produk rokok
Perasa dalam permen
Farmakologi:
Antivirus
Pengobatan kanker
Obat gangguan GI
Anti inflamasi
Obat diabetes

Dosis: 2-15 gr untuk ulcer dan gastritis

dosis yang lebih tinggi dapat
menyebabkan hiperkalemia
NOAEL
ADI

: 2 mg/ kg hari
: o,2 mg/ kg BB

STEVIA
Stevia rebaudiana

Judul :
Food and chemical toxicology
Oleh
Carakostas M, et .al

Kegunaan : Pemanis (Stevio glikosida)

pengganti gula pada penderita
diabetes
ADI : 4 mg/ kgBB