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Tecnologa CRISPR/CAS9 presente y futuro

en biotecnologa, y controversias de sus


patentes
Natalia Lamprea Bermdez[1], Oscar Lizarazo-Corts[2]
Se imagina una tecnologa capaz de identificar y reparar las secuencias de ADN defectuosas en
pacientes que sufren enfermedades de origen gentico, tales como Huntington o fibrosis qustica? Y
que sirva tambin para prevenir y controlar las infecciones virales tales como VIH o hepatitis? Y que
pueda ser usada igualmente en plantas o animales para controlar infecciones virales o eliminar
caractersticas no deseables en cultivos, incluso cuando las plantas ya han crecido? O que pueda
apagar y prender los genes en momentos determinados para modular la florescencia o la
maduracin de frutos? Estas son, entre otras, las aplicaciones que tiene el sistema CRISPR/Cas9.
Funcionamiento biolgico del sistema
En el campo de la biotecnologa y especficamente de la ingeniera gentica, siempre fue un reto
poder identificar un sitio especfico del ADN y poder editarlo al mismo tiempo, por ejemplo para
cambiar una mutacin puntual que impide la formacin de una protena, o para poder eliminar toda
una variante defectuosa de un gen. La tecnologa CRISPR/Cas9, logra justamente eso, identificar un
segmento especfico de ADN y eliminarlo o reemplazarlo, usando siempre las mismas herramientas:
un RNA dplex con la copia del ADN que se debe identificar (sgRNA) y con una secuencia corta
(PAM) que se unir al ADN y estabilizar la protena Cas9; y una protena (Cas 9, con actividad de
endonucleasa y helicasa) guiada por el sgRNA que separa y corta las dos hebras de ADN (Doudna y
Charpentier, 2014).
El sistema CRISPR/Cas con su RNA como molcula gua que dirige la actividad de Cas fue
descubierto en 2012 en las bacterias, es el sistema inmune de ellas y es empleado para defenderse
del ingreso de virus y plsmidos (Jinek, et.al. 2012). Cuando un virus infecta a una bacteria, lo que
hace es ingresar a la clula bacterial e insertar su ADN en el de sta, usar la maquinaria de
replicacin de la bacteria para reproducirse y crear ms virus. El sistema CRISPR/Cas les permite a
las bacterias identificar el ADN viral, enviar un fragmento a un arreglo de ADN con secuencias
cortas palndromas repetidas separadas por espacios donde se ubicara el ADN invasor o a identificar
(clustered regularly interspaced palindromic repeats -CRISPR), luego crea o transcribe un crRNA
con esa secuencia invasora y la usa para identificar ese mismo segmento en cualquier parte del ADN
bacterial donde se haya insertado, dirigiendo adems ese crRNA a la protena Cas9 para que corte el
ADN viral y pegue de nuevo el ADN bacterial de manera que quede como el original (Makarova et.
al, 2011) ( video de cmo funciona CRISPR/Cas aqu)
Aplicaciones del sistema CRISPR/Cas9
A partir de este sistema CRISPR/Cas9 bacterial, se realizaron versiones ligeramente adaptadas que
permiten la edicin del ADN en eucariotas aquellos organismos que tienen membrana nuclear
definida, tales como insectos, mamferos, plantas, etc-, puesto que una vez la secuencia blanco del
ADN es eliminada, el organismo tiene diferentes formas para reparar el ADN. Recientemente se
desarrollaron ensayos con el sistema CRISPR/Cas para mltiples aplicaciones en enfermedades
genticas, imgenes de diagnstico, agricultura, entre otros. Por ejemplo, se ha utilizado para
eliminar cataratas causadas por una mutacin dominante en el gen Crygc en ratones y logrando que
la descendencia del ratn no tuviera la enfermedad (Wu,et.al.,2013); se reparin vitro del loci CFRT

defectuoso en clulas madre intestinales aisladas de pacientes con fibrosis qustica (Schwank et. al.,
2013); se han modificado genes de diferentes tipos de plantas (Jiang et. al. 2013) y se han realizado
pruebas de imgenes diagnsticas en genes de inters al incluir protenas de fluorescencia en el
sgRNA (Chen, et. al., 2013). Los campos de aplicacin de la tecnologa CRISPR/Cas9 estn en
desarrollo y su proyeccin es alentadora, se estima que adems ser protagonista en el diseo de
drogas por su actividad como modulador de la expresin de genes, por ello ya algunas compaas
farmacuticas como Astrazeneca y Novartis han invertido en la tecnologa.
Solicitudes de patentes y su conflicto actual
Aunque hay dos solicitudes de patente que han generado el conflicto ms relevante y publicitado,
debe tenerse presente que hay varios grupos de investigacin y empresas que haban publicado
previamente resultados de investigacin relacionados con el funcionamiento de CRISPR/Cas y sus
aplicaciones en la edicin de genes, y que actualmente tambin tienen solicitudes de patente en
trmite (Granahan y Loughran, 2014).
Los actores en este conflicto son los investigadores y co-inventores de algunas de las solicitud de
patentes y las entidades en que trabajan, los investigadores mantienen su bata de laboratorio pero
la complementan con su atuendo de emprendedores en diferentes start-ups en algo que ya
empieza a tener aspecto de red compleja y enredada (Regalado, 2014):
1. a)Jennifer Doudna de la Universidad de California-Berkeley, tras distanciarse de Zhang y de
Editas Medicine de la cual fue co-fundadora, ahora es socia deCaribou
Biosciences@CaribouBIo, compaa que recientemente suscribi un acuerdo con Novartis, que
a su vez tiene alianzas con Intellia.
2. b ) Z h a n g i n v e s t i g a d o r d e l B r o a d I n s t i t u t e t r a b a j a c o n l a c o m p a a E d i t a s
Medicine@editasmed
junto a otros investigadores, se enfocan en terapias
humanas, obtuvieron licencia del titular de la patente en US, el Broad Institute.
3. c)Emmanuelle Charpentier cedi sus derechos y es una de las fundadoras cientficas
de CRISPR Therapeuticsfirma apoyada por Versant Ventures.
Tanto la investigacin de Zhang, como la del equipo de Doudna tuvieron apoyo de los Institutos
Nacionales de Salud NIH- de EEUU, como se seala en la patente concedida y en la solicitud en
trmite.
La solicitud de patente que tiene como co-inventoras a Emmanuelle Charpentier y Jennifer Doudna,
est relacionada con la edicin de genomas por el uso de CRISPR/Cas9, fue presentada en la Oficina
de Patentes de Estados Unidos USPTO el 15 de marzo de 2013 y tiene fecha de prioridad del 25 de
mayo de 2012 (PCT/US2013/032589)[3] (Aqu para Link USPTO).Los solicitantes son la Universidad
de California, Universidad de Viena y Jennifer Doudna. Dicha solicitud de patente reclama el sistema
RNA dirigido a ADN con cada uno de sus elementos, secuencia PAM, sgRNA y Cas9 con diferentes
secuencias alternativas (reivindicaciones 1-6); vectores de expresin con diferentes variantes de
estos elementos (reivindicaciones 7-17); clulas transgnicas y organismos transgnicos expresando
el sistema CRISPR/Cas9 con diferentes variantes (Rv 38-43), composiciones que contienen el sistema
CRISPR/Cas9 (Rv 44-63); mtodo de modificacin del ADN sitio-especfica con mltiples genes
posibles a modificar por disminucin o por incremento de su expresin (Rv 64-94), modificacin por
mtodos in-vitro o in-vivo (Rv 95-96), mtodo de tratamiento de sujetos por sistema CRISPR/Cas (Rv
97-108); kit que contiene distintas variantes del sistema CRISPR/Cas (Rv 109-155).
La patente del investigador Feng Zhang relacionada con el sistema CRISPR/Cas9 y mtodo para
editar la expresin de genes en clulas eucariotas, ya fue concedida en la USPTO (US 8,697,359),
sus titulares sonThe Broad Institute, Inc., y Massachusetts Institute of Technology (MIT), ambos de

Estados Unidos, tiene fecha de prioridad del 12 de diciembre de 2012. Protege el mtodo para
alterar la expresin de genes usando CRIPR/Cas9 en clulas eucariotas, incluidas las de mamferos y
humanos (reivindicaciones 1-7), el sistema CRISPR/Cas9 como tal, con su principio de
funcionamiento y adaptacin para clulas eucariticas, para disminuir o interrumpir la expresin de
genes (reivindicaciones 8-20). Esta misma invencin ya fue presentada va PCT (WO2014093661) y
en la Oficina Europea de Patentes -EPO.
Aunque la solicitud de Zhang fue presentada el 15 de octubre de 2013, fue estudiada por va fasttrack por lo que su estudio y concesin (15 abril 2014) fue anterior a la de la solicitud de Doudna y
Charpentier, pese a que su prioridad es posterior a sta (Sherkow J, 2015). Ambas solicitudes
incluyen la proteccin del sistema bsico de funcionamiento del CRISPR/Cas9 y varias de sus
aplicaciones generales en la modificacin de expresin de genes.
Las disputas entre Zhang y Doudna/Charpentier o mejor entre Broad Institute y U.CaliforniaBerkeley, se dan en una transicin entre el sistema first to invent anteriormente vigente en EEUU
y el sistema first to file establecido a partir de la norma AIA American Invents Act. (Lash, 2014,
2015). Tambin se aderezan con la participacin de terceros annimos que pueden enviar
comentarios third party relevance submission (Xconomy, 2015) a los diferentes procesos en
curso (a diferencia de lo que ocurre con la relativamente limitada posibilidad de presentar
observaciones de la Decisin 486, 60 das despus de la publicacin, demostrar legtimo inters y
pagar una tasa que no tiene ningn descuento, incluso para universidades o pymes).
Dichas patentes y la forma en que se gestionen, en particular los modelos de licenciamiento que se
empleen pueden bloquear o dificultar el acceso a la tecnologa de otras empresas e investigadores y
hacer que no se desarrolle todo el potencial de la herramienta debido a falta de libertad de
operacin. En Estados Unidos, por haber financiado parte de las Investigaciones los Institutos
Nacionales de Salud (dotados con robustos presupuestos), tienen licencia no exclusiva libre de
regalas sobre la patente de Zhang (licencia confirmatoria) y la solicitud de Patente
Doudna/Charpentier, esto con base en la norma Bayh-Dole Act, 37 CFR 401, Sec. 401.14 Standard
patent rights clauses. Otras empresas, como GE General Electric en su divisin de Ciencias de la
Vida, ya obtuvieron una licencia del Broad Institute y Zhang (MIT-Harvard).
Algunos antecedentes histricos en materia de licenciamiento de tecnologa y otros expertos tales
como Jacob Sherkow (2015) sugieren que la forma de resolver esto puede ser a travs de esquemas
de licenciamiento flexibles y no exclusivos, tal como sucedi en los 70 y 80 en Estados Unidos con
las patentes para las tecnologas de ADN recombinante desarrolladas por Stanford, la Universidad
de California San Francisco y posteriormente Genentech, caso paradigmtico en materia de
transferencia tecnolgica (Feldman, et.al, 2007). Tambin sugieren tener en cuenta el caso de
la Reaccin en Cadena de Polimerasa PCR (Sherkow, 2015) desarrollada por Cetus (US 4,965,188)
y cedida a Roche, tcnica que permite amplificar y replicar ADN y es usada ampliamente en
procesos de paternidad, investigacin en genes, en este caso si bien la proteccin por propiedad
intelectual fue fuerte, en aras de que se expandiera la tecnologa existi cierta tolerancia de los
titulares de derechos sobre los investigadores que en algunos casos la usaban sin licencia (Fore,
2006), dado que en Estados Unidos no existe una excepcin estatutaria de experimentacin. El
problema en caso como CRISPR/Cas es que podran llegar a requerirse varias licencias de
diferentes titulares.
Sin embargo, se podran reducir los costos de transaccin y aumentar la seguridad jurdica si desde
un principio solo se protegen mediante patente aquellas reivindicaciones que realmente lo ameriten,
aquellas que sean verdaderas invenciones y no meros descubrimientos, y se dejan en dominio
pblico los elementos bsicos de la herramienta, por ejemplo las secuencias naturales de Cas 9 .

Por lo anterior, este caso tambin pone una vez ms sobre la mesa la discusin sobre materia
patentable en biotecnologa. qu debe protegerse y qu no? cul es el alcance y los lmites a la
proteccin?
Estado actual de solicitudes en Colombia
En Colombia, no se solicitaron las patentes iniciales de las tecnologas de ADN recombinantes ni de
PCR, esto confiri amplia libertad de operacin a investigadores nacionales, pues adems de estar
amparadas por la excepcin de investigacin prevista en la Decisin 486, debido al principio de
territorialidad de las patentes podan emprender legalmente actividades con fines aplicados y
comerciales sin infringir patente alguna. Por ello hace varios aos se encuentran polimerasas en el
mercado comercializadas por entes nacionales. Estas son adquiridas a precios cmodos por
laboratorios, centros de investigacin, empresas y universidades y se emplean en una amplia gama
de investigaciones en biociencias, salud, agricultura etc.
En contraste en Colombia, si se present una de las principales solicitudes de patente para CRISPR/
Cas9. El 25 de noviembre de 2014 se radic la solicitud de patente de Doudna y Charpentier
(PCT/US2013/032589, WO 2013/176772) que corresponde al expediente colombiano 14-259531,
contiene las mismas reivindicaciones de la solicitud en Estados Unidos.
Segn el sistema de consulta de la SIC a la fecha nadie ha presentado observaciones u oposiciones
(an est en periodo de oposiciones). De concederse todas las reivindicaciones de esta solicitud de
patente, toda investigacin que pretenda usar el sistema CRISPR/Cas9 con fines comerciales
posiblemente deber obtener licencia de los titulares. Probablemente las investigaciones puramente
acadmicas sin fines comerciales podran beneficiarse de la excepcin de experimentacin prevista
en la Decisin 486 (Artculo 53). Sin embargo, muchos de los proyectos de regalas o aquellos
enmarcados en relacin Universidad-Empresa no se veran amparadas por esta excepcin y tendran
que contar con licencia.
Por ello entre otras opciones los investigadores y empresarios deben estar dispuestos a obtener
licencias para poder desarrollar sus actividades legalmente. Otra alternativa, puede ser que solo se
concedan algunas reivindicaciones de la solicitud de patente, y que las herramientas ms bsicas y
fundamentales de investigacin permanezcan en el dominio pblico en Colombia, esto depender
en parte- de que la oficina de patentes haga un examen riguroso de la solicitud y eventualmente de
que terceros realicen observaciones u oposiciones fundamentadas.
Esta interesante herramienta CRISPR-CAS, que representa buena parte del presente y futuro para
las investigaciones y aplicaciones en ciencias biolgicas y ciencias mdicas, pone sobre la mesa la
importancia de un descubrimiento con la capacidad de convertirse en una herramienta til para
muchos campos de investigacin, la necesidad de poder emplearlo con todo su potencial y los lmites
que debe tener la materia patentable.
Referencias Bibliogrficas
Chen B., et. al., Dynamic imaging of genomic loci in living human cells by an optimized CRISPR/Cas
system. Cell 155, 14791491 (2013).
Doudna Jennifer A. and Emmanuelle Charpentier, The new frontier of genome engineering with
CRISPR-Cas9. Science, Vol. 346 issue 6213 (2014).
Feldman MP, A Colaianni and C Liu. 2007. Lessons from the Commercialization of the Cohen-Boyer
Patents: The Stanford University Licensing Program. En Intellectual Property Management in Health
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2014.http://www.wolfgreenfield.com/files/granahan_and_loughran__crispr_cas9_.pdf
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http://www.xconomy.com/boston/2014/11/18/with-atlas-cash-and-berkeley-tool
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Lash Alex, Ready Aim. CRISPR: Will Gene-Editing Tools Hit Their Targets?
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http://www.xconomy.com/national/2015/02/17/ready-aim-crispr-will-gene-editi
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Regalado Antonio. El hallazgo biotecnolgico del siglo est envuelto en una


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Schwank G. et. al., Functional repair of CFTR by CRISPR/Cas9 in intestinal stem cell organoids of
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Sherkow Jacob. Law, history and lessons in the CRISPR patent conflict. Nature biotechnology, vol 33
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Wu Y. et al., Correction of a genetic disease in mouse via use of CRISPR-Cas9. Cell Stem Cell 13, 659

662 (2013).

[1] Biloga, Magster en Biologa. Especialista en Propiedad Intelectual. Asesora de patentes,


independiente.
[2] Abogado. Magster en Propiedad Intelectual. Candidato a PhD. Profesor de la Universidad
Nacional de Colombia, Director Grupo de Investigacin Plebio
[3] Con publicacin internacional WO2013/176772
*La imagen ha sido suministrada por los autores para la presente publicacin

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