UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO.

FACULTAD DE ESTUDIO SUPERIORES IZTACALA

MODULO INSTRUMENTACIN

DRA. BERTHA ALICIA HASHIMOTO YAEZ

DRA. MARCELA AMALIA N. PALACIOS HERNNDEZ

Procedimientos para realizar la biometra hemtica

Equipo: 2

Grupo: 1163

Biometra hemtica.
Tambin denominada citometra hemtica es una prueba que consiste en el estudio cuantitativo y
cualitativo de los eritrocitos.
La serie roja est compuesta por la determinacin de los ndices eritrocitarios primarios, que
incluyen la determinacin de hemoglobina, hematocrito y nmero de eritrocitos por milmetro. Los
ndices secundarios que son el volumen globular medio (VGM), hemoglobina globular media
(HGM), que se calculan a partir del ndice primario.
Recursos:
FSICOS

1 Espectrofotmetro
1 Microscopio
1 MICROCENTRIFUGA
1 Pipeta de sahli (0.02ml)
1 Tubo de ensayo con 0.25 ml de edta al 10%
1 Pipeta de Thoma para globulos rojos
1 Cmara de Neubauer (hematocitometro o cmara contadora)
1 Tubo de Wintrobe
1 Gradilla de sedimentacin globular (Wintrobe)
4 Portaobjetos
2 Tubos capilares
1Pipeta Pasteur con bulbo

QUIMICOS:
1 Frasco con solucin salina isotnica
1 Frasco con reactivo de Drabkin
Hemoglobina
Se determina por la formacin del complejo de cianometahemoglobina, por medio
del reactivo de Drabkin.
Tcnica
1-. Marcar dos tubos de ensayo de 13x100 uno con la letra b (blanco) y con la letra
p (problema).
2-. Depositar encada tubo 5ml de reactivo de Drabkin.
3-. Con una pipeta de Shali con boquilla se aspira sangre arriba de la marca 20.

4-. Se limpia el exceso de sangre

5. Se afora a la marca 20
6-. Se deposita en el tubo marcado con la letrap, aspirando y soplando varias
veces sobre el reactivo hasta homogeneizar la mezcla.
7. Se deja reposar durante 30 min a temperatura ambiente.
8-. La densidad ptica de este pigmento se mide en el espectrofotmetro a 540 nm
en absorbancia, obteniendo un valor que se multiplica por el factor 36.8 (valor
previamente establecido) y se reporta en gramos/ ml.
VALORES DE REFRENCIA
Hombres: 15.5-20g/100ml Mujeres: 13.5-17g/ml
CUENTA DE ERITROCITOS
1. Aspirar la sangre con la pipeta de Thomapara glbulos rojos hasta la marca de 0.5
lmpiese el extremo de la pipeta y llnese con liquido de Gowers hasta la marca de
101 cuidando que no entre aire.
2. Agitar durante 3 minutos en ngulo recto al eje longitudinal de la pipeta
4. Soplando, se elimina las 3 a 5 primeras gotas de la pipeta.
5. Llenar la cmara contadora (Neubauer) mediante un goteo parejo nico del lquido
debajo del cubreobjetos
6. Determinar transcurrir 4 minutos con el objeto de que se sedimente los eritrocitos.

7. Colocar la cmara en la platina del microscopio, se enfoca con el objetivo de 10x

y se observa la
cuadrcula para
asegurarse que
las celular estn
en
dilucin
homognea.
8. Cambiar el
objetivo de 40x
reduciendo
adecuadamente
la iluminacin
CUADRICULA
DEL

HEMATOCITMETRO DE NEUBAUER
La cuadricula superior mide 9mm2 y proporciona una escala adecuada para medir el
tamao de los objetos pequeos como los huevos de parsitos.
1. La cmara cuenta clulas tiene una profundidad de 0.1mm y se emplea en la
siguiente forma:
2. Contar las clulas de los pequeos cuadros (1 central y 4 angulares). Cuente
los eritrocitos situados en los lmites superior izquierdo de los cuadros R
pero no se cuenten aquellos que toquen los lmites derecho inferior.
3. Anote la cantidad hallada por 10,00 con objeto de obtener el nmero de
eritrocitos por microlitro de sangre.
VALORES DE REFERENCIA
Hombres: 5000,000 a 6000,000 millones/mm 3
Mujeres: 4500,000 a 5500,000 millones/mm3

R= 5 cuadros pequeos cada uno contiene 16 cuadritos que mide 1/400mm 2

cada uno de ellos. Estos 80 cuadritos son los nicos en los que se cuentan los
eritrocitos, generalmente con gran aumento.
W= 4mm3 Cuntese los leucocitos en stos con poco aumento.

X= 4mm3 que se emplean con otros cuadros para el conteo de clulas en lquido
cefalorraqudeo.
HEMATCRITO
1-.Se efecta por medio de la tcnica del microhematocrito
2-. Se recoge la sangre por medio de un capilar y se llena hasta las partes de
su longitud total del tubo capilar, se inclina para acelerar su llenado. Se tapa uno
de sus extremos con una pequea porcin de plastilina o se flamea con un cerillo
para cerrarlo (extremo que no ha estado en contacto con la sangre) y se limpia el
exceso de sangre.
3-. Se coloca adecuadamente en la microcentrifuga clnica, con la parte cerrada
sobre la empaquetadura de caucho (alrededor de la microcentrifuga), se coloca
la tapa, se atornilla y se centrifuga a 16.000 rpm durante 5min.
4. Se valora el microhematcrito como el porcentaje de toda la sangre venosa
ocupaba por los eritrocitos y se interpreta de la forma siguiente:

Con una escala o regla se mide desde la superficie de separacin de

plastilina hasta el menisco del plasma (100%) despus de mide el paquete
globular y se determina el porcentaje que corresponde.

VALOR DE REFERENCIA
Hombres: 45-57%
Mujeres: 42-48%
1.

Velocidad de sedimentacin globular

Fundamento: La velocidad de sedimentacin globular, refleja cambios en el contenido proteico
del plasma, que se observa en la mayora de las infecciones crnicas y agudas.
Procedimiento.
1. Con la pipeta Pasteur, llenar el tubo de Wintrobe hasta la marca de 0.
2. Colocar el tubo en la gradilla para sedimentacin, perfectamente vertical y ajustado al nivel
de la gradilla.
3. Dejar el tubo de Wintrobe en reposo durante 60 min. a temperatura ambiente.
4. Transcurrido el tiempo registrar el nivel de la columna de plasma, leyendo la escala de
arriba hacia abajo.
Esta lectura es la velocidad de sedimentacin eritrocitaria expresada en mm/ hr.
Interpretacin.

Hombres. 0 -5 mm/hr
2.

Mujeres. 0 -13 mm/ hr

ndices globulares medios.

a) Volumen globular medio ( VGM)
Fundamento. Indica el volumen medio de un eritrocito, es de gran valor en el
esclarecimiento de la causa de una anemia, si es mayor a los lmites normales se considera
anemia macrocitica o microcitica si es menor a los lmites normales.
Procedimiento.
1. Se calcula a partir del volumen de hematocrito y el nmero de eritrocitos expresados en
millones.
VGM=

Hematocrito X 100
Nmero de eritrocitos

b) Hemoglobina corpuscular media (HCM)

Fundamento. Representa la cantidad promedio de hemoglobina en cada eritrocito,
Procedimiento.
1. Se calcula a partir de la cantidad de hemoglobina y el nmero de eritrocitos.

HCM = Hemoglobina X 10
Nmero de eritrocitos

c) Concentracin de hemoglobina globular media ( CMHbC)

Fundamento. Es el ms importante de los ndices por representar la cantidad de
hemoglobina en porcentaje contenida en un eritrocito.
Procedimiento.
1. Se calcula teniendo en cuenta la cantidad de hemoglobina y hematocrito.
CMHbC = Hemoglobina X 100
Hematocrito