TECNOLOGIA DE LOS BIOPROCESOS INDUSTRIALES

TEMA 1- Puesta en marcha,

desarrollo y control de bioprocesos

Los bioprocesos industriales

Los bioprocesos industriales comprenden la aplicacin
industrial de la biotecnologa y la ingeniera quimica en
todas sus facetas con el fin de obtener materiales y
productos en escala industrial.
Para ello se debe combinar la base cientfica de la
biologa y la biotecnologa con la ingeniera de diseo y
desarrollo de procesos.
Es la aplicacin tecnolgica que utiliza sistemas
biolgicos y organismos vivos o sus derivados para la
creacin o modificacin de productos o procesos para
usos especficos

 Algunos hitos en la evolucin de los

bioprocesos
Preparacin de pan con
levadura

Prehistoria (antes de 3000

aos a C)

Fermentacin de zumos para

producir bebidas alcohlicas

Prehistoria (antes de 3000

aos a C

Fabricacin de papel

Siglo II

Produccin de cido lctico por 1881

microorganismos
Produccin de penicilina

1938

Produccin de vitamina B12

1949

Manipulacin enzimtica del

material gentico

1970

Secuenciacin del genoma

humano

2000-2001

Esquema general de un bioproceso

Materias primas
biolgicas

Producto
comercial

Operaciones
fsicas de
preparacin

Acondicionamiento
final

Transformacin
biolgica o
reaccin
bioqumica
(operacin
biotecnolgica)

Operaciones
fsicas de
separacin/purificacin

1- ACTIVIDADES EN EL DISEO DE BIOPROCESOS

Reconocer una oportunidad econmica

Concepcin, anlisis. mejora y evaluacin del
diseo
Diseo, completar, implementar.
Operacin de la planta. Explotar la
oportunidad econmica observada

Analizar y sintetizar procesos de la industria de bioprocesos,

basndose en economa, anlisis de mercado,
consideraciones cinticas/ termodinmicas/ biolgicas,. y
de equipo. Une varias disciplinas y ciencias como
biologa, bioqumica, gentica, agronoma, ingeniera,
fsica, qumica, medicina o veterinaria, pero tambin
derecho, economa, administracin de empresas.
El proceso completo de diseo basado en consideraciones
cientifico-tecnolgicas incluye:
el anlisis critico de la idea,
la invencin o seleccin del proceso apropiado,
la optimacin del proceso,
el diseo del equipo,
la descripcin de la operacin ptima,
la previsin econmica del beneficio probable

 Se abarcan muchos apartados interrelacionados, pero alejados y

relacionados de formas difciles de cuantificar.
Muchas variables importantes (por ejemplo la vida probable de
un proceso) no pueden estimarse con alguna precisin.
La incertidumbre alcanza a la informacin tcnica, cientfica, la
bondad de los modelos y las aproximaciones.

Diseos muy elementales pueden demostrar con gran claridad

que un proceso, que se pueda detallar, no va a ser vlido
ser raro poder optimizar con precisin el diseo, por lo que no
habr una sola solucin de un problema de diseo

Aspectos generales de los bioprocesos

industriales
Se va a hacer una recopilacin general de los
aspectos que deben ser tenidos en cuenta para el
desarrollo y puesta en funcionamiento de un
bioproceso industrial en general. Para ello
estudiaremos:
La puesta en marcha- o sea como se inicia un
bioproceso en cuanto a preparacin de materias
primas, microorganismos, equipos, etc
La operacin y los mtodos de anlisis y seguimiento
del proceso
Los mtodos de control tanto on-line como off-line

Puesta en marcha
1- Preparacin de materias primas
La preparacin incluye el almacenaje y el manejo de los
componentes del medio. Los medios se han de almacenar
en condiciones fras secas y limpias. La eficacia de
cualquier ciclo de esterilizacin va a depender de los
niveles de contaminacin de que originalmente se parta.
Adems el valor nutricional de los componentes del medio
se ver afectado si se permite que durante el periodo de
almacenaje crezcan los microorganismos.
Como regla general el medio ha de ser esterilizado (se ver
en el tema 2) tan pronto como sea posible despus de que
haya sido confeccionado. Asimismo ha de estar clara la
secuencia de adicin de los diversos componentes del
medio, en orden a evitar reacciones entre los mismos

 En el caso de que algn componente sea un polvo, ste ha de ser

dispersado previamente a su esterilizacin para que no forme
grumos y as haga ineficaz la transmisin de calor. Los componentes
ms contaminados sern los ltimos en aadirse.
Carbono- La fuente de carbono suele ser un carbohidrato, debiendo
tenerse en cuenta que durante la esterilizacin los azucares
reductores (por ej. la glucosa) pueden reaccionar con otros
componentes del medio, aumentando el nmero de productos
txicos que pueden inhibir el crecimiento.
Nitrgeno- Sobre el 10% del peso seco celular es nitrgeno. Muchos
organismos pueden utilizar nitrgeno inorgnico y la eleccin va a
tener una gran repercusin sobre el perfil de pH durante la
fermentacin. No es inusual encontrar que los rendimientos ms
altos se obtienen con fuentes de nitrgeno complejas que
contengan pptidos, aminocidos, etc.

Otros aditivos- Vitaminas- Adems de las fuentes de carbono y de

nitrgeno, existe una laga serie de compuestos que se pueden
denominar aditivos, entre los que se encuentran las vitaminas. Este
es un grupo de compuestos no relacionados por su estructura y que
son requeridos por el microorganismo para su metabolismo en
cantidades muy pequeas (1-50 g / l). Las vitaminas incluyen
tiamina, biotina, cido nicotnico, cido lipoico y cido pantoteico, y
a causa de su compleja estructura suelen ser lbilesles al calor, por
lo que se esterilizan por filtracin.
Otros aditivos suelen ser aadidos al medio para incrementar la
produccin. Estos pueden ser precursores del producto deseado o
antibiticos para proteger el microorganismo deseado y suelen ser
asimismo lbiles al calor. Incluidos entre los aditivos tambin estn
los antiespumantes, todos ellos son tensioactivos y generalmente
inmiscibles en agua por lo que producen una emulsin acuosa al ser
esterilizados, de todas formas la filtracin tambin es difcil por ser
polmeros altamente viscosos.

Puesta en marcha
2- Conservacin de microorganismos
En la actualidad existe una amplia variedad de tcnicas para la
conservacin de los microorganismos. Todos los mtodos tienen sus
ventajas y sus desventajas y no existe ninguno que se pueda considerar
ptimo para toda clase de microorganismos.
Los factores que han de tenerse en cuenta a la hora de seleccionar el
mtodo ms adecuado incluyen; el grado de viabilidad requerido en la
conservacin, las consecuencias que puedan ocasionar un cambio
gentico, el nmero de muestras de que se quiera disponer, la frecuencia
con que se ha de recoger el cultivo y el coste del mtodo que se escoja,
aparte del tipo de microorganismo y de el equipo de que se disponga.

Se enumerarn a continuacin una serie de mtodos de conservacin de

microorganismos, entre los que se encuentran los ms utilizados
actualmente, comentndose brevemente el principio en que se basa el
mtodo y las caractersticas ms destacadas:

Desecacin. La desecacin incluye la eliminacin de agua del cultivo y la

prevencin de su rehidratacin. Existen diversas formas. Conservacin en tierra o
arena, en slica gel, en tiras de papel y por ltimo en discos de gelatina. Todos ellos
son muy adecuados para esporas de cualquier tipo de microorganismos y no
requieren una gran inversin.

Liofilizacin. La liofilizacin pertenece a los mtodos de desecacin. Es un proceso

en el que el agua se elimina por evaporacin de una muestra de cultivo congelada.

Congelacin. Durante este proceso el agua deja de estar disponible para las
clulas, debiendo de conservarse posteriormente las mismas a bajas
temperaturas. Existen diversos medios de conservacin, as; Conservacin en
glicerol al 20% V/V y a -50C, en glicerol en bolas de vidrio y en nitrgeno lquido.
El proceso de conservacin no es muy costoso pero no as el equipo de
refrigeracin posterior.

Sub-cultivos. Este mtodo consiste en inocular un cultivo en un medio adecuado

contenido en una botella o en un tubo incubarlo para conseguir que crezca y por
ltimo almacenarlo. El proceso se ha de repetir de vez en cuando para asegurarse
el poder conseguir un cultivo nuevo antes e que el viejo muera. Normalmente el
cultivo se conserva en agar y en una de las siguientes formas; en el refrigerador a
4C, a temperatura ambiente y tambin bajo aceite mineral estril a cualquiera de
las temperaturas anteriores. Muchas bacterias sobreviven varios aos de esta
manera, el mtodo no es costoso pero requiere una labor de dedicacin intensa
para los diferentes pases.

 En general, todos los mtodos requieren una labor post- conservacin de

control de viabilidad, pureza y retencin de las caractersticas que se
deseen. Normalmente un simple crecimiento suele ser suficiente y esta
prueba suele servir, asimismo, para comprobar que el microorganismo no
est contaminado.

Para todo tipo de microorganismos, el principio general es minimizar el

nmero de "generaciones" que han de transcurrir para que un cultivo vaya
desde el inicial hasta su recogida final del medio de fermentacin. En
orden a minimizar los problemas originados por una degeneracin de la
cepa de inters, todos los cultivos conservados como cultivos patrn para
propsitos de produccin deberan prepararse a partir de un a colonia
aislada de la cepa parental.

Un proceso tpico para desarrollar el inculo incluira los siguientes pasos:

Cultivo patrn > Cultivo primera generacin > Cultivo de trabajo
> Suspensin de esporas > Cultivo inculo > cultivo de
produccin.

Puesta en marcha
3- Preparacin de fermentadores
Las principales tcnicas de cultivo: discontinuo, semicontinuo y continuo
utilizan diferente equipamiento auxiliar, aunque el equipo necesario para
un cultivo discontinuo queda bsicamente incluido en los dos ltimos.
Un cultivo discontinuo se lleva a cabo sin adicin ni retirada de ningn tipo
de nutriente, producto o material celular (solo gases en algn caso). Un
cultivo semicontinuo consiste esencialmente en un cultivo discontinuo al
que se le suministran nutrientes frescos en cantidades discretas. Por
contra un cultivo continuo, que es bsicamente un mtodo de prolongar
la fase exponencial de crecimiento de un microorganismo, consiste en
alimentar a los microorganismos con medio fresco y al mismo tiempo
desalojar el medio gastado ms las clulas del sistema, todo ello en
continuo y de una forma tal que diferentes parmetros permanezcan
constantes con el tiempo, por ej., el volumen de cultivo, la concentracin
celular, la concentracin de producto y el entorno del cultivo (pH,
Temperatura, O2 disuelto). Esta condicin es conocida como estado
estacionario.

 En general los servicios necesarios son de: aire, vapor, agua, electricidad
y gas. Autoclaves, incubadores orbitales o simples baos de agitacin,
estufas de incubacin y hornos de esterilizacin, campanas de flujo
laminar, bombas, tuberas, conectores y abrazaderas, filtros, reservorios
para el medio, equipos para el flujo de gas.
La inmensa mayora de las compaas dedicadas a la fermentacin
industrial tienen por lo menos una seccin de investigacin y desarrollo
dedicada a la fermentacin a nivel de laboratorio. En estas secciones el
tipo de fermentacin puede variar desde un frasco de 100 ml hasta un
fermentador de acero inoxidable de 100 l o incluso mayores. Existen,
asimismo, un buen nmero de tipos de fermentadores entre los cuales
podemos destacar el reactor de tanque agitado, del cual nos vamos a
ocupar en esta seccin, los air-lift, los fermentadores de torre, los
reactores de lecho fluidizado, etc.
Se comenzar la descripcin de los diferentes tipos por los ms sencillos;
los simples frascos susceptibles de ser agitados. Este tipo de
fermentadores pueden variar en tamao y en forma. Las aplicaciones de
estos frascos son mltiples en el laboratorio y pueden ir desde la seleccin
inicial de la cepa de trabajo, hasta el crecimiento del inculo.

 El inconveniente de este tipo de frascos en relacin a los

fermentadores ms sofisticados es su baja velocidad de
transferencia de oxgeno, as, si se recuerda la baja
solubilidad del oxgeno (9 ppm es el nivel de saturacin a
25C), se puede presumir una resistencia a la transferencia
del mismo desde las burbujas de aire hacia el lquido de
fermentacin

Los fermentadores de tanque agitado consisten bsicamente

en un tubo cilndrico con un agitador instalado en lo alto
del mismo. En el caso de los mini fermentadores el material
ms utilizado es vidrio borosilicato para el cilindro y acero
inoxidable para las tapas superior e inferior. El tanque, el
medio y las sondas suelen esterilizarse en autoclave, si el
tamao lo permite, y en conjunto, limitando as el nmero
de operaciones aspticas. El tanque puede tener, asimismo,
un diseo de agitador especfico, pantallas, un distribuidor
de aire y puertas para el muestreo. A continuacin se
muestra un diagrama tpico para un tanque de acero
inoxidable, los cuales son esterilizados "in situ".

Puesta en marcha
3.1. Equipo auxiliar para el cultivo semicontinuo

Todos los recipientes que hacen falta para llevar a cabo

un cultivo discontinuo hacen falta para un cultivo
semicontinuo. Los recipientes que en particular van a
contener cidos o bases debern ser de un material no
txico, resistente a la corrosin y capaces de resistir
repetidos ciclos de esterilizacin.

Un material apropiado es vidrio de borosilicato, que

adems es barato y transparente, siendo tambin
apropiado el acero inoxidable (316, AISI)..

 Bombas. Existen dos tipos de bombas (ambas de desplazamiento

positivo) que son recomendables para el bombeo asptico de
pequeos volmenes de medio de cultivo; la bomba peristltica y la
bomba dosificadora de diafragma. Otras bombas, como la de pistn
o las centrfugas, no se pueden utilizar ya que son difciles de
esterilizar y no bombean volmenes pequeos.
La bomba peristltica consiste en un cuerpo principal para alojar
tanto el motor y la parte elctrica como la unidad de rotacin de los
rodillos. En operacin el rodillo al avanzar ocluye el tubo, el cual al
volver a su forma original atrae al fluido que es atrapado por el
rodillo siguiente. El fluido es entonces expelido as que la unidad da
vueltas. El caudal puede ser modificado bien ajustando una
velocidad diferente o cambiando el dimetro del tubo.

 La bomba dosificadora o de diafragma consiste en un cuerpo

principal y una cabeza esterilizable por calor y desmontable. En la
Figura se puede observar como opera la bomba. El fluido es
chupado va la succin del tubo de entrada a la cabeza de la bomba,
(la presin del tubo de descarga est cerrada). La succin del tubo
de entrada cierra entonces y la presin del tubo de descarga abre
forzando al fluido hacia afuera. Las fuerzas de succin y presin en
la cabeza de la bomba estn generadas por las acciones recprocas
de tanto el embolo del diafragma como el cierre del retorno.

Bomba de doble diafragma

Puesta en marcha
3.2. Equipo auxiliar para el cultivo continuo

Con objeto de poder mantener las condiciones del estado

estacionario, existen dos tcnicas habituales de control; El
quimiostato basado en la limitacin de un nutriente que
determine la velocidad de crecimiento del microorganismo,
as, para que la biomasa del reactor permanezca constante,
la velocidad de crecimiento especfico ha de ser igual a la
velocidad de dilucin D = F / V, este sistema es el ms
habitual y por tanto sus aspectos prcticos sern los
estudiados ms detenidamente.

El otro sistema es el turbidostato en el que lo que se

controla es la densidad celular mediante un nefelmetro o
un espectrofotmetro. Un cultivo en quimiostato puede
llevarse a cabo con solo unas pocas modificaciones respecto
al equipo bsico del cultivo discontinuo. En la Fig.6. se
presenta un diagrama esquemtico de un cultivo de
laboratorio en un quimiostato. Los recipientes se han de
montar tal y como se indic para el cultivo semicontinuo,
debiendo de rellenarse la alimentacin diariamente,
asegurndose de que todos los nutrientes son solubles y
pueden esterilizarse por filtracin, si es el caso. Bombas.
Normalmente se requieren dos bombas para operar con un
quimiostato. Las bombas aconsejadas son asimismo las
relacionadas para el caso del cultivo semicontinuo,

Puesta en marcha
2.4 Mecanismos de control de nivel
Con objeto de conseguir y mantener el estado estacionario debe
de haber algn control del volumen del cultivo, el cual se mide en
litros de lquido no gaseado, lo que representa un problema en
cultivos aerbicos ya que el medio debe de ser aireado. Un segundo
problema, para todo tipo de cultivos, es que el entorno del cultivo
ha de ser homogneo por lo que se requiere una agitacin
constante, pero esto conlleva turbulencias que pueden falsear a
una deteccin falseada del nivel.
Existen diferentes mtodos de controlar el volumen del cultivo y
que aqu solo vamos a enunciar, el escoger uno u otro depende de
(a) la clase de microorganismo, (b) el tipo de fermentacin
(aerbica o anaerbica), (c) los constituyentes del medio (la
solubilidad y la miscibilidad), (d) volumen del cultivo, (e) grado de
exactitud requerido (variaciones de un 5% son aceptadas), (f)
tamao del fermentador, (g) coste, (h) grado de habilidad del
operador.

Mtodos analticos de determinacin

de clulas y productos
la actividad y vida til de un enzima cataltico o de una
poblacin celular depende directamente del ambiente en
que se encuentran. De acuerdo con esto y con objeto de
desarrollar reactores biolgicos optimizados y poder operar
con ellos de la forma ms eficaz, es crtico que el estado en
que se encuentra el ambiente que rodea al enzima o a la
poblacin sea seguido y controlado, as como la respuesta
de estos ante el ambiente.
Para conseguir estos objetivos se requieren tres funciones
diferentes: medida, anlisis de los datos y control. A
continuacin se examinar la instrumentacin que en la
actualidad se dispone para el anlisis de los biorreactores.

Mtodos de control on-line

1- Sensores fsicos
Los parmetros fsicos ms importantes del proceso que tienen
influencia sobre la funcin celular y sobre la economa del proceso y
que adems pueden ser seguidos en continuo son:
la temperatura, la presin, la potencia de rbol del agitador, la
velocidad del impulsor, la viscosidad del medio, las velocidades del
flujo del gas y del lquido, la espuma y el contenido en volumen o
en masa del reactor.
En pequeos reactores de laboratorio, slo la temperatura y la
velocidad del flujo del aire de alimentacin son determinados de
manera habitual. La medida de la presin y su regulacin es sin
embargo tcnica comn en fermentadores industriales.

 El sensor de temperatura utilizado ms ampliamente es el

"termistor", un artilugio semiconductor que presenta una
resistencia cambiante en funcin de la temperatura. Otros
posibles son los sensores de resistencia de platino y
termopares.

El seguimiento de la presin es de gran importancia durante

la esterilizacin, y el mantener una presin positiva en la
cabeza del reactor (alrededor de 1.2 atm) puede ayudar a la
hora de prevenir contaminaciones. Para el calibrado de la
presin habitualmente se utilizan manmetros de diafragma,
los cuales producen una seal neumtica que se traducen
caso de necesidad en una seal elctrica.
La potencia de entrada en tanques mecnicamente agitados,
puede ser medida bien mediante medidas potenciomtricas o
bien mediante un dinammetro de torsin.

 Una estrategia posible a la hora de medir la viscosidad del medio es

medir el consumo de potencia que se produce a diferentes
velocidades del agitador.
El mtodo ms simple para medir la velocidad de flujo de gas
(entrada y salida) es utilizar un caudalmetro de rea variable, como
por ejemplo un rotmetro, aunque cada vez se estn haciendo ms
populares los caudalmetros de masa trmica, especialmente para
reactores a pequea escala. Las medidas del flujo de gas son muy
importantes ya que se utilizan en los clculos de los balances de
materia.
La velocidad de flujo de lquido se puede llevar a cabo con
caudalmetros electromagnticos. En ocasiones se puede confiar en
las bombas dosificadoras u otra semejante bien calibrada que nos
proporcione la velocidad de flujo de lquido deseado.
La formacin de espuma en la superficie del lquido del reactor se
puede detectar mediante un sensor de nivel del lquido basado en
una sonda de capacitancia o conductancia.

2. Sensores qumicos del medio

Los electrodos disponibles en la actualidad, que puedan ser esterilizados
por calor repetidas veces, sirven para medir el pH, el potencial redox, el
oxgeno disuelto y presiones parciales de anhdrido carbnico. El ms
utilizado y fiable de todos ellos es el electrodo de pH, el cual
generalmente est diseado como un nico electrodo con una unidad de
vidrio de referencia.
Las medidas del potencial redox (Eh) son posibles utilizando una
combinacin de un electrodo de platino y otro de referencia. Una
aplicacin prometedora de las medidas redox est en el seguimiento de
las bajas concentraciones de oxgeno disuelto (< 1 ppm) en procesos
anaerbicos ( -450 mV < Eh < -150 mV) donde la formacin de productos
puede ser muy sensible al potencial redox.
Los diferentes tipo de sondas de oxgeno disuelto ahora disponibles son
galvnicas (potenciomtrias) o polarogrficas (amperomtricas). Los
electrodos miden la presin parcial de oxgeno disuelto y no la
concentracin de ese oxgeno disuelto.
Las sondas electroqumicas, esterilizables por calor, para la medida de
presiones parciales del dixido de carbono disuelto han comenzado a
utilizarse desde hace relativamente poco tiempo.

Anlisis de gases

La concentracin de CO2 en la salida de gases de un biorreactor es una medida

indicativa de la actividad respiratoria o fermentativa de los microorganismos y es
por tanto una da las medidas ms tiles y empleadas en el seguimiento y control
de biorreactores celulares. Existen diversas formas de medir la concentracin de
CO2 en la corriente de salida, la ms utilizada es emplear un espectrofotmetro
infrarrojo, aunque tambin se puede seguir midiendo la conductividad trmica,
por cromatografa de gases o por espectrofotometra de masas.

La presin parcial de O2 en esta corriente de gases es medida habitualmente

utilizando un analizador paramagntico, los cuales son muy sensibles a pequeos
cambios en la presin atmosfrica total, por lo que se requiere un seguimiento
simultneo de la presin baromtrica para la compensacin en el anlisis de
oxgeno.

La cromatografa de gases (CG) puede aplicarse para analizar diferentes

componentes de la salida de gas que incluye: O2, CO2, CH4 e H2. La CG tambin
puede aplicarse para determinar la presin parcial en la fase gas de los siguientes
componentes: etanol, acetaldehdo y diferentes cidos carboxlicos, obtenindose
con todo ello una informacin til sobre el estado de la fermentacin.

La espectrometra de masas (MS) est consiguiendo introducirse en el

seguimiento de la composicin de la corriente de gas, ya que se obtienen rpidos
tiempos de respuesta (< 1 min), alta sensibilidad, (alrededor de 10-5 M en el lmite
de su deteccin), capaz de analizar diferentes compuestos esenciales de forma
simultanea y respuesta linear en un amplio rango de concentraciones.

Determinacin de propiedades celulares.

Existen pocos instrumentos para el seguimiento en lnea o en continuo de las

propiedades celulares en un biorreactor. Las medidas ms bsicas que se necesitan
son las de la concentracin de la biomasa total, o mejor aun, la concentracin de la
biomasa activa. Aunque existe un cierto nmero de mtodos posibles, no hay
ninguno todava consistente y fiable para toda clase de microorganismos y de
medios.

Los mtodos pticos basados en la absorbancia de la luz (espectrofotometra) o en

la dispersin (nefelometra) han sido los ms ampliamente investigados.
Normalmente una corriente de muestra proveniente del reactor puede hacerse
circular a travs del reactor. Una dificultad potencial radica en la no linealidad entre
la densidad ptica y la concentracin de la biomasa por encima de una densidad
ptica 0.6 o 0.5 g biomasa/l.

La nica estrategia para el seguimiento en continuo, que se ha desarrollado hasta

ahora que proporciona informacin del estado bioqumico o metablico de la
poblacin celular es la fluorometra "in situ". La luz ultravioleta (366 nm de longitud
de onda) se dirige hacia el cultivo y excitados por esta radiacin ultravioleta
fluorescen los nucletidos de piridina reducidos (NADH y NADPH) con una intensidad
mxima aproximadamente a los 460 nm. La fluorescencia emitida por el cultivo se
mide con un detector apropiado, tal como un fotodiodo o un fotomultiplicador.

Mtodos off-line
1- Medidas de las Propiedades del medio
Los posibles mtodos abarcan el espectro completo de la qumica
analtica, espectroscopa y bioqumica por lo que una explicacin
completa de todos ellos es prcticamente imposible. Aqu, se
enfatizar en ciertos nuevos mtodos relacionados con las medidas
de las propiedades celulares que potencialmente sirven para el
seguimiento y control del proceso.
Una vez que se ha tomado una muestra del biorreactor se ha de
realizar una separacin slido-lquido, que se suele llevar a cabo
bien por centrifugacin o bien por filtracin, con el objetivo de
separar clulas y otras partculas de materia de la muestra en fase
lquida
Las medidas deseadas en un biorreactor son la concentracin de los
diferentes sustratos y las tasas de influencia de los componentes,
as como la concentracin de los productos de reaccin y de los
inhibidores. En el caso concreto de las fermentaciones se requiere
el anlisis de la fuente de carbono y de la de nitrgeno, adems
puede ser til el conocer los niveles de ciertos iones, tales como
magnesio o fsforo, en el medio.

 Los anlisis cuantitativos en fase lquida estn habitualmente basados en

la refraccin y en la absorcin de la luz a una determinada longitud de
onda, as como en la fluorescencia. As, por ejemplo, los azcares no son
capaces de absorber luz fuertemente y luego fluorescer pero alteran el
ndice de refraccin de la solucin. Con objeto de evitar interferencias de
otros compuestos existentes en la solucin, a menudo es necesario
separar o concentrar los componentes que se desean analizar.. Las
separaciones a escala ms fina entre compuestos relacionados se llevan a
cabo por mtodos cromatogrficos.
Una estrategia til para llevar a cabo ciertos anlisis qumicos es la
conversin selectiva del componente de inters a un producto fcil y
rpidamente medible. Esto es la base de uno de los mtodos estndar de
laboratorio para los ensayos de glucosa, en los que los enzimas
glucosa-oxidasa y peroxidasa, en presencia de ortodianisidina, convierten
la glucosa de forma selectiva en un compuesto coloreado que puede ser
medido espectrofotomtricamente.
Los electrodos especficos de iones se han convertido en herramientas
muy importantes a la hora de ensayar ciertos compuestos de importancia
biolgica. As el contenido de nitrgeno celular puede medirse con un
electrodo de amonio.
se puede medir la actividad biolgica del compuesto, por ejemplo los
antibiogramas. Es asimismo muy comn analizar el contenido enzimtico
de una solucin midiendo la actividad del enzima.

Anlisis de la composicin de la
poblacin celular
La mayora de las mediciones clsicas en bioqumica se realizan
considerando una poblacin media y por lo tanto se obtienen datos
no-segregados sobre la poblacin celular. As a continuacin se
discutirn en primer lugar medidas del tipo no- segregadas. Lo ms
general de tales medidas, despus de la determinacin de la masa
celular total o de la densidad, es el anlisis de la composicin
elemental de las clulas, incluyendo carbono, hidrgeno y
nitrgeno.
Las determinaciones del contenido total en protena RNA y DNA,
as como otras macromolculas pueden ser llevadas a cabo por
mtodos bien estandarizados.
Las protenas individuales pueden ser algunas veces analizadas por
cromatografa (FPLC o HPLC) o mediante el examen de las
intensidades relativas de las bandas obtenidas al hacer una
electroforesis a la mezcla proteica

 El marcaje con anticuerpos a una regin particular de una molcula es

una tcnica utilizada frecuentemente para determinar la existencia en la
superficie celular de tipos particulares de molculas o estructuras e
incluso en algunos casos para su cuantificacin.

La importancia de los plsmidos, molculas de DNA extracromosmico,

como portadores de las instrucciones genticas para la sntesis de
productos en organismos recombinantes hace que el ensayo del contenido
plasmdico celular sea una medida de gran importancia potencial.
Las tcnicas de observacin directa al microscopio, como indicador del
estado morfolgico del microorganismo, o el anlisis de las propiedades
de filtracin de una suspensin celular, factor relacionable asimismo con la
morfologa, nos pueden dar una base para el seguimiento del progreso de
la fermentacin.
La citometra de flujo es una tcnica de anlisis celular que implica medir
las caractersticas de dispersin de luz y fluorescencia que poseen las
clulas conforme se las hace pasar a travs de un rayo de luz. Esta tcnica
distingue no slo entre diferentes especies celulares sino tambin entre
diferentes estados metablicos, clulas metablicamente activas
(cultivables y viables pero no cultivables) y muertas.

Figure 1. Distribution of L. casei cells within a flow cytometric dot plot. Panels show double stained (CV6/PI
staining) samples used as flow cytometric controls: unstained cells (A), cells at early-exponential growth
phase (B), heat-killed cells (C) and mixture containing early-exponential phase and heat-killed cells (1:1)
(D). Gate P in dot plots shows healthy viable cells (CV6(+)/PI(-) cells), while double stained cells
(CV6(+)/PI(+) cells) representing sub-lethally damaged L. casei cells are shown in gate Y. Cells located in
gate Z correspond to dead cells (CV6(-)/PI(+) cells) that exhibited irreversible damages in plasmatic
membranes.