Laboratorio N2

Reconocimiento de enzimas de importancia Biolgica.

I.

Objetivos.
a. Demostrar la presencia de la enzima catalasa en tejidos animales y vegetales.
b. Observar el efecto de los catalizadores en una reaccin qumica.
c. Comprobar la accin de la temperatura y el pH sobre la actividad de las enzimas.
d. Comprobar la accin hidroltica de la amilasa.
e. Demostrar la accin de la pepsina en la digestin proteica.
f. Demostrar la accin de la lipasa en la digestin de los lpidos.

II.

Introduccin.
Las enzimas estn constituidas por polmeros de aminocidos, que actan como catalizadores
en el metabolismo de los seres vivos. Modulan o influyen en la velocidad de las reacciones sin
alterar su punto de equilibrio. Pueden actuar fuera de la clula. La sustancia (el o los
reactantes) sobre los cuales acta la enzima se denomina sustrato.
Casi todas las enzimas son mucho ms grandes que los sustratos sobre los que actan, y
solo una pequea parte de la enzima (alrededor de 3 a 4 aminocidos) est directamente
involucrada en la catlisis. La regin que contiene estos residuos encargados de catalizar la
reaccin es conocida como centro activo.
Al igual que las protenas, las enzimas se componen de una cadena lineal de aminocidos
que se pliegan durante el proceso de traduccin para dar lugar a una estructura terciaria
tridimensional de la enzima, susceptible de presentar actividad. Cada secuencia de
aminocidos es nica y por tanto de lugar a una estructura nica con propiedades nicas. En
ocasiones, protenas individuales pueden unirse a otras protenas para formar complejos, en
lo que se denomina estructura cuaternaria de las protenas.

III.

Materiales.
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o

IV.

Hgado
Agua oxigenada
Solucin de pH4
Solucione de pH12
Termmetro
Almidn
Benedict
Lugol
Galletas sin sal
Hidrxido de sodio al 40%

Procedimiento

o
o
o
o
o
o
o
o
o
o

Sulfato de cobre al 2%
cido actico
Pepsina 1%
Biuret
Albumina
HCl 0,2%
Solucin de bilis
Pancreatina 1%
Vaso qumico

A. Propiedades de las enzimas: efecto de un catalizador.

o
La catalasa es una enzima presente en las clulas que acelera la hidrolisis del perxido
de hidrogeno, un qumico toxico en agua y oxgeno. Cuando esta reaccin ocurre se
desarrolla una efervescencia fcil de observar.
o
Marque 4 tubos de ensayo con letras A, B, C, D. en cada una de los tubos vierta 1 mL
de agua oxigenada. Seguidamente, al tubo A, aada un poco de arena, al tubo B, un poco de
dixido de manganeso, al tubo c, un pedacito de hgado crudo y el tubo D un pedacito de
igual tamao de papa cruda. Observe la velocidad de la reaccin en cada caso y reporte los
resultados de la siguiente manera:
o
o

No esfervencensia = 0
Poca efervescencia = +

o
o

Moderada esfervencensia: ++
Mucha efervescencia: +++

VI.
VII.
X.
XIII.
XVI.
XIX.

Tubo
A
B
C
D

V. Cuadro N 1
Efecto de un catalizador.
VIII.
Contenido
IX.
Resultado
XI.
Arena
XII.
0
XIV.
MnO2
XV.
--XVII.
Hgado
XVIII.
+++
XX.
Papa
XXI.
++

XXII.
XXIII.
De acuerdo a los resultados obtenidos, Que podemos concluir?
XXIV.
R/- En la arena no hay presencia de enzimas catalasas por lo tanto no hay
efervescencia. A diferencia del hgado que contiene mayor presencia de enzima en
comparacin con la papa.
XXV.
B. Reconocimiento de la catalasa.
XXVI.
La catalasa es una enzima que se encuentra en las clulas de los tejidos animales y
vegetales. La funcin de esta enzima en los tejidos es necesaria porque durante el
metabolismo celular, se forma una molcula toxica que es el perxido de hidrogeno o agua
oxigenada. La catalasa la descompone en agua y oxgeno, por lo que soluciona el problema.
a. En un tubo de ensayo, coloque un trocito de hgado, aada 4mL de agua oxigenada.
Observe el burbujeo. A qu se debe esta reaccin a la catalasa Cuale son los
productos formados? Agua y oxgeno.
b. Cloque un trocito de hgado en tres tubos de ensayo. Deje uno a temperatura ambiente,
hierva otro en bao mara por 30 minutos y el ltimo, colquelo en hielo por 30 minutos.
Pasado ese tiempo, aada a cada tubo de ensayo con una pipeta 3 mL de agua
oxigenada. Observe la reaccin y compare sus resultados.
XXVII.
R-/ al tubo calentado hubo poca efervescencia y el tubo en hielo hubo moderada
efervescencia, a temperatura ambiente hubo efervescencia siendo la mayor.
XXVIII.
XXIX. Qu efecto puede tener la temperatura en la activada enzimtica?
XXX. R/- En temperaturas altas inhibe o minimiza la actividad enzimtica (temperatura
optima 25-35)
XXXI.
XXXII.
Temperatura Ambiente
XXXIII.
Mayor accin enzimtica
XXXIV.
Temperatura bajo
XXXV.
Moderada efervescencia
XXXVI.
Temperatura alta
XXXVII.
Inhibe la accin enzimtica
XXXVIII.
c. Enumere 3 tubos de ensayo y coloque un trocito de hgado de cada uno de ellos. Al 1
aada una solucin de pH4; al 2 aada una solucin con pH12 y al 3 aada agua
destilada. Espere unos 5 minutos, decante el lquido y aada 3 mL de agua oxigenada
a cada tubo de ensayo. Observe los resultados y compare.
XXXIX.
R/- el tubo 1 es el de mayor burbujeo, el tubo 2 se torn una coloracin amarillenta y
produjo burbujeo y el tubo 3 es el que ms burbujeo y el hgado subi. En el pH bsico
hay mayor efervescencia es mas rpido porque las enzimas actan en el pH bsico.

XL.
XLI.

Qu efecto podra tener el pH en la actividad enzimtica?

R/- El pH4 inhibe la actividad enzimtica (pH optimo 6-8). En el pH bsico hay mayor
efervescencia es mas rpido porque las enzimas actan en el pH bsico.

XLII.
XLIII.
C. Hidrolisis del almidn.
XLIV.
XLV.
La amilasa salival o ptialina es una enzima que se produce en las glndulas salivales,
actan sobre el polisacrido almidn, hidrolizado el enlace O-glucosidico, por lo que el
almidn terminara por transportarse en unidades de glucosa.
XLVI.
a. Coloque 4 tubos de ensayo en una gradilla, agregue a cada tubo 5 mL de una solucin de
almidn preparada al 1% en agua destilada o una solucin de galletas sin sal. A los tubos
de 3 y 4 aadir con una pipeta Pasteur, una pequea cantidad de saliva, obtenida de la
salivacin de aluminio del equipo y recogida en un tubo de ensayo bien lavado. (para
lograr una mayor produccin desaliva, piensa en un limn o en algo apetecible al paladar).
En el tubo 1 realiza la prueba de benedict o la reaccin de fehling (1 mL de fehling A y 1
mL de fehling B, calentar). En el tubo 2 realiza la prueba de lugol.
XLVII. Los tubos 3 y 4 que contiene la solucin de almidn y saliva, ponerlos en un vaso
precipitado a bao mara-; luego a intervalos de 5 minutos a partir del minuto 0 realice una
prueba de benedict hasta alcanzar el punto acrmico donde la enzima no hace su efecto.
XLVIII.
XLIX.
L. Cuadro 1
LI. Efecto de la amilasa salival sobre la digestin de los carbohidratos
LII.
Tiempo
LIII.
Test de lugol
LIV. Test de Benedict
LV. 5 min
LVI. +
LVII.
LVIII. 10 min
LIX. +
LX. +
LXI. 15 min
LXII.
+
LXIII.
+
LXIV. 20 min
LXV. +
LXVI.
+
LXVII.
25 min
LXVIII.
+
LXIX.
+
LXX.
30 min
LXXI. +
LXXII.
+
LXXIII.
55 min
LXXIV. +
LXXV. LXXVI.
LXXVII.
A cuntos minutos se logr el punto acrmico? 55 minutos (benedict).
LXXVIII.
Explique sus resultados: Al cabo de una hora sigui dando positivo al lugol. Puede ser
debido a la concentracin de lugol y el almidn.
LXXIX.
b. En un tubo de ensayo coloque 10 cc de saliva y realice las siguientes pruebas. Mezcle
con cido actico: Qu observa? Hubo un cambio de cloracin. Alcalinice una cantidad

de saliva con igual volumen de hidrxido de sodio al 40% y aada 2 gotas de sulfato de
cobre al 2% o 5%. La formacin de un anillo color violeta indica que la sustancia presente
es de naturaleza proteica.
LXXX. Debi observarse un anillo morado tenue comprobando la presencia proteica, pero en
nuestra prueba no sali.
LXXXI.
D. Digestin proteica mediante la pepsina.
LXXXII.
Esta digestin se lleva a cabo en el estmago (pH1-2) mediante proteasas como por
ejemplo la pepsina. En esta prueba se utilizara el reactivo de biuret para comprobar la
presencia de protenas (sin digerir) y pptidos (digestin). En presencia de protenas, el
reactivo de biuret se torna de un color violeta y en presencia de polipptidos de un color
rosado.
a. Rotule 5 tubos de ensayo y marque en cada uno los niveles de 2,4 y 6 centmetros y
llnelos de la siguiente manera:
LXXXIII.
Tubo 1: Hasta la marca de 4 cm. Con agua y hasta la marca de 6 cm con albumina.
Agite y mantngalo a temperatura ambiente.
LXXXIV. Tubo 2: hasta la marca de 4 cm con agua y hasta la marca de 6 cm con solucin de
pepsina. Agite e incube por 11/2 horas.
LXXXV. Tubo 3: hasta la marca de 2 cm con solucin con solucin de albumina, hasta la marca
de 4 cm con solucin de pepsina y a la marca de 6 cm con agua. Agite e incube por 1 1/2
horas.
LXXXVI.
Tubo 4: hasta la marca de 2 cm con solucin de albumina, hasta la marca de 4 cm con
solucin de pepsina y a la marca de 6 cm con HCl 0.2%. Agite e incube por 1 1/2 horas.
LXXXVII.
Tubo 5: Hasta la marca de 2 cm con solucin de albumina, hasta la marca de 4 cm con
solucin de pepsina y a la marca de 6 cm con agua. Agite y coloque un bao de hielo
por 11/2 horas.
LXXXVIII.
Despus de las 2 horas agregue 3.5 gotas del reactivo de biuret a cada tubo, compare
el color de los tubos 2 y 5 con el color del tubo 1. Analice y discuta los resultados. Llene
el siguiente cuadro.
LXXXIX.
XC.
XCI.
Cuadro 2
XCII.
Digestin de protenas
XCIV. Conteni XCV. TemperXCVI.
ResultaXCVII.
Explica
XCIII.
Tubo
do
atura
do
cin
XCIX.
Agua+
albumin
CII. Prueba
XCVIII.
1
C. 20-22
CI. Violeta
a+
control
biuret
CIII.
2
CIV. Albumi
CV. 37
CVI. Violeta CVII. Prueba
na +
control
pepsina
(No hay

proten
a, sin
coloraci
n)

+ biuret
CIX.
CVIII.

CXIV.
CXIII.

Albumi
na +
pepsina
+ agua

Albumi
na +
pepsina
+ HCl
0,2% +
biuret

CX.

CXV.

37

CXI.

37 CXVI.

CXII.

Polipp
tidos

CXVII.

Polipp
tidos
(El
cido
Cl
favorec
e la
accin
enzimt
ica.)
Temper
aturas
bajas
disminu
yen la
accin
enzimt
ica

Rosado

Rosado

CXXII.
CXIX.
CXVIII.

Albumi
na +
pepsina
+ agua
+ biuret

CXXI.
CXX.

No
hubo
cambio

CXXIII.
E. Digestin de los lpidos mediante la lipasa.
CXXIV.
La digestin de los lpidos o grasas se lleva a cabo en el intestino delgado (pH bsico)
mediante las enzimas denominadas lipasas. La bilis (emulsificante) es una sustancia que
emulsifica las grasas, es decir las transforma en gotas pequeas para que se realice la
accin enzimtica de la lipasa. Para esta prueba se utilizara el indicador denominado rojo
fenol, el cual tiene un viraje en medio cido y en medio bsico.
CXXV.
Rotule y marque 3 tubos de ensayo a los niveles de 3 cm y 6 cm. Agregue la solucin
de pancreatina al 1% (lipasa pancreatina) a cada tubo hasta la marca de 3 cm y luego
termine de llenar cada tubo de la manera siguiente.
CXXVI.
Tubo 1: Llene hasta la marca 6 cm con solucin de bilis. Adicione 2-3 gotas de rojo
fenol y luego Na (OH) hasta que el contenido del tubo se torne de color rosado. Agregue 5
gotas de aceite. Incube a 37 por 1 hora. Agite ocasionalmente. Observar cualquier cambio
de color, antelos.

CXXVII.

Tubo 2: llene hasta la marca de 6 cm con agua. Adicione 3,5 gotas de rojo fenol y Na
(OH) al 2% hasta que el contenido del tubo se torne rosado. Agregue 5 gotas aceite. Incube a
37 por una hora. Agite ocasionalmente. Observo cualquier cambio de color y antelos.
CXXVIII.
Tubo 3: llene hasta la marca de 6 cm con solucin de bilis. Agregue 3,5 gotas de rojo
fenol y Na (OH) al 2% hasta que el contenido el tubo se torne rosado. Agregue 5 gotas de
aceite. Mantenga el tubo a temperatura ambiente. Observe cualquier cambio de color y
antelos.
CXXIX.
CXXX.
Cuadro 4
CXXXI.
Digestin de los lpidos
CXXXII. CXXXIII.
Tu
Contenido
CXXXIV. Temper
CXXXV. Resulto
CXXXVI.
Explicacin
bo
atura
final
(coloraci
n)
CXXXVII. C
1 XXXVIII.
Bilis + CXXXIX.
37
CXL. Rojo
CXLI. Poca
fenol +
ladrillo
amortizacin
Na(OH)
,
2% +
CXLII.
Poca accin
aceite +
enzimtica.
pancreatin
Hay
a
descomposic
in de las
grasas este
en un medio
bsico debi
haber mayor
accin
enzimtica.
CXLIII.
2 CXLIV. Na(OH) CXLV. 37 CXLVI. RosadoCXLVII.
La bilis es el
2% +
medio
aceite +
bsico
pancreatin
a
CXLVIII.
3 CXLIX.
Bilis +
CL.
22
CLI.
Rojo
CLII.
Se observar
fenol +
ladrillo
gotas de
Na(OH)
aceite
2% +
aceite +
pancreatin
a
CLIII.

CLIV.
CLV.
CLVI.
CLVII.
Cuestionario
1. Defina los conceptos:
Enzima: protenas soluble producida por las clulas del organismo, que favorece y regula
las reacciones qumicas en los seres vivos.
Coenzima: son cofactores orgnicos no proteicos, termoestables, que unidos a una
apoenzima constituyen la holoenzima o forma cataltica activa de la enzima.
Apoenzima: es una protena sin actividad que constituye la holoenzima o enzima activa.
Holoenzima: es una enzima que est formada por una protena (apoenzima) y un cofactor,
que puede ser un ion o una molcula orgnica compleja unida (grupo prosttico) o no (una
coenzima). En resumidas cuentas, es una enzima completa y activada catalticamente.