UNIDAD ACADMICA DE CIENCIAS QUMICAS Y DE LA SALUD

CARRERA DE BIOQUMICA Y FARMACIA

TTULO:
DISEO DE UN GEL CON ACTIVIDAD ANTIINFLAMATORIA A PARTIR DE UN
EXTRACTO OBTENIDO DE LAS PARTES AREAS DE PORTULACA OLERACEA
(VERDOLAGA)

TRABAJO DE TITULACIN PREVIO A LA OBTENCIN DEL TITULO DE

BIOQUMICO FARMACUTICO

AUTORES:
LIDIA ELIZABETH GUZMN HERAS
JSSICA KARINA RAMREZ SARMIENTO

TUTORA:
VIVIANA GARCA MIR PhD

MACHALA - EL ORO

ii

iii

DEDICATORIA
Quiero dedicar este trabajo de investigacin primeramente a Dios, por bendecirme,
protegerme y por estar ah en todo momento, as tambin al a Virgen Mara por
interceder por m, e iluminar mi camino.
Con mucho amor a mis padres Anglica Mara Sarmiento Guamn y Milton Gustavo
Ramrez Matamoros, que me han apoyado incondicionalmente, por darme la fuerza y
concejos necesarios para seguir adelante.

Jssica Karina Ramrez Sarmiento

iv

DEDICATORIA
Dedico este trabajo, con mucho amor a Dios por bendecirme y acompaarme en cada
momento, siendo mi sustento para sobrellevar cada difcil situacin

que me toc

enfrentar a lo largo de mi carrera universitaria.

A mis padres Rosa Amparito Heras Illescas y Jos Salvador Guzmn Reyes, quienes
me han brindado su apoyo incondicional y mediante sus sabios consejos siempre me
fortalecieron para seguir adelante, a mis hermanos: Norma Susana, Natividad Magaly,
Miguel Ivn y Jinsop Ismael, quienes me han acompaado siempre y han sido base e
inspiracin de este trabajo.
A mis familiares y amigos en especial a Josu Moncada, quienes de una u otra forma
han sido parte importante de este logro acadmico.

Lidia Elizabeth Guzmn Heras

AGRADECIMIENTO
Expresamos nuestra gratitud principalmente a Dios por la vida, por permitirnos culminar
una etapa ms en nuestra existencia.
A nuestros padres con mucho cario ya que gracias a sus esfuerzos, sacrificio, lucha,
comprensin, dedicacin y amor nos han ayudado a alcanzar nuestras metas.
Nuestros sinceros agradecimientos a nuestra tutora, Dra. Viviana Garca Mir, por
impartirnos sus sabios conocimientos y guiarnos en el transcurso de nuestro proyecto.
A la Dra. Carmita Jaramillo, por su comprensin, por aportar con sus conocimientos y
darnos las comodidades para laborar en la Planta Piloto de Farmacia. As tambin, a
todas las personas que de una u otra manera han contribuido con el desarrollo de este
proyecto de investigacin. Agradecemos de todo corazn por su apoyo incondicional a
nuestro compaero y amigo Geovanny Ramn Japn.

Lidia Elizabeth Guzmn Heras

Jssica Karina Ramrez Sarmiento

vi

DISEO DE UN GEL CON ACTIVIDAD ANTIINFLAMATORIA A PARTIR DE UN

EXTRACTO OBTENIDO DE LAS PARTES AREAS DE Portulaca oleracea
(Verdolaga)
AUTORES
Lidia Elizabeth Guzmn Heras
Jssica Karina Ramrez Sarmiento
TUTOR
Dra. Viviana Garca Mir PhD
COTUTOR
Dra. Carmita Jaramillo Jaramillo MsC.

RESUMEN
Portulaca oleracea (verdolaga) es empleada tradicionalmente para el alivio del dolor y
la inflamacin asociados a enfermedades osteomusculares. El presente proyecto de
investigacin tiene como finalidad disear una forma farmacutica tipo gel con actividad
antiinflamatoria a partir de un extracto etanlico al 95 % utilizando las partes areas de
Portulaca oleracea (verdolaga). Para ello, inicialmente, se determinaron los principales
parmetros de control de calidad de la droga cruda y del extracto etanlico obtenido, a
travs del anlisis de sus ndices fsico-qumicos, los cuales estuvieron en
correspondencia con especificaciones de calidad previamente establecidas. La
evaluacin qumica mediante tamizaje fitoqumico y placa delgada, sugiri la presencia
de flavonoides, catequinas, aminocidos, alcaloides, compuestos grasos, saponinas y
taninos; as tambin el anlisis qumico mediante el mtodo de AlCl3 y Folin - Ciocalteu
sugiri la presencia de flavonoides y compuestos fenlicos en el extracto evaluado.
Este resultado fue corroborado mediante el estudio de Espectrometra de masas, el
cual confirm la presencia de flavonoides aun no reportados en esta especie vegetal. El
ensayo preclnico del extracto en ratas, mostr un efecto antiinflamatorio similar frente
al control positivo (naproxeno sdico). La optimizacin de los componentes del gel con
potencialidades antiinflamatorias, empleando como IFA el extracto de Portulaca
oleracea, fue llevada a cabo mediante el empleo de un diseo D-optimal de tres
componentes con restricciones, evaluando como variables respuesta, diferentes
parmetros como pH, extensibilidad y viscosidad, obteniendo ecuaciones matemticas
que permitieron optimizar los componentes. A partir de este anlisis se pudo conocer
que la experiencia 7 del diseo tiene similitud en su comportamiento viscoelstico con
la formulacin de referencia. Mediante este trabajo se demostr la factibilidad de
empleo de diferentes herramientas estadsticas para el diseo racional de
preparaciones farmacuticas (gel) a partir del extracto de Portulaca oleracea,
Palabras claves:
fitofrmaco.

Portulaca

oleracea,

inflamacin,

vii

antiinflamatorio,

fitoterapia,

DISEO DE UN GEL CON ACTIVIDAD ANTIINFLAMATORIA A PARTIR DE UN

EXTRACTO OBTENIDO DE LAS PARTES AREAS DE Portulaca oleracea
(Verdolaga)
AUTHORS
Lidia Elizabeth Guzmn Heras
Jssica Karina Ramrez Sarmiento
TUTOR
Dra. Viviana Garca Mir PhD
COTUTOR
Dra. Carmita Jaramillo Jaramillo MsC.

ABSTRACT
Portulaca oleracea (verdolaga) is used traditionally to reduce the pain caused by
inflamation asociated to musculoskeletal diseasses. The current research project has
the target of design a pharmaceutical form of gel with antiinflammatory activity from
95% ethanolic extract by the use of aerial parts of Portulaca oleracea (verdolaga). To
this effect, at the beginning were determinated the main quality control parameters of
the raw drug and the ethanolic extract obtained through the physico-chemical analysis
which corresponding with the referential specifications. The chemical evaluation done
by phytochemical screening and thin layer chromatography give the presence of
flavonoids, catechins, aminoacids, alkaloids, fat compounds, saponins and tanins; as
well as the chemical analysis through the AlCl3 and Folin-Ciocalteu method show the
presence of flavonoids and phenolic compounds in the extract evaluated. This result
was born out through mass spectrometer analysis which confirm the existence of
flavonoids do not reported yet for this vegetal specie. The preclinical essay show an
antiinflammatory effect similar to passive control (naproxen sodium). The optimization of
the gel components with antiinflammatory potential, using as IFA PAI the extract of
Portulaca oleracea, was carry on through the use of D-optimal design with three
components and restrictions, evaluating the response variables, differents parameters
such as pH, extensibility and viscosity, getting mathematic ecuations which let optimize
the components. The analysis shows that the number 7 experiment was better
comparated with the viscoelstic behaviour of the reference formulation. This work
conclude to, the factibility of the use of different statistical tools to the recional design of
pharmaceutical preparations and also it is applied to the gel form when is used the
Portulaca oleracea
Keywords: Portulaca oleracea, inflammation, inflammatory, phytotherapy, phytodrug.

viii

NDICE DE CONTENIDO
INTRODUCCIN ______________________________________________________ 1
PROBLEMA CIENTFICO _______________________________________________ 2
OBJETIVO GENERAL __________________________________________________ 2
OBJETIVOS ESPECFICOS _____________________________________________ 2
HIPTESIS __________________________________________________________ 2
CAPTULO I __________________________________________________________ 3
1.

REVISION BIBLIOGRFICA __________________________________________ 3

1.1.

Fitoterapia y Fitofrmacos ________________________________________ 3

1.2.

Portulaca oleracea L. ____________________________________________ 3

1.3.

Botnica y ecologa _____________________________________________ 3

1.4.

Composicin Qumica ___________________________________________ 4

1.5.

Usos farmacolgicos ____________________________________________ 5

1.6.

Extractos _____________________________________________________ 6

1.7. Gel __________________________________________________________ 6

1.7.1. Generalidades _______________________________________________ 6
1.7.2. Tipos de geles _______________________________________________ 7
1.7.3. Componentes de un gel ________________________________________ 7
1.7.3.1. Agente gelificante _________________________________________ 7
1.7.3.2. Agente neutralizante _______________________________________ 7
1.7.3.3. Humectantes _____________________________________________ 8
1.8. Inflamacin ____________________________________________________ 8
1.8.1. Clulas que participan en el proceso inflamatorio ____________________ 8
1.9.

Modelos de evaluacin in vivo de la actividad antiinflamatoria ____________ 8

CAPTULO II_________________________________________________________ 10
2.

MATERIALES Y MTODOS _________________________________________ 10

2.1. MATERIALES: ________________________________________________ 10
2.1.1. Material vegetal _____________________________________________ 10
2.1.2. Material biolgico ____________________________________________ 10
2.1.3. Material de laboratorio ________________________________________ 10
2.1.4. Equipos ____________________________________________________ 10
2.1.5. Reactivos y sustancias ________________________________________ 10
2.2. MTODOS ___________________________________________________ 11
2.2.1. Seleccin de la muestra _______________________________________ 11
2.2.2. Toma de muestras ___________________________________________ 11
2.2.3. Preparacin de las muestras __________________________________ 11
2.2.4. Parmetros morfomtricos _____________________________________ 11
2.2.5. Control de calidad de la droga seca y molida _______________________ 11
ix

2.2.5.1. Determinacin del contenido de humedad. Mtodo Gravimtrico. ___ 12

2.2.5.2. Determinacin de cenizas totales.- Mtodo de incineracin. ________ 12
2.2.5.3. Determinacin de sustancias solubles ________________________ 12
2.2.6. Preparacin de extractos ______________________________________ 13
2.2.6.1. Parmetros de calidad del extracto ___________________________ 13
2.2.7. Tamizaje Fitoqumico _________________________________________ 14
2.2.7.1. Tamizaje del extracto etanlico ______________________________ 14
2.2.8. Cuantificacin de principios activos. ______________________________ 15
2.2.8.1. Cuantificacin de flavonoides. _______________________________ 15
2.2.8.2. Cuantificacin de fenoles __________________________________ 16
2.2.9. Espectrofotometra de masas ___________________________________ 16
2.2.9.1. Cuantificacin de flavonoides por espectrometra de masas________ 16
2.2.10. Diseo del Gel de Portulaca oleracea. __________________________ 17
2.2.11. Comprobacin de calidad del Gel ______________________________ 18
2.2.12. Envasado y etiquetado. ______________________________________ 19
2.2.13. Evaluacin de la actividad antiinflamatoria del extracto etanlico. _____ 19
2.2.14. Anlisis estadstico _________________________________________ 20
CAPITULO III ________________________________________________________ 20
3.

RESULTADOS Y DISCUSIN _______________________________________ 21

3.1.

Caracterizacin macroscpica y morfomtrica de la droga fresca _________ 21

3.2.

Control de calidad de la droga seca y molida _________________________ 21

3.3.

Control de calidad del extracto ____________________________________ 23

3.4.

Tamizaje fitoqumico ___________________________________________ 24

3.5. Identificacin cualitativa de metabolitos en Cromatografa en Capa Delgada 25

3.5.1. Revelado Fsico _____________________________________________ 25
3.5.2. Revelados Qumicos__________________________________________ 26
3.6.

Bsqueda de flavonoides mediante Espectrometra de Masas ___________ 28

3.7.

Cuantificacin de flavonoides en los extractos ________________________ 31

3.8.

Cuantificacin de fenoles en los extractos ___________________________ 32

3.9.

Evaluacin de la actividad antiinflamatoria del extracto _________________ 34

3.10. Diseo experimental desarrollado para la seleccin de formulacin ptima _ 34

3.11. Optimizacin del diseo D-Optimal ________________________________ 39
3.12. Escalado ____________________________________________________ 40
CAPTULO IV ________________________________________________________ 42
4.

CONCLUSIONES _________________________________________________ 42

CAPTULO V ________________________________________________________ 43
5.

RECOMENDACIONES _____________________________________________ 43

INDICE DE GRFICOS

Grfico 1. Imagen de la planta Portulaca oleracea. ____________________________ 4

Grfico 2. Esquema de las reacciones a realizar en el extracto alcohlico _________ 14
Grfico 3. Proceso de elaboracin del producto (gel) __________________________ 18
Grfico 4. Histograma de frecuencias de longitud (A) y ancho (B) de hojas de Portulaca
oleracea (n= 100) _____________________________________________________ 22
Grfico 5. Revelado de la placa con luz UV a 365 nm _________________________ 25
Grfico 6. Revelado de la placa con luz UV a 254 nm _________________________ 26
Grfico 7. Revelado con Dragendorff aplicando calor; observacin de manchas color
naranja _____________________________________________________________ 26
Grfico 8. Revelado con FeCl3; observacin de manchas oscuras. ______________ 27
Grfico 9. Revelado con cido Sulfrico al 50 % en metanol + vainillina al 1% en
metanol; observacin de mancha azul verdosa. ______________________________ 27
Grfico 10. Separacin de la clorofila ______________________________________ 28
Grfico 11. Espectro de masas obtenido en modo negativo ____________________ 29
Grfico 12. Espectro de masas obtenido en modo positivo _____________________ 29
Grfico 13. Fragmentacin de compuesto 341 en modo negativo ________________ 30
Grfico 14. Espectro de masa de la fragmentacin del compuesto 255 ____________ 31
Grfico 15. Curva de calibracin, mtodo modificado de Feltrin y colaboradores (2012)
___________________________________________________________________ 32
Grfico 16. Curva de calibracin de fenoles _________________________________ 33
Grfico 17. Evaluacin de la actividad antiinflamatoria del extracto _______________ 34
Grfico 18. Modelo lineal de ajuste correspondiente al pH, en relacin al
comportamiento del carbopol frente a la trietanolamina ________________________ 37
Grfico 19. Grficos de traza y contorno para la variable pH ____________________ 37
Grfico 20. Diseo D-Optimal de la variable extensibilidad _____________________ 38
Grfico 21. Grficos de traza y contorno para la variable extensibilidad ___________ 38
Grfico 22. Modelo lineal de ajuste de la variable Viscosisdad __________________ 39
Grfico 23. Grficos de traza y contorno para la variable viscosidad ______________ 39

xi

INDICE DE TABLAS
Tabla 1: Experimento desarrollado en el diseo del gel ________________________ 18
Tabla 2: Resumen de las determinaciones de longitud (A) y ancho (B) para n= 100 __ 21
Tabla 3: Prueba de normalidad de longitud y ancho de las hojas, (Test de KolmogorovSmirnov) ____________________________________________________________ 22
Tabla 4: Humedad y cenizas de las partes areas de Portulaca oleracea (media/SD) 23
Tabla 5: Caractersticas Organolpticas del extracto etanolico de partes areas de
Portulaca oleracea ____________________________________________________ 23
Tabla 6: Parmetros de calidad del extracto (media/SD) _______________________ 23
Tabla 7: Tamizaje fitoqumico del extracto __________________________________ 24
Tabla 8: Absorbancias y concentraciones de flavonoides calculados como mg de
rutina/mL____________________________________________________________ 32
Tabla 9: Absorbancias y concentraciones de fenoles calculados como mg de GAE/mL
___________________________________________________________________ 33
Tabla 10: Parmetros evaluados en el diseo D-Optimal ______________________ 35
Tabla 11: Evaluacin de la distribucin normal de las variables respuestas ________ 35
Tabla 12: Resumen de los modelos ajustados del diseo D-Optimal______________ 36
Tabla 13: Criterios de optimizacin y soluciones obtenidas. ____________________ 40
Tabla 14: Determinacin de parmetros organolpticos del gel GV7-PLUS ________ 41
Tabla 15: Extensibilidad, pH, viscosidad y contenido del gel GV7-PLUS (media/SD) _ 41

xii

INTRODUCCIN
Aproximadamente 30 millones de personas consumen a diario medicamentos
antiinflamatorios en especial los adultos mayores y en un menor porcentaje los
deportistas, como lo indica Carmbula en el 2011. Sin embargo, estos medicamentos
presentan efectos secundarios ampliamente estudiados, tales como: problemas
cardiovasculares, renales, gastrointestinales, entre otros, dependiendo su va de
administracin. Acorde a Green, G. A. en 2011, entre el 10 y 20% de pacientes que
consumen AINES presentan indigestin (1, 2).
Por otra parte, no existen frmacos antiinflamatorios de origen natural en el mercado
local, siendo los sintticos y generalmente de alto valor comercial. La falta de ello es
principalmente debido al bajo desarrollo de tecnologa local enfocada a potenciar los
recursos fitoqumicos de alto conocimiento ancestral, y su puesta en escena en el
mercado local y mbito cientfico.
Portulaca oleracea L., (verdolaga) ha sido investigada cientficamente, y se ha
comprobado que posee actividad antiinflamatoria segn Mubashir y colaboradores, en
el 2011. El efecto antiinflamatorio y analgsico del extracto etanlico de las partes
areas (hojas secas y tallos) de P. oleracea L., mostr actividad significativa tanto
por va intraperitoneal como tpica (3).
Adems, Lee y colaboradores, en el 2012, comprobaron que esta planta inhibe la
inflamacin mediante mecanismos de bloqueo de los factores que participan en el
mecanismo de inflamacin (4).
Una investigacin preclnica realizada en ratas por Santamara en el 2011, donde se
evala la efectividad de extractos de verdolaga como antiinflamatorio comparndola
con un medicamento sinttico, la verdolaga fue ms efectiva y redujo la inflamacin en
un mayor porcentaje (5).
A Portulaca oleracea tambin se le atribuyen propiedades como hipoglucemiante y
actividades hipolipemiantes, antioxidante y antitumorales de acuerdo al trabajo
realizado por Zhao y coadjutores, en el 2013, donde se evidenci la inhibicin
significativa del crecimiento de tumores cancergenos en ratones (6).
Portulaca oleracea L. (verdolaga) es considerada en nuestro medio como maleza, la
cual crece anualmente y se encuentra distribuida en alrededor de 80 pases en el
mundo segn Pez en el 2007. De esta forma, dadas las condiciones ambientales
locales, esta planta puede ser ampliamente utilizada para este efecto en nuestro pas,
previo su estudio y desarrollo tecnolgico (7).
El presente proyecto de investigacin se enfoca en la verificacin experimental
mediante el estudio preclnico de un extracto etanlico a partir de las partes areas de
Portulaca oleracea L. (verdolaga), aplicada in vivo, as obtener una forma farmacutica
semislida (gel) con potencialidad antiinflamatoria, garanta teraputica y de fcil
acceso.

PROBLEMA CIENTFICO
La necesidad de disear un gel con potencialidad antiinflamatoria a partir de un
extracto etanlico a 95 de las partes areas de Portulaca oleracea (verdolaga).
OBJETIVO GENERAL
Disear una forma farmacutica semislida (gel) con actividad antiinflamatoria a partir
del extracto etanlico de las partes areas de Portulaca oleracea (verdolaga).
OBJETIVOS ESPECFICOS

Determinar parmetros farmacognsticos, tanto de la droga cruda, como del

extracto etanlico de las partes reas de Portulaca oleracea (verdolaga).
Evaluar cualitativa y cuantitativamente el extracto etanlico obtenido de las
partes areas de Portulaca oleracea (verdolaga).
Evaluar preclnicamente la actividad antiinflamatoria del extracto.
Disear una formulacin de gel a partir del extracto etanlico, con posible
actividad antiinflamatoria.
Determinar los parmetros fsicos y tecnolgicos que garanticen la calidad del
producto terminado.

HIPTESIS
El gel antiinflamatorio de Portulaca oleracea, es eficaz en los procesos de inflamacin
local y cumple con los parmetros de calidad que garantizan el uso del fitofrmaco
como medio teraputico.

CAPTULO I
1. REVISION BIBLIOGRFICA
1.1. Fitoterapia y Fitofrmacos
La Fitoterapia, etimolgicamente teraputica con plantas, se define como la ciencia
que estudia la utilizacin de los productos de origen vegetal con finalidad teraputica,
ya sea para prevenir, atenuar o curar un estado patolgico. El reino vegetal, sin
embargo, proporciona agentes con un grado de potencia farmacolgica y toxicolgica
muy diversa. Si bien, de esta definicin, se deducira que sta va a utilizar cualquier
producto de origen vegetal, independientemente de su potencia farmacolgica y
toxicidad. ste trmino, suele aplicarse a la utilizacin teraputica de productos con
una actividad suave o moderada, con mrgenes teraputicos relativamente amplios,
que dan lugar a tratamientos menos agresivos y que sea una teraputica suave. Desde
ese punto de vista, la Fitoterapia se considera especialmente til en el tratamiento de
afecciones leves o moderadas, as como de afecciones crnicas (8).
Por otro lado, la definicin de la palabra fitofrmaco se desprende de fito, que proviene
del griego planta, y frmaco, que significa medicamento (9).
En los ltimos tiempos, la industria farmacutica est empleando fitofrmacos,
productos que son elaborados a partir de un extracto que contiene un principio activo
que ha sido previamente analizado y cuantificado. El estudio, innovacin, produccin y
comercializacin de fitofrmacos, son una alternativa ante la bsqueda de
medicamentos naturales para el tratamiento de diferentes patologas (10).
Un fitofrmaco puede elaborarse de las siguientes maneras: a) A partir de partes
vegetales cortadas o pulverizadas. b) A partir de jugos de la planta. c) A partir de
tinturas, maceraciones en aceite y destilados. d) A partir de extractos obtenidos por los
diferentes procesos que usan solventes. As se aprovechara los principios activos que
son los que le dan la propiedad medicinal a la planta con la que se parte para la
elaboracin del fitofrmaco (11).
1.2. Portulaca oleracea L.
Varios grupos tnicos en la historia han utilizado diferentes especies de Portulaca
oleracea L. contra varias enfermedades durante muchos siglos (12).Es un miembro de la
familia Portulacaceae, catalogada como una mala hierba y considerada como la octava
planta ms comn en el mundo (13).

1.3. Botnica y ecologa

Nombre comn: Verdolaga, nombre cientfico: Portulaca oleracea L., familia:
Portulacaceae, descripcin: hierba anual de 80 centmetros de altura, suculentas con
flores amarillas y fruto capsular con semillas negras (14).

Grfico 1. Imagen de la planta Portulaca oleracea.

1.4. Composicin Qumica
La verdolaga es una planta herbcea anual, resistente a la sequa y tolerante a la sal,
la cual contiene altas cantidades de cidos grasos beneficiosos omega-3 y vitaminas
antioxidantes que hacen que se adapte fcilmente a estas condiciones (15).
Existen varios estudios cientficos sobre la composicin qumica de la planta los cuales
se citan a continuacin:
Segn Oliveira y colaboradores, en el 2009, determin que el agua es el principal
constituyente en la verdolaga en los tallos (media 90,5%) y hojas (media 91,8%), el
porcentaje de grasa variaba de 0,11% a 0,57%. Esta planta es muy rica en cidos
grasos poliinsaturados esenciales (PUEFA), ya que en un estudio se han encontrado
veinte y siete cidos grasos en las muestras de hojas, siendo el cido linolnico el ms
abundante, el cual vara desde 27,7 hasta 39,1%, seguido por palmtico (19,3 a 24,3%)
y cidos oleico (11,6-19,5%) (16). Tanto el cido alfa-linolnico (LNA) y cido linoleico
(LA), son esenciales para el crecimiento normal humano, promocin de la salud y
prevencin de enfermedades (17).
Tambin se detectaron cinco cidos orgnicos diferentes como son: fumrico,
acontico, ctrico, mlico y oxlico. Siendo el cido oxlico (OA) y ctrico los ms
abundantes, mientras que el cido acontico el ms bajo. El OA cuando est presente
en la dieta humana se puede combinar con minerales esenciales tales como calcio y
hierro, para formar sales insolubles conocidos como oxalatos y dificultar su
biodisponibilidad (17).
En una investigacin realizado por Liu y colaboradores, en el 2000, comprob el perfil
de cidos grasos y -caroteno, de un nmero de variedades australianas de verdolaga
(Portulaca oleracea) los mismos que se determinaron por GC y HPLC. El contenido de
cido graso total oscil de 1,5 a 2,5 mg / g de masa fresca en hojas, 0,6 a 0,9 mg / g en
los tallos y de 80 a 170 mg / g en las semillas. cido -linolnico (C18: 33)
representaron alrededor de 60% y 40% del contenido total de cidos grasos en las
hojas y semillas, respectivamente. No se detectaron cidos grasos omega-3 de cadena
larga. El contenido de -caroteno vari del 22 al 30 mg / g de masa fresca en las hojas.
4

Estos resultados indican que las variedades verdolaga australianos son una fuente rica
de cido -linolnico y -caroteno (18).
Contiene muchos compuestos biolgicamente activos y es una fuente de muchos
nutrientes, alcaloides, cumarinas, flavonoides, glucsidos cardacos, antraquinona,
protenas, el cido -linolnico y -caroteno, glicsido mono terpenos, N-transferuloyltiramina, tambin vitamina C, oleorresinas-I y II, saponinas, taninos, sacridos,
triterpenoides, -tocoferol y glutatin (12).
Un mtodo general basado en electroforesis capilar con deteccin electroqumica (CEED) fue desarrollado para la identificacin y determinacin de cinco flavonoides
(kaempferol, apigenina, miricetina, luteolina y quercetina) en especies de plantas. El
mtodo CE-ED optimizado fue empleado para analizar los flavonoides anteriores en
diferentes partes del Portulaca oleracea L (19).
Del extracto de metanol de Portulaca oleracea, un nuevo glucsido monoterpeno,
portuloside A, ha sido aislado. La estructura de portuloside A fue establecida por
mtodos espectroscpicos y luego confirm que Full-size image (<1 K) por sntesis de
linalool (3S) 3 (3,7 dimethylocta 1,7 dien 6 - onyl) - - glucopyranoside
(20)
.
Se encontr la presencia de cinco alcaloides, en un estudio realizado por Xiang, y
colaboradores, en el 2005, como son: oleraceins A, B, C, D y E que fueron aisladas de
Portulaca oleracea L., y sus estructuras determinadas por mtodos espectroscpico,
junto con otros constituyentes conocidos que incluyen cido p-cumrico, cido ferlico
y adenosina (21).
La elevada variedad de fitoconstituyentes en este vegetal se consideran los
responsables de las actividades biolgicas como antibacteriano, antifngico,
analgsico, antiinflamatorio, antifertilidad, relajante del musculo esqueltico y propiedad
cicatrizante (22).
1.5. Usos farmacolgicos
Verdolaga ha sido utilizada para el consumo humano, ya sea de forma cruda en
ensaladas y cocida en la preparacin de sopas y salsas, tambin como antisptico,
antidiurtica, vermfugo en la lcera bucal y trastornos urinarios (23).
Segn un estudio realizado Palaniswamy, et al., en el ao 2001, demostr que
Portulaca oleracea ofrece beneficios nutricionales, ya que es muy rico en cidos grasos
poliinsaturados esenciales (PUEFA) (17).
Segn Rashed, y colaboradores, en el 2003, estudiaron la actividad preliminar de
cicatrizacin de Portulaca oleracea usando Mus musculus IMV-1, mediante el empleo
de las partes areas frescas de Portulaca oleracea aplicando tpicamente sobre la
superficie de la herida. Para la determinacin de su efectividad se utilizaron parmetros
de contraccin de la herida y mediciones de resistencia a la traccin, dando como
resultado que esta planta acelera el proceso de cicatrizacin de la herida ya que
disminuye de superficie de la herida y aumenta la resistencia a la traccin (24).
En otra investigacin, se analizaron los extractos metanlicos de seis cultivares de
Portulaca oleracea por su contenido de fenoles totales (TPC) usando el mtodo de
Folin-Ciocalteu. La actividad antioxidante se midi utilizando los 1,1-difenil-2picrilhidrazil, (BCB) ensayos frricos-reduccin de la potencia antioxidante (FRAP) y
5

blanqueo -caroteno. El mtodo de titulacin de yodo se utiliz para determinar el

contenido de cido ascrbico (AAC). El ensayo BCB mostr que todos los cultivares
fueron capaces de inhibir la peroxidacin lipdica y la potencia de inhibicin no se
correlacion con el valor TPC (25).
Se ha determinado que esta planta produce la restriccin de movimiento en los
animales durante los estudios de deteccin de rutina, utilizando para el anlisis un
extracto etanlico al 10% (26).
Segn Chan y colaboradores, en el 2000, investig las propiedades analgsicas y
antiinflamatorias de tres especies de la familia (Portulacaceae), Portulaca oleracea L.
subsp. sativa (Haw.) Celak, a partir de un extracto etanlico al 10% de las hojas secas
y tallos, cuyo anlisis result positivo especialmente va intraperitoneal y tpica, pero no
por va oral en comparacin con el medicamento sinttico (diclofenaco sdico) utilizado
en el anlisis como control activo (12).
1.6. Extractos
La mejor manera de aprovechar las substancias o principios activos de una planta, se
recurre frecuentemente a los extractos. Estos se obtienen a partir de un proceso, que
consiste en extraer las substancias activas de una planta en un solvente adecuado, que
generalmente suele ser agua o alcohol La extraccin se puede realizar en fro o en
caliente, y el producto resultante puede ser una solucin concentrada o espesa en
funcin de la sustancia de origen, o espesarse por propio inters en base a la
aplicacin que se le vaya a dar (27).
El procedimiento de extraccin juega un importante papel en el esfuerzo total de
asegurar y proveer productos herbales de alta calidad a los consumidores de todo el
mundo. Cuando la naturaleza qumica de los compuestos es conocida (informacin
quimiotaxonmica) los mtodos de extraccin deben estar dirigidos a la obtencin de
estos compuestos con la mayor pureza posible Cuando la composicin qumica es
desconocida, el proceso de extraccin puede estar basado en el uso que la planta tiene
en medicina popular, o bien el llevar a cabo varas extracciones con solventes cuya
polaridad se fuera incrementando. La estandarizacin de los productos es un trabajo
necesario para confirmar la estabilidad del o los ingredientes activos de plantas
medicinales. De aqu radica la importancia de realizar bien la extraccin. Por este
motivo, las formulaciones de productos naturales deben estar estandarizadas para
entregar una cantidad conocida de ingrediente(s) activo(s) segn la dosis
recomendada. La estabilidad de los principios activos aislados y cuantificados deber
ser evaluada (28).
1.7. Gel
1.7.1. Generalidades
Los geles se consideran como sistemas dispersos, que suelen ser transparentes o
translucidos, pueden estar formados por lquidos de caracterstica -hidrfilos o
hidrfobos- a los que se les agregan sustancias de naturaleza coloidal formndose as
una estructura continua, las propiedades reolgicas se definirn por la naturaleza y
caractersticas de este sistema.
Los geles tambin se los puede definir a partir de su mtodo de obtencin; a partir de
soluciones coloidales que, por diferentes modificaciones en su entorno, adquieren una
6

estructura ordenada tridimensional que fija las particulas del soluto alrededor de las de
coloide (29).
1.7.2. Tipos de geles
En funcin de su consistencia y propiedades reolgicas algunos de ellos pueden
considerarse en aplicadores (barras) o bien en tarros y tubos. Suelen ir dentro de esta
forma de aplicacin a preparaciones lquidas viscosizadas de diferente naturaleza.
Los oleogeles o lipogeles son aceites gelificados mediante la incorporacin de aditivos
reologicos lipfilos. Se caracterizan por tener una mejor estabilidad y extensibilidad que
los respectivos lpidos constituyentes, en cuyo seno se ha dispersado finamente el
gelificante lipofilico, por lo general derivados de slice pirognica de bentonita lipoflica,
que ha proporciones del 2 a 5 %, transforman a un aceite a una masa pastosa y
transparente. No presentan un especial inters a nivel cosmtico aunque pueden
representar una posible opcin para la formulacin de sticks (29).
1.7.3. Componentes de un gel
1.7.3.1.

Agente gelificante

Estas sustancias polimricas orgnicas son capaces de formar estructuras

tridimensionales en medio lquido. En la mayora de los casos dicha estructuracin
comporta la solvatacin por parte de una serie de molculas del solvente
(habitualmente agua o soluciones hidroalcohlicas). A nivel de formulacin, los agentes
gelificantes pueden dividirse en dos subtipos: Polmeros pH dependientes: la formacin
del gel y consecucin de las propiedades reolgicas caractersticas del mismo
dependen del pH del medio externo. Polmeros no pH dependientes: la gelificacin se
produce con independencia del pH del medio externo (o cuanto menos en un muy
amplio intervalo de pH) (29).
Un agente gelificante muy utilizado es el carbopol que es un polmero del cido acrlico,
de alto peso molecular (grupos COOH libres) que se neutraliza con hidrxidos
alcalinos, o con aminas dando lugar a un gel transparente, brillante y no graso, lo cual
favorece la absorcin de los principios activos incorporados (30).
1.7.3.2.

Agente neutralizante

Este agente es utilizado nicamente en geles pH dependientes. En la mayora de los

casos se trata de bases orgnicas o inorgnicas, tales como trietanolamina o
aminometilpropanol. La naturaleza de la base neutralizante puede influir en ocasiones
en el tacto y en la transparencia final del preparado. En general, cuanto ms fuerte es
la base, ms rgidos y transparentes son los geles obtenidos; asimismo, en caso de
que el medio externo sea hidroalcohlico, la base a emplear deber ser una amina, a
diferencia de cuando el medio externo integra propilenglicol. En cuanto a la cantidad de
base requerida, sta debe incorporarse a la dispersin del gelificante, determinando en
continuo el pH que adopta la preparacin, hasta obtener aquel en el que se considera
que la correlacin entre la consistencia adquirida y el pH deseado (normalmente lo ms
prximo posible al eudrmico) es la ideal (29).

1.7.3.3.

Humectantes

Los polioles dentro de la formulacin en proporcin moderada (normalmente < 10%p/p)

dificulta la evaporacin del agua del preparado durante la fase de reposicin del gel; asi
mismo evita su rpida desecacin una vez aplicado sobre la piel, con lo que colabora a
la accin hidratante que se espera de dicho tipo de formulaciones. Sustancias como
(glicerina, sorbitol, propilenglicol) mejoran asimismo la extensibilidad del preparado
sobre la piel (29).
1.8. Inflamacin
La primera descripcin de la inflamacin fue realizada por Celsus en el ao 10 antes de
Cristo como enrojecimiento e hinchazn con calor y dolor (rubor et tumor cum calore et
dolore). El proceso inflamatorio involucra una serie de eventos inespecficos que
pueden ser provocados por numerosos estmulos o agresiones del medio (ej.: agentes
biolgicos, isquemia, interacciones antgeno-anticuerpo, traumatismos, lesiones
trmicas o fisicoqumicas de otra ndole, etc.). Cada tipo de estmulo provoca una
respuesta caracterstica (31).
A nivel externo, la respuesta suele ser por conocidos signos clnicos como tumefaccin
(edema), rubor, calor, dolor espontneo a la palpacin y desorden de la funcin tisular.
La respuesta inflamatoria ocurre en tres fases diferentes:
1. Una fase transitoria aguda, caracterizada por vasodilatacin local, hiperemia
activa e incremento en la permeabilidad capilar.
2. Una fase subaguda tarda, visiblemente caracterizada por un periodo de
hiperemia pasiva, infiltracin de leucocitos y fagocitos y,
3. una fase proliferativa crnica, en la cual ocurre degeneracin de tejidos, lesin
endotelial y fibrosis (32).
La inflamacin es un mecanismo fisiopatolgico bsico, la magnitud de la respuesta
inflamatoria es crucial pues una respuesta inflamatoria insuficiente resulta en
inmunodeficiencia, lo cual puede conducir desde una infeccin hasta cncer. Por otro
lado una excesiva respuesta inflamatoria causa morbilidad y mortalidad en
enfermedades tales como, arteriosclerosis, tromboembolismo, enfermedad arterial
coronaria, cerebral y perifrica, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crnica
(EPOC), la enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, peritonitis, esclerosis mltiple y
artritis reumatoide, entre otras (33).
1.8.1. Clulas que participan en el proceso inflamatorio
Existen dos tipos de clulas (prostaglandinas y citoquinas) implicadas en la inflamacin,
unas que se encuentran en forma permanente en los tejidos, como son los mastocitos y
las clulas endoteliales, y otras que pueden migrar y acceden al sitio afectado desde la
sangre, como son los neutrfilos polimorfonucleares, monocitos, macrfagos y
linfocitos. Estas clulas producen una gran cantidad de molculas activas que, de
manera directa o indirecta, son mediadores del proceso inflamatorio (31).
1.9. Modelos de evaluacin in vivo de la actividad antiinflamatoria
Para evaluar la actividad antiinflamatoria in vivo se dispone de modelos que varan en
la intensidad de la reaccin, estos pueden ser:

Modelos de inflamacin aguda

8

 Modelos de inflamacin subcrnica crnica (no detallados)

En el estudio de agentes antiinflamatorios se pueden seleccionar otros agentes
irritantes que permiten un conocimiento ms selectivo de la forma de actuar de la
sustancia objeto de estudio, como por ejemplo, bradicinina, histamina y xileno, que
provocan una inflamacin de origen neurognico, mientras que el empleo de
fenilpropiolato de etilo permite estudiar agentes antiinflamatorios con un largo perodo
de latencia, como son los corticosteroides como lo indica Ros y colaboradores, en el
2004(34). Dentro de los modelos de inflamacin aguda se pueden emplear tres mtodos,
cada uno presenta caractersticas especiales dependiendo de las condiciones bajo las
cuales se realice el estudio. Estos son:
1. Protocolo experimental por aceite de crotn
2. Edema auricular en ratn inducido por el 13-Acetato de1-12-Otetradecanoilforbol (TPA)
3. Edema plantar por carragenina: este mtodo fue descrito por primera vez por
Winter and Porter, 1957 y modificado por Sughisita en 1981. Ha sido uno de los
mtodos de mayor utilidad en la discriminacin de frmacos antiinflamatorios por
su sencillez y reproducibilidad. Consiste en la administracin subcutnea de una
pseudo solucin de carragenina (un muco polisacrido sulfatado extrado del
alga marina Chondrus crispus y Gigartina stellata) a nivel de la aponeurosis
plantar de la rata o del ratn. El producto a ensayar se puede administrar por
diferentes vas sea intraperitonal, oral, etc. La respuesta promovida por la
carragenina es de tipo bifsica. La primera fase es mediada a travs de la
liberacin de histamina, serotonina y quininas, mientras la segunda fase est
asociada a la liberacin de prostaglandinas, bradiquinina, proteasa y lisosoma,
con un efecto mximo que se presenta alrededor de 3 h de la inyeccin de
carragenina (35).

CAPTULO II
2. MATERIALES Y MTODOS
2.1. MATERIALES:
2.1.1. Material vegetal: Partes areas (hojas, tallos y semillas) de Portulaca
oleracea (verdolaga).
2.1.2. Material biolgico: Ratas de laboratorio (Wistar).

2.1.3. Material de laboratorio:

Bata de Laboratorio Cinta adhesiva
Esptula
Mascarillas
Varilla de agitacin
Guantes
Desecador
Cepillo
Pinzas
Secador artesanal
Cpsulas
de
Papel Aluminio
porcelana
Molino de tornillo
Crisoles
sin fin Corona
Frascos
mbar
Papel filtro
100ml
Fundas de cierre
Tubos de ensayo
hermtico
Baln
de Embudos
Marcador
destilacin.
Jeringuillas 1ml
Toallas
Fundas plsticas
absorbentes

Gradillas.
Pinzas con nuez.

Pipetas graduadas 5-10

ml
Pipetas pasteur
Vasos de precipitacin
100-500ml
Soporte para embudos
Soporte universal.
Pera de succin
Tijeras
Estilete
Papel peridico
Probetas 100-500 ml
Matraces de Erlenmeyer
250ml
Percolador

2.1.4. Equipos

Estufa
de
calentamiento
MEMMERT
Muffla FURNACE 48000
Balanza
Analtica
PIONEER
OHAUS
Molino CORONA
Campana de extraccin de gases
FUME HOOL FH1200
Calentador Magntico CIMAREC
Peachmetro OAKTON

Rotaevaporador HEIDOLPH
Espectrofotmetro PERKIN ELMER
FTIR 16 PC.
Viscosmetro VISCOLEAD ONE
FUNGILAB
Vortex MIXER
Lmpara
UV
SPECTROLINE
MINIMAX
Refractmetro (ANTON PAAR)

2.1.5. Reactivos y sustancias:

cido clorhdrico 1%
cido clorhdrico concentrado
Reactivo de Fehling
Cloruro frrico 5%
Solucin salina 0.9%

Agua destilada
Carbopol
Mentol
Proplenglicol
metil y propil parabenos
10

Hidrxido de sodio
Ninhidrina 2%
Cinta de magnesio metlico
Alcohol amlico
Reactivo de Kedde

Etanol 95%.
Trietanolamina

2.2. MTODOS:
2.2.1. Seleccin de la muestra
Para la recoleccin de las muestras o drogas vegetales se seleccion al sitio SAN
MIGUEL DE BRASIL del cantn EL GUABO provincia de EL ORO. Se lo realiz
durante los meses de abril, julio y agosto.
2.2.2. Toma de muestras
1. Se recolectaron la planta completa para luego seleccionar las partes areas
(hojas, tallos y semillas) de la misma manera se elimin cualquier material
extrao, que pueda contaminar y afectar la calidad de la droga vegetal.
2. Luego se seleccion las plantas con mejor apariencia y follaje, se extrajeron las
hojas y los tallos por separado.

2.2.3. Preparacin de las muestras

1. La limpieza se la realiz mediante un enjuague con agua potable, seguidamente
se introdujo en una solucin de hipoclorito de sodio al 0,5 % por un periodo de 5
minutos y por ltimo se enjuag con agua destilada, de esta manera se elimina
cualquier tipo de microorganismo o sustancias contaminantes.
2. Luego del lavado se colocaron sobre pliegos de papel filtro en los desecadores
al ambiente durante 12 horas.
3. Se procedi a cortar en partes muy pequeas tanto las hojas como los tallos por
separado y luego se llevaron a desecacin en estufas diferentes a 40 C hasta
tener desecacin completa. El comportamiento de ambos materiales frente al
proceso de secado difieren. Una vez secas se mezclaron y luego se moli en un
molino como paso final, se tamizaron las muestras a fin de obtener un polvo fino
para facilitar el proceso de extraccin de principios activos por parte del
disolvente.
2.2.4. Parmetros morfomtricos
Para evaluar este parmetro, se midi con una regla la longitud y el ancho de 100 hojas
escogidas al azar de la muestra fresca.
2.2.5. Control de calidad de la droga seca y molida
La droga seca y molida se almacen en recipientes impermeables con cierre hermtico
y en un lugar fresco y seco, as se evit posibles interferencias en los estudios. Todos
los anlisis fueron realizados por triplicado, segn las Normas de la OMS del 2011 y
MIiranda & Cuellar del 2000 (36, 37).

11

2.2.5.1.

Determinacin

del

contenido

de

humedad.

Mtodo

Gravimtrico.
A partir de la muestra pulverizada se pes 2 0.5 g y se transfiri a una cpsula de
porcelana previamente tarada y desecada a 105 C hasta masa constante;
seguidamente se desec a 105 C durante 3 horas. La cpsula se coloc en la
desecadora donde se dej enfriar a temperatura ambiente y se pes, colocndose
nuevamente en la estufa durante 1 hora, volvindose a pesar, hasta que se obtuvo una
masa constante (38).
Expresin de los resultados:
%H =

21
2

x 100

Donde:
%H= Porcentaje de humedad (%)
M2= Masa de la cpsula con la muestra de ensayo (g)
M1= Masa de la cpsula con la muestra de ensayo desecada (g)
M= Masa de la cpsula vaca.
100= Factor matemtico.
2.2.5.2.

Determinacin de cenizas totales.- Mtodo de incineracin.

Se determin con una masa de 2 0.5g de muestra, en un crisol de porcelana

previamente tarado. Se procedi a calentar suavemente la porcin de ensayo
aumentando la temperatura hasta carbonizar y luego se inciner en un horno mufla a
temperaturas de 700 a 750 C durante 2 horas. Se enfri el crisol en una desecadora y
se pes, repitiendo el proceso hasta que las dos pesadas sucesivas no difieron en ms
de 0.5 mg por gramo (masa constante) (38).
Expresin de resultados
2

C= 1 100
C= Porcentaje de cenizas totales en base hidratada
M2= Masa del crisol con la ceniza (g)
M1= Masa del crisol con la porcin del ensayo (g)
M= Masa del crisol vaco (g)
100= Factor matemtico.
2.2.5.3.

Determinacin de sustancias solubles

Se bas en la extraccin de las sustancias solubles en alcohol, mediante maceracin y

evaporacin hasta sequedad de una alcuota del extracto (38).
De la muestra de ensayo previamente pulverizada y tamizada, se pes exactamente 5
g y se transfiri a un erlenmeyer de 250 mL; se aadi 100 mL del disolvente, se tap y
12

se agit durante 6 horas, dejndose en reposo hasta el da siguiente; se agit 30

minutos, se dej reposar alrededor de media hora ms y se filtr por papel filtro. Se
tom una alcuota de 20 mL que se transfiri a una cpsula previamente tarada. Se
evapor sobre bao de agua, se desec en estufa a 105 C durante 3 horas, se enfri y
se pes (38).
Expresin de los resultados.

. 500.100
(100 )

Ss= Sustancias solubles (%)

H= Humedad de la muestra (%)
500 y 100= Factores matemticos para los clculos.
R= Residuo de la muestra (g)
M= Masa de la muestra (g)
2.2.6. Preparacin de extractos
La eleccin del disolvente a emplear, se realiz en base a la investigacin realizada
por Santamara en el 2011, utilizando etanol de 95 (5).
Se prepararon los extractos a partir de la droga seca y molida, por percolacin usando
como menstruo etanol de 95 , siguiendo la metodologa de Miranda y Cuellar del
2001(38).
Luego de montar el equipo de percolacin, se procedi a pesar 50 g de droga seca y
molida en un vaso de precipitacin, se aadi 100 ml del disolvente (etanol de 95 ), se
procedi a homogenizarlo y se dej en reposo por 40 minutos con el fin de humectar la
droga, procedimiento previo de extraccin.
Posteriormente se trasvas al equipo de percolacion y finalmete se adicion 50 ml del
menstruo, se coloc un pedazo de papel filtro sobre la mezcla y se tap la parte
superior del percolador con papel aluminio perforado.
Se abri un poco la llave para asegurarnos de que haya fluyo y cerramos
inmediatamente, transcurridas 16 horas, se procedi a obtener nuestro extracto
concentrado, se abri la llave a velocidad de 40 gotas/minuto.
El extracto lo se lo recolect en una probeta, se lo envas y se etiquet en frascos color
mbar y se conserv en refrigeracin de 2-8 C hasta su uso.
2.2.6.1.

Parmetros de calidad del extracto

Se evaluaron los parmetros de calidad de los extractos obtenidos de acuerdo a los

procedimientos recomendados por la Organizacin Mundial de la Salud del 2011 (36). Se
evalu los siguientes parmetros por triplicado:
1. Caractersticas organolpticas (color, olor, sabor y aspecto)
2. pH
13

3. Densidad por picnometra

4. ndice de refraccin, empleando un refractmetro ANTON PAAR
5. Grados Brix, empleando un refractmetro ANTON PAAR
6. Slidos totales
2.2.7. Tamizaje Fitoqumico
El tamizaje fitoqumico es una de las etapas iniciales de la investigacin fitoqumica,
que permite determinar cualitativamente los principales grupos qumicos presentes en
una planta y a partir de all, orientar la extraccin y/o fraccionamiento de los extractos
para el aislamiento de los grupos de mayor inters (39).
Esta evaluacin se la realiz segn el procedimiento de Miranda y Cuellar del 2000, el
cual se trata de un esquema general que utiliza la extraccin sucesiva con solventes de
polaridad creciente (37).Cuyo esquema general es el siguiente:
2.2.7.1.

Tamizaje del extracto etanlico

Grfico 2. Esquema de las reacciones a realizar en el extracto alcohlico

14

2.2.8. Cuantificacin de principios activos.

2.2.8.1.

Cuantificacin de flavonoides.

2.2.8.1.1.

Curva de calibracin.

Esta curva se determin con una solucin patrn de rutina con concentracin de
1000mg/l para lo cual se disolvieron 10 mg de rutina en 5 ml de metanol y se pas a
enrasar a un baln volumtrico de 10 ml), y de esta solucin se prepararon las
diluciones patrones de 100 mg/l, 110 mg/l, 120 mg/l, 130 mg/l, 140 mg/l y 150 mg/l.
Para lo cual se parte de la solucin de 1000mg/l. La solucin de 100 mg/l se prepar
con 1 ml de la solucin de 1000 mg/l y se afor a 10 ml con metanol en un baln
volumtrico. Para la solucin de 110 mg/l tomamos 1,1 ml de la solucin de 1000 mg/l
y se afor a 10 ml con metanol en un baln volumtrico. As mismo la solucin de 120
mg/l en un baln volumtrico de 10 ml colocamos 1,2 ml de la solucin de 1000 mg/l y
se afor con metanol. Para la solucin de 130 mg/l, agregamos 1,3 ml de la solucin de
1000 mg/l en un baln volumtrico de 10 ml y se afor con metanol. Para la solucin de
140 mg/l se tomaron 1,4 ml de la solucin patrn de 1000mg/l y se aforo a 10 ml en
baln volumtrico. Por ltimo la solucin de 150 mg/l se prepar con 1,5 ml de la
solucin de 1000 mg/l y aforados a 10 ml con metanol en baln volumtrico.
De cada solucin (100, 110, 120, 130, 140, 150 mg/l) se tom 0,5 ml de la solucin y
se adiciono 0,5 ml de tricloruro de aluminio (AlCl3) al 2% y 2,5 ml de metanol. Se
mezcl y dejo reposar por 1 hora, luego de este tiempo leemos las absorbancias en el
espectrofotmetro a 420 nm. Este procedimiento se realiza para cada solucin, el
espectrofotmetro se encero con un blanco preparado con 0,5 ml de agua destilada,
0,5 ml de AlCl3 al 2% y 3 ml de metanol.
2.2.8.1.2.

Cuantificacin de flavonoides en los extractos

Para la cuantificacin en el extracto se prepar una dilucin de 0,5 ml de extracto

aforados a 10 ml con metano en baln volumtrico, de esta solucin tomamos 0,5 ml y
mezclamos con 0,5 de tricloruro de aluminio al 2 % y 2,5 ml de metanol.
Agitamos y dejamos reposar por 1 hora, transcurrido este tiempo leemos las
absorbancias en el espectrofotmetro a 420 nm, de la misma manera se prepar un
blanco igual al ocupado para encerar el equipo en la curva de calibracin.
Las absorbancias obtenidas deben estar dentro del rango permitido de 0,3 a 0,8 de lo
contrario se buscar otra dilucin y se repetir el procedimiento.
Con los valores de las absorbancias procedimos a realizar las operaciones requeridas y
determinamos la concentracin de flavonoides en el extracto.

15

2.2.8.2.

Cuantificacin de fenoles

2.2.8.2.1.

Curva de calibracin

Lo principal fue encontrar la curva de calibracin para lo cual se pes 500 mg cido
glico y disolvimos en 30 ml de agua destilada a 80 C, pasamos al baln de 50 ml
tratando que se transfiera todo el contenido y se aforo con agua destilada.
De esta solucin concentrada se tom alcuotas de 1 a 5 ml y aforo cada una a 100 ml,
de esta manera cada dilucin corresponden a concentraciones de 10, 20, 30, 40 y 50
mg/100ml de cido glico.
De cada dilucin se tom 0,1 ml, posteriormente se adicion 5 ml de reactivo de Folin
(5 ml de reactivo folin concentrado aforar a 50 ml con agua destilada) y 0,9 ml de agua
destilada mezclar bien, esperar 5 minutos y adicionar 4 ml de carbonato de sodio a
7,5%, mezclar bien y esperar 2 horas para leer las absorbancias en el
espectrofotmetro a 765 nm.
2.2.8.2.2.

Cuantificacin de fenoles en los extractos

Se busc la dilucin ideal debido a que el extracto puro dio absorbancias superiores al
rango permitido de 0,3-0,8 por lo tanto lo ideal fue aforar 4 ml del extracto a 10 ml con
el etanol de 95 en baln volumtrico.
De la dilucin se tom 0,1 ml, posteriormente se adicion 5 ml de reactivo de FolinCiocalteu preparado y 0,9 ml de agua destilada mezclar bien, esperar 5 minutos y
adicionar 4 ml de carbonato de sodio al 7,5%, mezclar bien y esperar 2 horas para leer
las absorbancias en el espectrofotmetro a 765 nm, se encer el equipo con un blanco
preparado con la misma metodologa pero con el solvente empleado para obtener el
extracto en lugar de la dilucin ideal de la muestra. Este procedimiento se realiz por
triplicado obteniendo 9 valores de absorbancias.
Para conocer la concentracin de fenoles en el extracto con las absorbancias
realizamos los clculos respectivos para lo cual se ocupa la curva de calibracin
obtenida previamente.
2.2.9. Espectrofotometra de masas
2.2.9.1.

Cuantificacin de flavonoides por espectrometra de masas

(UHPLC-MS).
Preparacin de la muestra madre: concentrar 1 ml el extracto etanlico de verdolaga al
95%, colocarlo en un baln y llevarlo a sequedad en el rotavapor.
El residuo que queda pegado en las paredes del baln se lo homogeniza y se lo
disuelve con 1ml de MeOH: NH3 0.1% (8:2).
En esta evaluacin se requiere trabajar con concentraciones pequeas y libre de
interferencias, por ello se utiliz una columna RP18, la cual contiene dos filtros, uno en
el extremo superior y otro en el extremo inferior, y en el centro est formado por gel de
slice (apolar) (fase estacionaria) por la cual correr la muestra diluida y cuyo disolvente
a emplear es metanol (polar) (Fase mvil). Esta columna acta separando las
16

molculas apolares reteniendo as la clorofila y sustancias que pudieran entorpecer el

anlisis y estropear el sistema del equipo.
Continuando, se procede a humectar con 2 ml de metanol (para acelerar el proceso se
utiliz una bomba de presin para que ayude a arrastrar el disolvente por toda la
columna), y se deja pasar hasta quede unos 2-3 mm de metanol de la superficie del
filtro, se cierra la llave, y se procede a colocar 1ml de la muestra diluida y se deja
pasar hasta que se aproxime a la superficie del filtro, luego se pasa 1ml mas de
metanol observando la coloracin de la solucin que cae en el vial, si se percibe un
cambio, se procede a recoger en otro vial. En este caso obtuvimos dos coloraciones
amarilla y verdosa, las cuales son las soluciones madres (1 y 2 respectivamente).
Se rediluye la muestra tomando 1 l de la solucin madre, se coloca en un vial y se
aade 1ml de MeOH: NH3 0.1% (8:2), se homogeniza con la pipeta que se tom la
solucin madre, y se procede a colocar en el inyector del equipo para su respectivo
anlisis.
Este proceso se lo realiza por Infusin directa, donde pasar a la cmara de ionizacin
por electro nebulizacin y de sta, pasa al detector donde campos magnticos y
elctricos suspenden las molculas ionizadas, dando como resultado un espectro de
masas donde se identific los compuestos presentes en el extracto. Estas masas
observadas son la relacin de masa/carga de la molcula (m/z = m/1= m), as se pudo
identificar los compuestos en la muestra, luego se procedi a la fragmentacin por CID
(Disociacin Inducida por Colisin con helio), que consiste en seleccionar la masa y
aplicar energa lo cual har que este se rompa al colisionar con helio dando
fragmentaciones que son especficas para cada compuesto, de esta manera se evit
confusiones ya que dos compuesto pueden tener la misma masa pero jams podrn
fragmentar igual, a un compuesto se lo puede fragmentar hasta 10 veces para
confirmar.
Esta solucin se rediluy para buscar una concentracin de 1ppm (1 mg/L). Para el
MODO NEGATIVO (proceso explicado anteriormente) se emple mezcla 8:2 de
metanol al 1% y amoniaco. En MODO POSITIVO el sistema es igual al anterior, se
utiliza una mezcla fue 8:2 de metanol al 1 % y cido actico.
2.2.10.

Diseo del Gel de Portulaca oleracea.

A partir del extracto obtenido se procedi a disear la formulacin de gel para su

posterior elaboracin, procedimiento que se realiz cuidadosamente para garantizar un
producto de buena calidad. Siguiendo un modelo magistral de elaboracin a escala de
laboratorio y siguiendo las Normas de Buenas prcticas de Laboratorio.
Para llegar a la frmula ideal de nuestro producto se realiz un diseo experimental de
mezclas D-optimal de 3 componentes con restriccin. Las variables independientes
analizadas fue el porcentaje de carbopol, trietanolamina y agua, y como variable
respuesta, pH, extensibilidad y viscosidad. La tabla 1, presenta los 13 ensayos
realizados.
El diseo y procesamiento de la informacin se realiz mediante el software estadstico
DX8.

17

Tabla 1: Experimento desarrollado en el diseo del gel

STD.

RUN

10
7
9
8
3
4
11
1
13
2
12
5
6

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13

CARBOPOL
(%)
1,300
1,220
0,831
1,220
1,500
1,025
0,935
1,500
0,550
1,424
0,935
1,025
1,500

TRIETANOLAMINA
(%)
0,500
0,825
1,170
0,825
0,784
1,250
0,865
1,250
1,250
1,046
0,865
1,250
0,551

AGUA
(%)
57,000
56,755
56,799
56,755
56,516
56,525
57,000
56,050
57,000
56,330
57,000
56,525
56,749

En el Grfico 3, se describe el proceso que se realiz para la elaboracin de la

formulacin de gel.

AGITACION MANUAL

CARBOPOL
AGUA
(BAO ULTRASONICO)

VASO PRECIPITADO
(250ML)

COMPLETAR
VOLUMEN CON AGUA

EXTRACTO
MENTOL
PROPILENGLICOL
METIL Y PROPIL
PARAENOS

GEL
MEZCLAR HASTA
HOMOGENIZACION
TOTAL

Trietanolamina

Grfico 3. Proceso de elaboracin del producto (gel)

2.2.11.

Comprobacin de calidad del Gel

Se llev a cabo todos los parmetros necesarios que garanticen la calidad del proceso
de elaboracin y del producto terminado, siguiendo las normas que rigen para este tipo
de forma farmacutica. En los que se toma en cuenta el aspecto, color, homogeneidad,
consistencia, extensibilidad, pH y viscosidad.
La extensibilidad se determin colocando una placa cristal sobre una hoja de papel
milimetrado en el cual se han trazado las coordenadas que servirn de gua para
colocar en el centro de l 2 g de gel para cada formulacin, seguidamente se hace caer
de forma paralela sobre el semislido una placa de vidrio que pesa aproximadamente
380 g a una altura de 13 mm, inmediatamente se pone en marcha el cronometro por 5
minutos. Transcurrido el tiempo rpidamente se procede a realizar las mediciones de
los dimetros de la elipse formada con el calibrador de Vernier siguiendo las
18

coordenadas trazadas en el papel milimetrado (4 direcciones). Se calcul la medida de

los dimetros por la ecuacin:

( )
4

Dnde:
rn: Sumatoria de radios de la circunferencia (cm),
rp: radio promedio (cm).
Se calcul el rea total de extensin, mediante la siguiente ecuacin:

= = ()2
Dnde:
A: rea de la elipse,
E: extensibilidad del producto expresada en cm.
El ensayo se realiz a una temperatura aproximada de 25 C por triplicado (Pavn J,
2011).
La viscosidad se la realiz en el viscosmetro utilizando un usillo L4 y se emplearon 30
ml de gel en un recipiente adaptador para pequeas muestras a una velocidad de 1
rpm. Los resultados de viscosidad se obtuvieron directamente del valor que nos indica
el equipo.
2.2.12.

Envasado y etiquetado.

El envasado se realiz de manera manual en la planta piloto de la Unidad Acadmica

de la Universidad Tcnica de Machala, utilizando envases blancos, plsticos de
polietileno de alta densidad, incluyendo su tapa enroscable, de capacidad de 50 g y
llev su respectiva etiqueta con la informacin del producto terminado.
2.2.13.
Evaluacin de la actividad antiinflamatoria del extracto
etanlico.
Los grupos de ratas deben estar en buen estado de salud y en ayuno de 12 horas
antes de llevar a cabo el ensayo.
Para realizar este estudio, es necesario anestesiar a las ratas, para ello se le inyect
tiopental sdico va intraperotoneal, sabiendo que la dosis a administrar es de 40mg/Kg
de peso.
Luego se indujo la inflamacin aplicando el mtodo de edema plantar, que consiste en
la inyeccin subcutnea de una solucin de carragenina en la aponeurosis plantar de la
rata, provocando una reaccin de carcter inflamatorio, para luego evaluar la actividad
teraputica del extracto frente a un antiinflamatorio comercial, Naproxeno sdico.
Se organizaron 3 grupos de ratas, midiendo los volmenes normales de la pata
derecha posterior de la rata con un equipo manual, simulando la fundamentacin de
19

medida de un pletismmetro, que nos permiti medir el volumen de la misma, antes de

la aplicacin de carragenina.
Grupo I: Animales sin tratamiento (solo carragenina).
Grupo II: Ratas tratadas con Naproxeno sdico (blanco).
Grupo III: Animales con tratamiento del extracto obtenido de Portulaca oleracea L.
Tanto el extracto como el producto control, se aplicaron por va oral a las ratas, con la
ayuda de una cnula (grupos II y III), es muy importante la estandarizacin del ensayo
con la temperatura, tiempo. Nosotros en este caso trabajamos a una temperatura de 25
C, con intervalos de tiempo de 1 hora en cada determinacin por 4 horas.
Cada grupo est conformado por 2 ratas de ensayo, excepto el grupo I que solo se
trabajar con una sola rata que nos sirvi de referencia de la evolucin de la
inflamacin. Las mediciones se las realiz en cada rata en los intervalos de tiempo por
triplicado para obtener un promedio y la desviacin estndar.
Se determinar los resultados en porcentaje de inflamacin utilizando la frmula:
% =

0
100

Dnde:
Vt= volumen de la pata inflamada en un tiempo X.
Vo= volumen antes de la aplicacin de carragenina.
100= factor matemtico.
2.2.14.

Anlisis estadstico

Los datos fueron procesados con ayuda del software estadstico SPSS versin. 21. Los
resultados se expresarn como la media/desviacin estndar y las comparaciones se
realizaran mediante t de student o ANOVA, segn corresponda, considerando un nivel
de significacin del 5%. Previo a la aplicacin de estos test paramtricos se confirm
de igual forma la distribucin normal y la homogeneidad de varianza mediante el test
de Levene.
Se verific el cumpliendo de la distribucin normal mediante el test estadstico
Kolmogorov Smirnov.
Para evaluar las curvas de calibracin se realiz el anlisis de regresin simple lineal
con ayuda del mismo software, considerando el coeficiente de determinacin (R 2), la
significacin de la regresin (ANOVA, p menor 0.05) y el diagnstico de los residuos.

20

CAPITULO III
3. RESULTADOS Y DISCUSIN
Para obtener el gel a base de extracto de partes areas de Portulaca oleracea se
realiz previamente el control de calidad de la droga cruda y del extracto obtenido,
cuantificacin de metabolitos como flavonoides y fenoles e identificacin de
compuestos, usando alta tecnologa como es el espectrmetro de masas UHPLC
Thermo-Ultimate 3000, se llev a cabo la evaluacin de la actividad antiinflamatoria del
extracto, usando el modelo biolgico ratas Wistar del Bioterio de la Universidad Tcnica
de Machala. Mediante anlisis estadstico se identific la frmula ideal mediante una
serie de ensayos y control de calidad a cada producto, estos resultados son
representados en tablas y Grficos a lo largo de este captulo.
3.1. Caracterizacin macroscpica y morfomtrica de la droga fresca
Macroscpicamente se caracteriz un color verde oscuro brillante para las hojas que
son pecioladas, carnosas, con pice emarginado, con borde entero y de forma ovadas
dispuestas de manera alterna y tambin basal. Los tallos son de color rojo y verde
oscuro brillantes, suculentos y rastreros. Las semillas son pequeas de color negro y
de forma redondeada. Estos datos son similares a los reportados por Caldern,
Rzedowski y colaboradores en el ao del 2001(41).
Siguiendo con la identificacin de la droga se determin la longitud y el ancho de las
hojas parmetros que se muestran en la tabla 2.
Tabla 2: Resumen de las determinaciones de longitud (A) y ancho (B) para n= 100
Parmetro

Media (cm)

Des. Tpica

Coef. de Variacin

Longitud

3,38

0,60

17,75

Ancho

2,12

0,46

21,69

Las hojas estudiadas (n= 100) muestran a primera vista dimensiones distintas con
relacin a los parmetros evaluados, observando una longitud media de 3,38 cm y un
dimetro medio de 2,12 cm, de acuerdo al coeficiente de variacin el ancho de hoja a
hoja es ms variable que la longitud con valores de 17,75 para longitud y 21,69 para el
ancho.
En el Grfico 4, se pueden apreciar los histogramas de frecuencia de cada
determinacin, observando que los valores se ajustan a la distribucin normal o
campana de Gauss, para verificar lo dicho se realiz el test estadstico para prueba de
normalidad Kolmogorov Smirnov, que otorgo significaciones superiores a 0.05 para
longitud, y al contrario se demostr que esto no se cumple para el ancho con valor de p
menor a 0,05, resultados que se muestran en la tabla 3.

21

Grfico 4. Histograma de frecuencias de longitud (A) y ancho (B) de hojas de Portulaca

oleracea (n= 100)
Tabla 3: Prueba de normalidad de longitud y ancho de las hojas, (Test de KolmogorovSmirnov)

Variable

Kolmogorov-Smirnova
Estadstico

gl

Sig.

LONGITUD

,086

100

,063

ANCHO

,089

100

,049

3.2. Control de calidad de la droga seca y molida

Para caracterizar la droga se evalu los parmetros de humedad y cenizas resultados
expresados en la tabla 4, obteniendo una humedad residual igual a 6,90 % valor
promedio de las rplicas realizadas que de acuerdo a la OMS en el 2011 (36), estableci
los parmetros normales para esta determinacin, encontrndose nuestro anlisis
dentro del rango normal no mayor al 10 % aprobando este mtodo de secado.
As mismo los valores promedio para cenizas totales, solubles en agua e insolubles en
cido clorhdrico 3,03; 2,11 y 0,17 % respectivamente parmetros que permiten estimar
el contenido de minerales propios de la planta como tambin sustancias extraas como
arena, tierra o metales pesados que seran contaminantes de la droga, estos valores de
cenizas estn dentro de lo aceptable que segn la Farmacopea espaola del 2002, no
debe ser mayor al 12 % (42).
De esta manera se puede garantizar que la droga obtenida es de buena calidad y se la
puede emplear para la obtencin del extracto.

22

Tabla 4: Humedad y cenizas de las partes areas de Portulaca oleracea (media/SD)

H (%)

CT (%)

CSA (%)

CIHCl (%)

6,90/0,04

3,03/0,01

2,11/0,06

0,17/0,01

H: Humedad; CT: Cenizas Totales; CSA: Cenizas Solubles en Agua; CIHCl: Cenizas
Insolubles en cido Clorhdrico
3.3. Control de calidad del extracto
El anlisis organolptico que se puede observar en la tabla 5, nos brinda una forma de
caracterizar el extracto obtenido, presentando olor y color caracterstico de la planta y
sabor amargo que se puede relacionar con la presencia de metabolitos astringentes.
Tabla 5: Caractersticas Organolpticas del extracto etanolico de partes areas de
Portulaca oleracea

COLOR

OLOR

SABOR

ASPECTO

Verde intenso

Caracterstico a la planta

Amargo

Lquido

La caracterizacin farmacognstica del extracto representada en la tabla 6, nos indica

los valores promedios de las rplicas de cada parmetro evaluado.
Tabla 6: Parmetros de calidad del extracto (media/SD)
(%) BRIX

(%) ST

29,93/0,032

2,44/0,006

pH

5,82/0,006 1,3688/0,000

DENSIDAD
1,061/0,000

ST: Solidos Totales; R: ndice de Refraccin

El extracto present 29,93 % de Brix= valores de pH= 5,82 e indice de refaccin=
1,3688, que estan casi similares a los reprtados por Santamaria, (2011) en su
investigacin con extracto etanolico de 95 de partes areas de Portulaca oleracea,
con valores de 5,79 y 1,358 respectivamente, la misma que se llev a cabo en la
Escuela Superior Politcnica de Chimborazo donde usaron plantas recolectadas de la
ciudad de Ambato provincia de Tungurahua regin Interandina de Ecuador, mientras
que la densidad= 1,0161 g/ mL y solidos totales= 2,44 % difieren con los del autor
citado anteriormente que present valores de 0,957 g/mL y 1,27 %, indicando una
diferencia farmacognstica entre estos dos extractos obtenidos de la misma planta pero
de diferentes regiones (5).

23

3.4. Tamizaje fitoqumico

Las plantas medicinales deben sus propiedades a una variedad de metabolitos que
forman parte de ellas, el tamizaje fitoqumico representado en la tabla 7 nos muestra
los metabolitos presentes en el extracto que seran los posibles responsables de la
actividad atribuida a esta especia vegetal.
Tabla 7: Tamizaje fitoqumico del extracto
METABOLITO

ENSAYO

RESULTADO

Dragendorff

Wagner

Mayer

Flavonoides

Shinoda

Triterpenos

Lieberman-Buchard

Catequinas

Catequinas

Cumarinas

Beljet

Aminocidos

Ninhidrina

Saponinas

Espuma

Resinas

Resinas

Taninos

Cloruro frrico

Mucilagos

Mucilagos

Azucares reductores

Felhing

Compuestos grasos

Sudan III

Antocianidinas

Estructuras C3-C6-C3

Alcaloides

(-): Ausencia, (+): Presencia

El tamizaje es adems una manera de establecer cualitativamente la composicin
qumica del extracto, dando resultados positivos para la presencia de alcaloides,
flavonoides, catequinas, aminocidos, compuestos grasos, saponinas y taninos,
azucares reductores y antocianidinas.
Metabolitos como los flavonoides se les ha asignado la propiedad antiinflamatoria por
inhibir elementos que participan en el mecanismo de inflamacin impidiendo que se
produzca, as lo manifiesta Serafini y colaboradores, en el 2010 (43).

24

3.5. Identificacin cualitativa de metabolitos en Cromatografa en Capa

Delgada (CCD)
La CCD es una tcnica simple y eficaz para la identificacin de metabolitos, que tiene
como fundamento la separacin de las molculas que son arrastradas por un eluyente
mostrando distancias de corrimiento y colores especficos para cada compuesto o que
nos da una idea de lo que puede estar presente en la muestra.
Se utiliz una cmara de vidrio de 21,5 cm de altura, 23 cm x 6 cm en el rea de la
base y en la cara superior. La cmara se situ en la campana del laboratorio y se
trabaj a temperatura ambiente (25C). Se estim un tiempo de saturacin de 20 min
aproximadamente
La corrida se realiz en una cmara cromatogrfica de aproximadamente 15 20 min
de saturacin, utilizando como fase estacionaria placas se Slica Gel 60 F 254 y fase
mvil BAW (butanol, cido actico y agua) en proporcin 65: 25: 15. Demostrando as
las siguientes revelaciones:
3.5.1. Revelado Fsico
1 Revelado con luz Ultra-Violeta (UV), se observ lo siguiente:
a) Observando con luz UV a una longitud de onda de 365 nm aparece una
coloracin roja la cual es caracterstica de la clorofila tal como se muestra en el
Grfico 5.
b) En el mismo Grfico 5, se percibe una cloracin ligeramente azul a 365 nm.
c) Las manchas superiores de la placa del Grfico 7, muestran flourescencia al ser
observadas con luz UV a 254 nm.
d) La coloracin que se observa a 365 nm en el Grfico 5, no se observa al UV de
254 nm, por lo que no parece ser compuestos fenlicos, tal como se muestra en
el Grfico 6.

a)

b)

Grfico 5. Revelado de la placa con luz UV a 365 nm

25

c)

d)

Grfico 6. Revelado de la placa con luz UV a 254 nm

3.5.2. Revelados Qumicos

2 Revelado: con Dragendorff + calor resultado positivo
a) En el Grfico 7, estn mezcladas las manchas que revelaron al UV a 254 nm
(Grfico7), y con un Rf muy cercano, se puede percibir la manchita que revel
naranja al Dragendorff.
b) Tal como lo proyecta el Grfico 7, se observan manchas en revelado con
Dragendorff, lo que sugiere la presencia de alcaloides.

a)

b)

Grfico 7. Revelado con Dragendorff aplicando calor; observacin de manchas color

naranja

3 Revelado: con Cloruro Frrico (FeCl3).

Podemos percibir en el Grfico 8 con FeCl3 se observaron manchas oscuras al mismo
Rf al que el UV 254 nm mostr fluorescencia.
26

La mancha que corre cerca del frente del disolvente o fase mvil, pero que no es la
clorofila, se puede decir que se observan en dos partes:
a) A alto Rf sale la mancha oscura de FeCl3 lo que indica compuestos Fenlicos.
b) Tambin revela al UV 254 nm pero sale anaranjada con Dragendorff lo que se
sugiere alcaloides de alta polaridad y con grupos cromforos conjugados.

a)

b)

Grfico 8. Revelado con FeCl3; observacin de manchas oscuras.

4 Revelado: Con cido Sulfrico al 50 % en metanol + vainillina al 1% en
metanol.
En el Grfico 9, se observa una macha azul-verdosa con luz UV a 365 nm, que no tiene
grupos cromforos conjugados de baja polaridad, lo que podra ser saponinas.

365 nm

Grfico 9. Revelado con cido Sulfrico al 50 % en metanol + vainillina al 1% en

metanol; observacin de mancha azul verdosa.
27

3.6. Bsqueda de flavonoides mediante Espectrometra de Masas

En el grfico 10, se aprecia, en la columna de separacin RP18, el aislamiento de la
clorofila del extracto etanlico de Portulaca oleracea, que se realiz previo al anlisis
en el UHPLC, tal como se indic anteriormente en el diseo metodolgico.

Grfico 10. Separacin de la clorofila

Una tcnica de alta sensibilidad como sta, nos permite identificar compuestos
presentes en una muestra problema, en mnimas concentraciones hasta 1 pg/mL
(1ppt=10-12g), para dicho anlisis se emple el UHPLC Thermo-Ultimate 3000.
Ejecutando el mtodo de ionizacin de la muestra en modo positivo y negativo,
haciendo referencia a que generalmente para muestras de origen vegetal se trabaja en
modo negativo pero se llev a cabo tambin el modo positivo para constatar mejor la
presencia de los analitos objeto de la bsqueda, obteniendo espectros de masas que
representan los compuestos presentes en el extracto, tal y como se muestra en el
Grfico 11 y Grfico 12. Nos muestran tambien, una serie de masas detectadas en la
muestra del extracto diluido, donde cada pico corresponde a un compuesto diferente y
la altura del mismo representa los compuestos que mejor ionizaron en el modo
empleado.
Estas masas observadas son en realidad al relacin de masa del compuesto dividida
para la carga de la molcula (m/z), pero al poseer estas molculas valencia 1 ya sea en
modo positivo o negativo, el valor de Z ser 1, lo que nos deja m/1= m, esta es la que
se observa en los espectros de masas.

28

#3539 IT: 4.361 ST: 0.89 uS: 7 NL: 1.36E5

F: ITMS - c ESI Full ms [90.00-1000.00]
377.23

100
95
90
85
80
75
70
65

Relative Intensity

60
55
50
45
341.34

40

379.28

35

387.39

30

325.38

25
20
133.08

10

415.36

311.35

206.18
265.30

15

191.14
96.96

719.00

293.34

179.14

433.44

502.37
481.43

691.34
555.45 577.42

707.37

721.22
737.43

675.42

837.35

869.42 870.47

906.05

0
100

200

300

400

500

600

700

800

900

1000

m/z

Grfico 11. Espectro de masas obtenido en modo negativo

#9759 IT: 0.502 ST: 0.48 uS: 5 NL: 1.87E6
F: ITMS + c ESI Full ms [235.00-800.00]
391.13

100
95
90
85

429.25
80
75
70
65

Relative Intensity

60
55
50
45
40
413.36
35
30
25

430.29

20
15

431.27

381.21

10

278.99
268.20

316.34
314.21

797.57
679.61

365.21
432.32

351.27

523.42

478.43

553.38 537.49

611.45

655.50

699.51 717.54 743.58

787.53

0
250

300

350

400

450

500

550

600

650

700

m/z

Grfico 12. Espectro de masas obtenido en modo positivo

29

750

800

En el Grfico 13, se muestra la bsqueda de los flavonoides donde se seleccion los

compuestos que mejor ionizaron, para fragmentarlos y verificar si se trata de
flavonoides.
#3657 IT: 100.000 ST: 1.19 uS: 4 NL: 1.10E3
F: ITMS - c ESI Full ms2 341.00@cid20.00 [90.00-1000.00]
178.95

100
95
90
85
80
75
70
65

Relative Intensity

60
55
50
45
40
35
341.24

30
25
20

323.18
160.87
143.00

15
10

183.02
5
199.04

184.94 311.21
281.10
341.87

0
100

200

300

400

500

600

700

800

900

1000

m/z

Grfico 13. Fragmentacin de compuesto 341 en modo negativo

En la fragmentacin no se encontr ningn compuesto con masa similar a los
flavonoides buscados pero se encontr masas que podran corresponder a flavonoides
no reportados aun en esta especie vegetal.
Los flavonoides no siempre se presentan como sustancias puras sino tambin
combinados con azucares formando glucsidos, incluso se los encuentra combinados
entre s, pero cada compuesto tiene una forma especfica de fragmentacin, por lo es
indispensable la comprobacin mediante fragmentacin, as se evita confusiones al
hecho de que dos compuestos pueden tener la misma masa molecular pero no
fragmentaran igual.
Lo mencionado anteriormente se evidencia en el Grfico 14, donde se observa la
fragmentacin del compuesto 255 que estando en modo negativo la masa real seria
256 que supuestamente corresponde o se asemeja al flavonoide liquiritigenina, pero al
fragmentarlo se obtuvo un espectro de masas de este compuesto que no corresponden
al espectro de fragmentacin de liquiritigenina, tratndose de otro metabolito con
misma masa molecular.

30

#4718 IT: 85.219 ST: 1.37 uS: 4 NL: 8.14E1

F: ITMS - c ESI Full ms3 255.00@cid30.00 237.00@cid27.00 [65.00-1000.00]
195.06

100
95
90
85
80
75

219.13

70
65

Relative Intensity

60
55
193.15
50
45
40
35
30
25
20
237.10

15
10
5

97.10

153.02

125.08

0
100

200

300

400

500

600

700

800

900

1000

m/z

Grfico 14. Espectro de masa de la fragmentacin del compuesto 255

3.7. Cuantificacin de flavonoides en los extractos

La curva de calibracin diseada mediante el mtodo modificado de Feltrin y
colaboradores en el 2012, usando rutina como patrn representada en el grfico 15
(44)
. Los resultados estadsticos obtenidos nos asegura un buen ajuste de los datos
experimentales a la ecuacin, con un coeficiente de determinacin R2=0,9857 muy
cercano a 1. Las variables concentracin y absorbancia estn significativamente
correlacionadas con un valor de p=0,0001 en el ANOVA menor a 0,05. Se puede
constatar una buena correlacin entre concentracin y y absorbancia, demostrando la
precisin del procedimiento ejecutado y aportando confiabilidad al momento de
interpolar los valores de concentracin de flavonoides para cada absorbancia
calculados como mg de rutina/mL de extracto, dichas concentraciones son ilustradas
en la tabla 8.

31

Curva de Calibracin
0,8

y = 0,007x - 0,2818
R = 0,9857

Absorbancia

0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
100

110

120

130

140

150

mg/L

Grfico 15. Curva de calibracin, mtodo modificado de Feltrin y colaboradores (2012)

Tabla 8: Absorbancias y concentraciones de flavonoides calculados como mg de

rutina/mL
Replica

Absorbancias

Concentracin

0,568

2,425

0,568

2,425

0,566

2,419

(media/SD)

0,567/0,001

2,423/0.003

El valor promedio de flavonoides en verdolaga 2,423 mg/mL es superior a especies

vegetales como la manzanilla (0,0462 mg/mL) y el t verde (0,426 mg/mL), que
mostraron efecto antiinflamatorio importante de acuerdo a Muoz y colaboradores en Ia
investigacin realizada en el 2012 en Mxico, en la cual se atribuye el efecto
antiinflamatorio al contenido de metabolitos como fenoles, flavonoides, as mismo
flavonoides en verdolaga es inferior al reportado por Enciso y Arroyo, en el 2011 para
el matico de puna (11,5 mg/g) en su investigacin desarrollada en Lima-Per donde se
especifica que la actividad antiinflamatoria de esta especie es gracias a los flavonoides
presentes (45, 46).
De esta marera se puede sugerir el efecto antiinflamatorio reportado en verdolaga al
contenido de estos metabolitos en la planta.
3.8. Cuantificacin de fenoles en los extractos
Mediante el mtodo de Folin-Ciocalteu, se obtuvo una curva de calibracin confiable
con p= 0,0001 en el anlisis de regresin lineal una R2=0,9999 como se muestra en la
32

Grfico 16, nos garantiza buen ajuste de los datos a la ecuacin, los resultados de
fenoles totales fueron calculados en trminos de mg de cido Glico Equivalente
(GAE) por cada mL de extracto de verdolaga, se realizaron 3 rplicas obteniendo 9
absorbancias en total, la tabla 9 expone los valores medios de absorbancias y
concentracin de cada replica.

Curva de Calibracin (Folin-Ciocalteu)

0,9

y = 0,0192x - 0,091
R = 0,9999
p= 0,26

Absorbancia

0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0
0

10

20

30

40

50

mg/100mL

Grfico 16. Curva de calibracin de fenoles

Tabla 9: Absorbancias y concentraciones de fenoles calculados como mg de GAE/mL

Replica

Absorbancias

Concentracin

0,428

0,675

0,430

0,678

0,422

0,667

(media/SD)

0,427/0,004

0,673/0.005

El contenido promedio de fenoles 0,673 mg/mL observado en la tabla 9 es superior al

reportado en el 2012 por Muoz y colaboradores, para manzanilla (0,0693 mg/mL) e
inferior al del t verde (1,628 mg/mL) en la misma investigacin, donde se sugiere que
la actividad antioxidante de los fenoles tambin contribuye a que se d el efecto
antiinflamatorio (45).
De esta manera se muestra otra posible razn por la cual se ha reportado la actividad
antiinflamatoria en verdolaga, al ser los flavonoides y fenoles metabolitos que pueden
interferir en el mecanismo de inflamacin para inhibirlo o que no se produzca con
demasiada intensidad.
33

3.9. Evaluacin de la actividad antiinflamatoria del extracto

Como podemos observar en el Grfico 17, el extracto etanlico al 95% de las partes
areas Portulaca oleracea demostr poseer significativa propiedad antiinflamatoria
dando buenos resultados frente al blanco utilizado (Naproxeno Sdico), ya que logr
disminuir de manera evidente el volumen de la inflamacin de la pata izquierda del
grupo de ratas en experimentacin, en el transcurso del tiempo luego de la inyeccin
de la carragenina induciendo a la inflamacin. El Naproxeno sdico en comparacin
con el extracto resulto ser el mejor, pero estos resultados no difieren entre si
considerablemente ya que es mnima la diferencia.
Podemos percibir que el grupo de ratas tratadas con el Naproxeno sdico dentro del
transcurso de 30 minutos sufre el proceso de la inflamacin y luego decae en las
prximas horas. En cambio las ratas tratadas con el extracto etanlico al 95% dentro
del lapso de los 30 minutos no permite que se d la inflamacin total, si no que va
aumentado hasta las 2 horas y luego disminuye notoriamente en las siguientes horas
casi al punto de disminucin del blanco empleado.
Tambin se utiliz un grupo de ratas tratadas solo con carragenina y observamos que
el volumen de la inflamacin aumenta con el paso del tiempo.
0,35

Carragenina
Extracto
Naproxeno Sdico

Volumen (mL)

0,30
0,25
0,20
0,15
0,10
0,05
0,00
0

Tiempo (horas)

Grfico 17. Evaluacin de la actividad antiinflamatoria del extracto

3.10.
Diseo experimental desarrollado para la seleccin de formulacin
ptima
El desarrollo de esta nueva formulacin incluy un diseo D-optimal donde se evalu la
influencia de la variacin de carbopol, trietanolamina y agua, en la consistencia y
calidad final de la preparacin. En los 13 experimentos realizados se logr obtener
geles de variada consistencia, no observndose en ningn caso signos de inestabilidad
fsica o qumica. El color verde intenso, tpico del extracto, fue homogneo en todas las
preparaciones as como el olor caracterstico del mentol. Todas las variables
respuestas evaluadas cumplieron con una distribucin normal. Las probabilidades (p)
34

obtenidas tras aplicar el test de Kolmogorov Smirnov fueron superiores a 0,05. Por otro
lado, el anlisis de cada uno de las variables respuestas evaluadas: su ecuacin y
parmetros de bondad de ajuste y significacin de cada modelo se resumen en la tabla
10, 11 y 12.
Tabla 10: Parmetros evaluados en el diseo D-Optimal
A:Carbopol

B:Trietanolamina

C:Agua

1.300

0.500

1.220

pH

Extensibilidad
cm2

Viscosidad
m Pa.s

57.000

5.04

15.797

419103

0.825

56.755

5.73

14.184

304066

0.831

1.170

56.799

6.45

22.542

198575

1.220

0.825

56.755

6.19

14.857

431208

1.500

0.784

56.516

5.43

11.565

513544

1.025

1.250

56.525

6.48

17.523

560371

0.935

0.865

57.000

6.12

20.58

136083

1.500

1.250

56.050

6.25

10.136

0.550

1.250

57.000

7.24

40.883

107797

10

1.424

1.046

56.330

5.75

12.897

490061

11

0.935

0.865

57.000

6.02

21.062

256030

12

1.025

1.250

56.525

6.42

16.212

584576

13

1.500

0.551

56.749

5.02

13.587

342570

Run

Tabla 11: Evaluacin de la distribucin normal de las variables respuestas

Kolmogorov-Smirnova
Estadstico

gl

Sig.

pH

,140

12

,200*

Extensibilidad

,224

12

,098

Viscosidad

,137

12

,200*

35

Tabla 12: Resumen de los modelos ajustados del diseo D-Optimal

Modelo ajustado

Sig. (p)

Prdida de
ajuste (p)

ajustado

pH = -0.889*Carbopol
+1.591*Trietanolamina + +0.097*Agua

0.0001

0.5588

0.9193

Extensibilidad=2132.161*Carbopol+246.
858*Trietanolamina+1.666*Agua 42.208*Carbopol*Trietanolamina38.08843*Carbopol * Agua

0.0001

0.0736

0.9837

Viscosidad=5.96413E+005*Carbopol
+4.42934E+005* Trietanolamina12686.24348 * Agua

0.0071

0.2278

0.9669

El primer parmetro analizado fue el pH, este es sumamente importante pues se

encuentra asociado directamente a la formacin del gel. El carbopol es un polmero del
cido acrlico, de alto peso molecular (grupos COOH libres) que se neutraliza con
hidrxidos alcalinos, o con aminas dando lugar a un gel transparente, brillante y no
graso, lo cual favorece la absorcin de los principios activos incorporados. La
incorporacin de la cantidad adecuada de trietanolamina es esencial, su defecto no
permitir la adecuada formacin del enrejado tridimensional y un exceso ser,
igualmente, desfavorable. Adems, de la importancia del pH en la estabilidad de la
preparacin y en su adecuacin a las condiciones de la piel.
El pH obtenido en cada corrida, se encontr en el rango entre 5.02 y 7,24, valores
cercanos a la acidez caracterstica de la piel. Segn la literatura consultada, el valor del
pH de la piel es variable, segn la zona del cuerpo, la edad e incluso algunos autores
incluyen la raza. Su valor promedio es aproximadamente 5,5. La mayora de las
preparaciones dirigidas a la aplicacin en la piel su pH oscila desde la neutralidad hasta
ligeramente cido, pues tambin se consideran otros elementos como el pH de mxima
estabilidad y biodisponibilidad. En el caso particular del Carbopol, como se haba
comentado, su viscosidad final es dependiente del pH, se recomienda trabajar a pH
entre 6.3 - 7.5 (30).
El Grfico 18 presenta el modelo lineal al cual se ajustaron los resultados, con una
probabilidad de 0.0001 (p << 0,05), un valor de PRESS de 0.62, inferior al resto de los
modelos. El anlisis de prdida de ajuste ofreci un resultado de probabilidad igual a
0.5588, lo que indica que el error de los residuos es estadsticamente igual o similar al
error puro de las rplicas. El R2 ajustado, indica que el 91,9% de la variabilidad de los
resultados obtenidos es explicado por este modelo lineal.
El Grfico 19, muestra las representaciones de trazas y de contorno correspondiente al
pH, donde es evidente que el incremento del carbopol en las preparaciones tiende a
disminuir este parmetro y un efecto contrario se obtiene con el incremento de la
trietanolamina. Este comportamiento es lgico teniendo en cuenta las propiedades
cidas y alcalinas, de estos compuestos. El agua destilada prcticamente mantiene
36

constante los valores del pH al aumentar su proporcin, lo que indica que no influye
sobre este parmetro.

Design-Expert Software
Component Coding: Actual
pH

Trace (Piepel)
7.5

Actual Components
A: Carbopol = 1.159
B: Trietanolamina = 0.981
C: Agua = 56.659

A
7

B
p H

6.5

5.5

B
5

-0.400

-0.300

-0.200

-0.100

0.000

0.100

0.200

0.300

Deviation from Reference Blend (L_Pseudo Units)

Grfico 18. Modelo lineal de ajuste correspondiente al pH, en relacin al

comportamiento del carbopol frente a la trietanolamina

A: Carbopol
2.250

Design-Expert Software
Component Coding: Actual
pH
Design Points
7.24
5.02

X1 = A: Carbopol
X2 = B: Trietanolamina
X3 = C: Agua

5.5

56.050
6

0.500

6.5

2.200
B: Trietanolamina

0.550

57.750
C: Agua

pH

Grfico 19. Grficos de traza y contorno para la variable pH

El anlisis en el diseo D-Optimal, de la variable extensibilidad se muestra en el Grfico
20. Donde se demostr, que los resultados obtenidos se ajustan a un modelo
cuadrtico, con una probabilidad de ajuste de 0.0001 (p << 0,05), unido a un menor
valor de PRESS de 131.59. Por otro lado, el anlisis de prdida de ajuste ofreci un
resultado de probabilidad igual a 0.2278. En los grficos de trazas y contorno (Grfico
37

21) correspondientes se visualiza como el incremento del Carbopol (componente A)

disminuye los valores de extensibilidad, similar a aumentar consistencia, desde
aproximadamente -0,30 hasta 0,30. De manera contraria, el incremento del agua en las
preparaciones, como es lgico, trae aparejado un ligero incremento del rea de
extensibilidad. El efecto de la trietanolamina es el menos marcado de los tres
componentes estudiados.
Design-Expert Software
Component Coding: Actual
Extensibilidad

Trace (Piepel)
A

40

Actual Components
A: Carbopol = 1.159
B: Trietanolamina = 0.981
C: Agua = 56.659

E x te n s ib ilid a d

35

30

25

20

B
B

15

A
C
10

-0.400

-0.300

-0.200

-0.100

0.000

0.100

0.200

0.300

Deviation from Reference Blend (L_Pseudo Units)

Grfico 20. Diseo D-Optimal de la variable extensibilidad

A: Carbopol
2.250

Design-Expert Software
Component Coding: Actual
Extensibilidad
Design Points
40.883
10.136

X1 = A: Carbopol
X2 = B: Trietanolamina
X3 = C: Agua

56.050

0.500
2
2

15

20

25
30
35

2.200
B: Trietanolamina

0.550

57.750
C: Agua

Extensibilidad

Grfico 21. Grficos de traza y contorno para la variable extensibilidad

De igual manera en el Grfico 22, se presentan los resultados de la bondad de ajuste
de la variable Viscosisdad donde se demostr, que los resultados obtenidos se ajustan
a un modelo lineal, con una probabilidad de ajuste de 0.0071 (p << 0,05), unido a un
menor valor de PRESS de 1.944E+011.. Por otro lado, el anlisis de prdida de ajuste
ofreci un resultado de probabilidad igual a 0.0736, lo que indica que no hay prdida de
ajuste en el sistema. En los grficos de trazas y contorno (Grfico 23) correspondientes
se visualiza como el incremento del Carbopol (componente A) aumenta los valores de
viscosidad desde aproximadamente -0,30 hasta 0,30. De manera contraria, el
incremento del agua en las preparaciones, como es lgico, trae aparejado una
disminucin de esta variable, por tanto, de la consistencia de los geles.

38

Design-Expert Software
Component Coding: Actual
Viscosidad

Trace (Piepel)
800000

Actual Components
A: Carbopol = 1.159
B: Trietanolamina = 0.981
C: Agua = 56.659

V is c o s id a d

700000

600000

A
500000

B
400000

B
300000

C
200000

100000

-0.400

-0.300

-0.200

-0.100

0.000

0.100

0.200

0.300

Deviation from Reference Blend (L_Pseudo Units)

Grfico 22. Modelo lineal de ajuste de la variable Viscosisdad

A: Carbopol
2.250

Design-Expert Software
Component Coding: Actual
Viscosidad
Design Points
584576
107797

X1 = A: Carbopol
X2 = B: Trietanolamina
X3 = C: Agua

700000
600000

56.050

0.500

500000
400000
2
300000
2
2

200000

2.200
B: Trietanolamina

0.550

57.750
C: Agua

Viscosidad

Grfico 23. Grficos de traza y contorno para la variable viscosidad

3.11.

Optimizacin del diseo D-Optimal

En la optimizacin de la formulacin se utiliz un procedimiento numrico, en el cual se

asign un mximo de importancia a todas las variables. Los criterios de optimizacin
aparecen en la tabla, donde se busc analoga en estos parmetros de un gel de
referencia de la Bayer (Apronax Gel) que tiene un valor de extensibilidad de
26,207/0,024 cm2, pH 7,13/0,01 y la viscosidad de 1888478/16095,210 m Pa.s.
Las soluciones propuestas por el software, que resultaron con un 100 % de
deseabilidad, se muestran en la tabla 13.

39

Tabla 13: Criterios de optimizacin y soluciones obtenidas.

Goal

Lmite
inferior

A:Carbopol

en rango

B:Trietanolamina

Limite

Peso

superior

Peso
inferior

superior

0.55

1.5

en rango

0.5

1.25

C:Agua

en rango

56.05

57

pH

en rango

Extensibilidad

en rango

20

30

Viscosidad

en rango

150000

300000

Nombre

Importancia

Soluciones

Carbop

Trietanolami

ol

na

Agua

pH

Extensibilida

Viscosida

deseabilidad

0.806

1.008

56.985

6.4288

26.0437

204535

1.000

0.831

1.170

56.799

6.6463

24.3234

293465

1.000

0.728

1.250

56.822

6.8665

29.2071

267075

1.000

0.935

0.865

57.000

6.0880

21.2637

217639

1.000

0.872

1.021

56.907

6.3835

23.0473

250344

1.000

0.874

1.094

56.832

6.4887

22.6576

284948

1.000

0.930

1.022

56.848

6.3273

20.7033

286183

1.000

0.858

0.957

56.985

6.3015

23.9265

212628

1.000

0.760

1.095

56.945

6.6041

27.9744

216095

1.000

A partir de estos resultados se seleccion la formulacin 7 para el desarrollo de nuestro

gel, aunque en principio cualquiera de las soluciones anteriores satisface al 100%
nuestros requerimientos.
3.12.

Escalado

A partir de los resultados obtenidos se procedi a preparar tres lotes a escala de

laboratorio de la formulacin 7, seleccionada en el diseo. Durante el proceso de
elaboracin no se presentaron dificultades que incidieran de forma negativa en la
calidad del producto final, mantenindose durante todo el proceso, el mismo esquema
de trabajo diseado para las formulaciones anteriores.
Los geles elaborados presentaron buena calidad tecnolgica, con una apariencia
similar a los obtenidos en el desarrollo del diseo.
La tabla 14 nos muestra las propiedades organolpticas que caracterizan el producto
llamado GV7-PLUS presentando un color propio del extracto y de la planta, no fue
40

necesario usar colorante predominando as lo natural en el gel, presenta una buena

homogeneidad, untuosidad y sin presencia de grumos.
Tabla 14: Determinacin de parmetros organolpticos del gel GV7-PLUS
LOTE

ASPECTO

COLOR

OLOR

GRUMOS

UNTUOSIDAD
AL TACTO

Homogneo

Verde
claro

Caracterstico a la
planta y mentol

Negativo

Penetrante

Homogneo

Verde
claro

Caracterstico a la
planta y mentol

Negativo

Penetrante

Homogneo

Verde
claro

Caracterstico a la
planta y mentol

Negativo

Penetrante

En la tabla 15, se muestran los parmetros de control de calidad organolpticos

realizados de los 3 lotes de la formulacin 7, coincidiendo entre s los resultados
obtenidos, con una buena apariencia fsica y tecnolgica.
En la misma tabla, podemos observar la continuacin de los parmetros de calidad
fsicos de los 3 lotes manufacturados independientemente con un contenido de 30 g.
En cuanto al parmetro de extensibilidad en comparacin con el blanco utilizado
(Apronax), los valores de los tres lotes no coinciden al del blanco, el cual consta con
una extensibilidad mayor; siendo el lote 1 y el lote 3 los que coinciden entre s de
manera casi exacta (23,43 y 23,21 cm2 respectivamente) y se aproximan ms al
Apronax gel (26,207 cm2) en comparacin con el lote 2 que tiene una extensibilidad
ms baja (20,63).
En cuanto al pH de las formulaciones, as mismo los lotes 1 y 3 poseen valores
similares, siendo el lote 2 con pH ms bajo en comparacin con el resto de las
determinaciones, y se aproximan al pH del blanco utilizado. Es importante recalcar que
el rango de pH (nivel tpico) a alcanzar en las formulaciones es de 5,5 7,5, lo que
quiere decir que estos productos se encuentran dentro de los parmetros establecidos.
Referente a la viscosidad, el lote 2 y 3 tienen una viscosidad casi semejante. Ahora en
comparacin con el Apronax gel se diferencian significativamente siendo ste menos
viscoso que los productos elaborados ya que posee una viscosidad de 1888478 m
Pa.s.
Tabla 15: Extensibilidad, pH, viscosidad y contenido del gel GV7-PLUS (media/SD)

LOTE

EXTENSIBILID
AD (cm2)

pH

VISCOSIDAD (m Pa.s)

CONTENIDO
(g)

23,43/0,010

6,50/0,100

214532/16037,562

30

20,63/0,026

6,37/0,026

283955/10570,031

30

23,21/0,026

6,51/0,015

266843/16342,018

30

41

CAPTULO IV
4. CONCLUSIONES

La determinacin de algunos parmetros farmacognsticos, tales como

humedad, cenizas totales, sustancias solubles, en la droga cruda cumpli con
los parmetros establecidos en la bibliografa.
Se obtuvo por el mtodo de percolacin un extracto etanlico de las partes
areas de Portulaca oleracea.
La determinacin del control de calidad del extracto etanlico de las partes
areas de Portulaca oleracea, cumpli con los parmetros de referencia.
La evaluacin qumica mediante tamizaje fitoqumico y placa delgada sugiri la
presencia de flavonoides, catequinas, aminocidos, alcaloides, compuestos
grasos, saponinas y taninos.
El estudio de Espectrometra de masas sugiere la presencia de flavonoides aun
no reportados en esta especie vegetal.
La cuantificacin de flavonoides y compuestos fenlicos en el extracto mediante
el mtodo de AlCl3 y Folin Ciocalteu, result valores intermedios.
El ensayo preclnico del extracto en ratas, mostr un efecto antiinflamatorio
similar frente al control positivo.
Se desarroll un gel con el extracto etanlico de verdolaga con adecuadas
caractersticas fsicas y tecnolgicas.

42

CAPTULO V

5. RECOMENDACIONES

Iniciar investigaciones respecto a la comprobacin de otras propiedades

teraputicas de la Portulaca oleracea, tales como cicatrizante, antioxidante,
hipoglucemiante, entre otras.

Identificar qumicamente los flavonoides encontrados mediante tcnicas

analticas tales como espectrometra de masas y resonancia magntica nuclear.

Realizar estudios de estabilidad y control microbiolgico a las formas

farmaceticas.

Desarrollar nuevos fitomedicamentos a partir de esta planta, que permitan

incrementar el potencial que podra proveer esta especie endmica.

Realizar un estudio de inversin, a fin de conocer la factibilidad econmica de

industrializacin de estos fitofrmacos.

Realizar estudios comparativos con especies cultivadas en otros lugares del

Ecuador, a fin de conocer si existe dependencia de la zona de cultivo, sobre su
composicin qumica, efectos preclnicos y farmacolgicos.

43

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. Carmbula P. Consecuencias del uso de antiinflamatorios [Internet]. 2011;
[Citado
16
Agos
2015].
Disponible
en:
http://www.sanar.org/farmacos/consecuencias-uso-antiinflamatorios
2. Rodrguez F. Evidencias para el uso de antiinflamatorios no esteroideos
tpicos. Revista Clnica de Medicina de Familia. 2013; 6(3): 152-159.
3. Mubashir M, Bahar A, Showkat R, Bilal Z. Portulaca oleracea L. A Review.
Journal of Pharmacy Research. 2011; 4(9): 3044-3048.
4. Lee AS, Kim JS, Lee YJ, Kang DG, Lee HS. Anti-TNF- activity of Portulaca
oleracea in vascular endothelial Cells. International Journal of Molecular
Sciences. 2012; 13(5):5628-5644.
5. Santamara LM. Evaluacin de la actividad antiinflamatoria de extractos de
verdolaga (Portulaca oleracea) en ratas (Rattus novergicus) con edema
inducido por carragenina, en el bioterio Espoch [Tesis].
Riobamba
(Ecuador): Escuela Superior Politcnica de Chimborazo; 2011.
6. Zhao R, Gao X, Cai Y, Shao X, Jia G, Huang Y, et al. Antitumor activity of
Portulaca oleracea L. polysaccharides against cervical carcinoma in vitro
and in vivo. Carbohydr Polym. 2013; 96(2): 376-83.
7. Pez A, Pez P, Gonzlez M, Vera A,
Crecimiento, carbohidratos solubles y
(Portulaca oleracea L.) sometida a tres
Cientficas y humansticas de Luz de la
Universidad del Zulia. 2007; 24(4): 642-660

Ringelberg D, Tschaplinski T.
cidos grasps de verdolaga
niveles de radiacin. Revistas
Facultad de Agronomia de la

8. Caigueral, S & Vila, R. (2005). La Fitoterapia como herramienta

teraputica. Ginecologa y Obstetricia Clnica, 6(1), 43-51.
9. Heinze, G & Ontiveros, M. (1998). La fitofarmacologa como tratamiento
alterno en psiquiatra. Salud Mental, 21(6).
10. Alonso, J. (2013). Avances de Fitomedicina.
11. Buitrn X. Ecuador: uso y comercio de plantas medicinales, situacin actual
y aspectos importantes para su conservacin. TRAFFIC Internacional.
Reino Unido; 1999.
12. Chan K, Islam MW, Kamil M, Radhakrishnan R, Zakaria MN, Habibullah
M, et al. The analgesic and anti-inflammatory effects of Portulaca oleracea
L. subsp. Sativa (Haw.) Celak. J Ethnopharmacol. 2011; 73(3): 445-51.

13. Moneim A. The neuroprotective effects of purslane (Portulaca oleracea) on

rotenone-induced biochemical changes and apoptosis in brain of rat.
Pubmed.
2013;12(6):830-41.
Disponible
en:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23844694
14. Carmona J, Gil R, Rodrguez M. Descripcin taxonmica, morfolgica y
etnobotnica de 26 hierbas comunes que crecen en la ciudad de MridaVenezuela. Boletn Antropolgico [Revista en internet]. 2008; 26(73): 113129. Disponible en:
http://www.redalyc.org/pdf/712/71217219001.pdf
15. Yazici I, Trkan I, Sekmen A, Demiral T. Salinity tolerance of purslane
(Portulaca oleracea L.) is achieved by enhanced antioxidative system, lower
level of lipid peroxidation and proline accumulation. Science Direct. 2007;
61(1):
49-57.
Disponible
en:
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0098847207000597
16. Oliveira I, Valento P, Lopes R, Andrade P, Bento A, Pereira J.
Phytochemical characterization and radical scavenging activity of Portulaca
oleraceae L. leaves and stems. ScienceDirect. 2009; 92 (2): 129-134.
Disponible
en:
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0026265X09000204
17. Palaniswamy U, McAvoy R, Bible B. Stage of harvest and polyunsaturated
essential fatty acid concentrations in purslane (Portulaca oleraceae) leaves.
Pubmed.
2001;49(7):3490-3.
Disponible
en:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11453797
18. Liu L, Howe P, Zhou Y, Xu Z, Hocart C, Zhang R. Fatty acids and carotene in Australian purslane (Portulaca oleracea) varieties.
ScienceDirect.
2000;
893(1):
207-213.
Disponible
en:
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0021967300007470
19. Xu X, Yu L, Chen G. Determination of flavonoids in Portulaca oleracea L. by
capillary electrophoresis with electrochemical detection. ScienceDirect.
2006;
41(2):
493-499.
Disponible
en:
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0731708506000136
20. Sakai N, Inada K, Okamoto M, Shizuri Y, Fukuyama Y. Portuloside A, a
monoterpene glucoside, from Portulaca oleracea. ScienceDirect. 1996;
42(6):
1625-1628.
Disponible
en:
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0031942296002026
21. Xiang L, Xing D,Wang W, Wang R, Ding Y, Du L. Alkaloids from Portulaca
oleracea L.ScienceDirect. 2005; 66(21): 2595-2601. Disponible en:
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0031942205004176
22. Anusha M,
Venkateswarlu V,
Prabhakaran S,
Shareen B,
Pushpa
K, Ranganayakulu D Hepatoprotective activity of aqueous extract of

Portulaca oleracea in combination with lycopene in rats. Pubmed. 2011;

43(5):
563567.Disponible
en:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3195128/
23. Mohamed A, Ahmed E, Moniem A, Al-Quraishy S, Awadallah R. Antioxidant
effect of purslane (Portulaca oleracea) and its mechanism of action.
AcademicJournals.
2011;
5(9):
1589-1563.
Disponible
en:
http://www.academicjournals.org/article/article1380550022_Dkhil%20et%20
al.pdf
24. Rashed A, Afifi F, Disi A. Simple evaluation of the wound healing activity of
a crude extract of Portulaca oleracea L. (growing in Jordan) in Mus
musculus JVI-1. Science Direct. 2003; 88:131-136. Disponible en:
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0378874103001946
25. Lim Y, Quah E. Antioxidant properties of different cultivars of Portulaca
oleracea. ScienceDirect. 2007; 103(3): 734-740. Disponible en:
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0308814606007278
26. Radhakrishnan R, Zakaria M, Islam M, Chen H, Kamil M, Chan K, Al-Attas
A. Neuropharmacological actions of Portulaca oleraceae L v. sativa (Hawk).
Pubmed.
2001;
76(2):171-6.
Disponible
en:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11390132
27. Gonzalez, A. Obtencin de Aceites Esenciales y extractos etanolicos de
plantas del Amazonas. Universidad Nacional de Colombia. 2004.
28. Orozco, M. Eleccin de las condiciones ms adecuadas para la obtencin
de extractos de plantas superiores con actividad sobre una cepa de
Staphylococcus aureus resistente. Memoria para optar por el Grado de
Maestra en Ciencias con Orientacin Terminal en Qumica Biomdica,
universidad de Nuevo Len, Nuevo len, Mxico. 2004.
http://www.biodiversidad.gob.mx/publicaciones/librosDig/pdf/Flora_del_Valle
_de_Mx1.pdf
29. Juve. J, Viscasillas. A, Del Pozo A. Geles en dermofarmacia: conceptos
generales
y
elementos
para
su
formulacin.
2007
http://www.auladelafarmacia.com/resources/files/2011/8/22/1313999897544
_revAulFarm_migr_AULA_delafarmacia_N36__Medicamentos_y_Servicios_Profesionales_2.pdf
30. Rowe R, Sheskey P, Quinn M, editors. Handbook of Pharmaceutical
Excipients. 6th ed. London: RPS; 2009.
31. Gmez H, Gonzlez K,Medina J. Actividad Antiinflamatoria de Productos
Naturales. Bol Latinoam Caribe Plant Med Aromat. 2011; 10(3):182 217.

32. Fridovich I. Superoxide anion radical (O2-.), superoxide dismutases, and

related matters. J Biol Chem. 1997; 272(30):18515-7.
33. Nathan F. Atherosclerosis across 4000 years of human history: the Horus
study of four ancient populations. 1987
34. Ros L, Recio M, Mez S, Giner R. (2000). Natural triterpenoids as antiinflammatory agents. Studies in Natural Products Chemistry: Bioactive
Natural Products. vol. 22. (Eds.), Holanda, Elsevier, Amsterdam, 2000; p.
93143.
35. Chakraborty A, Devi R, Rita S, Sharatchandra K. and Singh T. 2004.
Preliminar y studies on antiinflammatory and analgesic activities of
Spilanthes acmella in experimental animal models. Indian J Pharmacol
36:148-150
36. World Health Organization (WHO). Quality control methods for herbal
materials; 2011.
37. Miranda M, Cuellar A. Manual de Prcticas de Laboratorio. Farmacognosia
y Productos Naturales. UH. Instituto de Farmacia y Alimentos. Cuidad de
La Habana, Cuba. 2000.
38. Miranda M, Cuellar A. Farmacognosia y Productos Naturales. UH. Instituto
de Farmacia y Alimentos. Cuidad de La Habana, Cuba. 2001.
39. Bruneton J. (2001) Elementos de Fitoqumica y Farmacognosia. Editorial
Acribia, Zaragoza-Espaa.
40. Pavn J, Valds L, Prez P. Diseo y desarrollo de dos mascarillas faciales
para el acn con quitina como sustancia bioactiva. Revista Cubana de
Farmacia, Ciudad de La Habana. 2011; 45(2):251-263. Disponible en:
http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S003475152011000200010&script=sci_arttext
41. Caldern G. Aizoaceae. In: Flora fanerogmica del Valle de Mxico. 2 ed.
139-142. 2001.
42. Real Farmacopea Espaola. Ministerio de Sanidad y Consumo. 2da ed.
Madrid: 2002.
43. Serafini M, Peluso I, Raguzzini A. Flavonoids as anti-inflammatory agents.
Proc Nutr Soc. 2010; 69(3):273-278
44. Feltrin A, Boligon V, Janovik M. Antioxidant Potential, Total phenolic and
Flavonoid contents from the stem bark of Guazum aulmifolia Lam. Asian.
Journal of Biological Sciences. 2012; 5(5):1-5.

45. Muoz E, Rivas K, Loarca M, Mendoza S, Reynoso R, Ramos M.

Comparacin del contenido fenlico, capacidad antioxidante y actividad
antiinflamatoria de infusiones herbales comerciales. Revista Mexicana de
Ciencias Agrcolas. 2012; 3(3): 481-495.
46. Enciso E, Arroyo J. Efecto antiinflamatorio y antioxidante de los flavonoides
de las hojas de Jungia rugosaLess (matico de puna) en un modelo
experimental en ratas. An Fac med. 2011; 72(4):231-237.
47. Mendoza L, Salvatierra G, Frisancho O. Perfil del consumidor de
antiinflamatorios no esteroideos en Chiclayo y Cajamarca, Per. Scielo.
2008; 25(4): 1728-5917.
48. Uprety Y, Asselin H, Dhakal A, Julien N. Traditional use of medicinal plants
in the boreal forest of Canada: review and perspectives. Journal of
Ethnobiology and Ethnomedicine. 2012; 8(7).
49. Palaniswamy U, Bible B, McAvoy R. Oxalic acid concentrations in Purslane
(Portulaca oleraceae L.) is altered by the stage of harvest and the nitrate to
ammonium ratios in hydroponics. ScienceDirect. 2004; 102(2): 267-275.
Disponible
en:
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0304423804000536