BIODEGRADACION DE PLASTICO POR Rhyzopus sp

Mara Teresa GONZALEZ CRUZ ; Gabriel CAMARENA GUTIERREZ

Metodologa Cientfica III; Unidad de Morfologa y Funcin. FES Iztacala, UNAM.
Av. De los Barrios No. 1 Los Reyes Iztacala, Tlalnepantla, 54090 Mxico
RESUMEN
Los plsticos son polmeros extremadamente estables y no entran fcilmente en los
ciclos de degradacin de la biosfera. El polietileno de alta densidad junto al polietileno
de baja densidad son los plsticos sintticos ms utilizados. Son lentos de degradar en
ambientes naturales, provocando graves problemas ambientales.
Recuperamos bolsas de plstico de un basurero, en el laboratorio separamos una
comunidad de hongos adherida a las bolsas, despus se aisl un hongo del gnero
Rhyzopus. Se sembr Rhyzopus sp. sobre tiras de plstico de baja densidad en agar.
Bajo el microscopio se observ que el hongo crece sobre el plstico generando
cambios en el color, corrosin de la superficie, formacin de agujeros o grietas en el
plstico. Nuestros resultados sugieren que los hongos del gnero Rhyzopus sp. forman
parte de una comunidad multicelular que puede ser ms eficiente en la degradacin de
plstico de baja densidad.
Palabras clave: biodregradacin de plsticos, Rhyzopus, plstico

POLYETHILENE BIODEGRADATION BY Rhyzopus sp

ABSTRACTS
Plastics are polymers extremely stable and not easily fit into the cycles of degradation
of the biosphere. Both, the high density polyethylene and low density polyethylene are
the most widely used synthetic plastics. They are slow to degrade in natural
environments, causing severe environmental problems.
Plastic bags was recovered from a garbage dump then we separate a fungi community
attached to the bags, then isolated a Rhyzopus fungi. Rhyzopus were seeded over

plastic of low density strips on agar. Under the microscope it was observed that the
fungus grows on the plastic creating changes in color, etching, formation of holes or
cracks in the plastic. Our results suggest that fungi of the genus Rhyzopus sp. form a
mutlcellular community that can be more efficient in the degradation of low density
plastics.
Key words: plastics biodegradation, Rhyzopus, plastic

INTRODUCCION
Se ha reconocido como un problema grave la presencia de plsticos y polmeros
sintticos en las aguas residuales y en el suelo. Algunos tipos de plstico son
biodegradables, y sus mecanismos de degradacin ahora empiezan a ser claros. La
biodegradacin es el proceso mediante el cual las sustancias orgnicas se eliminan o
transforman por la accin de organismos vivos. El trmino biodegradacin se utiliza a
menudo en relacin con la ecologa, la gestin de residuos, la remediacin
(bioremediacin) de los materiales de plstico (Gpferich, 1997). Los microorganismos
son responsables de la mayora de la degradacin de plsticos (Atagana, et al., 2004),
y los factores abiticos, como la fotodegradacin o hidrlisis desempean un papel muy
secundario (Dietrich, 1990, Sasek, et al., 2003).
Durante la degradacin, las exoenzimas de microorganismos descomponen polmeros
complejos a molculas ms pequeas de cadenas cortas, por ejemplo, oligmeros,
dmeros y monmeros, que son lo suficientemente pequeos para pasar las
membranas semi-permeables de los hongos, y luego para ser utilizados como fuentes
de carbono y energa. Cuando los productos finales son el CO2, H2O, o CH4, la
degradacin se llama mineralizacin (Frazer, 1994; Hamilton et al., 1995).
Se ha encontrado que el desarrollo de comunidades microbianas multicelulares
conocidas como biopelculas (biofilms), adheridas a las superficies de residuos
sintticos, han resultado ser poderosos agentes degradantes en la naturaleza,
mostrando una mayor resistencia a los agentes antimicrobianos. Tambin en la mayora
de los ambientes naturales y artificiales, la mayora de las poblaciones microbianas

forman biopelculas sobre superficies slidas (Atkinson, 1974) y su actividad metablica

es superior a la de los organismos individuales (Kirchman, 1982).
Por lo tanto, hay grandes posibilidades de desarrollo de una tecnologa de biopelcula
para una mayor biodegradacin de polmeros. En este estudio, nuestro objetivo fue
aislar e identificar hongos que degradan plstico, asociados con las bolsas de
polietileno que se utilizan en los supermercados y que son depositadas en los
basureros.
Material y Mtodo

En un basurero al aire libre sobre el Ro de los Remedios, Naucalapan, Estado de

Mxico, se extrajeron 15 muestras de bolsas de plstico con biopelculas visibles,
enterradas a un metro de profundidad. Las muestras se guardaron en bolsas de papel y
fueron llevadas al laboratorio. Se lavaron las bolsas de plstico con agua destilada
estril, quitando todos los residuos posibles, despus las bolsas se sumergieron una
solucin de cloramfenicol a 0.5mg/ml en agua destilada estril, sin agitacin por 60
minutos, para eliminar las bacterias presentes en la biopelcula. Posteriormente se
sumergieron las bolsas en agua destilada estril por 30 minutos (Mndez R., 2007).
Se cortaron tiras de las bolsas de plstico alrededor de una biopelcula visible y se
sembraron en cajas de Petri con agar Czapeck- Dox a pH 5,0 al que se le adicion
extracto de levadura al 3% y se incubaron a 30C por 48 horas (Mndez R., 2007) .
Despus se tom una muestra del consorcio de hongos en la caja de Petri y se
realizaron diluciones seriadas y se sembraron en papa dextrosa pH 5 y se incubaron a
37 C por 48 horas (Koneman W. et al., 1985). Para la obtencin de colonias puras de
hongos, se realiz la tcnica de microcultiv en porta objetos (Koneman W. et al.,
1985). Se extrajeron crculos de medio agar glucosa Sabouraud, y se colocaron en el
centro de un porta objetos estril; con una asa de siembra se tom una muestra de la
caja con la mayor dilucin y se deposit en la orilla del crculo de agar y se coloc un
cubreobjetos

Posteriormente el porta objetos se coloc dentro de una caja de Petri que contena
papel filtro estril y encima una varilla de vidrio, esto con la finalidad de mantener el
portaobjetos elevado sobre la superficie de la caja, se cerr la caja y se incubo a
temperatura ambiente por 5 das.
Al da cinco se observ el crecimiento de hongos en los portaobjetos y en los casos
donde se observaron dos o ms tipos de hongos, se tom una muestra de cada uno y
se sembraron en portaobjetos como se indic antes. Este proceso se repiti hasta
observar el crecimiento de una colonia homognea de hongo en el portaobjetos.
Generalmente los hongos se adhieren al cubreobjetos, el cual se retir y se coloc
sobre un portaobjetos que tena una gota de azul de anilina en lactofenol, y los
montajes se preservaron sellando los bordes del cubreobjetos con esmalte de uas
transparente.

Con estas laminillas se observaron las caractersticas morfolgicas en

un microscpio Nikon. La identificacin de los hongos encontrados se realiz siguiendo

a Koneman et al., (1985) y Frutis, et al., (2009).
Actividad del hongo sobre el plstico.
Seleccionamos a Rhyzopus sp para observar su actividad sobre el polietileno de baja
densidad, seguimos a Kavelman y Kendrick (1978) con las siguientes modificaciones:
se cortaron cuadros de 1.0 por 1.0 cm y se eliminaron los que mostraron grietas o
perforaciones bajo el microscpio. Los cuadros se lavaron con HClO al 0.5% y se
lavaron tres veces con agua destilada estril y despus se sumergieron en
cloramfenicol a 5 mg/ml durante 30 minutos, despus se lavaron 3 veces con agua
destilada estril durante 20 minutos.
Los cuadros de plstico se colocaron en agar Czapeck sin sacarosa, el cual fue
preparado como sigue: 3.0 gr de nitrato de sodio, 1.0 gr de fosfato de potasio, 0.5 gr
de cloruro de potasio, 0.5gr de sulfato de magnesio, 0.01 gr de sulfato ferroso, 15.0 gr

de agar-agar, se ajust el pH a 5.0 y otro a pH 7.0 y se diluyeron en 1000mL de agua .

Se esteriliz y vaci a cjas de Petri (Koneman W. et al., 1985). Despus de tres das se
colocaron los cuadros de plstico de baja densidad sobre el agar; se mantuvieron a 37
C por dos das, con la finalidad de asegurar que no haba contaminacin.
De los cultivos puros de hongos se tom una muestra para diluirlos y alcanzar una
turbidez de 5 en la escala de MacFarland, con la finalidad de tener una concentracin
conocida. De sta dilucin, con una asa de siembra se deposit a Rhyzopus en las
puntas del cuadro de plstico; las cajas se mantuvieron a 28 y 30 C durante 4
semanas.

Las cajas se abrieron para observacin en el microscopio. Se tomaron

fotografas a 20 X de las cajas control y en las que se sembr Rhyzopus sp.

Finalmente se separaron del agar los plsticos sobre los que creci Rhyzopus sp y con
cuidado se lavaron 5 veces con agua destilada, se montaron sobre portaobjetos y se
fotografiaron al microscopio.

RESULTADOS
La tcnica de microcultivo permiti separar los hongos que formaban la biopelcula.
Rhyzopus sp. creci sobre el plstico de baja densidad (Fig. 2); se puede observar la
actividad de biodegradacin como cambios de color y perforaciones.
El crecimiento del hongo en la interfase plstico-agar se observa en la figura 2. El
plstico sobre agar, sin hongos, durante el periodo del experimento se observa en la
figura 2a. El crecimiento de Rhyzopus en la interfase agar-plstico se observa en la
figura 2b ; el crecimiento invasvo del hongo sobre el plstico se observa en la figura 2c
y 2d.
Los efectos de la actividad de biodegradacin de Rhyzopus sp. sobre el plstico se
observan en la figura 3. El cambio de color en las orillas del plstico de baja densidad,
por efecto del crecimiento de Rhyzopus sp se observan en la figura 3a y 3b; se observa
la erosin del plstico provocado por el crecimiento de Rhyzopus sp. en la figura 3c y
3d; se observan perforaciones sobre el plstico en las zonas donde creci el hongo.

DISCUSIN
La evaluacin de los cambios visibles en los plsticos es un mtodo semicuantitativo
que se puede realizar en casi todas las pruebas. Los efectos utilizados para describir la
degradacin incluyen corrosin de la superficie, la formacin de agujeros o grietas, la
fragmentacin, los cambios en el color o la formacin de bio-pelculas en la superficie
como se ve en las figuras. Estos cambios no demuestran un proceso metablico de
biodegradacin, pero el parmetro de cambios en la observacin puede ser utilizado
como un primer indicador de cualquier ataque microbiano. Este mtodo se aplica
generalmente con microorganismos que pueden degradar un polmero determinado
(Nishida y Tokiwa, 1993; Abou-Zeid, 2001), pero tambin puede ser utilizado para
obtener resultados semi-cuantitativos (Ishigaki 2004).
El empleo de plsticos est aumentando en la vida del hombre y est aumentando la
presin sobre la capacidad para disponer de los plsticos de desecho; de manera que
la fabricacin de plsticos biodegradables y la biodegradacin de los plsticos de
desecho han incrementado su importancia (Ying y Yanful 2005). El papel de los hongos
en la biorremediacin de suelos contaminados est siendo investigado (DAnnibale, et
al., 2006); mientras que poco se sabe de la ecologa de las comunidades que forman
biopelculas y su actividad en la degradacin de plsticos en los basureros.

Agradecimientos
El trabajo se realiz gracias al apoyo del programa
Universidad Nacional Autnoma de Mxico

Referencias

PAPIME PE203609 de la

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2.-Frutis M. I., Huidobro S. Ma. E. 2009. Micologia basica, manual teorico-practico.
FES-Istacala, UNAM. Mexico. 151 Pp.
3. Koneman, E.W., Allen, S.D., Janda, W.M., Schreckenberger, P.C. & Washington,
C.W. 1985. Diagnstico

Microbiolgico.

Texto

Atlas

Color.

Editorial

Mdica

Panamericana.

D'Annibale A, F. Rosetto, V. Leonardi, F. Federici, y M. Petruccioli 2006. Role of

Autochthonous Filamentous Fungi in Bioremediation of a Soil Historically Contaminated
with Aromatic Hydrocarbons. Applied and Environmental Microbiology, 72:28-36

Abou-Zeid, 2001

Ishigaki T, Sugano W, Nakanishi A, Tateda M, Ike M, Masanori Fujita M. 2004. The

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reactors Chemosphere 54: 225233

Atagana, H. J. 2004. Biodegradation of phenol, o-cresol, m-cresol and p-cresol by

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Atkinson, B. y Fowler, H. W., 1974. Adv. Biochem. Eng., 1974, 3, 224277.
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Kirchman, D. y Mitchell, R., 1982. Appl. Environ. Microbiol., , 42, 200209.
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The Netherlands.

Ying Zheng y Ernest K. Yanful 2005 A Review of Plastic Waste Biodegradation. Critical
Reviews in Biotechnology, 25:243250, 2005

Figura 3. muestra los efectos de la actividad de biodegradacin de Rhyzopus sp. sobre

el plstico de baja densidad. 3a y 3b Cambio de color en las orillas del plstico de baja
densidad donde se sembr a Rhyzopus. 3c y 3d se observa la erosin del plstico
provocado por el crecimiento de Rhyzopus sp., se observan perforaciones sobre el
plstico en las zonas donde creci el hongo.

Fig. 1. Fotografa al microscopio de la superficie de plstico control en medio Czapek sin

sacarosa despus de 5 semanas pH 5/28C. Donde no se observa crecimiento de hongos. Plstico
cortados en cuadros de 1 X 1 cm y colocado en el centro de la caja petri.

Fig. 2. Fotografa de la superficie de plstico inoculado con Rhyzopus sp en medio Czapek sin
sacarosa despus de 5 semanas pH 5/28C. Fig. 2A. Se inocul el hongo en una arista del cuadro
de plstico. 2B se observa el crecimiento de Rhyzopus sp. sobre el plstico y sobre el agar. 2C y
2D se observa el hongo creciendo sobre el plstico de baja densidad cortado en cuadros de 1 X 1 cm y
colocado en el centro de la caja petri.

Fig. 3. Fotografa de la superficie de plstico inoculado con Rhyzopus sp en medio Czapek sin
sacarosa despus de 5 semanas pH 5/28C. Los cuadros de plstico se lavaron con agua
bidestilada eliminando los hongos que estaban creciendo sobre la superficie y se fotografiaron
las zonas de erosin, decoloracin o perforacin. 3A. Se observa la superficie donde creci el
hongo mostrando decoloracin y erosin del plstico. 3B muestra la superficie del plstico
donde probablemente creci el micelio del hongo. 2C muestra los cambios de coloracin y
degradacin de la esquina del plstico donde creci el hongo.

Fig. 4. Fotografa con campo obscuro de la superficie de plstico inoculado con Rhyzopus sp en
medio Czapek sin sacarosa despus de 5 semanas pH 5/28C. Los cuadros de plstico se lavaron
con agua bidestilada eliminando los hongos que estaban creciendo sobre la superficie y se
fotografiaron las zonas de erosin, decoloracin o perforacin. 4A. Se observa la superficie del
plstico donde fue inoculado el hongo mostrando decoloracin y erosin. 4B muestra una
perforacin y zonas de erosin sobre la superficie del plstico donde probablemente creci el
micelio del hongo. 2C muestra una perforacin sobre la superficie del plstico y cambio de
coloracin donde estaba creciendo el micelio.