FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

MEDICINA
TRABAJO DE BIOLOGA MOLECULAR
RFLP
POLIMORFISMOS DE LONGITUD DE FRAGMENTOS DE
RESTRICCIN

2015-2016

HISTORIA
El descubrimeinto de las endonucleasas en 1975 hizo acreedor al Premio Nobel
de Medicina a los microbilogos Werner Arber, Daniel Nathans y Hamilton Smith
En 1985 Sir. Alec Jeffreys quien descubri los RFLP fue nombrado sir, una de las
mximas distinciones a la que se puede aspirar en el Reino Unido
Polimorfismos
Son variaciones en la secuencia de un lugar determinado del ADN entre los
individuos de una poblacin, se pueden clasificar en:

Polimorfismo de nucletido nico SNP (RFLPs)

Es una variacin en la secuencia de ADN que afecta a una sola de una secuencia
del genoma
AGGTCA
AGCTCA

Polimorfismos de tamao:
Insercin/Delecin
Es una contraccin de insercin o delecin de nucletidos de una una secuencia

En el nmero de repeticin en tndem

Es una secuencia corta de ADN que se repite consecutivamente en un locus
cromosmico especfico. Se encuentran repartidas por todo el genoma humano

Satlites (LINES, SINES, ALU) 5-500 pb

Mini satlites (VNTR) 5-100 pb
Micro satlites (STRs) 1-5 pb

 Polimorfismos de Longitud en Fragmentos de Restriccin

(RFLP)
Se refiere a secuencias especficas de nucletidos en el ADN que son reconocidas
y cortadas por las enzimas de restriccin o endonucleasas

Endonucleasas

Llamadas tambin nucleasas de restriccin, enzimas restrictivas o restrictasas

tienen la capacidad de cortar enlaces fosfodiester son de origen bacteriano y
reconocen una secuencia PALINDROMICA (secuencia que se lee igual en ambas
direcciones)

NOMENCLATURA

EJEMPLO

CORRESPONDE A:

Escherichia

Gnero de la bacteria

co

coli

Especie de la bacteria

RY13

Cepa de la bacteria

La primera enzima
identificada

Orden de identificacin de la
enzima en la bacteria

TIPOS DE ENDONUCLEASA

Tipo I: Cortan lejos de la secuencia de reconocimiento 1000 o ms pares de

bases de distancia.

Tipo II: Cortan en la secuencia de reconocimiento.

Tipo III: Cortan el ADN a 25 pares de bases de distancia de la secuencia de
reconocimiento.
Las endonucleasas de Tipo I y Tipo III tienen actividad de restriccin y metilacin
y Usan ATP esto la diferencia de la endonucleasas Tipo II que tiene actividad solo
de restriccin, no requieren ATP y necesitan cofactores como Mg++. Estas
enzimas cortan en secuencias especficas del DNA (denominadas dianas de
restriccin), dando lugar a fragmentos de tamaos diferentes, existen DOS TIPOS
DE CORTES por medio de endonucleasas

Cohesivos.- este tipo de corte puede generar extremos cohesivos o

escalonados que contienen bases desapareadas. Los extremos cohesivos son
muy reactivos, por lo que reciben el nombre de "pegajosos", ya que se adhieren a
fragmentos de ADN con secuencias de bases complementarias.

Romos.- los extremos generados por el corte pueden ser "romos" es decir que
los extremos no tienen bases desapareadas

APLICACIONES

Creacin de mapas de restriccin de plsmidos o bacterifagos.

Fragmentacin de ADN genmico por electroforesis (PCR-RFLP)
Generacin de fragmentos para clonacin en vectores.

TCNICA O METODOLOGA

Extraccin ADN + PCR +digestin + electroforesis

Se puede amplificar por PCR un gen de inters o un fragmento determinado del

genoma y hacer una digestin con enzimas de restriccin para evaluar la aparicin
de RFLPs (PCR-RFLP).

En esta tcnica se puede determinar el patrn de bandas obtenidas luego de la

electroforesis en los siguientes sujetos que presenten o no el gen con una enzima
de restriccin que corta en la secuencia especifica como se muestra:

Paciente A.- tiene el gen, la enzima lo reconoce y corta en la secuencia especifica

Paciente B.- no tiene el gen, la enzima no corta por que no reconoce la secuencia
especfica
Paciente C.- Posee dos formas diferentes de un gen en particular cada una
heredada de cada uno de los progenitores por lo tanto la enzima reconoce la
secuencia especifica en una sola secuencia del ADN.