TLC: AAS y Cafena en comprimido

Presentacin TF

2009

Validacin de un mtodo de separacin e

identificacin de Cafena y cido
acetilsaliclico en comprimidos por TLC.
Ana Varela
Curso Qumica Analtica II

Objetivo:

Validar una tcnica cromatogrfica

para la separacin e identificacin de
cafena y cido acetilsaliclico (AAS)
en comprimidos de venta en plaza.

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Introduccin
Cromatografa:
Es un mtodo analtico empleado
ampliamente en la separacin,
identificacin y determinacin de los
componentes qumicos en mezclas
complejas.

Introduccin
Validacin:
Un proceso de validacin consiste en
demostrar estadsticamente que el mtodo
es
adecuado
para
un
propsito
determinado.
El objetivo es conocer las caractersticas y
funcionamiento del mtodo y proporcionar
confianza y seguridad en ste y los
resultados que genera.

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Parmetros
Lmite de deteccin.
Precisin
en
condiciones

repetibilidad para valores de Rf.

Lmite de cuantificacin para
AAS.
Linealidad para el AAS.

de
el

Parte experimental: Materiales y reactivos

Placas:
Se utiliz placas de
slica gel de 5 x10 cm
(POLIGRAMSILG/UV2
54)
Adsorbente:
slica
(SiO2).
G: posee sulfato de
calcio como ligante.
posee
una
UV254:
sustancia fluorescente
(sulfuro de zinc) que
permite visualizar los
componentes
bajo
una = 254 nm.

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Parte experimental: Materiales y reactivos

Fases mviles ensayadas:
Fase mvil 1

Dietilter : Acetato de etilo 5:5

Fase mvil 2

Dietilter : Acetato de etilo : cido actico

5:4:1

Fase mvil 3

Benceno : Acetona 5:5

Las fases mviles fueron preparadas con solventes de

grado analtico a excepcin del dietilter (Qumica
Gamma).

Parte experimental: Materiales y reactivos

Patrones:

AAS y Cafena de grado

analtico disueltos en etanol comercial.

Preparacin de la muestra: se

tritur un comprimido previamente

masado (m = 0,57 g aprox.) y se
suspendi en
0,11 g aprox. del
mismo en 5,0 mL de etanol comercial.

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Parte experimental: Materiales y reactivos

Siembra:
Capilares graduados de
5 L.
Distancia entre cada
punto 1 cm y 0,5 cm
de los bordes laterales.

Parte experimental: Materiales y reactivos

Desarrollo: se llev a

cabo
en
cmaras
(recipientes con tapas
de cierre hermtico) de
500 cm3 con aprox.
20,0 mL de fase mvil
y
papel
de
filtro
recubriendo
las
paredes.

Para la fase mvil

elegida el tiempo de
desarrollo es aprox. 10
minutos.

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Parte experimental: Materiales y reactivos

Revelado: luz ultravioleta de = 254 nm.
Fsico y no destructivo.

Cafena

cido acetilsaliclico

Muchas sustancias orgnicas, con sistemas de dobles

enlaces conjugados o aromticos, absorben luz ultravioleta,
por lo que iluminadas con esta luz aparecen como zonas
oscuras o con colores caractersticos.

Parte experimental: Metodologa de trabajo

Lmite de deteccin:

Para cada patrn se sembr soluciones

de diferente concentracin y se busc la
menor concentracin de AAS y cafena
que fue detectada.
Se eligi a partir de las caractersticas de
las manchas la concentracin de la
solucin de la muestra.
Se sembraron soluciones patrn de AAS:
0,09; 0,1; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 3,0; 4,0;
5,0 y 10,0 % (m/v) y de cafena: 0,009;
0,01; 0,03; 0,05; 0,1; 0,2; 0,5; 0,8 y
1,0 % (m/v).

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Parte experimental: Metodologa de trabajo

Precisin en condiciones de
repetibilidad:

Se sembraron 7 patrones de AAS (2,0

% (m/v)), 6 patrones de cafena (0,8
% (m/v)) y 7 muestras (2,0% (m/v)
en AAS).
Se midieron los Rf y se calcularon los
Rf promedio y coeficiente de variacin
(CV) para los patrones y la muestra.

Parte experimental: Metodologa de trabajo

Lmite de cuantificacin:
Se tom como lmite de cuantificacin la menor
concentracin utilizada en la curva de calibracin.

Linealidad:
Se determin la linealidad del mtodo para el AAS,
relacionando la concentracin de cuatro soluciones
patrn con el rea de la mancha.
Se tom la mancha como circular y se midi su radio
paralelo a la lnea de siembra.

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Resultados y discusin
Lmite de deteccin:

cido acetilsaliclico: 0,10 % (m/v)

Cafena: 0,05 % (m/v)

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Resultados y discusin
Precisin en condiciones de repetibilidad
Los siguientes cromatogramas muestran la
distribucin de las siembras

Placa 1: 1-M 2-M 3- C 4 -A 5- A

Placa 2: 1-C 2- M 3- A 4- C 5- M
Placa 3: 1- A 2- C 3- C 4- A 5- A
Placa 4: 1- M 2-A 3- C 4- M 5- A
M = Muestra 2,0 % (m/v) en AAS
A = AAS 2,0 % (m/v)
C = Cafena 0,8 % (m/v)

Resultados y discusin
Datos obtenidos para el estudio de la repetibilidad
AAS
(2,0 %)

Cafena
(0,8 %)

AAS

Cafena

0.64

0.14

0.62

0.13

0.64

0.14

0.63

0.15

0.63

0.12

0.63

0.13

0.62

0.12

0.61

0.14

0.62

0.13

0.62

0.14

0.62

0.13

0.62
Rf p = 0.63
CV = 0.01%

Rf p = 0.13
CV = 0.07%

Muestra

0.63

0.14

0.63

0.14

Rf p= 0.62
CV = 0.01 %

Rf p = 0.14
CV = 0.05 %

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Resultados y discusin

Lmite de cuantificacin:
cido acetilsaliclico: 0,50 % (m/v)

Resultados y discusin
Linealidad
Cromatograma obtenido para el estudio de
la linealidad.

1- Patrn de AAS 0,5 % (m/v).

2- Patrn de AAS 1,0 % (m/v).
3- Patrn de AAS 1,5 % (m/v).
4- Muestra 2% (m/v) en AAS.
5- Patrn de AAS 3,0 % (m/v).

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Resultados y discusin
Datos obtenidos para el estudio de la
linealidad

AAS % (m/v)

Radio (cm)

rea (cm2)

0,5

0,250

0,1963

1,0

0,275

0,2376

1,5

0,300

0,2827

3,0

0,375

0,4418

Resultados y discusin
Curva de anlisis de regresin lineal.

rea (cm2)

0,5

y = 0,0993x + 0,1406
R2 = 0,9971

0,4
0,3
0,2
0,1
0
0

Concentracin (% (m /v))

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Conclusin
Los resultados obtenidos permiten

afirmar que , en las condiciones

mencionadas,
el
mtodo
es
adecuado para separar e identificar
los componentes activos de los
comprimidos.

Trabajo futuro
Utilizacin de otro mtodo de revelado (agentes
qumicos).

Revelado para la cafena:

Exposicin a vapores de yodo.

Rociar primero con una solucin

preparada mezclando 1 g de I2 y
1g de KI en 100 mL de etanol; y
luego con HCl 25 % y etanol en
proporcin 1:1. La cafena se
colorea de rojo. ?

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Trabajo futuro
Revelado para el AAS:
Rociar
con
solucin
preparada segn: 1 parte de
ferrocianuro
de
potasio,
solucin acuosa al 5 %; 2
partes de solucin al 10 %
de cloruro frrico y 8 partes
de agua destilada.El AAS
adquiere un color pardo.
Rociar con solucin al 2 %
de nitrato frrico en medio
cido ntrico 65 %. El AAS se
colorea de violeta. ?

Bibliografa

Bardanca. M, Identificacin de Cafena y Aspirina en

Mejoral, Instituto de Profesores Artigas, Anlisis Qumico,
1992.
Domnguez. X, Cromatografa en papel y en capa
delgada, Monografa N 16, Secretaria General de la OEA,
1975
Harris, D, Anlisis qumico cuantitativo, Tercera edicin,
Revert, 2003.
Ortega. A, Validacin de mtodos analticos, Curso
Qumica Analtica II, Tecnlogo qumico 2009, Facultad de
Qumica.
Skoog-West-Holler, Qumica Analtica, Sexta edicin, Mc
Graw Hill, 1995.

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