Dia Pro

El kit es un inmunoensayo enzimtico en fase slida para la determinacin de anticuerpos frente a todos los
subtipos de VIH-1 y VIH-2 y VIH-1 antgeno (p24) en suero o plasma humano. El kit puede ser utilizado para
la deteccin de unidades de sangre y el seguimiento de los pacientes infectados por el VIH. Este kit est
destinado exclusivamente para el diagnstico in vitro en un laboratorio clnico autorizado y la prueba tiene que
ser realizada por personal profesional de la salud especficamente entrenado.
La evidencia epidemiolgica indica que un agente infeccioso transmitido a travs del contacto ntimo, el
consumo de drogas por va intravenosa o el uso de sangre o productos sanguneos infectados conduce al
Sndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA). Esta enfermedad afecta a la inmunidad mediada por clulas
T, lo que resulta en la linfopenia severa y una reducida subpoblacin de auxiliares T-linfocitos. La destruccin
de esta poblacin de linfocitos T por el virus causa una deficiencia inmune, dando como resultado una respuesta
reducida o deficiente a infecciones posteriores. En consecuencia, las infecciones se vuelven ms graves y
pueden causar la muerte. En la actualidad, no existe un tratamiento exitoso para el SIDA.
El agente etiolgico ha sido identificado como un retrovirus, virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1
(VIH-1). Un tipo muy relacionados, pero distintos de virus de la inmunodeficiencia, designado VIH-2, tambin
se ha aislado. Este virus causa una enfermedad que es indistinguible de SIDA. La reactividad serolgica cruzada
entre el VIH-1 y VIH-2 se ha demostrado que es muy variable de una muestra a otra. Esta variabilidad requiere
la inclusin de antgenos de VIH-1 y VIH-2 para la deteccin de anticuerpos contra el VIH-1 y VIH-2. La
presencia de anticuerpos anti-HIV-1 y / o anti-HIV-2 y / o VIH antgeno p24 en la sangre indica infeccin
potencial con el VIH-1 y / o VIH-2 y, por consiguiente esta sangre no debe utilizarse para transfusin o para
fabricacin de productos inyectables.
Los pptidos sintticos que representan eptopos inmunodominantes de VIH-1 y VIH-2, junto con un anticuerpo
monoclonal para el antgeno p24 del VIH-1 se recubren en pocillos de una microplaca. Los pptidos y el
anticuerpo se han seleccionado cuidadosamente para garantizar la deteccin de anticuerpos y antgeno p24 para
todos los subtipos de VIH-1, incluyendo el subtipo O y VIH-2. Las muestras de suero o plasma se aaden a
estos pozos y, si los anticuerpos especficos para VIH-1 y / o VIH-2 (IgG, IgM o IgA) estn presentes en la
muestra, formarn complejos estables con los antgenos de pptidos de VIH en el pozo. En caso de VIH-1 p24
est presente en la muestra, el antgeno ser capturado por el anticuerpo monoclonal especfico. complejos
antgeno-anticuerpo son luego identificados a travs de la adicin sucesiva de: (1) pptidos biotinilados, un
anticuerpo monoclonal biotinilado contra el VIH-1 p24, y; (2) peroxidasa de rbano conjugada con HRP
estreptavidina. La actividad hidroltica de peroxidasa de rbano picante permite la cuantificacin de estos
complejos antgeno-anticuerpo. A continuacin se aade la solucin de sustrato de peroxidasa. Durante la
incubacin, un color azul desarrollar en proporcin a la cantidad de / 2 anticuerpos anti-VIH 1-o antgeno p24
del VIH-1 unido a la bien, estableciendo as su presencia o ausencia en la muestra. Los pocillos que contenan
las muestras negativas para anticuerpos anti-VIH y / o antgeno p24 permanecen incoloro. Una solucin de
parada se aadi a cada pocillo y el color amarillo resultante se ley en un lector de microplacas a 450 nm.

BioMerieux. Vironostika

Murex
FINALIDAD DE USO
Enzimoinmunoanlisis para la deteccin mejorada de la seroconversin frente a los virus de la
inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1, grupo O del VIH-1) y la deteccin de los anticuerpos anti-VIH-2.
RESUMEN Y EXPLICACIN DEL ENSAYO
Hasta ahora se han descrito e implicado como agentes causantes del sndrome de inmunodeficiencia adquirida
(SIDA) 2 tipos de virus de la inmunodeficiencia humana, VIH-1 y VIH-2. Ambos son retrovirus que se
transmiten por exposicin a determinados fluidos corporales infectados, sobre todo, sangre y secreciones
genitales, y por va placentaria. La infeccin por VIH-1 est extendida por todo el mundo; mientras que la
infeccin por VIH-2 est extendida principalmente en frica occidental y en algunos pases europeos.1 Ambos
virus presentan gran reactividad cruzada de los antgenos de las protenas gag y pol, mientras que las
glucoprotenas de la envoltura presentan una reactividad cruzada mucho menor. Para el cribado, es necesario
utilizar los eptopos de las protenas de la envoltura de los dos virus, adems de las protenas gag o pol con
mayor reactividad cruzada para asegurar la deteccin de anticuerpos frente a ambos tipos de virus en todos los
estados posteriores a la infeccin.2,3 Se han identificado diversos subtipos del VIH-1, denominados
conjuntamente como grupo O, en muestras procedentes de Camern y Europa.4,5 El grupo O es altamente
divergente de los primeros subtipos conocidos del VIH-1 (denominados conjuntamente como grupo M). Se
pueden utilizar eptopos especficos de la envoltura de este virus para detectar los anticuerpos frente al grupo O
en los individuos infectados, ya que las reacciones cruzadas con los subtipos conocidos del VIH no son fiables.6
Los anticuerpos especficos que ms rpido aparecen despus de la infeccin por el VIH seran, en primer lugar,

las inmunoglobulinas M (IgM) y, a continuacin, las inmunoglobulinas G (IgG).7 Los ensayos que detectan
ambos tipos de anticuerpos, IgM e IgG, son los ms sensibles en la deteccin de la seroconversin de los
anticuerpos frente al VIH, mientras que los antgenos core del VIH se detectan normalmente durante un corto
perodo de tiempo antes de la seroconversin al anticuerpo. El ensayo Murex HIV Ag/Ab Combination est
diseado para detectar el antgeno core del VIH, as como las IgG, IgM e IgA frente a las glucoprotenas de la
envoltura y las protenas pol con reaccin cruzada del VIH-1 y VIH-2. De esta manera, se pueden detectar las
muestras de suero, plasma con EDTA o plasma con citrato, potencialmente infecciosas. PRINCIPIOS DEL
PROCEDIMIENTO El ensayo Murex HIV Ag/Ab Combination se basa en micropocillos recubiertos de pptido
sinttico que representa regiones inmunodominantes de VIH-1 (O) y VIH-2, protena recombinante derivada de
las regiones de la envoltura de VIH-1 y VIH-2, y una protena pol del VIH, junto con anticuerpos monoclonales
frente al p24 del VIH-1. El conjugado es una mezcla de los mismos eptopos antignicos y de diferentes
anticuerpos monoclonales, tambin frente al p24, todos ellos marcados con peroxidasa de rbano. Las muestras
del ensayo y los sueros de control se incuban en los pocillos y el antgeno core reactivo del VIH o los
anticuerpos anti-VIH presentes en la muestra o en el suero de control se unen a los anticuerpos o a los antgenos
de los micropocillos. La muestra y el exceso de anticuerpos se eliminan mediante lavado. Seguidamente, se
aade el conjugado, que se une a su vez al antgeno core del VIH o a los anticuerpos especficos ya unidos a los
reactivos del pocillo. En las muestras que no contengan antgeno core reactivo ni anticuerpos especficos, el
conjugado no se une al pocillo. Despus del lavado que elimina el conjugado no unido, se aade a los pocillos
una solucin con 3,3',5,5'tetrametilbenzidina (TMB) y perxido de hidrgeno. En los pocillos con conjugado
unido aparece un color azul verdoso que se convierte en naranja y que se puede leer a 450 nm una vez que la
reaccin se para al aadir cido sulfrico.
Media del control negativo = 0,080
Valor del punto de corte = 0,080 + 0,150 = 0,230