AN
n . Sen u
Donde:
AN = Apertura numrica
n = ndice de refraccin del medio entre el punto P y la lente
Sen u = Seno del ngulo de apertura
mide la cantidad de rayos que penetran en la lente y se denomina Apertura Numrica.
Puesto que la funcin Seno est definida en el intervalo [-1 , 1] entonces el Sen u no
puede ser mayor de 1, y dado que el ndice de refraccin de los mejores medios
pticos conocidos no es mayor de 1.6; usando aceite de inmersin, podemos deducir
que la mxima Apertura Numrica que puede lograrse en una lente es de 1.4.
La Apertura Numrica es una constante ptica para cualquier lente y determina la
capacidad de la lente para dar detalles finos del objeto observado.
Su valor est grabado en las lentes objetivo.
Ejemplo: El lmite de resolucin del ojo humano es de 0.1mm por lo que, 2 puntos
separados por una distancia menor a 0.1 mm (100 micras) sern visualizados como
uno solo. Por otro lado, el lmite de resolucin del microscopio de luz visible es de 0.2
micras (0.0002 mm); por lo que los puntos sern visualizados como independientes.
El lmite de resolucin es una constante ptica y su valor puede ser calculado por la
siguiente frmula:
--
r = 0.61
AN
Donde:
r = Lmite de resolucin
= Longitud de onda de la luz empleada en la observacin
En general, la radiacin de una determinada longitud de onda no puede ser usada
para observar detalles ms pequeos que su propia longitud de onda; este hecho
representa una limitacin fundamental en todo microscopio compuesto.
Como hemos visto, la mxima apertura numrica que puede lograrse es de 1.4 por lo
tanto, el lmite de resolucin de un microscopio compuesto depende, en ultima
instancia, de la longitud de onda de la luz empleada en la observacin; la cual est en
el rango de 0.4 0.7 micras dependiendo de su color.
En trminos prcticos, las bacterias y la mitocondrias, las cuales estn alrededor de
0.5 micras (500 nanmetros), son las estructuras ms pequeas que pueden ser
vistas con el microscopio compuesto. Estructuras ms pequeas que estas no podrn
ser visualizadas por efectos de la difraccin ptica.
= 1000 micras
=
= 1000 nanmetros =
=
10 Angstrom
=
10 3
103 nm
10 A0
Tornillo micromtrico.- Situado en la parte inferior y lateral del brazo, sirve para
desplazar lentamente el tubo ptico y enfocar al objeto. Nos da un enfoque fino del
objeto observado.
Platina.- Placa metlica que se encuentra fija en la parte inferior del brazo, presenta
una abertura central llamada abertura de la platina destinada a dar paso a los rayos
luminosos proyectados por el espejo y a travs de la cual puede observarse la lente
condensador. En la parte posterior y lateral lleva pinzas que sirven para fijar la lmina
porta objeto.
Revlver.- Sistema discoidal giratorio que va montado en la parte inferior del tubo
ptico, posee 3 4 aberturas donde se atornillan las lentes objetivo. Este dispositivo
permite el intercambio de las lentes objetivo las cuales al girar deben disponerse en el
retn indicando que se encuentran en posicin de observacin.
Tornillo del condensador.- Permite desplazar verticalmente el condensador. Para
una ptima observacin; el condensador debe estar en su posicin ms alta.
Base.- Llamada tambin pie o estativo; sirve para dar estabilidad al microscopio.
Ocular.- Situado en la parte superior del tubo ptico. Recibe ese nombre por ser la
lente situada ms cerca al ojo del observador. Existen oculares de diferentes poderes
de amplificacin: 4x, 5X, 10x, 12x, y 16x. Su valor se encuentra grabado en la lente
la cual acta como una lupa proporcionando una imagen ms grande, virtual y
derecha de la imagen del objetivo.
MATERIALES:
Del estudiante:
1 franela
3 lminas portaobjetos
3 lminas cubre objeto (laminillas).
1 frasco gotero.
Papel lente
Tijera, pinza, bistur y estilete
Hebras de lana y algodn
Papel bond escrito a maquina
Papel milimetrado.
Del laboratorio:
Microscopio compuesto
Aceite de inmersin
Alcohol absoluto : ter etlico (1 : 2)
MTODO:
El microscopio es un instrumento de precisin, delicado y caro. Por ms slido que
parezca no debe ser sometido a un trato rudo pues esto afectara su delicado
mecanismo. Es necesario familiarizarse con sus partes y a continuacin seguir los
siguientes pasos:
El microscopio se transporta cogiendo con una mano el brazo y con la otra se
soporta la base.
Limpie la mesa de trabajo con un pao limpio.
Elegir un lugar, en la mesa de trabajo, de manera que el microscopio est
estable.
Limpie la parte mecnica del microscopio: tubo ocular, brazo, platina, tornillos
macromtrico y micromtrico, tornillo del condensador y base. Use un pao limpio
y seco.
Proceda a limpiar el sistema ptico: ocular, objetivos, condensador y espejo. Esta
limpieza se lleva a cabo usando nicamente PAPEL LENTE y cuidando de no
colocar los dedos sobre las lentes.
Seleccione el objetivo de menor aumento.
Desplazar el tubo ptico a su mnima posicin.
Verificar que el diafragma est completamente abierto.
Con ayuda del respectivo tornillo, desplace el condensador a su posicin ms alta.
Verifique que entre el espejo y la fuente de luz no existan obstculos.
Mirando por el ocular, dirigir el espejo, por su cara cncava, hacia la fuente de luz
hasta que el campo de microscopio se ilumine intensamente y en forma
homognea.
Una vez completado este procedimiento, el microscopio est enfocado, apto para
proceder a la observacin de las muestras deseadas y no debe ser cambiado de
lugar pues la posicin del espejo con respecto a la fuente de luz varia y habra que
enfocarlo nuevamente.
DESARROLLO EXPERIMENTAL:
Limpie una lmina porta objeto con un pao limpio y seco. Maneje la lmina
nicamente por los bordes.
Con sumo cuidado limpie una lmina cubre objeto.
Con un gotero, coloque una o dos gotas de agua en el centro de la lmina porta
objeto.
Recorte una letra e minscula y, con ayuda de la pinza y el estilete, colquela en
la gota de agua en posicin de lectura.
Cubra la muestra con una laminilla cubre objeto evitando la formacin de burbujas
de aire.
Seque el exceso de agua con papel absorbente.
CUESTIONARIO
1.- Qu es difraccin ptica. Explique cmo influye este fenmeno en microscopia.
2.- Qu es refraccin y como influye en microscopia.
3.- La fuente luminosa de un microscopio compuesto es radiacin ultravioleta, de
2000 de longitud de onda y lo usamos con objetivos de apertura
Numrica 0.25 y 0.65. Calcular el lmite de resolucin del microscopio para cada
uno de lo objetivos.
4.- El PPLO (organismo del tipo de la pleuroneumona) mide 0.1 u de dimetro.
Exprese su tamao en milmetros, nanmetros y ngstrom.
5.- De qu factores depende el aumento microscopio?
6.- Qu otros tipos de microscopios existen?
BIBLIOGRAFA
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