Gua de Prcticas de Biologa Celular y Hereditaria III

PRCTICA No 1

Escuela de Medicina

DETERMINACIN CUALITATIVA DE

PROTENAS

CAPACIDADES:
1. Analiza qumicamente las protenas provenientes de muestras biolgicas mediante
determinaciones cualitativas.
2. Demuestra la coagulacin de las protenas mediante experiencias de laboratorio.
3. Utiliza tcnicas de coloracin para reconocer la presencia de protenas en muestras
biolgicas.

I. INTRODUCCIN:
Las protenas son las molculas ms abundantes y funcionalmente diversas de los
seres vivos. Prcticamente cada proceso vital depende de esta clase de
macromolculas, Por ejemplo, las enzimas y las hormonas polipeptdicas dirigen y
regulan el metabolismo en el organismo, mientras que las protenas contrctiles del
msculo permiten el movimiento. En el hueso, la protena colgeno forma un
entramado para el depsito de cristales de fosfato de calcio, actuando como los
cables de acero del hormign armado. En el torrente sanguneo, protenas como la
hemoglobina y la albmina plasmtica desplazan molculas esenciales para la vida,
mientras que las inmunoglobulinas luchan contra las bacterias y los virus infecciosos.
En resumen, las protenas exhiben una increble diversidad de funciones, aunque
todas comparten la caracterstica estructural comn de ser polmeros lineales de
aminocidos, los cuales son sus unidades monomricas. La unin de un bajo nmero
de aminocidos da lugar a un pptido; si el nmero de aminocidos que forma la
molcula no es mayor de 10, se denomina oligopptido, si es superior a 10 se llama
polipptido y si el nmero es superior a 50 aminocidos se habla de una protena.
Los 20 aminocidos encontrados habitualmente en las protenas se unen mediante
enlaces peptdicos. La secuencia lineal de los aminocidos unidos contiene la
informacin necesaria para generar una molcula proteica con una forma
tridimensional nica. La complejidad de la estructura proteica se analiza mejor si se
considera la molcula en cuatro niveles de organizacin: primario, secundario,
terciario y cuaternario. Un examen de estas jerarquas de complejidad creciente ha
revelado que ciertos elementos estructurales estn repetidos en una amplia variedad
de protenas, lo que sugiere que hay reglas generales relativas a las formas en las
cuales las protenas asumen su forma nativa funcional, estos elementos estructurales
repetidos van desde combinaciones simples de alfa hlices y lminas de beta hoja
plegada, que forman pequeos motivos, hasta el plegamiento complejo de dominios
polipeptdicos de las protenas multifuncionales.
La mayor parte del nitrgeno proveniente de los alimentos se consume en forma de
protenas, cuya cantidad asciende a 70-100 g/da en la dieta. Por lo general, las
protenas son demasiado grandes como para ser absorbidas por el intestino. Por lo
tanto deben ser hidrolizadas a dipptidos, tripptidos y aminocidos individuales, los
cuales pueden ser absorbidos.
Docentes: Jorge Luis Plasencia Cuba, Emeterio Marino Olivares De la Cruz, Jos Luis Santilln Jimnez

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II. MATERIALES:
De la Ctedra

Del alumno

Material de vidrio: Tubos de ensayo,

Gradilla, Varillas de vidrio, Mechero, Vasos
de precipitados, Pipetas, etc.
Reactivos: cido ntrico concentrado,
Hidrxido de sodio a 40 %, Hidrxido de
sodio al 20 %. Sulfato cprico al 1 %,
Acetato de plomo al 5 %, Reactivo de
Biuret, alcohol.

Material Biolgico: clara de Huevo

Muestre de leche de vaca (en tarro o
fresca) y leche materna.
Suero sanguneo (se extraer en el
laboratorio).
Marcador indeleble.

III. PROTOCOLO:
3.1. EXPERIENCIA 01. Coagulacin de Protenas
1. Colocar en un tubo de ensayo 3 ml. de clara de huevo diluida (tambin se
puede utilizar suero sanguneo), llevar a bao mara y observar.
2. En un segundo tubo colocar 3 ml de clara de huevo diluida y aadir 2 ml de
alcohol etlico, observar los resultados.
FUNDAMENTO
Las protenas debido al gran tamao de sus molculas forman con el agua
soluciones coloidales que pueden precipitar formndose cogulos al ser
calentadas a temperaturas superiores a 70 C o al ser tratadas con soluciones
cidas, salinas, alcohol, etc. La coagulacin de las protenas es un proceso
irreversible y se debe a su desnaturalizacin por los agentes indicados que al
actuar sobre la protena la desordenan por destruccin de sus estructuras
secundaria y terciaria.
3.2. EXPERIENCIA 02. Reaccin Xantoproteica.
1. Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 mL de solucin problema (ovoalbmina).
2. Aadir 1 mL de HNO3 concentrado.
3. Calentar al bao mara a 100 C.
4. Enfriar en agua de cao.
5. Aadir gota a gota una disolucin de sosa al 40%.
FUNDAMENTO:
Es debida a la formacin de un compuesto aromtico nitrado de color amarillo,
cuando las protenas son tratadas con cido ntrico concentrado. La prueba da
resultado positivo en aquellas protenas con aminocidos portadores de grupos
bencnicos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la
prueba se neutraliza con un lcali vira a un color anaranjado oscuro.

Docentes: Jorge Luis Plasencia Cuba, Emeterio Marino Olivares De la Cruz, Jos Luis Santilln Jimnez

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3.3. EXPERIENCIA 03. Reaccin de Biuret.

1. Tomar un tubo de ensayo y colocar unos 3 mL de ovoalbmina, realizar la
prueba tambin con una muestra de leche.
2. Aadir 2 mL del Reactivo de Biuret.
3. Observar una coloracin violeta-roscea caracterstica.
FUNDAMENTO
La presencia de protenas en una mezcla se puede determinar mediante la
reaccin de Biuret. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solucin acuosa
alcalina (gracias a la presencia de NaOH o KOH). La reaccin se basa en la
formacin de un compuesto de color violeta, debido a la formacin de un complejo
de coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del
nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos. La reaccin debe su nombre
al Biuret, una molcula formada a partir de dos de urea (H 2N-CO-NH-CO-NH2),
que es la ms sencilla que da positiva esta reaccin, comn a todos los
compuestos que tengan dos o ms enlaces peptdicos consecutivos en sus
molculas.

Cuando una protena se pone en contacto con un lcali concentrado, se forma

una sustancia compleja denominada Biuret. Que en contacto con una solucin de
sulfato cprico diluida, da una coloracin violeta caracterstica.
3.4. EXPERIENCIA 04. Reaccin de los aminocidos azufrados.
1. Colocar en el tubo de ensayo de 2 a 3 mL de ovoalbmina y en otro de 2 a 3
mL de leche.
2. Aadir 2 mL de solucin de hidrxido de sodio al 20%.
3. Aadir 10 gotas de solucin de acetato de plomo al 5%.
4. Calentar el tubo hasta ebullicin
5. Si se forma un precipitado de color negruzco nos indica que se ha formado
sulfuro de plomo, utilizndose el azufre de los aminocidos, lo que nos sirve
para identificar protenas que tienen en su composicin aminocidos con
azufre
FUNDAMENTO
Se pone de manifiesto por la formacin de un precipitado negruzco de sulfuro de
plomo. Se basa esta reaccin en la separacin mediante un lcali, del azufre de
los aminocidos, el cual al reaccionar con una solucin de acetato de plomo,
forma el sulfuro de plomo.
Docentes: Jorge Luis Plasencia Cuba, Emeterio Marino Olivares De la Cruz, Jos Luis Santilln Jimnez

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3.5. EXPERIENCIA 05: Reaccin Ninhidrina (Hidrato de tricetohidrindeno al 0.1 %).

1. Colocar en un tubo de prueba 2 mL de sustancia problema.
2. Aadir 1 ml de Ninhidrina
3. calentar hasta ebullicin por 1 min.
4. Dejar enfriar y observar
FUNDAMENTO
Todas aquellas sustancias que presentan al menos un grupo amino y uno
carboxilo libre, reaccionaran con la Ninhidrina. La positividad se manifiesta por la
aparicin de un color violceo o amarillo. Debido a que las protenas y los
aminocidos, poseen esta caracterstica, la reaccin sirve para identificarlos.
Algunas soluciones de amonio y aminas, dan la coloracin caracterstica,
aparentemente debido a una oxidacin y reduccin intramolecular de la Ninhidrina
en presencia de amonaco. Los aminocidos porina e hidroxiprolina, que no
poseen grupo amino sinnimo (-NH-), dan un color rojo que pasa rpidamente a
amarillo.
IV.

ANLISIS E INTERPRETACIN DE RESULTADOS:

Representa cada experiencia con esquemas e interpreta con fundamento
cientfico las reacciones.
4.1. EXPERIENCIA 01. Coagulacin de Protenas.

4.2. EXPERIENCIA 02. Reaccin Xantoproteica.

Docentes: Jorge Luis Plasencia Cuba, Emeterio Marino Olivares De la Cruz, Jos Luis Santilln Jimnez

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4.3. EXPERIENCIA 03. Reaccin de Biuret.

4.4. EXPERIENCIA 04. Reaccin de aminocidos azufrados.

4.5. EXPERIENCIA 05: Reaccin con Ninhidrina.

Docentes: Jorge Luis Plasencia Cuba, Emeterio Marino Olivares De la Cruz, Jos Luis Santilln Jimnez

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V. CONCLUSIONES:
___________________________________________________________________
___________________________________________________________________
___________________________________________________________________
___________________________________________________________________
___________________________________________________________________
VI. ACTIVIDADES COMPLEMENTARIAS:
1. De los siguientes aminocidos - Ala; Lys; Ser; Glu; Phe; Arg; Asp - escoja aqul o
aqullos que sean apolares y justifique su respuesta en un mximo de DOS lneas.

2. Los aminocidos encontrados en las protenas naturales son pticamente activos,

con la sola excepcin de uno de ellos. Explique esa caracterstica y cul
aminocido es la excepcin.

3. Las protenas naturales se caracterizan porque:

a) Todas se forman a partir de slo veinte aminocidos
b) Tienen una cantidad variable de grupos amino y carboxilo libres
c) Su carga elctrica puede variar segn cual sea el pH del medio
d) Su funcin radica, fundamentalmente, en el tipo de estructura secundaria
que predomine en su conformacin nativa
e) Todas las alternativas son correctas, excepto una de ellas que es falsa.
4. Si se identifican la secuencia y la naturaleza de los amino cidos de una protena
y la orientacin espacial de los respectivos grupos R, con sus diferentes
interacciones, se estar describiendo:
a) Exclusivamente, la estructura terciaria de la protena
b) El nivel de estructura secundaria, solamente
c) Las estructuras secundaria y cuaternaria
d) Las estructuras primaria y secundaria
e) Las estructuras primaria y terciaria
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS CONSULTADAS: Ordnala segn formato
Vancouver.

Docentes: Jorge Luis Plasencia Cuba, Emeterio Marino Olivares De la Cruz, Jos Luis Santilln Jimnez

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PRCTICA No 2

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ACCIN ENZIMTICA

CAPACIDADES:
1. Infiere el efecto de una enzima peroxidasa presente en tejidos animales.
2. Frmula explicaciones sobre el efecto de la enzima amilasa y ureasa.
3. Infiere el efecto de la temperatura y el pH en la intensidad de la reaccin enzimtica.
4. Analiza el papel de las enzimas en el metabolismo.
I. INTRODUCCIN:
Las enzimas son protenas especficas, que actan como catalizadores de las
reacciones qumicas en todos los seres vivos. La actividad enzimtica puede
comprobarse experimentalmente mediante la identificacin y cuantificacin de los
productos formados en la reaccin que ellas regulan. La accin de estos compuestos
proteicos en una reaccin, se ve afectada por la variacin de factores fsicos y qumicos
como la temperatura, concentracin de la enzima y del sustrato, el pH, etc.
La catalasa (peroxidasa o perxido de hidrgeno oxidorreductasa) es una de las
enzimas ms abundantes en la naturaleza y se encuentra ampliamente distribuida en
los organismos eucariotas y algunos procariotas, aunque su actividad vara en
dependencia del tejido en cual se encuentra; sta resulta ms elevada en el hgado y
los riones, ms baja en el tejido conectivo y los epitelios, y prcticamente nula en el
tejido nervioso. A nivel celular se localiza en las mitocondrias y los peroxisomas, excepto
en los eritrocitos, donde se encuentra en el citosol. El perxido es un producto de la
actividad celular (radical libre originado en la respiracin celular) y al acumularse en
exceso intoxica la clula por lo cual debe ser degradado por la enzima especfica. La
reaccin en la cual interviene la catalasa se presenta de la siguiente manera:
Catalasa
2H2O + O2
1. Comp
rende
el
Esta reaccin puede visualizarse por la formacin
de burbujas, las cuales se producen
conce
debido al desprendimiento de oxgeno. La
cantidad de burbujas es una medida
de
cualitativa proporcional a la intensidad de lapto
reaccin
y puede utilizarse para evaluar la
enzim
dinmica de la reaccin.
a.
2. Recon
oce el o tialina, es un enzima hidrolasa que
La amilasa salival, denominada tambin ptialina
tiene la funcin de digerir el glucgeno y elefecto
almidn para formar azcares simples, se
de la
produce principalmente en las glndulasenzim
salivares (sobre todo en las glndulas
partidas) y en el pncreas. Tiene un pH de 7.
a Cuando uno de estas glndulas se inflama
aumenta la produccin de amilasa y aparece
elevado su nivel en sangre.
catala
sa
prese de carbono y amoniaco. Se encuentra
La ureasa cataliza la hidrlisis de la urea a dixido
nte en
principalmente en semillas, microorganismos
e invertebrados. La enzima ureasa de la
tejidos
soja (Glycine max) descompone la urea en animal
amonaco y dixido de carbono:
es y
Ureasa
veget
CO (NH2)2 + H2O
2 NH3 + CO2
ales.
3. Recon
el De la Cruz, Jos Luis Santilln Jimnez
Docentes: Jorge Luis Plasencia Cuba, Emeterio Marino oce
Olivares
efecto
de la
enzim
a

2H2O2

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La disolucin de amonaco (NH3) tiene un pH alto que puede ser detectado mediante un
papel indicador de pH. El amonaco producido por la reaccin tambin puede ser
detectado por el olor. La urea es un compuesto especialmente bueno para la eliminacin
de nitrgeno debido a que es soluble en agua y menos txico que el amonaco. La orina
humana contiene 2% de urea.
II. MATERIALES:
De la Ctedra
Solucin Indicadora Universal
20 Tubos de ensayo por mesa.
6 vasos de precipitados de 50 mL
3 pipetas de 10 mL
Pinzas de madera
3 gradillas.
Mortero
Bao Mara.
Varillas de vidrio
Pizetas
Solucin diluida de almidn.
cido ctrico 10%
Bicarbonato de Sodio (NaHCO3).
Perxido de Hidrgeno.
Lugol y Reactivo de Fehling.

Del alumno
Hgado y corazn de pollo. (por mesa
de prctica)
Extracto de soja (10 mL de agua por
gramo de materia seca de soja.
Hielo (500 g por mesa). Llevar al
laboratorio apenas se llega a la
universidad para preservar en
congelador.
100 gramos de urea.
Dos cuchillos por mesa de prctica.

III. PROTOCOLO:
3.1. EXPERIENCIA 01. Accin de enzima catalasa de origen animal sobre el H2O2.
1. Rotular 4 tubos de ensayo con los nmeros 1, 2, 3 y 4.
2. En el tubo 1 adicionar un pedazo de hgado y 2 ml. de agua oxigenada.
Observar la intensidad de la reaccin.
3. Tomar un pedazo de hgado similar al anterior, agregar al tubo 2 y colocar al
bao de mara durante 10 minutos. Retirar, dejar enfriar y adicionar 2 ml de
agua oxigenada.
4. Tomar el tubo 3 y agregar otro pedazo de hgado en la misma cantidad que
en la anterior y colquelo en un recipiente con hielo durante 10 minutos.
Retrelo e inmediatamente adicionar 2 ml de agua oxigenada.
5. Tomar el tubo 4 y agregar media cucharadita de macerado de hgado y luego
2 ml de agua oxigenada.
3.2. EXPERIENCIA 03. Accin de la amilasa salival sobre su sustrato especfico.
1. Poner en una gradilla cuatro tubos de ensayo, numerados del 1 al 4.
2. Aadir en cada uno de los tubos 5 ml de una solucin diluida de almidn.
3. A los tubos 3 y 4 aadir una pequea cantidad de saliva.
4. En los tubos 1 y 2 hacer la reaccin de Fehling y lugol respectivamente.
5. Colocar los tubos 3 y 4 a bao mara 37 por espacio de 15 minutos; luego
hacer la reaccin de Fehling y lugol.

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Preparacin de la Amilasa salival (ptialina)

Despus de enjuagarse la boca, masticar un trozo de papel filtro para
estimular la salivacin. Los lquidos segregados se van pasando a un
embudo que tenga un papel filtro, el filtrado se coloca en un tubo de ensayo
hasta obtener 1 ml. La saliva as obtenida se diluye empleando 1ml de saliva
y 10 ml de agua destilada, as se obtiene la preparacin de la enzima base.

3.3. EXPERIENCIA 04. Accin de la ureasa.

1. Colocar 8 ml de cada una de las siguientes soluciones en tres tubos de
ensayo: cido ctrico, bicarbonato y agua destilada; agregar 5 gotas del
reactivo universal de pH.
2. Medir el pH de la urea y de la suspensin de la soya.
3. Aadir a los tres tubos 2 ml de solucin de urea, mezclar y observar el color.
4. Aadir a los tres tubos 2 ml de la suspensin de soja.
5. Comparar los colores y los olores de las mezclas en todos los tubos. Repita
esta observacin a los 3 min.
IV. ANLISIS E INTERPRETACIN DE RESULTADOS:
4.1. EXPERIENCIA 01. Complete y responda lo que se le solicita

1. Qu papel desempea el hgado en la

experiencia?
----------------------------------------------------------------------

H2O2

2. Cul es la naturaleza qumica de la sustancia

que cataliza la reaccin?
---------------------------------------------------------------------3. Hubo desprendimiento de calor en la reaccin?
Si fuese as qu tipo de reaccin sera?
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

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4. Presenta reaccin? Por qu?

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---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------5. Cul es el efecto de la

temperatura sobre el catalizador?

H2O2

-------------------------------------------------------------------------------------------

Bao Mara

6. Ocurre reaccin?
--------------------------------------------------7. Cmo es la intensidad de la
reaccin en relacin a las reacciones
anteriores?

H2O2

---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

HIELO

8. La reaccin que observa es mayor o menor a la

del tubo 1? Por qu?
-------------------------------------------------------------------

H2O2

-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------9. De ejemplos de otros materiales de naturaleza

animal con los cuales se pueda desarrollar esta
experiencia.
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

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4.2. EXPERIENCIA 03. Accin de la amilasa salival.

37 oC

37 oC

4.3. EXPERIENCIA 04. Accin de la ureasa. Complete y responda lo que se le solicita.

FASE 1.
1

FASE 2.

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FASE 3.

V. CONCLUSIONES:

..
VI. ACTIVIDADES COMPELENTARIAS:
1. Explique la importancia de las enzimas trabajadas en el metabolismo humano.
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.
2. Explique como ocurre la actividad enzimtica de la ureasa del Helycobacter
pylori, en el caso clnico.
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.

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3. Explique qu sucedera con la digestin en el estmago si se consume una

cantidad excesiva de hamburguesas.
-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.
V. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS CONSULTADAS: Ordnala segn formato
Vancouver.

LECTURA COMPLEMENTARIA
Estmago
Las funciones de estmago como un rgano de almacenamiento donde el alimento se procesa en una forma lquida
llamada quimo. La secrecin de cido por las clulas parietales situadas en el revestimiento del estmago ( Mdulo
7: Estructura de estmago figura ) crea las condiciones para las primeras etapas de la digestin y tambin juega
un papel importante en la esterilizacin de la parte superior del tracto gastrointestinal.Las funciones neuronales y
endocrinas del estmago son responsables de proporcionar la neuronal (acetilcolina), endocrino (gastrina)
y paracrina (histamina y somatostatina) sistemas que coordinan el control de la secrecin de las clulas
parietales .
El estmago se divide en tres partes, el fundus, el cuerpo y el antro, que contienen diferentes tipos de clulas.En el
fondo de ojo y el cuerpo, el epitelio gstrico de los invagina estmago para formar glndulas gstricas, que se
componen de las clulas mucosas del cuello que secretan una glicoprotena clulas mucosas, jefe (zimgeno) que
secretan pepsingeno y las clulas parietales que secretan cido. No hay clulas parietales en el epitelio del antro,
pero esta regin tiene clulas G que sintetizan y liberan gastrina, que es uno de los principales estmulos de la
secrecin de cido.
La secrecin de cido clorhdrico (HCl) por las clulas parietales mantiene el pH muy bajo en el estmago y la mucosa
gstrica, que se ha desarrollado dispositivos especiales para la proteccin contra el cido. Si este sistema defensivo
se descompone o si se siente abrumado por la produccin excesiva de cido, el epitelio exterior comienza a sufrir
una fuga de en las capas subyacentes que causan hemorragias intersticiales y el desarrollo de las lceras
ppticas . Por tanto, existe un inters considerable en la comprensin de lasfunciones neurales y endocrinas del
estmago que liberan el excitador y estmulos inhibidoras que regulan la secrecin de cido.
Neuronales y endocrinos funciones del estmago
El control de la secrecin de cido depende de mecanismos neurales, endocrinos y paracrinos que son activados por
diferentes aspectos de la alimentacin ( mdulo 7: Estructura de estmago figura ). Hay una fase ceflica (control
de la secrecin de cido por el cerebro) durante el cual el olor de los alimentos y el proceso de la ingestin genera
seales neurales que se transmiten en el estmago por el nervio vago. Estas seales neuronales pueden ser

Docentes: Jorge Luis Plasencia Cuba, Emeterio Marino Olivares De la Cruz, Jos Luis Santilln Jimnez

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responsables de la liberacin de la hormona intestinal grelina de las clulas X / A-como. El vago no inerva las clulas
parietales directamente, pero las seales se transmiten a travs de una red de clulas nerviosas en el plexo mientrico
y submucoso, que contienen las neuronas postganglionares que inervan a continuacin, las clulas parietales. Estas
neuronas colinrgicas la liberacin de acetilcolina (ACh), que es un estmulo potente de las clulas
parietales. Tambin neuronas postganglionares inervan las clulas enterocromafinas similar (LCE) para estimular
la liberacin de histamina, que es otro activador importante de la secrecin de las clulas parietales.
Otra parte de la fase ceflica que est mediada a travs del nervio vago es la liberacin de la gastrina de lasclulas
G situadas en el antro pilrico. Como se describi anteriormente, el vago termina en el plexo mientrico y submucoso
de la que una neurona postganglionar libera liberador de gastrina pptido (GRP) para activar las clulas T para la
liberacin de gastrina. Este gastrina entra en el torrente sanguneo y se lleva a la regin fndica, donde cuenta con
mltiples funciones para activar las clulas parietales, las clulas enterocromafinas similar (LCE) y los de la
somatostatina que secretan las clulas D . Poblaciones separadas de clulas D, que se encuentran en la regin
antral, forman parte del epitelio y tienen una superficie apical que puede probar el nivel de H + como parte de un bucle
de retroalimentacin negativa. Si el contenido de cido del estmago se vuelve demasiado alta, hay un aumento en
la liberacin de la somatostatina que se desconecta la liberacin de gastrina por las clulas G. Esta fase ceflica es
controlado nicamente por el cerebro y puede ocurrir independientemente de cualquier alimento que entra en el
estmago.
Adems de la fase ceflica, hay una fase gstrica de la secrecin que es iniciado por la llegada de alimentos en el
estmago. Las neuronas sensoriales en la pared de la mucosa responden al estiramiento del estmago, y esto
provoca un simple reflejo a travs del plexo submucoso para activar las neuronas postganglionares que activan tanto
el parietal y clulas T como se describe anteriormente. Otro aspecto de la fase gstrica es la estimulacin directa de
las clulas T por parte de los productos de la digestin, tales como los aminocidos.
G celular
Clulas G (gastrina) se encuentran en el epitelio gstrico en la regin antral del estmago ( Mdulo 7: Estructura de
estmago figura ). Estos son clulas endocrinas inusuales, ya que son parte del epitelio gstrico. Ellos tienen
microvellosidades apicales que aumentan el rea superficial para mejorar su capacidad para detectar componentes
de los alimentos en el estmago, tales como aminocidos, que actan para aumentar la liberacin de gastrina. La
clula G tambin se activa a travs del nervio vago, que hace contacto con el complejo mientrico y submucoso para
activar una neurona postganglionar que libera pptido liberador de gastrina (GRP) que funciona para estimular la
liberacin de gastrina.
Esta regin antral tambin contiene clulas D que son una parte del epitelio y que funcionan para secretar la
somatostatina (SST) , que inhibe las clulas G. La membrana apical tiene microvellosidades, mientras que la regin
basal tiene proyecciones caractersticamente largos que liberan Sst en el entorno de la clula G.
La gastrina es un heptapptido amidado que es sintetizada y liberada por las clulas G. La gastrina se sintetiza como
un gran preprogastrina que se somete a una serie de modificaciones post-traduccionales a medida que pasa a travs
de la va secretora retculo / Golgi / grnulo endoplsmico:
1.
2.
3.
4.

5.

El pptido seal de preprogastrina se escinde a progastrina por una peptidasa seal se encuentra en la
membrana interna del retculo endoplsmico.
Progastrina entra en las pilas de Golgi donde est sulfatada en los residuos de tirosina.
Mientras que en el aparato de Golgi, la protena sulfatada tambin se somete a la fosforilacin de Ser-96
antes de que se empaqueta en grnulos secretores.
Mientras que en los grnulos, la progastrina se somete a escisin dibsico en varios sitios por varias
convertasas de prohormonas resultantes en la formacin de cualquiera de G34 o G17. El siguiente paso es
la eliminacin de residuos bsicos por carboxipeptidasa E (CPE).
El paso final es la amidacin C-terminal para formar el activo G17-NH 2 , que es la gastrina activo. En el caso
del precursor de G34-Gly, esto puede ser amidado para G34-NH 2 que se convierte luego en G17-NH 2 .

La gastrina liberada de las clulas G entra en los vasos sanguneos que rodean y se lleva a la regin del fondo uterino
donde tiene tres objetivos principales: estimula la secrecin de HCl por las clulas parietales , que estimula la
liberacin de histamina por las clulas enterocromafines-como (LCE) y estimula liberacin de somatostatina por
las clulas D .
La infeccin del estmago por Helicobacter pylori aumenta la actividad secretora de estas clulas T, y esto puede
contribuir a la secrecin mejorada de cido que causa lcera pptica .
Sndrome de Zollinger-Ellison es causada por la sobreproduccin de gastrina.
celular D

Docentes: Jorge Luis Plasencia Cuba, Emeterio Marino Olivares De la Cruz, Jos Luis Santilln Jimnez

Gua de Prcticas de Biologa Celular y Hereditaria III

Escuela de Medicina

D clulas son clulas endocrinas que liberan la somatostatina (SST) . Se encuentran en los tejidos, tales como los
islotes de Langerhans, el intestino y en diferentes regiones del estmago ( Mdulo 7: Estructura de estmago
figura ). Tienen largos procesos citoplsmicos que hacen contacto ntimo tanto con el parietal y las clulas G. Un
Tal paracrina disposicin permite Sst para ejercer su efecto inhibidor por ser liberado directamente en las clulas T
y las clulas parietales. En el caso de este ltimo acta, somatostatina para inhibir la secrecin de cido ( Mdulo 7:
secrecin Figura HCl ).
La infeccin del estmago por Helicobacter pylori inhibe la actividad secretora de estas clulas D y esto puede
contribuir a la secrecin mejorada de cido que causa lceras ppticas .
clulas Enterocromafines como (LCE)
Clulas Enterocromafines como (ECLS), que se asemejan a los mastocitos, las clulas endocrinas son situados
dentro de la mucosa gstrica, donde contribuyen al control de la secrecin de cido por la liberacin de histamina
( Mdulo 7: Estructura de estmago figura ). La histamina se sintetiza a partir de histidina mediante una reaccin
de descarboxilacin llevado a cabo por la histidina descarboxilasa (HDC). La histamina se almacena dentro de las
grandes vesculas de secrecin que son liberadas por una variedad de estmulos. Los principales estmulos son
gastrina, que se produce por los antrales clulas G y llega a los ELCs travs de la circulacin y la pituitaria ciclasa
adenilato pptido de activacin (PACAP) que se libera de las terminaciones nerviosas de las neuronas
postganglionares.
La liberacin de histamina es controlado por Ca 2+ vas de sealizacin. La gastrina acta a travs de la
colecistoquinina-B (CCK B ) receptores que estn acoplados a la inositol 1,4,5-trifosfato (INSP 3 ) / Ca 2 +casete de
sealizacin . Adems de conducir la secrecin de la histamina, el aumento de Ca 2 + tambin activa la transcripcin
de genes para HDC, el transportador de monoamina vesicular de subtipo 2 (VMAT-2), que transfiere la histamina en
la tienda vesicular, y cromogranina A. La accin de PACAP no est claro; la posibilidad ms probable es para que
acte a travs del tipo PACAP 1 (PAC 1 receptor) que se acopla a la misma va de sealizacin utilizado por
el receptor de gastrina (CCK B ) .
Estimulacin prolongada de estas clulas puede dar lugar a la hiperplasia y esto puede contribuir a sndrome de
Zollinger-Ellison . Tal escenario se produce en gastrinoma cuando hay tumores que causan una secrecin excesiva
de gastrina.
X / A-como las clulas
Clulas X / A-como, que se encuentran principalmente en el estmago, son clulas endocrinas especializadas para
la sntesis y liberacin de la hormona intestinal grelina . Constituyen aproximadamente el 20% de la poblacin de
clulas endocrinas en el estmago, pero tambin se encuentran en otras regiones del intestino (el duodeno, el leon
y el colon). Clulas X / A-como tienen una gran poblacin de vesculas-densos con ncleo que contiene grelina
almacenado, que se libera en la anticipacin de la alimentacin y desempea un papel importante en el control de
la ingesta de alimentos y el peso corporal ( Mdulo 7: Figura control de la ingesta de alimentos ) .
Clula parietal
Las clulas parietales funcionan para secretar cido en el estmago. Se encuentran en el cuerpo principal y, en menor
medida, en la regin fndica del estmago ( Mdulo 7: Estructura de estmago figura ). La mucosa gstrica
contiene un gran nmero de glndulas gstricas, que se abren a la superficie a travs de pozos gstricas ( Mdulo
7: clulas parietales Figura ). Las glndulas se componen de clulas parietales intercaladas entre las clulas
principales (zimgeno) que liberan pepsingeno. Las clulas mucosas del cuello en la superficie secretan mucosa,
que protege la superficie contra el duro ambiente en el estmago.
La ultraestructura de la clula parietal refleja su funcin en la secrecin de fluidos. El rea superficial de la superficie
luminal se ampla en gran medida a travs de un amplio sistema de canalculos que se alinea con
microvellosidades. Estos canalculos son altamente dinmicos, dependiendo del grado de estimulacin. En una clula
en reposo, los canalculos colapsan sobre s mismas ya que la membrana se retira en la clula para formar vesculas
y tbulos apretadas cortas conocidas como el sistema tubulovesicular. Cuando se estimulan las clulas para secretar
cido, la coleccin de los tbulos y vesculas se fusionan con la membrana apical de reformar los canalculos. Este
proceso de fusin parece ocurrir a travs de la clsica ciclo de exocitosis / endocytotic porque las vesculas
contienen los componentes habituales de la maquinaria de exocitosis tales como los N receptores -ethylmaleimide
sensible a la protena de fusin protena de unin (SNAREs), sinaptobrevina [tambin conocido como asociada a
vesculas protena de la membrana 2 (VAMP2)] y syntaxin 3.
Los canalculos son los sitios donde H + y Cl - son secretadas para proporcionar el gradiente osmtico para un flujo
paralelo de agua. El control de la secrecin de las clulas parietales se lleva a cabo por neural (acetilcolina),
endocrino (gastrina) y paracrino (histamina y somatostatina) estmulos ( Mdulo 7: secrecin Figura HCl ).

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Control de la secrecin de las clulas parietales

La secrecin de cido clorhdrico (HCl) por la clula parietal est regulada por los nervios (acetilcolina), endocrinos
(gastrina) y paracrina (histamina) y la somatostatina estmulos ( Mdulo 7: Figura secrecin de HCl ). El componente
clave de los mecanismos inicos responsables de la secrecin de cido es la H + / K + -ATPasa, que existe en dos
estados. En la clula en reposo, la enzima inactiva se encuentra en el sistema tubulovesicular ( Mdulo 7: clula
parietal Figura ). Despus de la estimulacin, canalculos se forman cuando las vesculas y tbulos fusionan con la
membrana apical y los resultados en la activacin de la H + / K +-ATPasa que comienza a transportar H + en el lumen
de los canalculos a cambio de K + ( Mdulo 7 : Figura HCl secrecin ). La extrusin de H + proporciona la fuerza
motriz para el flujo paralelo de Cl - y agua. Un suministro continuo de H + es proporcionado por la anhidrasa carbnica
que combina CO 2 y agua para formar H+ y HCO 3 - . Este ltimo se extruye despus a travs de la membrana
basolateral por un Cl - / HCO 3 -intercambiador, que tambin suministra el flujo de Cl - utilizado para la secrecin de
cido en el canalculo. Este elegante mecanismo secretor de fluido es controlada por la fusin del sistema
tubulovesicular con el canalculo que resulta en la activacin de la HCO 3 - / Cl - intercambiador.
Los estmulos que controlan la secrecin de cido todo activan vas de sealizacin que convergen en este evento
de fusin. La acetilcolina seales neuronales acta a travs del receptor muscarnico M3 para inducir elinositol 1,4,5trifosfato (INSP 3 ) / Ca 2+ casete de sealizacin . Exactamente el mismo mecanismo de sealizacin es empleado
por la gastrina acta a travs de la colecistoquinina-B (CCK B receptores). El aumento de Ca 2+ acta entonces para
estimular los eventos de fusin que dan lugar a la transferencia de tbulo-vesculas a la membrana apical. El papel
del Ca 2+ todava no est claro, pero una de sus acciones es estimularCa 2+ / calmodulina dependiente de la protena
quinasa II (CaMKII) para fosforilar el Ca 2+ fosfoprotena -sensible de 28 kDa (CSPP-28).
La histamina, que es uno de los principales secretagogos, acta sobre H 2 receptores que estn acoplados a lava de
sealizacin de AMP cclico . El AMP cclico a continuacin, acta a travs de la protena quinasa A (PKA) para
fosforilar una serie de sustratos que pueden contribuir a la translocacin y la fusin de las vesculas con la membrana
apical. Dos de estas protenas fosforiladas ( ezrin funcin en la remodelacin de la actina LASP-1 y). LASP-1 parece
ser una protena adaptadora, que contiene un N-terminal de dominio LIM , dos repeticiones nebulin internos y un Cterminal 3 dominio de homologa Src (SH3) . Cuando LASP-1 es fosforilada por la PKA, se une a la actina y por lo
tanto pueden contribuir a la reorganizacin del citoesqueleto durante la fusin de membranas. PKA tambin fosforila
parchorin, que a continuacin se transloca desde el citosol a la membrana apical, en las que puede contribuir a la
aparicin de la secrecin de cido.
La somatostatina (SST) , que se libera de las clulas D ( Mdulo 7: Estructura de estmago figura ), es
unparacrina regulador que funciona para inhibir la secrecin de cido. Sst se une a un receptor SSTR2 que acta a
travs de la protena G G i para inhibir la formacin de AMP cclico por adenilil ciclasa ( Mdulo 7: secrecin Figura
HCl ).

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