UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA

INSTITUTO DE CINCIA E SADE

DEPARTAMENTO DE BIOINTERAO

REAES COM CIDOS NUCLEICOS

UFBA 2016

DISCENTES:
1. Daniel Rodrigues dos Santos da Guia
2. Eduardo Fukutani
3. Sarah Souza
GRADUAO EM BIOTECNOLOGIA ICS UFBA 2016
DATA:

15 de setembro de 2016.

DOCENTE:
1. Daniele Takahashi Bernal

O relatrio:
Este relatrio tem como
objetivo a primeira
interao dos discentes do
curso de biotecnologia
UFBA com o laboratrio
de bioqumica sob a
superviso da docente
Daniele Takahashi Bernal
para a realizao de
reaes com cidos
nucleicos a fim de
entender um pouco sobre a
bioqumica dessas
molculas.

SUMRIO

1. INTRODUO:
1.1. CIDOS NUCLEICOS:
Os cidos nuclicos so responsveis pelo controle de todas as atividades
celulares e pela manuteno da estrutura das clulas, alm de estarem relacionados
com os mecanismos de hereditariedade, isso , com a capacidade que as clulas e os
seres vivos tm de transmitirem as suas caractersticas para os descendentes.
Nos seres vivos, h dois tipos de cidos nuclicos: o cido
desoxirribonuclico (DNA ou ADN) e o cido ribonuclico (RNA ou ARN), que
apresentam papis distintos.
1.2. CIDO NUCLEICO: DNA
Principal molcula da hereditariedade nos seres vivos, o DNA (cido
desoxirribonucleico) uma molcula estruturada em 2 fitas antiparalelas e
complementares. Sua unidade de formao os nucleotdeos, molculas formadas
por uma desoxirribose ligada por ligao n-glicosdica a uma base nitrogenada e um
grupamento fosfato ligado ao acar por uma ligao fosfodister. Os nucleotdeos
por sua vez so ligados entre si por ligao de hidrognio.

1.3. CIDO NUCLEICO: RNA

O RNA uma molcula intermediria na sntese de protenas, ela faz a
intermediao entre o DNA e as protenas. Ele formado por uma cadeia de
ribonucleotdeos, que, por sua vez, so formados por um grupo fosfato, um
aucar (ribose), e uma base nitrogenada.
Os principais tipos de RNA so os RNAs mensageiros (mRNAs), os transportadores
(tRNAs) e os ribossomais (rRNA). Os RNAs mensageiros so aqueles que codificam as
protenas e que devem ter seus cdons lidos durante o processo de traduo. Os RNAs

ribossomais fazem parte da estrutura do ribossomo, junto com diversas outras protenas
e so eles que catalisam a ligao entre dois aminocidos na sntese de protenas. Os
RNAs transportadores so aqueles que fazem a conexo cdon-aminocido pois
carregam um aminocido especfico de acordo com seu anticdon (complementar ao
cdon do mRNA).
Por ser uma fita simples, o RNA pode formar pontes intracadeia, o que faz com que ele
possa ter uma infinidade de arranjos tridimensionais, importantes em sua funo.

1.4. PROPRIEDADES FSICO-QUMICAS

Absoro da radiao ultravioleta As duplas ligaes das bases pricas e
pirimidnicas determinam a absoro da luz ultravioleta com espectro mdio de 260
nm. Comparando-se a uma soluo protica de mesma concentrao, os cidos
nuclicos apresentam absoro de 20 a 30 vezes superior, propriedade esta que serve
para caracteriz-los experimentalmente. Em conseqncia de degradao, esta
absoro tende a aumentar (ao de RNAses ou de desnaturao do DNA), o que se
denomina efeito hipercrmico.
Peso Molecular Varivel conforme o tamanho das molculas (RNAt: 10.000
Dalton; DNA: milhares a dezenas de milhares de Dalton).
Solubilidade: Sais sdicos de DNA so solveis ainda que apresentem alta
viscosidade. Tais solues se precipitam pela adio de 2 volumes de etanol,
levando ao aparecimento de longas fibras de aspecto elstico e esbranquiado.
Dissociao/Hibridizao cidos nuclicos que apresentam emparelhamento das
bases (estrutura secundria) podem dissociar-se sob ao da temperatura. Cadeias
simples separadas por fuso so passveis de re-emparelhamento com fitas
complementares, constituindo hbridos RNA-DNA, o que constitui a base do
emprego de sondas moleculares marcadas (de RNA ou DNA), para fins de
diagnstico ou de investigao cientfica.

2. OBJETIVO
O objetivo desse experimento foi utilizar as propriedades fsico- qumicas dos
cidos nucleicos para sua caracterizao e diferenciao.

3. MATERIAL UTILIZADO:
Fgado de rato (homogeneizado com 9 vol de cido ctrico a 2% para

inibio das nucleases)

cido tricloroactico (TCA) a 20%
TCA a 5%
Reagente da difenilamina;
Reagente de resorcinol;

Banho-maria a 100C;
Pipetas de variados volumes;
Bquer;
Tubos de ensaio.

4. METODOLOGIA:
Extrao:

Foi

colocado

em

um

tubo

de

centrfuga

ml

do

homogeneizado e 2 ml de TCA a 20%, ele foi misturado e foi feito um

repouso de 10 minutos. Ento, ele foi centrifugado a 2000 RPM por 10
minutos, o sobrenadante foi desprezado e o sedimento foi ressuspendido
em 4 ml de TCA a 5%. Depois foi aquecido em banho-maria a 100oC
durante 10 minutos. E ento, foi centrifugado a 2000 RPM por 5 minutos
e o sobrenadante que contem DNA e RNA das clulas de fgado de ratos
foi decantado.

4.1. Reao de Dische (DNA)

A hidrlise cida branda remove seletivamente as bases pricas, preservando a
ligao fosfo-dister internucleotdicas. Os resduos apurnicos livres sofrem
desidratao, dando como produtos, aldedos (delta)-hidroxi-levulnicos, os quais,
reagindo com difenilamina do derivados azuis.
Tcnica:
2 tubos foram marcados (A e B) e colocado 1 ml do extrato em A e 1 ml de H2O
em B
Adicionado em ambos os tubos 2 ml do reagente de difenilamina.
A soluo foi misturada e aquecida a 100oC durante 10 minutos.
4.2.

Reao de Bial (RNA)

As riboses e os nucleotdeos que as contem, quando aquecidos em meio cido,

produzem furfural (a ribose liberada pela hidrlise das ligaes fosfo-dister e
Nglicosdicas em meios cidos). Na presena do orcinol o furfural d compostos
azulados.
Tcnica:
Dois tubos (A e B) foram marcados
1 ml de extrato em A e 1ml de H2O em B foi acrescentado
Adicionado em ambos, 2 ml do reativo de orcinol,
Misturados e aquecidos a 100oC por 10 minutos.
* Obs: Substituindo-se orcinol por resorcinol, obtem-se um composto de colorao
amarelada.
5. RESULTADOS E DISCUSSO:

6. CONCLUSO:
7. REFERNCIAS:
1. <file:///C:/Users/Admin/Downloads/ICSA13_roteiros%20de%20aulas%20pr
%C3%A1ticas_acidos%20nucleicos%20(1).pdf >. ACESSO EM 14/09/2016.
2. <https://pt.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_ribonucleico>.
ACESSO
EM
14/09/2016.
3. <http://geneticavirtual.webnode.com.br/genetica-virtual-home/prefacio/estrutura
%20e%20replica%C3%A7%C3%A3o%20do%20dna/composi
%C3%A7%C3%A3o%20dos%20nucleotideos/>. ACESSO EM 14/09/2016.
4. <http://www2.iq.usp.br/docente/flaviam/Aulas/QBQ_0313/Estrutura_e_Funcao_
de_Acidos_Nucleicos.pdf>. ACESSO EM 14/09/2016.