Anda di halaman 1dari 34

12.A.

Gambaran pemisahan analitis
Dalam bab 7 kita memeriksa beberapa metode untuk memisahkan analit dari gangguan
yang potensial. Misalnya, dalam ekstraksi cair-cair analit dan gangguan yang awalnya hadir
dalam fasa cair tunggal. sebuah fase cair yang bercampur kedua diperkenalkan, dan dua fase
yang dicampur dengan gemetar. Selama proses ini analit dan gangguan partisi sendiri antara dua
fase untuk luasan yang berbeda, yang mempengaruhi perpisahan keduanya. Meskipun kekuatan
teknik pemisahan ini, ada beberapa keterbatasan yang signifikan.
12A.1. Masalah dengan Talak Sederhana
Misalkan kita memiliki sampel yang mengandung analit dalam matriks yang tidak sesuai
dengan metode analisis. Untuk menentukan konsentrasi analit ini, pertama kali terpisah dari
matriks menggunakan ekstraksi cair-cair. Jika ada analit tambahan, kita mungkin perlu
menggunakan ekstraksi tambahan untuk mengisolasi mereka dari matriks analit ini. Untuk
campuran kompleks analit ini dengan cepat menjadi proses yang membosankan. Selanjutnya,
sejauh mana kita dapat mempengaruhi pemisahan tergantung pada rasio distribusi masingmasing spesies dalam sampel. Untuk memisahkan analit dari matriks, rasio distribusi harus
secara signifikan lebih besar dari itu untuk semua komponen lain dalam matriks. Ketika rasio
distribusi analit adalah mirip dengan spesies lain, maka pemisahan menjadi tidak mungkin.
Sebagai contoh, mari kita asumsikan bahwa suatu analit A, dan interferent matriks, I, memiliki
rasio distribusi 5 dan 0,5, masing-masing. Dalam upaya untuk memisahkan analit dari matriks,
sederhana ekstraksi cair-cair dilakukan dengan menggunakan volume yang sama dari sampel dan
pelarut ekstraksi yang cocok. Setelah perlakuan yang diuraikan dalam Bab 7, mudah untuk
menunjukkan bahwa ekstraksi tunggal menghilangkan sekitar 83% dari analit dan 33% dari
gangguan tersebut. Meskipun mungkin untuk menghapus 99% dari A dengan tiga ekstraksi, 70%

dari saya juga dihapus. Bahkan, tidak ada kombinasi praktis jumlah ekstraksi atau rasio volume
sampel dan penggalian fase yang menghasilkan pemisahan diterima analit dan gangguan oleh
ekstraksi cair-cair sederhana.
12A.2. cara yang lebih baik untuk memisahkan suatu campuran
Masalahnya dengan ekstraksi sederhana adalah bahwa pemisahan hanya terjadi dalam
satu arah. Dalam ekstraksi cair-cair, misalnya, kita mengekstrak zat terlarut dari tahap awal ke
tahap penggalian. Pertimbangkan, lagi, pemisahan analit dan interferent matriks dengan rasio
pembagian 5 dan 0,5, masing-masing. Sebuah transfer tunggal cair-cair ekstraksi 83% dari analit
dan 33% dari interferent ke fase penggalian. Jika konsentrasi A dan I di dalam sampel yang
identik, maka rasio konsentrasi mereka di fase penggalian setelah satu ekstraksi demikian,
ekstraksi tunggal meningkatkan pemisahan zat terlarut dengan faktor 2,5. Ekstraksi kedua
sebenarnya mengarah ke pemisahan miskin. Setelah menggabungkan dua bagian dari fase
penggalian, rasio konsentrasi menurun ke Kita dapat meningkatkan pemisahan dengan terlebih
dahulu mengekstraksi zat terlarut dalam fase penggalian, dan kemudian penggalian mereka
kembali ke bagian segar dari tahap awal. Karena zat terlarut A memiliki rasio distribusi yang
lebih besar, itu diekstrak ke tingkat yang lebih besar selama ekstraksi pertama dan pada tingkat
lebih rendah selama ekstraksi kedua. Dalam hal ini rasio konsentrasi akhir dalam tahap
penggalian secara signifikan lebih besar. Proses ekstraksi zat terlarut bolak-balik antara bagian
segar dari dua fase, yang disebut ekstraksi berlawanan, dikembangkan oleh Craig di tahun 1940an.
Fenomena yang sama membentuk dasar dari kromatografi modern. Pemisahan
kromatografi dicapai dengan terus melewati satu fase sampel bebas, yang disebut fase gerak,
selama fase sampel bebas kedua yang masih tetap, atau stasioner. Sampel disuntikkan, atau

ditempatkan, ke dalam fase gerak. Ketika bergerak dengan fase gerak, komponen sampel partisi
sendiri antara fase mobile dan stasioner. Komponen-komponen yang Rasio pembagian nikmat
fase diam memerlukan waktu lebih lama untuk melewati sistem. Mengingat waktu yang cukup,
dan fase stasioner dan mobile yang cukup, zat terlarut dengan rasio distribusi yang sama dapat
dipisahkan.
Sejarah kromatografi modern dapat ditelusuri ke pergantian abad. Ketika botani Rusia
Mikhail Tswett (1872-1919) menggunakan kolom dikemas dengan fase diam kalsium karbonat
untuk memisahkan pigmen berwarna dari ekstrak tumbuhan. Sampel ditempatkan di bagian atas
kolom dan dilakukan melalui fase diam menggunakan fase gerak petroleum eter. Sebagai sampel
bergerak melalui kolom, pigmen dalam ekstrak tanaman dipisahkan menjadi band berwarna
individu. Setelah pigmen yang memadai dipisahkan, kalsium karbonat telah dihapus dari kolom,
dipotong, dan pigmen ditemukan oleh ekstraksi. Tswett bernama kromatografi teknik,
menggabungkan kata Yunani untuk "warna" dan "menulis." Ada sedikit minat dalam teknik
Tswett sampai 1931 ketika kromatografi diperkenalkan kembali sebagai teknik analitis untuk
pemisahan biokimia.
Perintis bekerja dengan Martin dan Synge pada tahun 1941. Didirikan pentingnya
kromatografi partisi cair-cair dan menyebabkan perkembangan dari teori untuk pemisahan
kromatografi; mereka dianugerahi 1952 Nobel Prize di bidang kimia untuk pekerjaan ini. Sejak
itu, kromatografi dalam berbagai bentuk telah menjadi teknik pemisahan yang paling penting dan
banyak digunakan. Metode pemisahan lainnya, seperti elektroforesis, efek pemisahan tanpa
menggunakan fase diam.

3. adalah padat atau film cairan dilapisi pada permukaan padat. Dalam kromatografi kolom. Fase stasioner terdiri dari dukungan yang solid dengan anion kovalen . Dengan demikian. klasifikasi pemisahan analitis Analitis dapat diklasifikasikan dalam tiga cara: dengan keadaan fisik dari fase gerak dan fase diam. atau dengan mekanisme kimia atau fisika yang bertanggung jawab untuk memisahkan konstituen sampel. zat terlarut terpisah berdasarkan pada kemampuan mereka untuk menyerap ke fase diam padat. logam. Fase gerak biasanya cair atau gas.12A. dalam kromatografi gas-cair fase gerak adalah gas dan fase diam adalah cairan. Dalam kromatografi planar mantel fase diam sebuah kaca. Mekanisme yang zat terlarut terpisah menyediakan sarana ketiga untuk karakteristik pemisahan. saat ini. lapisan film cair pada bahan partikel kemasan padat atau dinding kolom ini. Sebuah reservoir yang mengandung fase mobile ditempatkan dalam kontak dengan fase diam. . Zat terlarut ionik tertarik dengan fase diam oleh gaya elektrostatik. diikuti oleh jenis fase diam. seperti dalam kromatografi gas. diasumsikan menjadi fase gerak. Dalam kromatografi adsorpsi. Fase diam adalah baik padat atau tipis. Teknik kromatografi sering dinamai dengan daftar jenis fase mobile. Jika hanya satu fase ditunjukkan. dengan metode kontak antara fase gerak dan fase diam. Dalam kromatografi partisi. Pemisahan didasarkan pada perbedaan dalam partisi keseimbangan zat terlarut antara fase diam cair dan fase gerak. film cairan tipis lapisan dukungan solid berfungsi sebagai fase diam. dan bergerak fase gerak oleh kapiler. dan fase diam. Kelompok fungsional yang digunakan dalam kromatografi pertukaran ion. atau piring plastik datar dan ditempatkan dalam ruang berkembang. fase stasioner ditempatkan di kolom sempit melalui mana bergerak fase gerak di bawah pengaruh gravitasi atau tekanan. Dua pendekatan umum yang digunakan untuk membawa fase gerak dan fase diam ke dalam kontak.

Sebuah percobaan kromatografi kolom khas diuraikan dalam. Perbedaan mobilitas ion account untuk perpisahan mereka. Idealnya. di mana pemisahan karena perbedaan ukuran zat terlarut. maka zat terlarut terpisah menjadi band individu. teori ini juga dapat diterapkan untuk kromatografi planar. Kemajuan pemisahan kromatografi dipantau dengan detektor yang cocok terletak di ujung kolom. profil konsentrasi awal zat terlarut adalah persegi panjang. meningkatkan waktu yang dihabiskan di kolom. 12. Dalam pemisahan elektroforesis. Dengan modifikasi yang sesuai. Tidak semua metode pemisahan memerlukan fase diam.Gel berpori digunakan sebagai fasa diam pada kromatografi ukuran-eksklusi. Sebuah plot sinyal detektor sebagai fungsi waktu atau volume fase gerak dielusi dikenal sebagai kromatogram dan terdiri dari puncak untuk masing-masing band zat terlarut dipisahkan. Sebuah puncak kromatografi dapat dicirikan dengan berbagai cara. desain kolom dan keadaan fisik dari fase stasioner dan mobile dapat bervariasi. dan band zat terlarut individu mulai memperluas dan mengembangkan profil Gaussian. Teori Umum Kolom Kromatografi Dari dua metode untuk membawa fase stasioner dan mobile ke dalam kontak. Zat terlarut besar tidak dapat menembus ke dalam fase diam berpori dan begitu cepat melewati kolom. dikenakan zat terlarut bermigrasi di bawah pengaruh medan potensial diterapkan. Sampel dimasukkan di bagian atas kolom sebagai band sempit.B. misalnya. yang lebih penting adalah kromatografi kolom. Zat terlarut lebih kecil masuk ke dalam fase diam berpori. Meskipun angka yang menggambarkan kromatografi percobaan cair-padat mirip dengan yang pertama kali digunakan oleh Tswett. Sebagai sampel bergerak ke bawah kolom zat terlarut mulai memisahkan. dua di antaranya . Pada bagian ini kita mengembangkan teori umum bahwa kita mungkin berlaku untuk segala bentuk kromatografi kolom. Jika kekuatan interaksi masing-masing zat terlarut dengan fase diam cukup berbeda.

Selama dua puncak yang sama ukuran. 1. resolusi 1. t. Waktu retensi juga dapat diukur secara tidak langsung sebagai volume fase gerak eluting antara pengenalan zat terlarut dan penampilan puncak maksimum zat terlarut ini. dan didefinisikan sebagai 12. Dalam analisis . Hal ini dikenal sebagai volume retensi.1 Seperti ditunjukkan dalam. Membagi volume retensi oleh laju aliran fase mobile.13%. Selain puncak zat terlarut.2B. tm. Waktu atau volume fase gerak yang dibutuhkan untuk mengelusi komponen nonretained disebut waktu kekosongan kolom. mereka dianggap nonretained. ia menyediakan cara yang berguna untuk menentukan apakah perubahan dalam kondisi eksperimental mengarah ke pemisahan yang lebih baik. Sejak zat terlarut ini tidak berinteraksi dengan fase stasioner. Puncak ini hasil dari zat terlarut yang bergerak melalui kolom pada tingkat yang sama sebagai fase mobile. juga menunjukkan puncak kecil dielusi segera setelah sampel disuntikkan ke dalam fase gerak. memberikan waktu retensi.5 sesuai dengan tumpang tindih di daerah hanya 0. masing-masing mewakili satu komponen sampel. tergantung pada apakah waktu retensi atau volume retensi yang menarik.1 Resolusi kromatografi Tujuan dari kromatografi adalah memisahkan sampel menjadi serangkaian puncak kromatografi. adalah waktu yang telah berlalu dari pengenalan zat terlarut ke puncak maksimum. u. tingkat pemisahan antara dua puncak kromatografi membaik dengan peningkatan R.ditunjukkan pada. Vr. Lebar dasar diukur dalam satuan waktu atau volume. Karena resolusi adalah ukuran kuantitatif keberhasilan pemisahan ini. Parameter penting kedua adalah lebar puncak kromatografi ini di baseline. A dan B. Waktu retensi. atau volume kosong. Resolusi adalah ukuran kuantitatif dari tingkat pemisahan antara dua puncak kromatografi. Seperti yang ditunjukkan pada lebar dasar ditentukan oleh perpotongan dengan dasar tangen garis yang ditarik melalui titik infleksi di kedua sisi puncak kromatografi. w. r.

Dengan meningkatkan interaksi zat terlarut dengan kolom atau dengan meningkatkan selektivitas kolom untuk salah satu zat terlarut. masing-masing. sehingga (mol S)tot= (mol S)m+ (mol S)s 12. koefisien partisi keseimbangan dan rasio distribusi akan sama. dan lebih besar dari 1 saat tr. yang didefinisikan sebagai 12. D.B. α. Efeknya diatur oleh beberapa faktor yang secara kolektif disebut efisiensi kolom.3 Kolom Selektivitas Selektivitas relatif kolom kromatografi untuk sepasang zat terlarut diberikan oleh faktor selektivitas. 12.B.kromatografi minyak lemon puncak untuk limonene memiliki waktu retensi 8.2 Kapasitas Faktor Distribusi zat terlarut S Antara fase gerak dan fase diam bisa diwakili oleh reaksi kesetimbangan dan koefisien partisi terkait nya.36 menit dengan lebar dasar 0. . A.96 menit. Selama zat terlarut yang tidak terlibat dalam kesetimbangan tambahan baik dalam fase gerak atau fase stasioner. γ-terpinene elutes di 9.11 Identitas zat terlarut didefinisikan sedemikian rupa sehingga zat terlarut A selalu memiliki waktu retensi yang lebih kecil. Lebar puncak adalah efek kinetik terkait dengan gerakan zat terlarut dalam waktu dan antara fase gerak dan fase diam.54 min. dengan lebar dasar 0. Masing-masing faktor ini dianggap lebih detail di bagian berikut. dan rasio distribusi. Kekekalan massa mensyaratkan bahwa total mol zat terlarut tetap konstan di seluruh pemisahan. KD.2 mana subskrip m dan s mengacu pada fase gerak dan fase diam. B lebih besar dari tr. 12. faktor selektivitas sama dengan 1 ketika zat terlarut terelusi dengan waktu retensi yang sama.64 menit. Dengan demikian.

1. dan efisiensi kolom kita mempertimbangkan hubungan mereka dengan resolusi kromatografi.21 dan 12. Setelah menata ulang. persamaan untuk resolusi antara puncak kromatografi untuk zat terlarut A dan B adalah 12. dan faktor kapasitas. yang merupakan fungsi dari jumlah pelat teoritis atau ketinggian piring teoritis. selektivitas.C.20 Retensi kali untuk zat terlarut A dan B diganti dengan faktor kapasitas masing-masing dengan menata ulang persamaan 12. adalah aman untuk mengasumsikan bahwa lebar puncak untuk dua zat terlarut yang kurang lebih sama.10 tr = k'tm+ tm dan menggantikannya ke dalam persamaan 12.22 mengandung istilah yang sesuai dengan efisiensi kolom. Mengoptimalkan kromatografi Pemisahan Sekarang kita telah mendefinisikan faktor kapasitas. faktor penting lain dalam kromatografi adalah jumlah waktu yang diperlukan untuk mengelusi sepasang zat terlarut. dan menyumbang pengaruh faktor kapasitas zat terlarut B. menyumbang efek efisiensi kolom.11. Karena kita hanya tertarik pada resolusi antara zat terlarut eluting dengan waktu retensi yang sama.19 memberikan 12. lebih atau kurang mandiri. . Istilah pertama.17 untuk w B dan menggantikannya ke dalam persamaan 12. ditulis sebagai 12. Istilah kedua adalah fungsi dari α dan menyumbang pengaruh kolom selektivitas.22 Persamaan 12.12.19 Pemecahan persamaan 12. Istilah-istilah ini dapat bervariasi. Persamaan 12.21 Selain resolusi. Akhirnya. istilah ketiga di kedua persamaan adalah fungsi dari kB'. Memanipulasi parameter ini untuk meningkatkan resolusi adalah subjek dari sisa bagian ini. Waktu yang dibutuhkan untuk mengelusi zat terlarut B adalah 12. oleh karena itu. faktor kapasitas zat terlarut A dihilangkan dengan menggunakan persamaan 12.20. kolom selektivitas. Akhirnya. untuk mendapatkan resolusi dan analisis waktu yang diinginkan untuk sepasang zat terlarut.

sebanding dengan zat terlarut konstanta distribusi kesetimbangan. Faktor kapasitas Sebuah zat terlarut ini berbanding lurus dengan rasio distribusi. dan bahwa kenaikan waktu retensi di kedua arah. Dalam hal ini dimungkinkan untuk mengurangi kB' dengan kehilangan sedikit dalam resolusi sementara secara signifikan memperpendek waktu analisis. Dalam kromatografi . meningkatkan kB' meningkatkan resolusi. efeknya terbesar ketika' faktor kapasitas aslinya kecil. yang juga merupakan fungsi dari kB'. misalnya. Hubungan antara faktor kapasitas dan waktu analisis dapat menguntungkan saat perpisahan menghasilkan resolusi diterima dengan k besar B'. Hal ini juga ditunjukkan pada yang menunjukkan perubahan relatif dalam waktu retensi sebagai fungsi dari faktor kapasitas baru. maka perlu untuk mengubah kondisi kromatografi dengan cara yang mengarah ke umum. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 12. namun. ketika nilai asli dari kB'adalah 1.21 tetap konstan.11. Misalnya.5%. meningkatkan nilainya untuk 10 memberikan peningkatan 82% dalam resolusi. peningkatan lebih lanjut untuk 15 menyediakan peningkatan bersih dalam resolusi hanya 87. Perbaikan dalam resolusi yang diperoleh dengan meningkatkan kB' umumnya datang dengan mengorbankan waktu analisis lebih lama.1 Menggunakan Faktor Kapasitas Optimalkan Resolusi Salah satu cara paling sederhana untuk meningkatkan resolusi adalah untuk menyesuaikan faktor kapasitas untuk zat terlarut B. peningkatan nonselektif dalam faktor kapasitas untuk kedua zat terlarut. pada gilirannya.12. peningkatan besar dalam kB tidak menyebabkan peningkatan proporsional lebih besar dalam resolusi. sekitar dua kali lipat waktu retensi zat terlarut B. Perhatikan bahwa minimal dalam kurva waktu retensi terjadi ketika kB' adalah sama dengan 2. yang. Untuk meningkatkan kB 'tanpa secara signifikan mengubah α. Jika semua hal lain dalam persamaan 12.C. Meningkatkan kB' dari 2 hingga 10. Selanjutnya.

Suhu kemudian meningkat. Sebagai pemisahan berlangsung. Selain itu. Misalnya. Kesulitan ini ditemui begitu sering bahwa itu dikenal sebagai masalah elusi umum. ini biasanya dilakukan dengan mengurangi suhu kolom. penurunan kB' sebagai sarana memperpendek waktu analisis keseluruhan dapat menyebabkan hilangnya resolusi untuk zat terlarut eluting dengan waktu retensi lebih pendek. meningkatkan resolusi untuk zat terlarut dengan waktu retensi singkat dengan meningkatkan kB' dapat secara substansial meningkatkan waktu retensi untuk nanti eluting zat terlarut. Salah satu solusi untuk masalah elusi umum adalah untuk melakukan penyesuaian tambahan untuk faktor kapasitas dari waktu ke waktu. kondisi kromatografi berubah dengan cara yang meningkatkan tingkat elusi (mengurangi waktu retensi) untuk nanti eluting zat terlarut. juga menyebabkan peningkatan kB'. Dalam kromatografi gas ini dilakukan dengan pemrograman suhu.gas. sehingga meningkatkan faktor kapasitas mereka. persamaan 12. Di sisi lain. kondisi kromatografi awal disesuaikan untuk meningkatkan resolusi untuk zat terlarut dengan waktu retensi singkat. zat terlarut menghabiskan proporsional lebih banyak waktu dalam fase diam. untuk membawa off komponen kemudian eluting . memastikan bahwa itu menghabiskan lebih banyak waktu di fase diam meningkatkan faktor kapasitasnya. Dengan demikian. oleh karena itu. baik terus menerus atau dalam langkah-langkah. Meningkatkan volume fase diam. Ketika fase gerak memiliki kekuatan pelarut yang rendah. Dalam kromatografi cair. Menyesuaikan faktor kapasitas untuk meningkatkan resolusi antara sepasang zat terlarut dapat menyebabkan waktu retensi terlalu lama untuk zat terlarut lainnya. Suhu awal kolom ini dipilih sedemikian rupa sehingga zat terlarut pertama yang mengelusi sepenuhnya diselesaikan. Pada suhu yang lebih rendah tekanan uap zat terlarut ini menurun.6 menunjukkan bahwa faktor kapasitas sebanding dengan volume fase diam. mengubah kekuatan pelarut fase mobile adalah cara termudah untuk mengubah faktor kapasitas zat terlarut ini.

memberikan resolusi yang diinginkan tanpa mengubah waktu analisis. α. Misalnya.05 dan kB'= 2.dengan kedua resolusi diterima dan waktu analisis yang wajar. maka persamaan 12.3 Menggunakan Kolom Efisiensi Optimalkan Resolusi Jika faktor kapasitas dan α diketahui.25 membutuhkan sekitar 24.C. Pendekatan yang lebih diinginkan adalah untuk memotong ketinggian piring teoritis dalam setengah. 50%. Misalnya. maka pemisahan tidak mungkin. mengubah α 1.400 piring. ini juga memerlukan dua kali lipat dari waktu analisis. Dalam kromatografi cair efek yang sama dapat diperoleh dengan meningkatkan kekuatan eluting pelarut ini. Namun. biasanya tidak mungkin untuk meningkatkan resolusi dengan menyesuaikan kB' atau N. setengah dari apa yang dibutuhkan. ketika α hampir 1. Perubahan α sering memiliki efek yang lebih dramatis pada resolusi dari kB'. Jika kolom hanya menyediakan 12. jika H dapat menurun lebih dari. diberikan α = 1. maka dimungkinkan untuk mengubah fase dengan cara yang selektif mengubah faktor kapasitas zat terlarut ini.5 meningkatkan resolusi sebesar 267%. Perubahan α adalah mungkin jika kondisi kromatografi diubah dengan cara yang lebih selektif untuk salah satu zat terlarut. 12. Bagaimana jumlah pelat teoritis menjadi dua kali lipat? Cara termudah adalah dengan menggandakan panjang kolom.1-1.21 dapat digunakan untuk menghitung jumlah pelat teoritis yang diperlukan untuk mencapai resolusi yang diinginkan. Bahkan lebih baik. Bahkan.0. resolusi 1. 12. itu juga dimungkinkan untuk mencapai .C.800 pelat teoritis. Jika zat terlarut berpartisipasi dalam reaksi kesetimbangan sekunder baik dalam fase diam atau bergerak.2 Menggunakan Kolom Selektivitas Optimalkan Resolusi Pendekatan kedua untuk meningkatkan resolusi adalah untuk menyesuaikan alpha. Hal ini dikenal sebagai elusi gradien.

yang tidak mengandung bahan kemasan. Perhatikan bahwa untuk kolom tubular terbuka. tetapi yang lain mengikuti lagi. Berbagai kecil dari ukuran partikel dan kemasan lebih konsisten menghasilkan nilai yang lebih kecil untuk λ. Beberapa molekul Jalur terlarut melewati kolom kromatografi perjalanan jalur terpisah yang mungkin berbeda panjangnya. lebih zat terlarut berdifusi ke arah band depan dan . Hp0 Longitudinal Difusi Kontribusi kedua untuk pelebaran pita adalah hasil dari difusi longitudinal zat terlarut dalam fase gerak. dan λ adalah akuntansi konstan untuk konsistensi kemasan. molekul zat terlarut terus bergerak. Beberapa perawatan teoritis pelebaran pita telah diusulkan. jalur yang lebih berliku-liku. Karena perbedaan ini di jalan panjang. Karena konsentrasi zat terlarut adalah terbesar di pusat sebuah band kromatografi. dan perpindahan massa dalam fase gerak. perpindahan massa dalam fase diam. Hp.resolusi yang diinginkan dengan waktu analisis lebih pendek dengan mengurangi kB'atau α. Kami akan mempertimbangkan satu pendekatan di mana ketinggian piring teoritis ditentukan oleh empat kontribusi: beberapa jalur. difusi longitudinal. Beberapa molekul zat terlarut mengikuti jalur yang relatif lurus melalui kolom. molekul zat terlarut disuntikkan secara bersamaan mengelusi pada waktu yang berbeda. Perbedaan molekul penyebab zat terlarut ukuran partikel dan konsistensi kemasan untuk jalur panjang yang berbeda perjalanan. menyebar melalui fase gerak. Faktor utama yang berkontribusi terhadap variasi dalam panjang jalur adalah kemasan homogen dari fase diam dalam kolom. perlu untuk memahami faktor-faktor eksperimental berkontribusi terhadap perluasan band kromatografi zat terlarut ini. adalah Hp = 2λdp dimana dp adalah diameter rata-rata bahan kemasan partikulat. Bahkan jika kecepatan fase mobile 0. Untuk menentukan berapa ketinggian piring teoritis dapat menurun. Kontribusi beberapa jalur dengan ketinggian piring teoritis.

sedangkan laju aliran untuk kolom kapiler adalah 1-25 mL / menit. Kolom ini diisi dengan dukungan yang solid partikulat.belakang tepi dari berdifusi ke tengah band. Pilihan yang gas pembawa digunakan sering ditentukan oleh detektor instrumen. efisiensi pemisahan. gas kromatografi Sebuah teknik kromatografi di mana fase gerak adalah gas. dengan diameter partikel berkisar 37-44 m ke 250-354 m.2 kromatografi kolom Sebuah kromatografi kolom memberikan lokasi untuk fisik mempertahankan fase diam. Laju aliran yang sebenarnya ditentukan dengan flow meter yang ditempatkan di outlet kolom. jumlah analit yang dapat dengan mudah dipisahkan. yang memiliki keuntungan menjadi kimia inert terhadap kedua sampel dan fase diam . disuntikkan ke dalam aliran fase bergerak gas lembam (sering disebut gas carrier). Dengan kolom dikemas kecepatan ponsel-fase biasanya dalam kisaran 25-150 mL / menit. Kromatografi Gas Dalam kromatografi gas (GC) sampel. Konstruksi kolom juga mempengaruhi jumlah sampel yang dapat ditangani. stainless steel. Kedua dikemas dan kolom kapiler digunakan dalam kromatografi gas. Dikemas Kolom Kolom dikemas dibangun dari kaca.1 Tahap Mobilefase mobile yang paling umum untuk GC adalah Dia. 12. Hasil akhirnya adalah peningkatan lebar band. Ar. 12.D. yang mungkin menjadi gas atau cairan.D. Dukungan partikulat yang . dan jumlah waktu yang diperlukan untuk pemisahan. dan N2.D. dengan diameter 2-4 mm. Sampel dilakukan melalui kolom dikemas atau kapiler di mana komponen sampel yang terpisah berdasarkan pada kemampuan mereka untuk mendistribusikan sendiri antara fase mobile dan stasioner. tembaga atau aluminium dan biasanya 2-6 m panjang. 12.

dukungan yang solid yang terbuat dari manik-manik kaca atau polimer fluorocarbon telah diperkenalkan. Untuk meminimalkan beberapa kontribusi jalan dan perpindahan massa dengan tinggi plate. permukaan tanah diatom mengandung gugus silanol (-SiOH).5-7. Partikelpartikel ini cukup berpori. yang dibahas dalam bagian berikutnya. pemisahan didasarkan pada partisi dari zat terlarut antara fasa gerak gas dan fase diam cair dilapisi pada bahan kemasan padat.5 m2 / g. dikemas kolom dapat menangani jumlah yang lebih besar dari sampel. yang menyediakan kontak yang cukup antara fase gerak dan fase diam. juga tersedia. menyediakan situs aktif yang menyerap molekul zat terlarut dalam kromatografi gas-padat. silanols permukaan dinonaktifkan oleh silanizing dengan dimethyldichlorosilane dan cuci dengan alkohol (biasanya methanol) sebelum pelapisan dengan fase diam. Sampel dari 0. Dibandingkan dengan kolom kapiler. kolom dikemas dengan 10. Efisiensi kolom biasanya beberapa ratus sampai 2000 piring / m. Ketika dihidrolisis. biasanya 0.000 pelat teoritis. dilapisi . yang terdiri dari kerangka silika diatom. Dinding berlapis tubular terbuka.paling banyak digunakan adalah tanah diatom. Dalam kromatografi gas-cair (GLC).1-10 mL secara rutin dianalisis dengan kolom dikemas. Dukungan ini memiliki keunggulan yang lebih lembam dari tanah diatom. Kolom mungkin sampai 100 m panjang dengan diameter sekitar 150-300 m. yang menurunkan kualitas pemisahan. disebut kolom megabore. Kolom bore lebih besar dari 530 m. Baru-baru ini. menyediakan kolom dengan 3000-10.000 pelat teoritis memiliki kapasitas puncak dari kapiler Kolom kapiler. Kolom kapiler terdiri dari dua jenis utama. kolom (WCOT) mengandung lapisan tipis fase diam. Untuk menghindari adsorpsi molekul zat terlarut pada bahan kemasan terkena. dengan area permukaan 0. atau kolom tubular terbuka yang dibangun dari leburan silika dilapisi dengan polimer pelindung. bahan kemasan harus dari kecil diameter yang praktis dan sarat dengan film tipis fase diam.25 pM tebal.

Meskipun ratusan fasa diam telah dikembangkan. di mana semua kelompok -R adalah kelompok . Tidak adanya bahan kemasan memungkinkan kolom kapiler menjadi lebih lama dari kolom dikemas. volatilitas yang rendah. Dalam dukungan berlapis kolom terbuka tubular (SCOT). Agar elusi di GLC ditentukan terutama oleh titik didih zat terlarut dan. 12.pada dinding bagian dalam kapiler. termal stabil. oleh interaksi zat terlarut dengan fase diam. seperti tanah diatom.3 Stationary Tahapan Selektivitas Dalam kromatografi gas dipengaruhi oleh pilihan fase diam. dan zat terlarut polar lebih mudah untuk memisahkan menggunakan fase diam polar. dalam rangka peningkatan polaritas. banyak yang tersedia secara komersial.D. Kolom kapiler memberikan peningkatan yang signifikan dalam efisiensi pemisahan. untuk tingkat yang lebih rendah. dilapisi dengan fase diam cair melekat pada dinding bagian dalam kapiler ini. Tekanan yang dibutuhkan untuk memindahkan fase gerak melalui kolom dikemas membatasi panjangnya. dan dari polaritas yang tepat untuk zat terlarut yang dipisahkan. bersama dengan sifat fisik dan aplikasi khas. Zat terlarut dengan titik didih yang berbeda secara signifikan dengan mudah dipisahkan. Secara umum. Beberapa ini tercantum. lapisan tipis dari dukungan yang solid. dua zat terlarut dengan titik didih yang sama dapat dipisahkan hanya jika fase diam selektif berinteraksi dengan salah satu zat terlarut. Sebuah fase stasioner polidimetil siloxane. zat terlarut nonpolar lebih mudah dipisahkan dengan fase diam nonpolar. kontribusi lebih penting untuk efisiensi mereka lebih besar adalah kemampuan untuk fashion kolom lagi. Kriteria utama untuk memilih fase diam adalah bahwa itu harus kimiawi inert. mayoritas pemisahan GLC dicapai dengan mungkin 5-10 fase stasioner umum. Meskipun sebagian besar kolom kapiler berisi piring lebih teoritis per meter dari kolom dikemas. Di sisi lain.

Meningkatkan polaritas disediakan oleh menggantikan trifluoropropyl (-C3H6CF3) dan kelompok fungsional sianopropil (-C3H6CN) atau menggunakan fase diam berdasarkan polietilen glikol. Yang paling menonjol adalah fase stasioner yang mengandung gugus fungsional kiral. Terikat fase stasioner yang melekat pada permukaan silika kapiler. Ketebalan film yang paling umum adalah 0. adalah nonpolar dan sering membuat pertama pilihan yang baik untuk pemisahan baru. seumur hidup berguna kolom ini secara signifikan dipersingkat. dalam 50% metil-50% fenil polysiloxane. yang dilakukan setelah fase diam ditempatkan di kolom kapiler.25 m. seperti steroid. dengan zat terlarut mendidih rendah eluting pertama. Film tebal digunakan untuk zat terlarut sangat volatile. memberikan selektivitas yang lebih besar. Karakteristik penting lain dari kolom kromatografi gas adalah ketebalan fase diam. Dengan demikian. seperti gas. menghasilkan fase diam sedikit polar. . karena mereka memiliki kapasitas yang lebih besar untuk mempertahankan zat terlarut tersebut. Urutan elusi saat menggunakan polidimetil siloxane biasanya mengikuti titik didih dari zat terlarut. 50% dari kelompok -R adalah kelompok fenil (-C6H5). efisiensi pemisahan meningkatkan dengan film tipis. yang dapat digunakan untuk memisahkan enantiomer. Mengganti beberapa kelompok metil dengan substituen lain meningkatkan polaritas fase diam. Ketika dioperasikan di atas batas ini. Masalah penting dengan semua fase diam cair adalah kecenderungan mereka untuk "berdarah" dari kolom. Silang. Film tipis digunakan ketika memisahkan zat terlarut dari volatilitas yang rendah. Beberapa fase stasioner GLC mengandalkan selektivitas kimia. link bersama rantai polimer yang terpisah. Kolom kapiler dengan fasa diam terikat atau silang memberikan stabilitas superior.metil (CH3). sehingga memberikan stabilitas yang lebih besar.

seperti Tenax. Senyawa ini menyapu melalui perangkap dikemas dengan bahan penyerap. Kedua. yang dilapisi dengan film tipis organik.4 Contoh Pendahuluan Tiga pertimbangan menentukan bagaimana sampel diperkenalkan ke kromatografi gas. Sebuah pendekatan yang menarik untuk mengisolasi analit adalah fase padat microextraction (SPME). yang umum digunakan. Dalam satu pendekatan. Serat tersebut kemudian ditarik ke dalam jarum dan ditransfer ke kromatografi gas untuk analisis.19 di Bab 7). Serat. ditiupkan melalui sampel. membersihkan senyawa volatil. yang diilustrasikan pada Gambar 12. diturunkan ke dalam sampel dengan menekan plunger dan terkena sampel untuk waktu yang telah ditentukan. analit harus hadir pada konsentrasi yang tepat. bagaimanapun. Zat terlarut dari volatilitas yang rendah dapat ditahan oleh kolom dan terus mengelusi selama analisis sampel berikutnya. Pertama.19. Analit menguap dapat dipisahkan dari matriks nonvolatile menggunakan teknik ekstraksi yang dijelaskan dalam Bab 7. Analit menguap juga dapat dipisahkan dari matriks cair menggunakan pembersihan dan perangkap atau dengan headspace sampling. Tidak setiap sampel yang berpotensi dapat dianalisis dengan GC. Untuk bergerak melalui kolom. semua konstituen disuntikkan ke GC harus stabil. di mana analit diekstrak dari matriks berair dalam metilen klorida atau pelarut organik lainnya. gas inert. menyuntikkan sampel tidak harus menurunkan pemisahan. Akhirnya. konstituen sampel ini harus stabil. serat leburan silika ditempatkan di dalam jarum suntik. ekstraksi caircair.D. dapat disuntikkan langsung ke instrumen. Zat terlarut nonvolatile mengembun pada kolom.12. Mempersiapkan Contoh kromatografi gas Volatile dapat digunakan untuk memisahkan analit dalam matriks kompleks. di . Ekstraksi fase padat juga digunakan untuk menghilangkan konstituen matriks yang tidak diinginkan. menurunkan kinerja kolom ini. seperti Dia atau N2. seperti polidimetil siloxane. Dalam pembersihan dan perangkap (lihat Gambar 7.

Pemanasan perangkap dan kembali disiram dengan gas pembawa transfer senyawa volatil dengan kromatografi gas. analit dapat hadir pada tingkat konsentrasi yang melebihi . Desorpsi termal digunakan untuk melepaskan analit menguap dari padatan. Selain itu. Analit volatile menyapu dari tabung dengan gas pembawa dan dibawa ke GC. Ketika suatu analit terlalu terkonsentrasi. proses yang dikenal sebagai kriogenik fokus. Setelah membersihkan dengan gas pembawa untuk menghilangkan O2 (yang dapat menyebabkan reaksi oksidasi saat memanaskan sampel). asam amino tidak cukup stabil untuk menganalisis secara langsung dengan kromatografi gas. Sebagian dari padat ditempatkan dalam tabung stainless steel berlapis kaca dan diadakan di tempat dengan colokan dari glass wool. misalnya. Bahan organik yang mudah menguap diisolasi dari sampel air dengan pembersihan dan perangkap. Misalnya. Analit nonvolatile harus kimia dikonversi ke turunan stabil sebelum analisis. Setelah memungkinkan waktu untuk analit menguap untuk menyeimbangkan antara sampel dan udara di atasnya. Di ruang atas sampel sampel ditempatkan dalam botol tertutup dengan ruang udara di atasnya. Untuk menjaga efisiensi zat terlarut sering terkonsentrasi di bagian atas kolom dengan mendinginkan kolom inlet di bawah suhu kamar. Menyesuaikan analit AnalyteÕs Konsentrasi hadir pada konsentrasi terlalu kecil untuk memberikan kebutuhan sinyal yang memadai untuk berkonsentrasi sebelum menganalisis. Mereaksikan asam amino dengan 1-butanol dan asetil klorida menghasilkan asam amino esterfied. Pengobatan selanjutnya dengan asam trifluoroasetat memberikan asam amino ini mudah menguap N-trifluoroacetyl-n-butil ester turunan. sehingga serius merendahkan pemisahan. Sebuah sisi manfaat dari banyak metode ekstraksi diuraikan sebelumnya adalah bahwa mereka sering berkonsentrasi analit.000 kali lipat. sampel dipanaskan. mudah untuk membebani kolom. sebagian dari fasa uap sampel oleh jarum suntik dan disuntikkan ke dalam kromatografi gas.mana mereka dikumpulkan. dapat terkonsentrasi sebanyak 1.

Detektor yang ideal memiliki beberapa fitur yang diinginkan.6 Kromatografi Gas Bagian akhir dari kromatografi gas detektor. Hambatan listrik . didasarkan pada konduktivitas termal fase mobile. seperti metilen klorida. yang masih banyak digunakan. Biasanya. itu melewati kawat filamen tungsten-renium. Dalam pemisahan isotermal kolom dipertahankan pada suhu konstan. temperatur diatur sedikit di bawah itu untuk zat terlarut didih terendah sehingga dapat meningkatkan interaksi zat terlarut dengan fase diam. Sebagai fase gerak keluar kolom. Menyuntikkan Sampel Untuk menghindari kerugian precolumn dalam resolusi karena pelebaran pita. respon linear melalui berbagai konsentrasi zat terlarut (yang membuat pekerjaan kuantitatif lebih mudah). Temperatur awal ditetapkan di bawah bahwa untuk zat terlarut didih terendah.D.D. sampel dari ukuran yang cukup harus diperkenalkan dalam volume kecil dari fase gerak. Thermal Conductivity Detector Salah satu detektor kromatografi gas paling awal. pilihan yang ditentukan oleh zat terlarut. kontrol suhu kolom ini sangat penting untuk mencapai pemisahan yang baik dalam kromatografi gas. tanggap terhadap semua zat terlarut atau selektivitas untuk kelas tertentu dari zat terlarut. Sebagai pemisahan berlangsung.respon linear detektor. Salah satu kesulitan dengan pemisahan isotermal adalah bahwa suhu mendukung pemisahan zat terlarut mendidih rendah dapat menyebabkan waktu retensi terlalu lama untuk zat terlarut didih lebih tinggi. 12. Oven mampu pemrograman suhu memberikan solusi untuk masalah ini. Melarutkan sampel dalam pelarut yang mudah menguap.5 Temperature Control Seperti disebutkan sebelumnya. suhu perlahan-lahan meningkat baik di tingkat seragam atau dalam serangkaian langkah-langkah. termasuk batas rendah deteksi. Untuk alasan ini kolom terletak di dalam oven thermostated. 12. membuat analisis yang layak. dan ketidakpekaan terhadap perubahan tingkat atau suhu mengalir.

Karena konduktivitas termal yang tinggi. Api ionisasi Detector Pembakaran senyawa organik dalam hasil H2 / udara api dalam api kaya elektron dan ion. tergantung pada konduktivitas termal dari fase gerak. yang. Atom karbon yang paling. Ketika diperkuat. seperti H2O dan CO2 tidak dapat dideteksi. konduktivitas termal dari penurunan fase gerak dan suhu kawat filamen. yang semuanya dapat menyebabkan perubahan dalam perlawanan filamen ini. Jika potensi sekitar 300 V diterapkan di api. karena memberikan sinyal untuk zat terlarut yang konduktivitas termal berbeda dari helium. saat ini memberikan sinyal analitis yang berguna. di mana hanya fase gerak berlalu. pada gilirannya. tekanan. meningkat. Ketika zat terlarut terelusi dari kolom. kecuali orang-orang di karbonil dan gugus karboksilat. hancur ketika menggunakan detektor . Sebagian besar senyawa anorganik dan banyak gas. mengoreksi setiap variasi bergantung waktu di laju aliran. dan dengan demikian ketahanan. Keuntungan lain adalah bahwa hal itu memberikan respon linear untuk konsentrasi zat terlarut pada rentang 104-105 lipat. membuat FID detektor yang ideal untuk analisis sampel lingkungan atmosfer dan berair. helium adalah fase mobile pilihan saat menggunakan detektor konduktivitas termal (TCD). Sebuah sel referensi. menghasilkan sinyal. Ini adalah dasar dari detektor populer ionisasi nyala (FID). atau daya listrik. batas deteksi konduktivitas detektor panas adalah miskin dibandingkan dengan detektor populer lainnya. Detektor juga tak rusak. tentu saja. sehingga memungkinkan untuk mengisolasi zat terlarut dengan perangkap dingin postdetector. Sampel. Keuntungan dari FID termasuk batas deteksi yang sekitar dua sampai tiga kali lipat lebih kecil dari itu untuk detektor konduktivitas termal dan respon linear lebih 106-107 lipat dalam jumlah analit disuntikkan.filamen tergantung pada suhu. Sayangnya. arus kecil kira-kira 10-9-1012 A berkembang. membuat FID detektor hampir universal untuk senyawa organik. Sebuah detektor TCD memiliki keuntungan dari universalitas.

Detektor termionik merespon senyawa yang mengandung nitrogen atau fosfor. dan zat terlarut) yang terionisasi. Detektor lain Dua detektor tambahan serupa di desain untuk detektor ionisasi nyala. Meskipun batas deteksi yang sangat baik. Elektron Tangkap Detector The penangkapan elektron detektor adalah contoh detektor selektif. Di ruang ionisasi semua molekul (sisa gas pembawa. Dalam GC-FT-IR. Dalam fotometri nyala detektor emisi optik dari fosfor dan sulfur menyediakan detektor selektif untuk senyawa yang mengandung unsur-unsur ini. yang Fourier transform spektrofotometer inframerah (FT-IR) dan spektrometer massa (MS). Karena setiap zat terlarut mengalami fragmentasi karakteristik menjadi . dan kelompok nitro dan relatif tidak sensitif terhadap amina. limbah dari kolom mengalir melalui sel optik dibangun dari tabung Pyrex 10-40 cm dengan diameter internal 1-3 mm. Penurunan arus listrik ini berfungsi sebagai sinyal. ECD sangat selektif terhadap zat terlarut dengan kelompok elektronegatif fungsional.ionisasi nyala. alkohol. arus listrik berkurang. rentang linier memanjang lebih dari hanya sekitar dua kali lipat. pelarut. Permukaan interior sel dilapisi dengan lapisan mencerminkan emas. Elektron yang dipancarkan mengionisasi fase gerak. mengakibatkan produksi elektron tambahan yang menimbulkan arus listrik antara sepasang elektroda (Gambar 12. Dua detektor yang umum. dan ion dipisahkan oleh rasio massa terhadap muatan mereka. dan hidrokarbon. yang biasanya N2. yang juga merupakan instrumen independen. Dalam GC-MS limbah dari kolom diperkenalkan langsung ke ruang ionisasi spektrometer massa ini dengan cara yang menghilangkan sebagian besar gas pembawa. Ketika zat terlarut dengan penampang tinggi untuk menangkap elektron elutes dari kolom.23). Detektor terdiri dari emitor beta (partikel beta adalah sebuah elektron) seperti 63 Ni. seperti halogen. Beberapa refleksi dari radiasi sumber seperti yang ditularkan melalui sel meningkatkan panjang jalur optik melalui sampel.

diikuti oleh perpisahan mereka pada kolom kapiler dengan fase diam nonpolar. dengan kisaran linear yang mencakup lima lipat. seperti yang ditemukan di rempah-rempah dan wewangian. Sebuah kromatogram khas untuk analisis bensin tanpa timbal ditunjukkan pada Gambar . klinis. Analisis organik yang mudah menguap dalam air minum. spektrum massa intensitas ion sebagai fungsi dari rasio massa terhadap muatan memberikan informasi kualitatif yang dapat digunakan untuk mengidentifikasi zat terlarut. biasanya 25 fg 100 pg. dan air limbah. Sebagai detektor GC. forensik. dilakukan dengan pembersihan dan perangkap. Analisis lingkungan Salah satu aplikasi lingkungan yang paling penting dari kromatografi gas untuk analisis berbagai polutan organik di udara.7 Aplikasi kuantitatif kromatografi gas Banyak digunakan untuk analisis beragam sampel di lingkungan. Analisis klinis klinis. ilmu makanan.ion yang lebih kecil. Contoh aplikasi ini dibahas dalam bagian berikut. sebuah proses yang disebut pemantauan ion selektif. 12. farmasi. Bahan yang mudah menguap. dan petrokimia laboratorium. atau spektrometer massa dapat digunakan sebagai detektor. sering dapat diperoleh dengan headspace sampling.D. Sebuah ionisasi nyala. Sebuah spektrometer massa memberikan batas deteksi yang sangat baik. Makanan dan minuman dianalisis baik secara langsung maupun setelah ekstraksi yang cocok. penangkapan elektron. dan laboratorium forensik sering menggunakan kromatografi gas untuk analisis obat. analit umumnya harus diisolasi dengan ekstraksi. air. Karena matriks sampel adalah sering tidak sesuai dengan kolom GC. Selektivitas dapat dicapai dengan memantau hanya spesifik rasio massa terhadap muatan. misalnya. total arus ion untuk semua ion mencapai detektor biasanya digunakan untuk memperoleh kromatogram. biokimia. farmasi .

waktu retensi yang disesuaikan dari alkana yang normal meningkatkan logaritmis.25. informasi spektral yang tersedia sering dapat digunakan untuk mengidentifikasi zat terlarut individu. Indeks retensi Kovat menyediakan salah satu solusi untuk pencocokan waktu retensi. diberikan sebagai 12. dengan demikian. indeks retensi adalah 400 untuk butana dan 500 untuk pentana. Satu pendekatan adalah untuk spike sampel dengan menambahkan aliquot dari analit dicurigai dan mencari peningkatan ketinggian puncak. senyawa eluting antara butana dan pentana memiliki indeks retensi antara 400 dan 500. Waktu retensi juga dapat dibandingkan dengan nilai yang terukur untuk standar. Karena kesulitan yang sama persis dengan kondisi seperti itu. dan x + 1 . tabel waktu retensi merupakan utilitas terbatas. untuk alkana normal seperti 100 kali jumlah atom karbon. Perhitungan kuantitatif Dalam analisis kuantitatif. Misalnya. tinggi atau area puncak kromatografi suatu analit yang digunakan untuk menentukan konsentrasi. metode lain harus digunakan untuk mengidentifikasi zat terlarut. asalkan kondisi operasi yang identik. Dalam kondisi isotermal.D.8 Kualitatif Aplikasi Kromatografi Gas juga dapat digunakan untuk tujuan kualitatif. ICPD. Meskipun tinggi puncak mudah untuk mengukur. utilitas dibatasi oleh hubungan terbalik antara tinggi dan lebar puncak kromatografi. variasi. tepat nilai indeks retensi senyawa ini. Kecuali kondisi kromatografi secara hati-hati dikendalikan untuk mempertahankan efisiensi kolom konstan. Ketika menggunakan FTIR atau spektrometer massa sebagai detektor. Untuk menentukan indeks retensi untuk senyawa lain. waktu retensi yang disesuaikan diukur relatif terhadap bahwa untuk alkana biasa eluting sebelum dan sesudah. Dengan detektor nonspectroscopic konvensional.d. 12.12. Kovat didefinisikan indeks retensi.29 di mana x adalah eluting alkana normal sebelum kompleks. saya.

juga dapat interferent. juga diekstrak. maka kita bisa berasumsi bahwa sampel juga bebas dari kontaminasi. 2. Jika menunjukkan kosong sampel bukti untuk kloroform. seperti benzena dan fenol. Karena volatilitas. 12D. Bagaimana kita bisa menentukan apakah sampel telah terkontaminasi dengan cara ini? Sebuah kosong sampel air trihalomethane bebas dapat disimpan dengan sampel setiap saat. Mengapa kehadiran senyawa lain tidak mengganggu analisis ini? Detektor penangkapan elektron relatif tidak sensitif terhadap senyawa Nonhalogenated. mencemari sampel.10 Evaluasi Skala Operasi analit hadir pada tingkat dari besar untuk komponen ultratrace telah berhasil ditentukan dengan kromatografi gas. memberikan selektivitas tambahan.D. 12. Meskipun kloroform adalah analit.adalah yang eluting alkana yang normal setelah kompleks. sampel dengan analit besar dan kecil mungkin perlu diencerkan sebelum analisis. Mengapa perlu untuk mengumpulkan sampel sehingga tidak ada ruang atas (lapisan udara yang melapisi cairan) di botol sampel? Karena volatilitas trihalomethanes. Metode ini menggunakan singkat. kloroform hadir di udara laboratorium dapat menyebar melalui sampel botol ini Teflon septum. 3. Ekstraksi cair-cair yang digunakan untuk mengekstrak trihalomethanes adalah selektif. 4. kolom dikemas yang umumnya menghasilkan resolusi miskin puncak kromatografi. Selain trihalomethanes. Termal konduktivitas dan ionisasi nyala detektor . deskripsi berikut penentuan trihalomethanes dalam air minum memberikan contoh instruktif dari prosedur yang khas. kehadiran headspace sebuah memungkinkan untuk kemungkinan kehilangan analit. Ekstraksi lengkap.9 Metode Perwakilan Setiap metode kromatografi gas memiliki pertimbangan sendiri yang unik. Tergantung pada pilihan detektor. berbagai konstituen organik nonpolar dan polar.

sampel cairan. Meskipun kromatografi kolom sederhana. atau sampel padat terlarut dalam pelarut yang sesuai. pertukaran ion dan eksklusi ukuran. fokus dari bagian ini adalah pada kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC). seperti peptida dan karbohidrat. Sebuah diagram skematik dari instrumen HPLC yang khas ditunjukkan pada Gambar 12. detektor lainnya. tetapi hanya setelah mereka telah dibuat lebih mudah menguap oleh derivatisasi kimia yang cocok. Dalam setiap kasus. Sampel nonvolatile. dan oleh zat terlarut / interaksi ponsel-fase. termasuk adsorpsi cair-padat. partisi cair-cair. Sisa dari bagian ini penawaran eksklusif dengan pemisahan HPLC berdasarkan partisi cair-cair.E Tinggi Kromatografi Cair Kinerja Meskipun Kromatografi gas digunakan secara luas. instrumentasi dasar pada dasarnya sama. memerlukan jumlah substansial lebih kecil dari analit.dapat menangani sejumlah besar analit. masih digunakan dalam pekerjaan preparatif skala besar.26. seperti detektor penangkapan elektron atau spektrometer massa. berbagai teknik termasuk dalam lingkup umum kromatografi cair adalah salah satu teknik pemisahan paling umum digunakan. 12. dilakukan melalui kolom kromatografi dengan fasa gerak cair. Dalam HPLC. jumlah bahan yang tersedia dari mana volume injeksi diambil harus cukup untuk menjadi sampel yang representatif. itu terbatas pada sampel yang stabil secara termal dan mudah diuapkan. Pemisahan ditentukan oleh interaksi zat terlarut / stasioner fase. . Untuk analit jejak. Untuk alasan ini. jumlah aktual analit disuntikkan sering di kisaran pikogram. pertama kali diperkenalkan oleh Tswett. Meskipun volume sampel disuntikkan cukup kecil (sering kurang dari mikroliter a). dapat dianalisis dengan GC. bagaimanapun. Bentuk lain dari kromatografi cair menerima pertimbangan kemudian dalam bab inikolom:.

12.1 mm dan 4. silika sering adalah "dibatasi" dengan mereaksikan dengan Si (CH3Cl.6 mm. di mana R adalah alkil atau gugus alkil tersubstitusi.3 Fase Gerak Elusi agar zat terlarut dalam HPLC diatur oleh polaritas.E. maka fase diam akan polar. melindunginya dari kontaminasi. 12. Terikat fase stasioner yang melekat dengan mereaksikan partikel silika dengan organochlorosilane dari bentuk umum Si (CH3) 2 RCL. gugus alkil yang organosilane ini. Untuk mencegah interaksi yang tidak diinginkan antara zat terlarut dan kelompok -SiOH tidak bereaksi. Kolom analitis kolom yang paling umum digunakan untuk HPLC dibangun dari stainless steel dengan diameter internal antara 2. kolom tersebut ditetapkan sebagai end-capped Sifat dari fase diam ditentukan oleh sifat. kali retensi dikendalikan dengan memilih fase .1 HPLC Sebuah HPLC biasanya meliputi dua Kolom analitis yang bertanggung jawab untuk pemisahan dan kolom penjaga. Fase diam mungkin sebagian larut dalam fase gerak.E. dan panjang mulai dari sekitar 30 mm sampai 300 mm.000-60. menyebabkan ia "berdarah" dari kolom dari waktu ke waktu.000 pelat teoritis / m. Efisiensi kolom khas adalah 40. Kolom ini dikemas dengan 3-10 m partikel silika berpori yang mungkin memiliki bentuk yang tidak teratur atau bulat. itu kovalen terikat pada partikel silika. Jika R adalah gugus fungsional polar.2 Fasa Diam Dalam kromatografi cair-cair fase diam adalah sebuah film cair dilapisi bahan kemasan yang terdiri dari 3-10 m partikel silika berpori. Kolom penjaga ditempatkan sebelum kolom analitis. dalam pemisahan yang normalfase zat terlarut paling polar menghabiskan proporsional sedikit waktu dalam fase diam polar dan zat terlarut pertama yang terelusi dari kolom. Untuk mencegah ini kehilangan fase diam.12.E.

Dalam pemisahan fase-balik urutan elusi dibalik. Bahan partikulat mampu menyumbat pipa HPLC atau kolom dihilangkan dengan penyaringan. beralih ke fase gerak lebih polar dapat memberikan pemisahan diterima dengan analisis yang lebih pendek waktu. mengakibatkan distorsi sinyal detektor. Memilih Tahap Ponsel Beberapa indeks telah dikembangkan untuk membantu dalam memilih fase mobile. mengendalikan polaritas fase mobile memainkan peran penting dalam meningkatkan pemisahan kromatografi cair. sedangkan waktu retensi lebih pendek memerlukan fase mobile polaritas yang lebih rendah. beralih ke lead fase gerak kurang polar untuk waktu retensi lebih lama dan lebih banyak kesempatan untuk pemisahan diterima. Hal ini penting ketika menggunakan elusi gradien. Jika. yang paling berguna dari yang merupakan indeks polaritas.gerak. Ketika dua zat terlarut yang cukup diselesaikan. Gas-gas terlarut sering menyebabkan pembentukan gelembung gas saat fase gerak memasuki detektor. Ketersediaan beberapa waduk pelarut memungkinkan komposisi fase gerak untuk dengan cepat dan mudah bervariasi. seperti Dia. Degassing dicapai dalam beberapa cara. degassing dan penyaringan dapat diselesaikan sebelum pelarut . dengan yang paling zat terlarut polar menjadi yang pertama untuk mengelusi.4 HPLC Sebuah fitur penting dari HPLC instrumentasi adalah kehadiran beberapa waduk pelarut . tetapi yang paling umum adalah penggunaan pompa vakum atau sparging dengan gas inert.E. 12. Sebagaimana dibahas dalam bagian sebelumnya. dengan fase gerak kurang polar mengarah ke waktu retensi lebih lama. yang memiliki kelarutan yang rendah dalam fase gerak. pemisahan miskin karena zat terlarut yang eluting terlalu cepat. misalnya. Meningkatkan polaritas fase gerak menyebabkan waktu retensi lebih lama. Jika instrumen tidak dirancang untuk melakukannya. yang komposisi ponsel-fase sistematis berubah dari pelarut lemah untuk pelarut kuat.

12.ditempatkan di waduk.5 Contoh Pendahuluan tekanan operasi khas dari HPLC cukup tinggi bahwa tidak mungkin untuk menyuntikkan sampel dengan cara yang sama seperti dalam kromatografi gas. Kebanyakan instrumen HPLC menggunakan pompa reciprocating terdiri dari piston yang gerakan back-dan-sebagainya mampu baik mempertahankan laju aliran konstan hingga beberapa mililiter per menit dan mendapatkan tekanan output tinggi diperlukan untuk mendorong fase mobile melalui kromatografi yang kolom. Sampai saat ini. 12. Sebaliknya. mayoritas detektor HPLC tidak unik untuk metode. Setiap sampel tambahan di luar yang diperlukan untuk mengisi keluar sampel loop melalui jalur limbah. Setelah loading sampel. .5 uL ke 2 mL. Sebuah katup proporsi pelarut mengontrol komposisi fase mobile. yang memungkinkan perubahan yang diperlukan dalam komposisi fase gerak ketika menggunakan elusi gradien. tetapi baik instrumen berdiri sendiri atau versi yang dimodifikasi dari yang sama. Sebuah jarum suntik dengan kapasitas beberapa kali bahwa dari loop sampling digunakan untuk menempatkan sampel dalam lingkaran. dan sampel menyapu ke kolom. Pelarut ponsel-fase yang ditarik dari waduk mereka oleh aksi pompa. banyak detektor telah dikembangkan untuk digunakan dalam pemisahan HPLC pemantauan.E. Sampling loop yang dipertukarkan. Untuk menghilangkan masalah ini peredam pulsa ditempatkan di outlet pompa. injector dihidupkan ke posisi inject. sampel dimasukkan menggunakan loop injector. Bolak-balik gerakan dari hasil pompa reciprocating dalam aliran berdenyut yang memberikan kontribusi suara untuk kromatogram. Dalam posisi ini fase mobile diarahkan melalui loop sampling. dan tersedia dengan volume mulai dari 0.E. Dalam posisi beban loop sampel diisolasi dari fase gerak dan terbuka ke atmosfer.6 Detektor untuk HPLC Seperti kromatografi gas.

voltametri. Detektor elektrokimia kelompok lain yang umum dari detektor HPLC tersebut didasarkan pada pengukuran elektrokimia seperti amperometry. Coulometry. Selain itu. namun memilikideteksi yang lebih miskin batas dari 100 ng-1 mg analit disuntikkan. Detektor lainnya Beberapa detektor lainnya telah digunakan dalam HPLC. pada dasarnya spektrofotometer dimodifikasi dilengkapi dengan aliran sel. Batas deteksi yang sesedikit 1-10 pg analit disuntikkan. detektor indeks bias tidak berguna untuk elusi gradien kecuali komponen ponsel-fase memiliki indeks bias yang identik. biasanya 100 pg-1 ng analit disuntikkan.Detektor spektroskopi Detektor HPLC paling populer didasarkan pada pengukuran spektroskopi. Keuntungan menggunakan spektrometer massa di HPLC yang sama seperti untuk kromatografi gas. Detektor fluoresensi memberikan selektivitas tambahan karena lebih sedikit zat terlarut mampu fluorescing. dengan nilai serendah 1-10 pg dalam beberapa situasi. Batas deteksi yang cukup baik. kromatogram yang dihasilkan adalah plot absorbansi sebagai fungsi waktu elusi. dan fluoresensi. menanggapi hampir semua senyawa. Selain itu. Kromatogram yang dihasilkan adalah plot intensitas fluoresensi sebagai fungsi waktu. spektrometer massa memberikan kualitatif. dan konduktivitas. Instrumen memanfaatkan array dioda rekor spektrofotometer seluruh spektrum. Mengukur perubahan indeks bias fase mobile analog dengan memantau konduktivitas termal fase mobile di kromatografi gas. termasuk UV / Vis penyerapan. Bila menggunakan UV / Vis detektor. Detektor lain yang berguna adalah spektrometer massa. di mana panjang gelombang analitis yang dipilih dengan menggunakan filter yang tepat. memberikan kromatogram tiga dimensi yang menunjukkan absorbansi sebagai fungsi dari panjang gelombang dan elusi waktu. informasi struktural yang . Sebuah detektor indeks bias hampir universal. Detektor ini berkisar dari desain sederhana.

8 Cara Perwakilan Meskipun setiap metode HPLC memiliki pertimbangan sendiri yang unik. dan pengukuran kuantitatif dapat dibuat dengan menggunakan standar eksternal dan kurva kalibrasi normal. biaya. dan waktu. Perhitungan kuantitatif analisis kuantitatif sering lebih mudah untuk melakukan dengan HPLC dari GC karena suntikan yang dibuat dengan injeksi lingkaran tetap volume bukan jarum suntik.E.(2metoksifenil) piperazine dalam toluena. 12. bagaimanapun. industri. Mereaksikan isosianat dengan 1.(2-metoksifenil) piperazine melayani tujuan ganda menstabilkan mereka terhadap degradasi sebelum analisis HPLC sementara juga membentuk turunan yang dapat dipantau dengan penyerapan UV.7 kuantitatif Aplikasi HPLC Secara rutin digunakan untuk kedua analisis kualitatif dan kuantitatif dari lingkungan. Akibatnya.E. deskripsi berikut tekad . forensik. Perkembangan terkini dalam spektrometri massa.dapat membantu mengidentifikasi analit. Isosianat organik di atmosfer industri dapat ditentukan dengan cara ini oleh gelembung udara melalui larutan 1. variasi dalam jumlah sampel disuntikkan diminimalkan. dari fluoxetine dalam serum memberikan contoh instruktif dari prosedur khas. selektivitas. kepekaan.9 Evaluasi Bila dibandingkan dengan kromatografi gas. sampel klinis. Gas dikumpulkan oleh gelembung melalui perangkap yang mengandung pelarut yang cocok. Antarmuka antara HPLC dan spektrometer massa secara teknis lebih sulit dari itu dalam GC-MS karena ketidakcocokan fase gerak cair dengan persyaratan vakum tinggi spektrometer massa ini. dan produk konsumen. dan . 12. ketepatan.E. HPLC hanya memiliki beberapa perbedaan dalam skala operasi. telah menyebabkan minat yang tumbuh di LC-MS. ketelitian. 12. farmasi.

di sisi lain. di mana LLC unggul. lemah penukar asam kation. isooctane. keton <alkohol. tapi kolom modern menggunakan porous partikel 3-10-um silika atau alumina. Dalam karya asli Tswett ini fase stasioner halus dibagi CaCO3. kuat penukar . 12F LiquidÐSolid Adsorpsi Kromatografi Dalam kromatografi adsorpsi cair-padat (LSC) kemasan kolom juga berfungsi sebagai fase diam. juga dapat digunakan. aldehid. biasanya divinylbenzene polystyrene silang. dari yang lebih pendek untuk waktu retensi lebih lama. Resin pertukaran ion dibagi menjadi empat kategori: kuat penukar asam kation. Fasa diam nonpolar. Karena HPLC tidak terbatas pada analit volatile. Sejak fase diam adalah polar. fase gerak biasanya pelarut nonpolar atau agak polar. seperti sebagai absorben berdasarkan arang-. Kapiler GC kolom. Gambar 12. Fase gerak khas termasuk heksana. Volume injeksi di HPLC biasanya secara signifikan lebih besar daripada di GC karena kapasitas yang lebih besar dari kolom HPLC. 12G IonEfek Kromatografi Dalam kromatografi pertukaran ion (IEC) fase diam adalah resin polimer cross-linked. dengan kelompok-kelompok fungsional kovalen ionik.peralatan yang diperlukan. Presisi dalam HPLC sering lebih baik karena penggunaan rutin injector lingkaran. adalah olefin <hidrokarbon aromatik <eter <ester. amina <amida <asam karboksilat Bagi kebanyakan sampel kromatografi cair-padat tidak menawarkan kelebihan khusus lebih cair kromatografi -liquid (LLC). Urutan biasa elusi. dan metilen klorida. kisaran senyawa yang dapat dianalisis agak lebih besar daripada untuk GC. menyediakan tenaga menyelesaikan lebih besar untuk campuran kompleks. Satu pengecualian adalah untuk analisis isomer. The counterions untuk ini biaya tetap mobile dan dapat dipindahkan oleh ion yang bersaing lebih menguntungkan untuk situs pertukaran.32 menunjukkan pemisahan LSC khas dua amfetamin pada kolom silika menggunakan 80:20 campuran metilen klorida dan metanol yang mengandung 1% NH4OH sebagai fase gerak. memiliki piring lebih teoritis.

dengan demikian kehilangan kapasitas tukar mereka. oleh karena itu mempertahankan muatan positif bahkan dalam solusi sangat dasar. sepenuhnya terprotonasi pada tingkat pH kurang 4. oleh karena itu. tetapi terbatas pada kisaran moderat. dan dengan demikian kapasitas untuk pertukaran ion. Zat terlarut lebih kecil menghabiskan proporsional lebih banyak waktu dalam pori-pori dan. sebuah basa lemah anion exchanger kehilangan muatan positif dan. Dalam kromatografi ukuran-eksklusi. 12. . Lemah penukar dasar anion.dasar anion. kapasitas tukarini:. Kedua bahan berpori. akibatnya. membutuhkan waktu lebih lama untuk mengelusi dari kolom. Kelompok-kelompok fungsional untuk asam penukar kation lemah. Kuat penukar asam kation termasuk asam kelompok sulfonat fungsional yang mempertahankan bentuk anion.000 Å untuk divinylbenzene resin silang polystyrene. dalam solusi asam kuat. Penukar dasar anion yang kuat yang dibentuk menggunakan amina kuartener. tetap terprotonasi hanya pada tingkat pH yang cukup mendasar. Dalam kondisi yang lebih mendasar. Ukuran selektivitas dari kemasan tertentu tidak tak terbatas. bagaimanapun. juga disebut molekul-pengecualian atau kromatografi gel-permeasi. pemisahan didasarkan pada kemampuan zat terlarut untuk masuk ke dalam pori-pori kemasan kolom. dengan ukuran pori berkisar dari sekitar 50-4000 Å untuk partikel silika dan dari 50 ke 1.H Chromatography Ukuran-Pengecualian Dua kelas fasa diam berukuran mikron telah ditemukan di bagian Partikel silika dan silang resin polimer manik-manik.000. dan penukar dasar anion lemah. bagaimanapun.

TUGAS RINGKASAN KROMATOGRAFI OLEH : NUR APRILIANA LENOHINGIDE F1C114017 JURUSAN KIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS HALU OLEO KENDARI 2016 .

TUGAS RINGKASAN KROMATOGRAFI OLEH : SAMSIAH F1C114097 JURUSAN KIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS HALU OLEO KENDARI 2016 .