Manual de Microbiología Industrialii (Ibt) PDF

MANUAL DE PRCTICAS
MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS
PROGRAMA
INTRODUCCIN - - - - - - - - - - 3
OBJETIVO - - - - - - - - - - 3
MEDIDAS DE SEGURIDAD - - - - - - - - - - 3
PRCTICA NO. 1 PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO Y ESTERILIZACIN EN

AUTOCLAVE - - - - - - - - - - 8
PRCTICA NO. 2 SIEMBRA DE UN MICROORGANISMO - - - - - - - - - - 10
PRCTICA NO. 3 AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS - - - - - - - - - -12
PRCTICA NO. 4 SIEMBRA EN PLACA POR ESTRA - - - - - - - - - - 14
PRCTICA NO. 5 SIEMBRA EN PLACA POR VACIADO - - - - - - - - - - 20

PRCTICA NO. 6 MANTENIMIENTO Y CONSERVACIN DE MICROORGANISMOS - - - - - - - - - 23
PRCTICA NO. 7 ELABORACIN DE VINAGRE - - - - - - - - - - 28
PRCTICA NO. 8 ANLISIS DE AGUAS - - - - - - - - - - 31
PRCTICA NO. 9 FERMENTACION ALCOHOLICA - - - - - - - - - - 37
PRCTICA NO. 10 PROYECTO DE INVESTIGACIN - - - - - - - - - - 39

BIBLIOGRAFA - - - - - - - - - - 41
1
Recopilado por Q.I. Luz del Carmen Schroeder Rodrguez
MANUAL
DE
MICROBIOLOGA
INDUSTRIAL
2
INTRODUCCION
La microbiologa industrial es la ciencia que estudia la aplicacin de los microorganismos en
la industria. Esta EE pertenece al rea de la Ingeniera aplicada, en el Programa Educativo
de Ingeniera en Biotecnologa, con 3 horas de teora y 4 horas de laboratorio para un total
de 10 crditos.
El programa educativo de Laboratorio de Microbiologa Industrial, consiste en la utilizacin
de microroganismos en diferentes procesos industriales, tales como la produccin de
diferentes compuestos orgnicos, transformacin de productos, biorremediacin y
tratamiento de residuos. Su importancia radica en el control y sistematizacin de los
procesos industriales donde participan bacterias, hongos, levaduras.
OBJETIVO
Capacitar al estudiante para que con un alto grado de responsabilidad y compromiso aplique
el fundamento terico, en el aislamiento y caracterizacin de microorganismos, enzimas y
metabolitos secundarios con aplicaciones en la industria. Desarrollando su habilidad en el
manejo de las tcnicas.
MEDIDAS DE SEGURIDAD
1.- Al entrar al laboratorio el alumno con la finalidad de protegerse deber usar bata
blanca de manga larga, zapato cerrado, y ropa adecuada.
a) Guantes deber lavarlos con benzal y alcohol antes de quitrselos y colocarlos en una
bolsa de papel de estraza para reutilizarlos por lo que debe marcar su nombre, colocar una
etiqueta para control de esterilidad y entregarlos para que sean esterilizados, posteriormente
se lavar y desinfectar las manos con benzal, y alcohol.
b) Quitarse el cubre boca y el cubre cabello (guardarlo en bolsa nylon) y llevrselo para lavar
con cloro y jabn en casa. si hubiera existido salpicaduras deber entregarlo para esterilizar
y posteriormente desechar,
d) Quitar la bata doblarla y colocar en bolsa nylon para transportar a casa la cul debe ser
sumergida en agua con cloro previo al lavado. En caso de haberse salpicado con el
microorganismo en estudio deber entregarse al laboratorio para su esterilizacin antes del
lavado.
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e) Si existiera alguna contaminacin o salpicadura en cara, en zonas no cubiertas deber

lavarse con Iodoforo o Isodine ya que en 30 segundos se eliminan los microorganismos.
2.- Se asignar una gaveta de laboratorio la que ser compartida, para todo el curso, su
responsabilidad consiste en mantener en buen estado todo el equipo que tenga a su cargo.
3.- Al entrar al laboratorio limpie su rea de trabajo con una solucin de jabn cloro agua
utilizando para ello un jalador con esponja procurando que la solucin de lavado caiga en la
canaleta y efecte lo mismo al salir.
4.- Coloque los objetos, como libros, abrigos, u otras pertenencias personales fuera de las
reas de trabajo para evitar que se contaminen.
5.- En la sesin de laboratorio debe de presentarse puntualmente, ya que al principio se
dar explicacin de 15 minutos del cmo se va a trabajar para facilitar su trabajo.
6.- Despus de la explicacin recibida por el Maestro deber de llenar un vale con el material
que utilizar en la prctica en donde anotar N de equipo, carrera, nombre de los
integrantes, N de matrcula fecha y firma, este ser entregado en el cubculo y
posteriormente reintegrar el material perfectamente limpio y ordenado al trmino de la sesin
Si durante el trabajo llegase a sufrir algn desperfecto el material (romperse) deber ser
restituido en especie inmediatamente.
7.- Se le asignar por cada dos personas un microscopio mediante un nmero que debe
coincidir con el nmero del equipo, anotar en la bitcora el nmero de microscopio que ha
tomado asentando en la misma su firma este equipo lo utilizar durante todo el semestre y
ser compartido con otros grupos y carreras de la FCQ
8.- Los microscopios estn ordenados por numeracin del 1 al 25 la cual es coincidente con
la numeracin del inventario de la Universidad Veracruzana.
9.- El microscopio ser entregado junto con su cordn y un contacto de intercambio de triple
a doble al regresar el microscopio deber de regresar completos los accesorios y colocarlo
en su nmero.
10.- Si al recibir su microscopio nota usted alguna falla en l, deber reportarlo 5 minutos
despus de recibirlo, de lo contrario la falla existente ser su responsabilidad y deber
resanarla en especie.
11.- No saque JAMS del laboratorio equipo medio de cultivo o cultivos microbianos, por el
riesgo al que puede exponerse.
12.- No introduzca alimentos para consumir en el laboratorio ya que corre el riesgo de
contaminarse.
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13.- Est PROHIBIDO fumar dentro del laboratorio.

14.- Nunca se siente en las mesas de trabajo, ya que es anti disciplinario y corre el riesgo
de contraer algn microorganismo.
15.- Cuando la prctica realizada contemple observacin cada 2 horas, el instructor y el
alumno se pondrn de acuerdo para asistir a efectuar las observaciones sin que se
interrumpan las labores, y de esta manera se sigan las reacciones en su momento.
16.- Todo objeto contaminado deber someterse a esterilizacin en autoclave para lo cual
las cajas petri se colocaran en bolsas de polipapel dentro de botes, posteriormente se
colocarn en las bolsas para RPBI (norma 087) que posteriormente son entregadas al
responsable de recoleccin de residuos Biolgicos Infecciosos de acuerdo al programa
existente en FCQ y a la norma087.
17.- En caso de accidente en el laboratorio, por ejemplo, que se derrame o caiga un cultivo
vivo, conserve la calma y aplique el siguiente procedimiento:
a) Informe al instructor del accidente.
b) Coloque toallas de papel sobre el material derramado.
c) Vierta desinfectantes sobre las toallas.
d) Despus de 15 minutos quite y tire las toallas en el receptculo destinado a material
contaminado.
18.- En caso de producirse un incendio o herida personal, informe de inmediato al instructor.
Debe de conocer la ubicacin de los extinguidores y la ubicacin del botiqun de primeros
auxilios.
19.- Al concluir cada sesin de laboratorio, coloque todas las instalaciones y el equipo de
laboratorio en forma ordenada, papeles de desecho e instrumentos contaminados se
depositarn en los receptculos apropiados.
20.- Se recomienda que el alumno (hombre) debe asistir con cabello corto, sin bigote,
ni barba, uas perfectamente recortadas y las alumnas debern de contar con una liga
para recoger su cabello durante la sesin as como traer uas recortadas y evitar portar
prendas en las manos.
21.- El alumno deber leer cada ejercicio de laboratorio y contestar el cuestionario antes de
entrar a clase, por lo que debe contar con una libreta de pasta dura (bitcora), en la forma y
color indicado.
23.- En la bitcora el alumno anotar: dibujos, observaciones propias, comentarios y
conclusiones de la prctica, as como el cuestionario resuelto y la bibliografa consultada
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24.- La Bitcora ser entregada al instructor cada semana para su revisin y acreditacin
de la prctica, es conveniente que el llenado de la misma la realice durante la prctica, para
que al concluir el laboratorio, se evite llenarla ya que si no fue entregada cada semana no
ser considerada en la evaluacin
25.- El trmino del laboratorio ser una semana antes de la conclusin de cursos establecido
en calendario oficial.
MTODOS DE EVALUACIN
26.- El alumno deber de tener el 100% de las prcticas acreditadas, buen comportamiento
en el laboratorio y deber haber entregado en tiempo y forma la bitcora as como haber
contestado adecuadamente durante los interrogatorios que se le realizan.
27.-Se realizar evaluacin continua durante el desarrollo del laboratorio considerando el
desempeo, destreza, seguimiento de normas de seguridad y disponibilidad de residuos, as
como el reporte adecuado del trabajo experimental conforme a los lineamientos establecidos
al inicio del curso.
28.- Al final del curso se entregar la bitcora y un reporte global del laboratorio, el cual se
elaborar de acuerdo a los lineamientos establecidos por el maestro y ser entregado en
fsico y tambin enviado va Internet
Evidencia (s) de
desempeo
Criterios de desempeo
mbito(s) de aplicacin
Porcentaje %
Asistencia y Desempeo
(Asistencia-15%,
Exposicin-15%,
Participacin en el
desarrollo de las
prcticas- 20%)
Evaluacin del
conocimiento
Laboratorio
50
Reporte de prcticas
mediante bitcora
Evaluacin del
conocimiento
Laboratorio
15
Examen
Evaluacin del
conocimiento
Laboratorio
20
Manual
Adquisicin del
conocimiento
Laboratorio
15
6
REQUISITOS BSICOS
MICROBIOLOGA
QUE
DEBEN
EXISTIR
EN
UN
LABORATORIO
DE
Con la finalidad de garantizar la seguridad en el laboratorio es necesario conocer las normas

de seguridad antes de realizar cualquier experimento. Los estudiantes despus de haber
aprendido esto, podrn trabajar con eficiencia las tcnicas bsicas aprendidas en
Microbiologa General.
Aunque para algunos estudiantes con experiencia esto les parecer repetitivo, esto le
Permite al estudiante e instructores mostrar conformidad acerca de las reglas que se
aplicarn durante el desarrollo del curso
El equipo de un laboratorio de Microbiologa incluye el material bsico como: incubadora,
frigorfico, baos de agua controlados, autoclaves, centrfuga, bomba de vaco,
balanzas, microscopios, mecheros Fisher, asas de platino termmetros y portaobjetos
as como material ms sofisticado como sistema de electroforesis en gel, placas
multipocillos, (MICROtituladores) lectores de placas (scaner), termocicladores para la
lectura en cadena de polimerasa (PCR)..
La Microbiologa implica el estudio de los microorganismos que ocasionan enfermedades en
humanos, por lo tanto son muy importantes los hbitos de trabajo extremadamente
cuidadosos para evitar la difusin de enfermedades, hacia las personas que entran al
laboratorio, la familiaridad que se obtenga con los medios requeridos para mantener ese
ambiente seguro y limpio constituyen un componente clave para un correcto trabajo en el
mismo. Con la finalidad de que cumpla con la normatividad y la seguridad en el laboratorio
deber de cumplir con el reglamento que he diseado de acuerdo a la infraestructura y
condiciones de la Facultad
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PRCTICA No.1
PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO Y ESTERILIZACIN EN AUTOCLAVE
ANTECEDENTES:
La mayora de los medios de cultivo utilizados en bacteriologa son mezclas separadas
empricamente por microbilogos, sin conocimiento exacto de su composicin qumica
definida y reproducibles, estos ltimos aos, adems de clulas de tejidos vivos, se han
desarrollado otros medios de cultivo, con el fin de resolver problemas especiales en la
investigacin y en la Microbiologa industrial.
El medio bsico a partir del cual se preparan otros muchos e importantes medios es un
caldo elaborado a partir de una infusin de carne. Sus ingredientes son los siguientes:
Preparacin de medio de cultivo general
LIQUIDO: Caldo nutritivo: Peptona 5 g., Extracto de carne 3g, agua 1000 ml; (si el medio
es liofilizado se pesar solamente 8g de caldo nutritivo) una vez pesado el medio se
verter en un matraz que contenga la dcima parte del agua a utilizar, posteriormente se
completa el volumen de agua, se hierve durante 1 minuto (el tiempo se cuenta a partir de
que rompe la ebullicin); distribuir en tubos de cultivo matraz de cultivo y se procede a
esterilizar en autoclave a 121C por 15 minutos.
SOLIDO: Agar nutritivo: Peptona 5g Extracto de carne 3g agar 15g agua 1000 ml; (si el
medio es liofilizado se pesar 23g de agar nutritivo) una vez pesado el medio se verter en
un matraz que contenga la dcima parte del agua a utilizar, posteriormente se completa el
volumen de agua, se deja reposar 10 minutos y se hierve durante 1 minuto (el tiempo se
cuenta a partir de que rompe la ebullicin); la disolucin de medio es completa cuando al
agitar el matraz no quedan grumos suspendidos en las paredes, distribuir en tubos de
cultivo matraz de cultivo en porciones segn se vaya a utilizar y se procede a esterilizar
en autoclave a 121C por 15 minutos.
El Agar o agar agar se utiliza nicamente como soporte slido de los nutrientes es un
polisacrido marino que se obtiene de la pared celular de las algas Elidan, Euchema y
Gracilari, su composicin qumica es de subunidades de galactosa, mezcla heterognea de
agaropectina y agarosa, se disuelve en agua lentamente: solo despus de hervir algn
tiempo, pero una vez que la solucin alcanza una temperatura menor de 45 C se
solidifica.
NOTA: si no se cuenta con el material adecuado en el laboratorio de Microbiologa se

podr suplir los tubos de cultivo por tubos de ensaye y se deber tapar con un tapn
elaborado con gasa y algodn (la gasa es con la finalidad de que el algodn no quede
adherido a la boca del tubo ocasionando con ello la generacin de contaminantes qumicos
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al flamear la boca del tubo cada vez que se utilice. Los matraces se podrn suplir con
frascos que tengan boca angosta y tapa de metal (jugo) y con la finalidad de completar el
volumen del empaque interior de la tapa se tendr que colocar un papel de alumin.io, papel
de estraza en la boca del frasco y posteriormente la tapa de metal.
Dentro de los medios de cultivo se tienen los medios naturales, medios selectivos, y
medios diferenciales, as como los medios de ensayo, hoy en da la mayora de los medios
de cultivo se compran ya liofilizados, pero si usted llegase a necesitar un medio para
separar un microorganismos de una fuente natural es necesario pensar que ese
microorganismo necesita los nutrientes de su habitad para poderlo cultivar y es
conveniente preparar los medios de cultivo en el laboratorio adicionndole esos nutrientes,
si deseo separar un hongo que est atacando el chayote es necesario preparar un caldo
de chayote que se puede convertir si as se desea en un agar chayote, por lo que es
conveniente efectuar el siguiente procedimiento: Pesar 100 gramos de chayote con todo y
cscara hervirlo molerlo depositarlo en tubos esterilizar y posteriormente sembrar, si esto
te da resultado entonces vuelves a preparar la suspensin de chayote y posteriormente ya
que lo hubieres molido le adicionas 1.5 g de agar hierves, esterilizas y resiembras.
Lo mismo realizars con el betabel, zanahoria, papa, en algunos casos ya venden el sustrato
en polvo (papa en polvo para hacer pur) en este caso es conveniente pesar solo 5 g para
100 ml de agua y posteriormente adicionar el agar (1.5g)
OBSERVACIONES:
CONCLUSION:
CUESTIONARIO:
1.- Que otros medios de cultivo existen?
2.- Ventajas y desventajas del calor seco y humeado.
3.- Qu otros mtodos de esterilizacin conoce?
4.- Cmo considera que el calor seco destruye a los microorganismos?
5. Por qu el proceso de esterilizacin consiste en calentar durante una hora a 110C o
bien media hora a 180C?
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICA
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PRACTICA No.2
SIEMBRA DE UN MICROORGANISMO
ANTECEDENTES:
El agar es una sustancia qumica mucilaginosa, extrada de ciertas algas, est formada por
lo menos en parte por CaSO4 y un polisacrido que contiene galactosa y es utilizado en
bacteriologa como soporte de los medios de cultivo microbiano
Cuando al agar simple se le adicionan nutrientes entonces el agar recibe el nombre de
acuerdo a los nutrientes adicionados y as se obtiene el Agar Nutritivo, cuando su
composicin es 5g de peptona, 3 g de extracto de carne (preparacin que lleva el caldo
nutritivo) 15 g de agar y 1 lt de agua el medio es denominado AGAR NUTRITIVO.
El agar nutritivo utilizado para cultivo microbiano, una vez pesado se deja reposar 10
minutos con la finalidad de que el polmero que conforma el agar se hidrate y
posteriormente se hierve durante 1 minuto se puede distribuir en tubos de ensaye, u otros
recipientes, se esteriliza y se colocan los tubos en una posicin semi-horizontal, formando
al solidificar, una superficie inclinada extensa, para poder sembrar. A esto se le llama Agar
inclinado o de Tope inclinado, cuando solo la mitad superior del agar est inclinado, o bien
el tubo se puede llenar a 2/3 partes, formando una agar profundo.
DESARROLLO EXPERIMENTAL
MATERIAL
10 Tubos de ensayo
Asa y porta asa.
REACTIVOS
Agar nutritivo.
.
Agua destilada.
Bao Mara
1.- Se prepara el agar como se indica en la etiqueta del frasco, se hierve distribuye y
esteriliza a 121C durante 15 minutos.
SIEMBRA DE UN MICROORGANISMO
2.- Para sembrar un tubo de agar inclinado, primeramente se introduce el asa y se estra
en la superficie del pico de flauta, posteriormente se introduce el asa (como si se inyectara)
hasta el fondo del tubo y se saca el asa con mucho cuidado, procure no romper la
superficie del agar con el asa.
3.- Si la siembra a efectuar es de picadura, con un asa que termine en punta, se toma
una muestra de microorganismos y se pica el agar (como si inyectara) y con cuidado se
saca el asa. El crecimiento iniciar casi siempre en la lnea recta que traz la aguja.
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4.- Para que el microorganismo desarrolle en la interface del Agar, se funde

completamente 20 ml. de agar y luego se enfra a 45C. a sta temperatura, el agar
todava es lquido y lo suficientemente fro para que los organismos a sembrar no mueran,
cuando est lquido el agar, se introduce el asa con los microorganismos, y se agita
vigorosamente, se vaca a una caja petri. El medio se deja enfriar y el agar solidifica.
OBSERVACIONES:
CONCLUSION:
CUESTIONARIO:
1. - Por qu el agar deber mantenerse en bao mara a 45 C, antes de verterlo en la caja petri?
2.- Por qu siempre se vaca el medio e inoculan las cajas cerca del mechero encendido?
3.- Cules son las precauciones personales que debes de observar durante esta prctica
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:
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PRCTICA NO 3.
AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
POR EL MTODO DE DILUCIONES.
1. Marcar una serie de tubos de 16 X 150 de 1 al 10.
2. Adicionar a cada tubo 9 ml. de agua destilada y esterilizar.
3. Agregar al primer tubo 1 gramo 1 ml. de la muestra, en el caso de suelo, homogenizar
la suspensin y dejar sedimentar las partculas gruesas.
4. Efectuar diluciones decimales de cada muestra como se indica a continuacin.
TUBO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
DILUCIN
1 gr. 0 1ml de muestra
1ml del tubo 1
1ml del tubo 2
1ml del tubo 3
1ml del tubo 4
1ml del tubo 5
1ml del tubo 7
1ml del tubo 8
1ml del tubo 9
1ml del tubo 10
+ 9ml de diluyente* 10-1

NOTAS:
a) Homogeneizar cada tubo antes de transferir el volumen respectivo al siguiente tubo.
b) Usar una pipeta diferente para hacer cada dilucin.
5. Seleccionar cinco diluciones segn las instrucciones del profesor.
6. Colocar 0.5 ml. de cada dilucin en cada una de las cajas petri estriles previamente
marcadas con la dilucin correspondiente.
7. Aadir a cada caja 20 ml. de agar nutritivo estril, fundido y mantenido a 45 C.
8. Homogeneizar el inoculo por rotacin suave sobre la mesa.
9. Dejar solidificar e Incubar a 37C durante 24 horas.
Depositando el contenido de la pipeta en la caja Petri
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OBSERVACIONES:
CONCLUSION:
CUESTIONARIO:
1.- Indicar hasta que dilucin encontr colonias aisladas a partir de las muestras
estudiadas.
MUESTRA
DILUCIN
2.- Escribir en la tabla siguiente el nmero de colonias encontradas en cada una de las
diluciones indicadas.
DILUCIN
No. DE COLONIAS EN 0.5gr No. DE COLONIAS

/g
1
2
3
3.- En base a los datos de la tabla anterior diga Cul es el nmero de MO por gramo o
mililitro de muestra estudiada?
4.- Por qu el agar debe de estar completamente fundido antes de hacer el vaciado?
5.- Este tipo de cultivo que tipo de microorganismos desarrolla mejor?
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PRACTICA No.4
SIEMBRA EN PLACA POR ESTRA
ANTECEDENTES:
Cuando se aade una sustancia solidificarte a un medio lquido que contiene clulas
bacterianas, se inmoviliza cada clula en el lugar en que se encuentra cada una origina
una colonia de clulas fijas que crece hasta formar una masa visible. Si las clulas
primitivas son atrapadas, distantes entre s, cada clula viable o grupo de clulas origina
una colonia separada, diferente. Este hecho es de gran importancia y constituye el
fundamento de ciertas tcnicas que utilizan medios slidos, que proporcionan ventajas
que no ofrecen los medios lquidos.
Hasta ahora se ha utilizado nicamente medios slidos para cultivos inclinados en tubo de
ensayo. Pero si se utiliza una caja petri, se abren nuevas posibilidades para el manejo de
cultivos microbianos.
Considerando, por ejemplo, el problema de separar mezclas de diferentes bacterias en un
medio lquido. Las clulas son demasiado pequeas para ser tomadas individualmente,
excepto mediante las tediosas e inseguras tcnicas de dilucin o por los procedimientos
altamente complicados de aislamiento de una sola clula. Sin embargo, si las clulas son
separadas por dilucin, y fijada sobre un mtodo slido e incubada convenientemente
hasta que forme colonias, puede aislarse sobre distintos tubos de ensayo con medios de
cultivo.
Nota: las caractersticas de las colonias en diferentes microorganismos difieren en
tamao, forma, consistencia y color; en consecuencia, el aspecto de la colonia es una
valiosa forma de identificacin.
INOCULACIN DE LAS PLACAS DE AGAR
Asegrate que el agar est slido y ahora ya se pueden aplicar cultivos microbianos a la
superficie del agar y extenderlos con un asa, una aguja curvada o una varilla de vidrio.
Esto se llama siembra por estra. Existen varias tcnicas que se pueden utilizar para
sembrar placas por estra. Aqu se describen dos de ellas, y ambas proporcionan
excelentes resultados, si se hacen correctamente el objetivo inmediato de la siembra en
placa por estra, es obtener colonias de bacterias, separadas, a partir de suspensiones
concentradas de clulas.
Durante la inoculacin, al comienzo de la siembra, las clulas estrechamente
apelmazadas, forman colonias que se desarrollan juntas, pero a medida que la extensin
contina, cada vez existen menos clulas, que permanecen en las gotas que lleva el asa.
A medida que stas caen y crecen sobre la superficie, originan colonias separadas. Las
estras al principio no producirn colonias separadas. Una buena placa resulta de los
movimientos progresivos y repetidos del asa o aguja.
En ambas tcnicas, se inicia la siembra con una gota de cultivo en un borde del agar. En
la primen tcnica, se llama la aguja de siembra (doblada como un bastn de hockey) o el
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asa y se enfra tocando el borde ms alejado del operador, se extiende el cultivo de una
parte a otra de borde a borde, en lneas paralelas, en direccin hacia el operador.
Cuando se alcance el centro de la placa se gira esta unos 180 y se contina la extensin,
ahora alejndose del operador. (Esta inversin evita el obstculo del borde de la placa.)
Se mantiene la cubierta de la placa de petri en la mano izquierda, cubriendo parcialmente
el agar.
En la segunda tcnica, se comienza nuevamente con la gota, se hacen dos o tres estras
paralelas, se flamea el asa, se hacen dos o tres estras en ngulo recto con las primeras,
se flamea nuevamente el asa y se repite el proceso. As se obtienen los mismos
resultados que antes, es decir, la dilucin del cultivo.
En algn lugar a lo largo de la extensin, debern aparecer colonias aisladas.
1) SIEMBRA POR ESTRA:

En la placa preparada como se establece anteriormente, se siembra con el
microorganismo del siguiente modo:
1. Se colocan las cajas en la mesa cerca del mechero.
2. Con la mano derecha se toma el asa y se incinera a la llama.
3. Con la mano izquierda se toma la caja donde se va a inocular y se destapa (con la
misma mano), dejando una pequea abertura para lo cual al coger la tapadera se desliza
ligeramente hacia abajo dejndola colgada sobre la base de la caja pero en forma
inclinada.
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4. A continuacin se toma el tubo que se va a aislar se destapa con el dedo meique, se

introduce el asa en el tubo y se toma un asada procurando cucharear al hacerla para que
la gota quede convexa y no plana para obtener una mayor cantidad de microorganismos
al sacar el asa del tubo se debe procurar no tocar las paredes del mismo.
5. Depositar la gota a travs de la abertura sobre el Agar procurando que caiga toda.
Efectuar todas las inoculaciones necesarias en forma simultnea, sin necesidad de volver
a esterilizar el asa para tomar una segunda asada.
6. Una vez colocadas las gotas cerramos la caja incineramos el asa y esperamos 1 o 2
mn. con el fin de que haya la menor humedad posible y se pueda aislar el cultivo.
7. Invertir las cajas sobre las mesas con cuidado, con la mano izquierda tomar la base y
cerca del mechero efectuar las estriadas segn explicacin. Una vez concluido colocar la
base sobre la tapadera que est sobre la mesa.
8. Una vez concluido entregar la caja: para incubacin.
NOTA: Las estras se deben hacer sin mezclarse entre ellas.
2) AISLAMIENTO POR EL MTODO DE LA ESTRA CRUZADA:

1. Esterilizar el asa en la flama del mechero.
2. Dejar enfriar el asa cerca del mechero.
3. Tomar una asada de la muestra (tubo No. 1 de la serie de diluciones) y colocada en los
bordes de la placa agar nutritivo, haciendo una serie de estras continuas hacia el centro
de la caja. (Ver Esquema de Siembra por Estra.)
4. Esterilizar el asa nuevamente y enfriarla en los bordes del agar.
5. Hacer una segunda serie de estras tocando la anterior en su posicin final, como se
indica en el esquema 4.
6. Esterilizar el asa nuevamente y enfriarla en los bordes del agar.
7. Repetir los pasos 4 y 5 para hacer las series de estras que se indican en los
esquemas.
8. Esterilizar el asa y enfriarla.
9. Incubar el material debidamente etiquetado, a 37'C. por 24 horas.
NOTA: El aislamiento deber hacerse de acuerdo con los esquemas que se presentan.
INCUBACIN DE LAS PLACAS DE AGAR

Debido a la elevada concentracin de agua en al agar, se forma algo de agua de
condensacin durante la incubacin de las placas de petri. La humedad puede resbalar
desde la tapa a la superficie del agar, provocando una masa de crecimiento concluyente,
impidiendo. la formacin de colonias individuales. Para evitar esto, las placas de petri se
incuban rudimentaria mente invertida.
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DESARROLLO EXPERIMENTAL
MATERIAL
Asa de nicromo
5 cajas
5 tubos de ensaye
REACTIVOS
Agar
Cultivo problema
Utilizando el agar nutritivo suministrado, prepare cuatro placas de petri y despus de que
se hayan enfriado y solidificado, proceda como sigue:
NOTA: Las placas recin preparadas pueden no ser siempre satisfactorias para sembrar
por estra, ya que los organismos altamente mviles pueden extenderse en la pelcula de
humedad sobre la superficie.
1.- Conserve una placa estril como control. Se mantiene cubierta.

2.- Mediante el-asa de inoculacin, siembre cuidadosamente por estra un cultivo
problema sobre tres placas restantes. Se siembre una placa usando el primer mtodo,
como se muestra en la ilustracin, y otra placa utilizando el segundo mtodo. Es
conveniente dibujar un modelo de estriado sobre el fondo de cada placa con un lpiz
graso para ayudarse en la orientacin de la siembra.
3.- Ahora que se ha observado el principio de la tcnica de siembra por estra, debe idear
una tcnica propia y ensayarla sobre la placa restante.
4.- Incube las placas en posicin invertida a 37C.
NOTA: Las placas antes de inocularlas debers marcarlas con el marcador indeleble
coloca en la tapa en la menor rea posible tu clave, seguido por el semestre y la carrera,
la fecha y la identificacin del contenido.
Se estudia el crecimiento en las placas de agar durante la incubacin. Se observan las
diferencias en el tamao, forma y aspecto de las colonias. El operador debe verificar si su
tcnica para obtener colonias aisladas fue eficaz. La placa control sirve como medida de
la esterilidad del medio y de la eficacia de la tcnica; no deber presentar colonias.
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TCNICAS QUE DEBES CONSIDERAR CUANDO ESTRIAS

a) Para llevar a cabo la siembra realizarlo en el rea estril, el cual lo proporciona la llama
del mechero, tomar una asada con la mano derecha del tubo de cultivo, o de la muestra
con la mano izquierda entreabre la caja que se encuentra sobre la mesa desinfectada y
deposita la gota el microorganismo que tienes en el asa
b) Una vez realizado esto, tapa la caja con la mano izquierda sin soltar el asa, toma la
caja procurando sostener ambas fracciones con la mano sin que se caiga, dale vuelta a la
caja deposita la tapa sobre la mesa (boca arriba) y ahora te has quedado con la base de
la caja que ya tiene el microorganismo proceders a estriar segn figura
c) Primeramente se efecta una descarga microbiana y posteriormente se empieza a
aislar por dilucin del microorganismo mientras hace usted esto no de vueltas al asa
mantngala firmemente como si tuviera un lpiz para escribir. Lo que si debe de ir girando
es la base de la caja para ello utilice el dedo pulgar ya que ha concluido la estra tape la
caja y selle con un pedazo de cinta colquela en posicin invertida en la incubadora y
espere mnimo 18 horas para observar algunos MO requieren de 5 das para desarrollar.
NOTA: Debe tener cuidado al momento de hacer el estriado ya que se puede cortar el
agar con la misma asa. No imprima fuerza hacia abajo figrese que est pintando un
cuaderno con pintura de madera.
ESTRIADO DE LA CAJA PETRI
18
OBSERVACIONES:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1. - Por qu el agar deber mantenerse en bao mara a 45 C, antes de verterlo en la

caja petri?
2. - Cul es la razn por la cual se siembra en estra?
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS:
19
PRACTICA 5
SIEMBRA EN PLACA POR VACIADO
ANTECEDENTES:
Los cultivos en agar u otros medios slidos realizados en cajas petri, se llaman cultivos en
placa, con frecuencia, cuando hablamos de la caja petri, solamente le llamamos placa. El
proceso para pasar el agar fundido de un tubo de ensayo a una caja petri, se llama verter
en placa.
La tcnica de la siembra en placa por vaciado proporciona un segundo mtodo de obtener

cultivos puros a partir de una mezcla de microorganismos. Difiere de la siembra por estra
en que el medio de agar es inoculado mientras est an lquido (pero fro, 45C.), de forma
que las colonias se desarrollan en todo el medio, no solamente en la superficie. Para
algunos fines, esto es una ventaja; por ejemplo, para estudiar la accin de una colonia de
estreptococos sobre los glbulos rojos de la sangre. Tambin se obtiene una mejor
distribucin de las colonias en una placa bien preparada, y los aislamientos son ms, fciles
de hacer.
Si se desea "cultivar" los microorganismos existentes en una mezcla, debe resolverse

primero el problema de obtener las concentraciones apropiadas de microorganismos
bacterianos en las placas. Debe de evitarse la obtencin tanto de placas repletas de
colonias, como de placas sin ninguna colonia, ya que ambas seran intiles. No existe un
medio seguro de predecir el nmero de clulas viables en una muestra determinada: leche,
suspensin de un suelo o cultivo bacteriano de 24 horas. Por ello, deben hacerse
siempre varias diluciones de la muestra y prepararse varias placas. Debe esperarse que
solamente una o dos placas tendrn un nmero apropiado de colonias. Las placas que
resulten demasiado concentradas y demasiado diluidas deben eliminarse. Sin embargo, la
experiencia con un determinado tipo de muestra Permite minimizar las diluciones intiles.
El mtodo de dilucin con el asa de cultivo proporciona por lo general placas con un
20
nmero apropiado de colonias, y se basa en una dilucin aproximadamente cuantitativa

de la muestra en un medio slido.
DESARROLLO EXPERIMENTAL:
MATERIAL REACTIVOS:
1 Asa y porta-asa Agar.
3 Tubos de ensayo (preparados con agar). Cultivo problema.
3 Cajas petri.
A) MTODO 1
1. Funde tres tubos de agar (12-15 mL.) y enfrelos hasta 45C.
2. Transfiera aspticamente un asa de un cultivo microbiano mixto al primer tubo de agar
fundido. Mezcle el inoculo golpeando el tubo con el dedo ndice. El xito de este mtodo
depende de una perfecta mezcla y de una uniforme distribucin de los microorganismos.
3. Transfiera dos asas de inoculo mezclado con el agar, del primero al segundo de agar
y mezcle bien.
4. Transfiera tres asas del segundo al tercer tubo de agar y mezcle perfectamente.
PRECAUCIN: Ya que el descenso de la temperatura de 45C. A 42C ocurre

rpidamente, estos pasos deben realizarse con rapidez para evitar la solidificacin del
agar.
5. Vierta cada uno de los tubos de agar en una caja petri diferente, girndolas (7 veces a
la izquierda, 7 veces a la derecha, 7 veces hacia arriba y hacia los lados, procure que el
agar no se caiga ni se para distribuir el agar perfectamente, y djelas solidificar.
6. Incube las placas a 30C por 24 o 48 horas.
NOTA: Se examinan los tamaos relativos de las colonias en las cajas.
Las colonias bien separadas las puedes caracterizar, por tamao, forma, aspecto, color y
consistencia.
Obsrvese que las colonias que por distribucin al azar han crecido sobre la superficie de:
la placa, se desarrollan grandes y, probablemente, circulares. En contraste, las colonias
que se han desarrollado dentro del agar son relativamente pequeas y presentan
generalmente una seccin transversal lenticular, que refleja la limitacin fsica del
crecimiento en el interior del agar. Es evidente que en poblaciones mixtas de
microorganismos de origen natural (contenido intestinal, materia vegetal en fermentacin.,
suelo, etc.), algunas especies estarn presentes en nmero mucho mayor que otras. Esto
constituye el punto dbil de las tcnicas de dilucin con fines de aislamiento: 10
organismos presentes en pequeo nmero sern diluidos hasta el punto de extincin en
21
placas repletas de especies dominantes. Los organismos secundarios pueden

recuperarse en algunos casos, por ejemplo utilizando un producto qumico que inhiba
especficamente a las especies dominantes. As su crecimiento ser detenido,
permitiendo el crecimiento de las especies en menor nmero, que podrn aislarse a bajas
diluciones.
OBSERVACIONES:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1.- Para que nos sirve el mtodo de siembra en placa por vaciado?
2.- En que difiere del mtodo de siembra por estra?
3.-Qu ventaja se obtiene usando el mtodo de siembra en placa por vaciado?
22
PRCTICA No. 6
MANTENIMIENTO Y CONSERVACIN DE MICROORGANISMOS
ANTECEDENTES
Los microorganismos que son seleccionados por producir algn metabolito importante
industrialmente no deben de sufrir cambios metablicos, por lo que es importante
conservarlos, el mtodo elegido debe ser el adecuado para que no varen sus
caractersticas genticas.
Existen varios mtodos para la conservacin de microorganismos donde la eleccin del
mtodo estar encaminada a retener las caractersticas de la cepa, estas tcnicas se
mencionan a continuacin, as como algunas diferencias entre ellas. (Cada uno de estos
mtodos presenta dos o ms variaciones):
Durante un programa de aislamiento y seleccin han demostrado tener y mantener las
caractersticas requeridas por la industria, se deben someter a un estudio estricto acerca
de los cambios que pueden sufrir cuando se someten a algn procedimiento de
conservacin; as pues, el mtodo de conservacin elegido juega un papel importante en
la industria de fermentacin.
Parmetros para observar el funcionamiento del microorganismo.
Criterios generales para seleccionar el medio:
- Tiempo.
- Tipo de microorganismo
- Forma de reproduccin del microorganismo
Conservacin a Corto plazo
Resiembra
En serie en tubos inclinados y en medio lquido en refrigeracin con una duracin de 15 a
20 das de almacenamiento. Tapa de aceite mineral, tapa de cera, con una duracin de 12
a 36 meses de almacenamiento.
a) Cultivos profundos en agar extracto de suelo, este es un mtodo adecuado para el
mantenimiento de microorganismos anaerobios los cuales han sido aislados de suelo.
b) Mantenimiento de cultivos en tubos inclinados de agar y en medios lquidos. Este es un
mtodo de conservacin muy empleado en cultivos que se emplean continuamente
(cultivos de trabajo).
Por otro lado, las resiembras sucesivas y continuas aunadas a los cambios que sufre el
medio propiciarn cambios genticos indeseables en los cultivos, lo cual se reflejar en
los rendimientos de la cepa. Aunque este mtodo es el ms usado y normalmente se
aplica a hongos, bacterias, levaduras actinomyces y algas.
23
c) Cultivos en tubos inclinados con agar adicionado de aceite mineral. A los cultivos
preservados por el mtodo anterior, se les puede adicionar un aceite mineral como
Amerol o Nugol, con esto se disminuyen las posibilidades de contaminacin, de tal forma
que los cultivos pueden mantenerse por ms tiempo, aunque no se elimina el problema de
los cambios genticos que pueden sufrir la cepa. Los cultivos mantenidos en agar
inclinado ya sea con o sin aceite mineral deben ser protegidos con capuchn metlico o
de papel parafina
Conservacin de microorganismos a mediano plazo

Para este tipo de conservacin se utiliza un soporte slido para atenuar el metabolismo.
Mantenimiento de cultivos en suelo estril. Este es un mtodo simple y muy empleado
Principalmente para microorganismos que esporulan. Aunque el mtodo originalmente
uso suelo estril, tambin se pueden usar otros soportes como: Arena estril, papel filtro,
esferas de plstico o perlas en vidrio.
Conservacin de microorganismos a largo plazo
Mantenimiento de microorganismos por secado en fro (Liofilizacin).
Liofilizacin coloca al microorganismo en un soporte leche descremada, carbonatos,
lactosa, para darle proteccin por los cambios del proceso. Este proceso puede durar de
15 a 20 aos ms de almacenamiento.
Tierra frtil estril: el microorganismo esta con sustrato, el microorganismo se coloca en
un recipiente al vaco, esto es perfecto para el microorganismo.
Criogenia: sumergir en gases lquidos como N2 lquido a 80 C, se requiere un equipo
muy grande, instalaciones especiales, es muy utilizado para microorganismos que no
esporulan.
Otros gases O2, He - 220 C, Argn, se usa un soporte Ej. Polvo de cal.
Virus se conserva en tejido o se inserta a un hospedero) o en estado atenuado en cultivo
de clulas anmales, embriones de pollo.
En algunas ocasiones la industria fermentativa tiene frecuentes prdidas por
degeneracin de las cepas de trabajo; las causas primordiales que cusan estas prdidas
de los cultivos que se mantienen bajo determinadas condiciones se mencionan a
continuacin:
a) Contaminacin por otros microorganismos
b) Contaminacin por fagos
c) Problemas de mutacin y seleccin natural.
d) Personal mal entrenado.
El objetivo fundamental de mantener la viabilidad en los microorganismos es: conservar
todas las funciones metablicas, reproducible y que transmitan todas sus caractersticas a
sus descendientes, con replicaciones bajas, capaces de reproducirse.
24
. MATERIAL
EQUIPO
Mechero Fisher
6 tubos de ensaye
2 tubos con 9 mL
de solucin salina
fisiolgica (0.85%)
1 gradilla metlica
10 jeringas
estriles
1 puente
4 pipetas de 1 mL
1 caja de Petri con
varilla en forma de
V , con un porta y
un cubreobjetos
1 asa
1 bistur
Algodn
Gasa
Papel Kraft
1 autoclave
1 incubadora 35
2C
1 microscopio
1 horno a 170C
1 balanza digital
MEDIOS DE
CULTIVO
Agar Soya
tripticasena.
Agar Papa y
Dextrosa.
Caldo Nutritivo
REACTIVOS
Aceite mineral
estril
Arena estril
Solucin salina
fisiolgica
Colorantes para la
tincin de Gram
Azul de metileno
1.- Realizar un examen microscpico de los microorganismos que se quieren conservar.

2.- Previamente se deber realizar una tincin de Gram para bacterias y una preparacin
en fresco para mohos y tincin simple para levaduras.
3.- Si el cultivo es puro, se deben preparar tubos con medio para conservarlo.
4.- Preparar tubos inclinados con 5 ml. de medio agar soya tripticasena, para bacterias y
actinomicetos, agar papa dextrosa para mohos y levaduras, tambin se pueden usar los
medios de cultivo en los que se haya aislado o bien el que recomiende la bibliografa que
se haya consultado.
5.- Rotular los cultivos con los siguientes datos:
Nombre del microorganismo
Lugar y fuente de donde se aisl (aislado en el laboratorio o proporcionado por
alguna institucin)
Requerimientos especiales (Medio de mantenimiento, temperatura ptima de
crecimiento, y de produccin,
pH ptimo, nutrientes especficos etc.)
Nombre del metabolito (si lo produce).
25
MANTENIMIENTO DE CULTIVOS EN TUBOS CON AGAR INCLINADO.

1.- Por este mtodo se recomienda sembrar bacterias, levaduras y mohos
2.- Se siembra por triplicado cada uno de los microorganismos que se van a conservar.
3.- Incubar los tubos a 35 2C durante 24 horas si se trata de bacterias y levaduras y a
28C durante 48 horas si se trata de mohos durante cinco das.
4.- Se verifica el crecimiento adecuado y se conservan los tubos en refrigeracin a una
temperatura aproximada de 4C
MANTENIMIENTO DE CULTIVOS EN TUBOS CON AGAR INCLINADO Y ACEITE
MINERAL.
1.- Por este mtodo se recomienda que se conserven bacterias y levaduras.
2.- Se colocan 100 ml de aceite mineral en un matraz Erlenmeyer y se esteriliza por calor
seco a 170C durante una hora.
3.- Al tubo inclinado que se sembr, se le adiciona el aceite mineral hasta que cubra el
agar, sellar con papel parafilm y guardar el tubo en el refrigerador a una temperatura
aproximada a 4C.
MANTENIMIENTO DE CULTIVOS EN ARENA ESTRIL.
1.- Este mtodo se recomienda para conservar mohos y microorganismos esporulados.
2.- Se esterilizan 3 tubos de ensaye con tapn de rosca que contienen arena y se
esterilizan por calor seco 170C durante 1 hora.
3.- El tubo que tiene el moho que se va a conservar se le adicionan 5 ml. de solucin
salina estril, se homogeniza hasta que se vea una suspensin y se adiciona lentamente
al tubo que contiene el suelo de tal manera que la arena solo se humedezca.
4.- Se sella el tubo con papel parafilm y se conserva en refrigeracin.
* Nota: Para evaluar la viabilidad del cultivo conservado se realiza lo siguiente
Se siembran los microorganismos en caldo nutritivo incubando 24 horas para bacterias y
levaduras a 37C y para mohos 48 horas a 28C
26
OBSERVACIONES:
CONCLUSION:
CUESTIONARIO:
1.-Menciona otros mtodos de conservacin de microorganismos?
2.-Cunto tiempo pueden durar vivos los microorganismos por el mtodo de suelo
estril?
3.-Cunto tiempo pueden durar vivos los microorganismos por el mtodo de tubos
inclinados?
4.-Cunto tiempo pueden durar vivos los microorganismos por el mtodo con aceite
mineral?
5.-Cunto tiempo pueden durar vivos los microorganismos por el mtodo de
congelacin?
6.-Cunto tiempo pueden durar vivos los microorganismos por el mtodo de liofilizacin?
27
PRCTICA No. 7
ELABORACIN DE VINAGRE
ANTECEDENTES:
El vinagre es un excelente ejemplo de la produccin microbiolgica de un compuesto, el
cual es el resultado del proceso de fermentacin y una subsecuente oxidacin. El primer
paso en la produccin de vinagre se lleva a cabo por una levadura que fermenta el
azcar, el cual utiliza como sustrato, produciendo alcohol como un producto de ese
proceso.
La produccin casera de vinagre utiliza las levaduras que se encuentran de forma natural
en la piel de uvas o manzanas. Comercialmente, se utiliza la S. cerevisiae como cultivo
para iniciar el proceso de fermentacin. En ambos casos ocurre este proceso.
Seguido del proceso de fermentacin, el etanol producido por las levaduras metabolizado
aerbicamente por las bacterias del cido actico, tales como el
Acetobacter aceti u otras especies. Estos organismos oxidativos son capaces de utilizar el
alcohol como fuente de carbono y energa, produciendo el cido actico como un
producto de desecho.
Reactivos
Materiales
250 ml. de jugo de manzana 4 matraces Erlen Meyer
bien limpios, de 250 ml.
1 manzana (sin lavar)
Asa de inoculacin
Pasas (sin lavar)
Papel aluminio
1 sobre de levadura para
Cuchillo
hacer pan
Primera Parte:
1. Adicionar aproximadamente 50 ml. de jugo de manzana a cada uno de los matraces
Erlenmeyer de 250 ml.
2. Adicionar a un primer matraz conteniendo jugo de manzana, trozos de piel de manzana
y 3 pasas (ambas sin lavar).
28
3. Adicionar a otro matraz conteniendo jugo de manzana, trozos de piel de manzana y

3 pasas (todo bien lavado).
4. Rehidratar la levadura para hacer pan siguiendo las instrucciones del fabricante y
despus del tiempo que establecen las mismas, adicionar 1 ml a otro matraz conteniendo
el jugo de manzana.
5. Cubrir todos los matraces con papel aluminio e incubar a temperatura ambiente.
Revisar peridicamente los matraces para observar crecimiento del microorganismo, olor
y produccin de gas. NO AGITAR LOS MATRACES.
Segunda Parte:
1. Cuando el olor del etanol se haga predominante en los matraces, lleve a cabo la tincin
de Gram para observar tanto levaduras como bacterias.
2. Dejar que los matraces que contienen la piel de manzana y las pasas progresen
naturalmente. Los organismos oxidativos deben estar presentes en el matraz, ya que
ellos, al igual que las levaduras, forman parte de la flora normal de esas frutas.
Tercera Parte:
1. Examinar los matraces para observar la produccin de una pelcula, la cual indicar el
crecimiento del microorganismos aerbico Acetobacter. NO
ROMPER LA PELCULA AGITANDO EL MATRAZ.
2. Cuando la pelcula est bien formada y el olor de vinagre se haga presente, haga la
tincin de Gram. Compare los resultados de sus observaciones con respecto a las
primeras que realiz (sustrato fermentado).
29
OBSERVACIONES:
CONCLUSION:
CUESTIONARIO:
1. Cules son los dos grupos de microorganismos responsables de la produccin del
vinagre?
2. Por qu el vinagre debe pasteurizarse?
3. Bsicamente qu factores se controlaron en esta prctica para la produccin del
vinagre?
30
PRACTICA No. 8
ANLISIS DE AGUAS
MEDIANTE LA TCNICA DEL NMERO
COLIFORMES (NMPOC)
MS PROBLE DE ORGANISMOS
ANTECEDENTES:
ANLISIS MICROBIOLGICO DEL AGUA
Por las caractersticas fsicas y qumicas tan peculiares que presenta el agua, se le
encuentra formando parte de una gran variedad de materiales en la naturaleza, lo mismo
se trate de objetos animados o inanimados. Esa singular ubicuidad del agua, y su
insustituible participacin en los procesos biolgicos obedece a las caractersticas
singulares (suigeneris) que posee. Podemos sealar algunas de tales propiedades: lquida,
transparente, inspida, inodora, azul plido en capa profunda; de otra manera incolora,
congela a 0C y hierve a 100C a una presin de 760 mm Hg, prcticamente incompresible,
con calor especfico alto, poderosa capacidad solvente y funciona como dipolo. Existe libre
en la naturaleza con los tres estados fsicos y constituye alrededor de 70% del peso corporal
humano en donde tiene importante papel en la regulacin trmica. Tal conjunto de
cualidades ha llevado a darle al agua una larga lista de usos en la satisfaccin de las
necesidades en las comunidades humanas:
Bebida, culinario, higiene personal, recreativo en piscinas, riego, aseo de utensilios, lavado
de alimentos, retiro de desechos domsticos e industriales, etc. Saneamiento de locales,
calles y edificios; extincin de incendios, generador de vapor y de electricidad, solvente y
materia prima en la industria, instalaciones de aire acondicionado, enfriamiento, y uso
recreativo en fuentes y lagos. Fcilmente puede apreciarse que de los usos indicados, es
en los del inciso en donde se involucra un riesgo para la salud, ste riesgo surge de los
siguientes hechos:
El agua se pone en contacto directo con sustancias txicas y microorganismos patgenos.
Como resultado, stos agentes se incorporan al agua, disueltos o en suspensin. El
contacto ocurre espontneamente en la naturaleza o como consecuencia del uso que
hacemos del agua, lo que es prcticamente inevitable. Al hacer uso del agua, sta se pone
en contacto directo con el cuerpo humano, externa e internamente. Por otra parte,
reconociendo la necesidad del consumo del agua es de tal magnitud que su disponibilidad
constituye una propiedad, el control de su calidad sanitaria se justifica plenamente porque:
Puede contener una gran variedad de agentes patgenos. Se tiene conocimientos acerca
31
de casos aislados y epidemias que se presentan usando el agua como vehculo del agente
patgeno. La incidencia de los casos mencionados es mnima cuando el control sanitario
de su calidad se ejerce sistemticamente en una comunidad.
Desde el punto de vista bacteriolgico, la importancia sanitaria se refiere a la presencia de
aquellos microorganismos patgenos que pueden utilizar el agua como vehculo de
diseminacin; principalmente bacterias intestinales, siendo utilizadas como medio de
eliminacin de excretas y otros desechos; puede tambin contener microorganismos
patgenos de asiento no intestinal (flora de la piel, por ejemplo), tales grmenes son
destruidos por los mismos mecanismos y medios que suelen utilizarse cuando se tratan las
aguas por el proceso ordinario de potabilizacin. Por sta razn, el problema de control
sanitario del agua se realiza en funcin de las bacterias intestinales.
MATERIAL
10 Tubos de Ensaye.
Gradilla.
Jeringa de 10 ml.
Jeringa de 1 ml.
Frascos con tapa
Cajas Petri.
Frascos con tapa
Campanitas
fermentacin.
Tripie.
Tela de Asbesto.
Termmetro.
Cerillos
REACTIVOS
Caldo Lactosado.
Caldo Lactosado Verde
Brillante.
Agar cuenta estndar
EQUIPO
Horno.
Autoclave.
Bao
Mara
con
Termostato.
Incubadora.
Cuenta Colonias Quebec
de
PREPARACIN DE AGAR CUENTA ESTNDAR

Suspender 23.5 g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitacin suave
hasta su completa disolucin y hervir durante un minuto. Esterilizar en autoclave a 121C
(15 libras de presin).
32
PREPARACIN DEL CALDO LACTOSADO

La etiqueta dice pesar 13g de medio liofilizado y disolver en 1000 ml. de agua hervir durante
un minuto distribuir en tubos y esterilizar a 121C por 15 minutos en Autoclave
Extracto de carne 3.0 g.

Lactosa. 5.0 g
Peptona. 5.0 g
Agua Destilada 100 ml.
PREPARACIN DEL CALDO LACTOSA-VERDE BRILLANTE
Peptona. 10.0 g
Lactosa. 10.0 g
Ox-gall 10.0 g
Verde Brillante 0.0133 g
Agua Destilada 100 ml.
Disolver 40 gr. del medio deshidratado en 1 litro de agua destilada, hervir y distribuir en
volmenes de 3 ml. en tubos de 13 x 100 con campana de fermentacin. Esterilizar a 121C.
por 15 min.
1. Leer la norma NOM-109.SSA y NOM092-SSA
2. La muestra de agua se toma en un frasco estril despus de dejar correr el agua de la
tubera por 5 minutos.
3. Si la muestra es de ro, tomarla en contra corriente.
4. Transportar la muestra el laboratorio sumergida en hielo.
5. Homogenizar el frasco durante 7 seg. o bien agitarlo 25 veces en un ngulo de 35.
33
6. Tomar 1 ml. de muestra de agua y vaciado en una caja Petri estril, agregar Agar cuenta
estndar fundido y estabilizado a 45C. Agitar la muestra y Agar con movimientos lentos
rotacionales y verticales.
7. Dejar solidificar sobre la superficie plana horizontal de la mesa.
8. Incubar la caja en posicin invertida a 35C. durante 24 horas.
9. Despus de la incubacin contar las colonias con ayuda de un cuenta colonias Quebec
y reportar las colonias por ml. de agua, como nmero de microorganismos mesoflicos, el
cual no deben de ser mayor de 50ml para considerada aceptable.
CUENTA DEL N.M.P.O.C.
1. Preparar 7 tubos de cultivo con 10 ml. de caldo Lactosado cada uno, adicionar una
campanita de fermentacin, llenarla y tapar los tubos y esterilizar durante 15 min. a 121C.
. Los cinco primeros tubos llevarn 10 ml. de Caldo Lactosado a los cuales a cada uno se
le adicionan 5 ml. de la muestra de agua. El sexto y el sptimo tubos, llevarn 9 ml. de
Caldo Lactosado y con jeringa de 1 ml. se deposita 1 y 0.1 ml. la muestra de agua
respectivamente.
2. Incubar a 35 C. por 24 o 48 horas.

3. Observar en que tubos hubo fermentacin y anotar corno prueba presuntiva. De cada
tubo positivo tornar una azada y trasvasar a tubos que contenga Caldo Lactosa Verde
Brillante.
4. Incubar a 35 "c. por 24 O 48 horas.
5. Despus de la incubacin observar en que tubo hubo fermentacin. Anotar este resultado
como prueba confirmativa y recurrir a las tablas de N.M.P./100mL para hacer las lecturas
correspondientes.
34
NOTAS:
1.
La fermentacin se observa por la formacin del gas, indicado por la presencia de
burbuja en el interior de la campana.
2.
En el caso de Harinas, se debe de efectuar una pesada de 10 gr. de muestra en 90
ml. de agua Peptona estril de donde se procede a efectuar la tcnica, y el resultado de
tablas se multiplica por los gramos de la muestra.
Nmero de tubos
O
1
1
O
1
2
2
O
2
1
3
O
3
O
3
1
4
O
4
O
4
1
5
O
5
O
5
1
(+)
O
O
O
O
O
O
1
O
O
1
O
O
1
O
NMP/ml.
muestra
2.0
2.0
4.0
5.0
8.0
9.0
12.0
12.0
15.0
20.0
21.0
40.0
100.0
200.0
de lmite de confianza al 99%

Inferior
<1.0
superior
15
TABLA DEL NUMERO MS PROBABLE DE ORGANISMOS COLIFORMES

X= Combinacin poco probable que se obtiene slo en el 4% de los casos. No debe
utilizarse para decisiones importantes. La condicin de tubos positivos que no aparecen en
las tablas debe de considerarse inaceptable.
NOTAS: Debido a que en el agua potable debe de existir una cantidad menor de 2
microorganismos por 100 ml. de agua, se recomienda usar esta serie de diluciones, pero
existen otras combinaciones aceptables como lo marca la NOM-127 y NOM-042 de la
Secretaria de Salud.
35
OBSERVACIONES:
CONCLUSION:
CUESTIONARIO:
36
PRACTICA N 9
FERMENTACION ALCOHOLICA
FERMENTACION DE LA FRUTA
ANTECEDENTES.
La fermentacin alcohlica es un proceso biolgico de fermentacin en plena ausencia de
aire, originado por la actividad de algunos microorganismos que procesan los hidratos de
carbono, para obtener como productos finales: un alcohol en forma de etanol, dixido de
carbono en forma de gas y unas molculas de ATP que consumen los propios
microorganismos en su metabolismo celular energtico anaerbico. El etanol resultante se
emplea en la elaboracin de algunas bebidas alcohlicas, tales como el vino, la cerveza, la
sidra, el cava, etc.
La fermentacin alcohlica tiene como finalidad biolgica proporcionar energa anaerbica
a los microorganismos celulares (levaduras) en ausencia de oxgeno para ello disocian las
molculas de glucosa y obtiene la energa necesaria para sobrevivir, produciendo el alcohol
y 2 como desechos consecuencia de la fermentacin.
Las levaduras y bacterias causantes de este fenmeno son microorganismos muy
habituales en las frutas y cereales contribuyen en gran medida al sabor de los productos
fermentados.
TECNICA:
1. En un recipiente para 4 lt. de agua, solamente se agregan 3 litros de agua se
procede a pelar la pia y cortarla en trozos.
2. Posteriormente se agrega al recipiente con agua la cascara de la pia, la pia en
trozos, el piloncillo rayado, los clavos, las pimientas, y la canela, se tapa con un
trapo para evitar la acumulacin de gases.
3. Despus de 3 das de reposo se revisa si hubo fermentacin para esto se tiene que
observar una pequea capa de espuma blanca en la superficie si se observa esta
capa de espuma, se procede a agregar 200 ml. De cerveza como sustituyente de la
cebada.
4. Se vuelve a tapar con el trapo y se deja reposar otros 3 das, al finalizar este lapso
se filtra todo en contenido con una coladera y un trapo para eliminar los residuos
slidos.
5. Finalmente, de la espuma blanca que se forma, se realiza una tincin para levaduras
(para corroborar la presencia de las mismas) y una tincin de GRAM (para saber
qu tipo de bacterias tenemos).
37
OBSERVACIONES:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
38
PRACTICA No. 10
PROYECTO DE INVESTIGACION
FERMENTACIONES
ANTECEDENTES.
El concepto de fermentacin se ha ido modificando con el tiempo y, actualmente, abarca
una gran cantidad de procesos y productos diversos: el trmino se aplica tanto a
procesos muy simples como a los que se desarrollan a escala industrial -con controles bien
establecidos y de gran utilidad para el hombre-, por lo que resulta difcil describirlo. Sin
embargo, prevalecen dos criterios para su definicin, uno bioqumico y otro microbiolgico.
Desde el punto de vista bioqumico, una fermentacin se define como un proceso

mediante el cual las sustancias orgnicas (sustrato) sufren una serie de cambios qumicos
(reducciones y oxidaciones) que producen energa: al finalizar la fermentacin, se presenta
una acumulacin de varios productos, unos ms oxidados (aceptaron electrones) y otros
ms reducidos (donaron electrones) que el sustrato, con un balance total de energa
positivo. Esta energa es utilizada en el metabolismo de los microorganismos.
Desde el punto de vista microbiolgico, en la actualidad, se entiende por fermentacin

aquel proceso en el que los microorganismos producen metabolitos o biomasa, a partir de
la utilizacin de sustancias orgnicas, en ausencia o presencia de oxgeno. La
descomposicin de los sustratos es llevada a cabo por enzimas producidas por los
microorganismos para tal finalidad. Se debe observar que el concepto llega a excluir a los
microorganismos del proceso, siempre y cuando estn presentes sus enzimas; sin
embargo, en estos casos, la velocidad de obtencin y los rendimientos del producto son
menores.
39
DESCRIPCION DEL PROYECTO.

Realizar una investigacin sobre las diferentes fermentaciones que existen.
De los diferentes tipos de fermentacin, escoger uno, para llevarlo a la prctica en el
laboratorio, investigando:
1.- Antecedentes o sustento terico.
2.-Objetivos.
3.-Descripcin de la prctica.
4.-Material.
5.-Equipo.
6.-Reactivos.
7.-Tcnica.
8.-Observaciones.
9.-Conclusin.
10.-Cuestionario.
11.-Referencias Bibliogrficas.
40
BIBLIOGRAFIA:
LIBRO MICROBIOLOGIA GENERAL. HG Schlegel, C Zaborosch - 1997 - academia.edu
LIBRO BIOQUIMICA DE LOS MICROORGANISMOS. RP i Farrs, AJ Gimnez - 1997 books.google.com
MICROBIOLOGIA GENERAL. es.slideshare.net/valemaxi/microbiologia-general-18692381
20 may. 2016 - libro completo de microbiologa general educacin.
MICROBIOLOGIA GENERAL INSTTUTITO DE INVESTIGAIONES BIOTECNOLOGICAS
www.iib.unsam.edu.ar/php/docencia/licenciatura/biotecnologia/2010/.../guiatp.pdF
LIBRO MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL. Alicia Hernndez. Colaboradores; Iliana Alfaro y
Ronald Arrieta
LIBRO DE MICROBIOLOGIAQ INDUSTRIAL. Ska EJaraba-Academia
www.academia.edu/10720387/LIBRO_DE_MICROBIOLOGIA_INDUSTRIAL
VoBo:
FECHA: 2 AGOSTO 2016
41

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MANUAL DE PRCTICAS

PRCTICA NO. 1 PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO Y ESTERILIZACIN EN

PRCTICA NO. 2 SIEMBRA DE UN MICROORGANISMO - - - - - - - - - - 10

PRCTICA NO. 3 AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS - - - - - - - - - -12

PRCTICA NO. 4 SIEMBRA EN PLACA POR ESTRA - - - - - - - - - - 14

PRCTICA NO. 5 SIEMBRA EN PLACA POR VACIADO - - - - - - - - - - 20

PRCTICA NO. 8 ANLISIS DE AGUAS - - - - - - - - - - 31

PRCTICA NO. 9 FERMENTACION ALCOHOLICA - - - - - - - - - - 37

PRCTICA NO. 10 PROYECTO DE INVESTIGACIN - - - - - - - - - - 39

e) Si existiera alguna contaminacin o salpicadura en cara, en zonas no cubiertas deber

13.- Est PROHIBIDO fumar dentro del laboratorio.

Con la finalidad de garantizar la seguridad en el laboratorio es necesario conocer las normas

NOTA: si no se cuenta con el material adecuado en el laboratorio de Microbiologa se

4.- Para que el microorganismo desarrolle en la interface del Agar, se funde

+ 9ml de diluyente* 10-1

Depositando el contenido de la pipeta en la caja Petri

No. DE COLONIAS EN 0.5gr No. DE COLONIAS

1) SIEMBRA POR ESTRA:

4. A continuacin se toma el tubo que se va a aislar se destapa con el dedo meique, se

2) AISLAMIENTO POR EL MTODO DE LA ESTRA CRUZADA:

INCUBACIN DE LAS PLACAS DE AGAR

1.- Conserve una placa estril como control. Se mantiene cubierta.

TCNICAS QUE DEBES CONSIDERAR CUANDO ESTRIAS

ESTRIADO DE LA CAJA PETRI

1. - Por qu el agar deber mantenerse en bao mara a 45 C, antes de verterlo en la

2. - Cul es la razn por la cual se siembra en estra?

La tcnica de la siembra en placa por vaciado proporciona un segundo mtodo de obtener

Si se desea "cultivar" los microorganismos existentes en una mezcla, debe resolverse

nmero apropiado de colonias, y se basa en una dilucin aproximadamente cuantitativa

PRECAUCIN: Ya que el descenso de la temperatura de 45C. A 42C ocurre

placas repletas de especies dominantes. Los organismos secundarios pueden

2.- En que difiere del mtodo de siembra por estra?

3.-Qu ventaja se obtiene usando el mtodo de siembra en placa por vaciado?

Conservacin de microorganismos a mediano plazo

1.- Realizar un examen microscpico de los microorganismos que se quieren conservar.

MANTENIMIENTO DE CULTIVOS EN TUBOS CON AGAR INCLINADO.

3. Adicionar a otro matraz conteniendo jugo de manzana, trozos de piel de manzana y

PREPARACIN DE AGAR CUENTA ESTNDAR

PREPARACIN DEL CALDO LACTOSADO

Extracto de carne 3.0 g.

PREPARACIN DEL CALDO LACTOSA-VERDE BRILLANTE

2. Incubar a 35 C. por 24 o 48 horas.

de lmite de confianza al 99%

TABLA DEL NUMERO MS PROBABLE DE ORGANISMOS COLIFORMES

Desde el punto de vista bioqumico, una fermentacin se define como un proceso

Desde el punto de vista microbiolgico, en la actualidad, se entiende por fermentacin

DESCRIPCION DEL PROYECTO.

FECHA: 2 AGOSTO 2016

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