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INSTITUTO POLITCNICO

NACIONAL
Escuela Nacional de Ciencias
Biolgicas
Departamento de Bioqumica
Laboratorio de Mtodos de Anlisis

DETERMINACIN DE LA
ACTIVIDAD DE ENZIMAS
PROTEOLITICAS. MTODO DE
KUNITZ

Alumna: Cervantes Martnez Mara Virginia


Grupo: 5QM1

Seccin: 2

Fecha de entrega: 22-09-16

FUNDAMENTOS:
Las enzimas son catalizadores de naturaleza protica, producidos por los
organismos vivos, por lo tanto, se consideran como catalizadores altamente
especficos que:
1) Modificacin de la velocidad de los cambios promovidos por ellas.
2) Determinan qu sustancias particulares de preferencia a otras distintas, son las
que van a sufrir cambios.
3) Impulsan dentro de los distintos cambios posibles que pueda seguir una sustancia,
cul de ellos en especial ser el usado.

Las enzimas proteolticas son las que utilizan como sustratos protenas o
cualquiera de los diversos derivados de las mismas.
Un desarrollo interesante es el uso de enzimas proteolticas para estudiar el
ncleo de ciertas molculas de protena biolgicamente activas.
El mtodo de Kunitz se utiliza como sustrato la casena al 1% en regulador de
fosfatos 0.05 M a pH 7.6.
La actividad proteoltica se informa en Unidades de Tirosina, es decir, g de
tirosina liberados en una hora por mg de protena.

OBJETIVOS:
1) Elaborar una curva estndar de actividad enzimtica.
2) Determinar la actividad proteoltica de la bromelana, la papana y otras proteasas.

RESULTADOS:

Curva de actividad enzimtica:

Tabla 1. Actividad enzimatica de la tripsina.

Tubo
T1 y 1
T2 y 2
T3 y 3
T4 y 4
T5 y5
TI y I

Concentracin
de Tripsina
(mg/mL)
0.04
0.08
0.12
0.16
0.20
Bromelana
1:10

A280
Problema
(nm)
0.242
0.349
0.398
0.473
0.530
PROBLEMAS
0.660

0.117
0.133
0.118
0.122
0.115

A280
corregida
(nm)
0.125
0.216
0.280
0.357
0.415

0.195

0.465

Testigo (nm)

Bromelana
1:20
Papana 1:2
Papana 1:4

TII y II
TIII y III
TIV y IV

0.538

0.162

0.376

0.598
0.371

0.354
0.253

0.244
0.119

Ejemplo de clculo de la A280 corregida:


A 280 corregida : A 280 problema A 280 testigo= A 280 corregida

A 280 corregida :0.2420.117=0.125 nm


0.4
0.35

f(x) = 1.9x + 0.05


R = 1

0.3
0.25

Absorvancia a 280nm corregida

0.2
0.15
0.1
0.05
0

0.05

0.1

0.15

0.2

concentracion de tripsina mg/mL

Ilustracin 1. Curva de actividad enzimtica de tripsina


Tabla 2. Curva de actividad enzimtica especfica para la digestin de casena por tripsina.

Tubo
1
2
3
4
5

Unidades Trpticas

Ejemplo clculo de unidades trpticas:

A280 corregida
0.125
0.216
0.280
0.357
0.415