MESA

UNIVERSIDAD NACIONAL
AGRARIA
LA MOLINA

INFORME N7

Curso:
Laboratorio de
Bioqumica
Profesor:
Jorge Montalvo, Paola
Grupo:
Lunes 2pm- 4pm
Integrantes:
Bustamante Vsquez,
Leonela
Gutirrez Castillo, Carla
Urruchi Pariona, Stefanie
Vsquez Gmez, Jose

MTODOS ESPECTROFOTOMTRICOS
Laboratorio de Bioqumica
I.

INTRODUCCION :
La glucosa es la principal fuente de energia en los seres vivos. Por tal razon es un
metabolito fundamental en los procesos biologicos.La determinacion cuantitativa
de este biocompuesto, ha sido objeto de muchos estudios y la literatura ofrece
diversas tecnicas de analisis que varian de acuerdo con diferentes factores como
la naturaleza de la muestra, los contenidos de glucosa y la viabilidad experimental.
Los metodos de determinacion mas antiguas se basan en la reduccion de iones
cpricos a cuproso. Existen diversas tecnicas que con algunas modificaciones
utilizan esta reaccion basica, es el caso del metodo de Nelson - Somogyi, cuyo
fundamento usamos en laboratorio y veremos en el presente informe.

MTODOS ESPECTROFOTOMTRICOS
Laboratorio de Bioqumica
II.

RESULTADOS:
REACTIVO

TUBOS
BLANCO

3
4
M.P.
Estandar de
0.40
0.60
0.80
1.00
glucosa (mL)
Agua destilada
1.00
0.60
0.40
0.20
(mL)
Muestra (mL)
1.00
Reactivo de
1.00
1.00
1.00
1.00
1.00
1.00
Somogy (mL)
Reactivo de
1.00
1.00
1.00
1.00
1.00
1.00
Nelson (mL)
Agua destilada
12.50
12.50
12.50
12.50
12.50
12.50
c.s.p. (mL)
Absorbancia
0.000
0.107
0.175
0.253
0.288
0.562
1. TUBO 1:
20.
2.
3. 1g
100mL
4. 10-2g
1mL
5. 10mg
100mL
0.3
(Sol St.)
f(x) = 38.81x - 0.01
-2
6. 4x10 mg
0.4mL
0.25
R = 0.98
7. 4x10-2mg
12.5mL
0.2
8. 3.2x10-3mg
1mL
-3
9. CSt1: 3.2x10 mg/mL
Absorbancia 0.15
10.
11. TUBO 2:
0.1
12.
13.
1g
100mL
0.05
-2
14.
10 g
1mL
0
0
0
0.01
15.
10mg
100mL
Concentracion (
(Sol St.)
-2
16.
6x10 mg
0.6mL
17.
6x10-2mg
12.5mL
21.
18.
4.8x10-3mg
1mL
22. TUBO 3:
19. CSt2: 4.8x10-3mg/Ml
23.
24.
1g
100mL
25.
10-2g
1mL
26.
10mg
100mL
(Sol St.)
27.
8x10-2mg
0.8mL
-2
28.
8x10 mg
12.5mL
29.
6.4x10-3mg
1mL
30.
CSt3: 6.4x10-3mg/mL
31.
32. TUBO4:
33.
34.
1g
100mL
35.
10-2g
1mL
36.
10mg
100mL
(Sol St.)
37.
10-1mg
1mL

Curva de Calibra

MTODOS ESPECTROFOTOMTRICOS
Laboratorio de Bioqumica
38.
39.

10-1mg
12.5mL
8x10-3mg
1mL
42.
43.
44.
45.
46.
47.
48.
49.
50.
51.
52.
53.
54.
55.
56.
57. FACTOR DE CALIBRACION:
58.

40.

CSt4: 8x10-3mg/mL
41.

1 Cst 1 Cs t 2 Cst 3 Cst 4

fc= (
+
+
+
)
4 A1
A2
A3
A4
1 0.0032 0.0048 0.0064 0.0080
+
+
+
)
60. fc= (
4 0.107 0.175 0.253 0.288
61. fc=0.027575
62. C M =0.027575 x 0.562
mg
63. C M =0.0155
mL
59.

64.
65.
66.
67.
68.
(KR)
69.
(KR)
70.
(KR)
71.
(KR)

0.0155mg
0.19375mg
19.375mg
242.1875mg

1mL
12.5mL

1mL (muestra d2)

100mL
4mL (muestra d1)
50mL
4mL

6054.6875mg

100mL

6.055g

100mL

Xg

240mL
72.
73. X = 14.532g

III.

74.
DISCUSIONES:
1.
El metodo de Somogyi-Nelson, altamente reproducible, determina azcares
reductores

presentes en concentraciones muy bajas (20 - 180 g/ml)

(Gonzales & Castellanos, 2003), razon por la cual se lo escogio para

determinar el porcentaje de azcares reductores presentes en la gaseosa
cuyo valor fue de 14.532g en 240mL, sin embargo en la etiqueta mostro un
4

MTODOS ESPECTROFOTOMTRICOS
Laboratorio de Bioqumica
valor de 22g en 240mL esta diferencia pudo haber sido causado por algn
error en la exactitud de preparacion de las muestras. El modo de accion de
dicho metodo se da debido a que un azcar reductor agregado al reactivo
de Somogyi, va a producir un precipitado de cobre reducido, en la forma de
hidrato cuproso y oxido cuproso, que va a tener un color rojo o amarillo, en
su medio basico (pH 9). En estas condiciones se oxidan en su medio acido
(pH 1,2 - 2,0) el arsenato y molibdato del reactivo de Nelson, dando origen
a la formacion de molibdeno azul, coloracion que se mantiene estable por
24-36 horas y que puede leerse mediante un espectrofotometro a 540nm
para la determinacion de la concentracion (Nelson, 1944; Somogyi, 1952;

IV.

Gonzales & Castellanos, 2003).

2.
3.
4.
5.
6.
7.
CONCLUSIONES:
1.
El metodo Somogy-Nelson

es

muy

utilizado

para

determinar

concentraciones de azcares reductores en muy bajas proporciones, sin

embargo tambien puede tener un leve error en laboratorio al realizar las
disoluciones de concentraciones bajas de los reactivos utilizados ya que
pueden generar mayor error en los resultados finales.

V.

2.
3.
CUESTIONARIO:
1.
2. En qu momento se realiza la precipitacin de las protenas y por
qu?
3.
4. La solubilidad de una proteina es muy variable por e depende de la
distribucion de sus grupos polares y apolares de la molecula. La proteina va
ser soluble cuando la interaccion proteina-agua ocurre y tiende a ser
insoluble cuando ocurre la interaccion proteina-proteina. Entonces,
cualquier factor que altere estas interacciones cambiara el grado de
solubilidad. La desnaturalizacion es la desorganizacion de la estructura de
la proteina, mediante agentes fisicos y quimicos que perturban la
conformacion de la proteina. Esta perturbacion es explicada porque las
proteinas plegadas y desplegadas presentan pequeas
5

diferencias de

MTODOS ESPECTROFOTOMTRICOS
Laboratorio de Bioqumica
energia libre, provocando mayor sensibilidad a los cambios en el entorno.
Las alteraciones se hacen visibles con la disminucion de la solubilidad y la
perdida, parcial o total, de la actividad biologica. La desnaturalizacion por
sales de metales pesados (en este caso fue sulfato de zinc), forma
proteinatos insolubles al romper los puentes salinos y formar enlaces
ionicos n los grupos con carga negativa. Esta disminucion de la solubilidad
se puede explicar por la exposicion de enlaces hidrofobicos, lo que
favorece la interaccion proteina-proteina y disminuye la interaccion
proteina-agua. La desnaturalizacion por bases fuertes (hidroxido de bario),
producen cambios de pH. Al cambiar los valores de pH los radicales de los
aminoacidos,

alterando los patrones de puentes salinos y enlaces de

hidrogeno en la proteina. Cuando la proteina esta totalmente disociada (en

ese punto isoelectrico) provoca que su fuerza electrostatica sea maxima,
entonces disminuye su solubilidad. Ambas formas de desnaturalizacion
provocan una disminucion de la solubilidad, ademas al incrementarse las
concentraciones de las sales ocurre una deshidratacion resultando en una
precipitacion de la solucion (conocido como fenomeno salting-out).
5.
6. Cul es el papel del oxalacetato de amonio?
7.
8. Tambien denominado sal de diamonio del acido oxalico, es utilizado en
los laboratorios de quimica para identificar los iones de calcio.
9. Tiene propiedades anticoagulantes, se utiliza bajo la forma de la mezcla
de tres partes de esta, con dos partes de oxalato de potasio. La sal de
amorio aumenta el volumen de los globulos rojos y la de potasio lo
disminuye.
10. Segn Wintrobe, con la proporcion utilizada, los eritrocitos no se alteran,
actan por precipitacion de calcio.
11. No se afecta al volumen globular medio y puede utilizarse para
determinaciones de hemoglobina, hematocrito, recuento globular y
eritrosedimentacion.
12.
13.
14.
15. Cul es el fundamento del mtodo de Somogy Nelson. Explique si
se produce una reaccion de oxidacin o reduccin.
16. Un azcar reductor es un monosacarido o disacarido que en una
traccion acta como agente reductor, por que pude transferir sus electrones
6

MTODOS ESPECTROFOTOMTRICOS
Laboratorio de Bioqumica
a otras moleculas. El grupo cetona o aldehido presente en la mayoria de
monosacaridos y polisacaridos, les permite actuar como azucares
reductores.
17. Existe una gran variedad de metodos para la valoracion de glcidos
mediante la reduccion de un ion metalico, uno de ellos es el metodo de
Somogyi-Nelson. Con este metodo se obtiene n resultados aptos para la
valoracion de azucares reductores en una solucion con o sin proteinas.
18. Metodo de Somogyi-Nelson
19. El metodo de Somgyi-Nelson se basa en de un ion cprico a cuproso
por accion de los azucares reductores, en un medio alcalino.
20. La utilizacion del sulfato de zinc, un desproteinizante, es necesaria solo
si la muestra que se evala contiene proteinas.
21. La utilizacion del desproteinizante basado en sulfato de zinc es utilizado
con la finalidad de arrastrar las proteinas desnaturalizadas.
22. Se adiciona al a muestra un hidroxido (Hidroxido de bario) y sulfato de
zinc, produciendose la siguiente reaccion quimica.
23. S O4 Zn+ BaOH 2 S O 4 Ba+ ZnOH
24. El hidroxido de zinc es insoluble en agua, y al momento de precipitar se
lleva consigo a las proteinas al mismo tiempo que el cation zinc las
desnaturaliza; asegurando de esta manera la accion reductora de los
glcidos y, la obtencion del filtrado sin azucares reductores a excepcion de
la glucosa.
25. La cantidad obtenida en el filtrado se calienta con un reactivo cpricoalcalino (Reactivo de Somogyi) para luego formar un precipitado (marron)
insoluble de oxido cuproso. Estos dos pasos se explican mejor separando
estas reacciones en dos partes.
Solucion A o parte cprica
Solucion B o parte alcalina
1) La parte cprica esta a base de una sal de cobre (sulfato de cobre),
sulfato de sodio y agua destilada. El medio alcalino que se

MTODOS ESPECTROFOTOMTRICOS
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proporciona va a favorecer la accion de los glcidos al reducir sales
cpricas a cuprosas.
26.
2) La parte alcalina esta formado por tartrato de sodio y potasio,
carbonato de sodio, bicarbonato de sodio, sulfato de sodio y agua
destilada. La funcion del sulfato de sodio es impedir la re oxidacion
de sales cuprosas formadas por los glcidos en la reaccion anterior,
ademas el medio alcalino va a favorecer nuevamente la reduccion
de sales cpricas a cuprosas.
27.

28.
29. Observacion: En la parte experimental realizada en el laboratorio estos
dos pasos se dieron de mata simultanea al agregar ambas soluciones (A y
B) a la muestra.
30. Reactivo de Nelson
31. Compuesto por molibdato de sodio tetra hidratado, acido sulfrico,
arseniato de sodio hepta hidratado y agua destilada. Los iones cuprosos
formados anteriormente van a reaccionar con el arseniato de sodio hepta
hidratado, el molibdato de sodio tetra hidratado y van a reducir a los iones
cuprosos, logrando un cambio de coloracion azul la intensidad del color es
proporcional a la concentracion de azcar reductor que habia inicialmente.

32.
8

MTODOS ESPECTROFOTOMTRICOS
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33. La determinacion de las absorbancias se obtiene mediante el
espectrofotometro a una longitud de onda optimo de 540nm. La presencia
de azucares reductores disponibles se determina por la equivalencia de
concentracion C y absorbancia A hallado en miligramos por ciento.
34.
35. En el mtodo de Folin para determinacin de azcar en sangre, se
aade a 0.1mL de sangre, 10mL de cido tungstico a fin de eliminar la
protenas. Una alcuota de 2mL de filtrado exento de protenas se
coloca en tubos para producir reaccin de color, cuyo volumen final
es 25mL. La intensidad de color se compara con la que produce 4mL
de estndar de glucosa de concentracin 1mg%. Al ser procesado con
los mismos reactivos, este estndar produce un color 1.05 veces ms
intenso que el producido por la sangre filtrada. Cul es la
concentracin de azcar en esta muestra de sangre?
36.
37.
38. 1mg
100mL
39. 4x10-2mg
4mL
25mL
40. X
1mL
41.
Estandar
42. CGLUCOSA
= X = 1.6x10-3mg/mL
43.
44. Intensidad de estandar de glucosa =
2.05N
45. Intensidad de azcar en sangre
=
N
46.
47.

1.6 x 103 C M
=
2.05 N
1N

48. C M =7.8079 x 1 0

mg
mL

49.
50. 7.8079x10-4mg
51. 0.0195mg
52. 0.0984mg
(Sangre)
53. X
54.
Azucar

55. C SANGRE =X =0.984

1mL
25mL

2mL (Alicuota)
10.1mL
0.1mL
1mL (Sangre)

mg
mL

56.
57.
58.
9

MTODOS ESPECTROFOTOMTRICOS
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59. El coeficiente de extincin molar de una sustancia es de 3575cm -1mol-1
en una celda de 1cm y con una longitud de onda de 280nm. Cul ser
la concentracin en mg o en g si se obtuvo una absorbancia de 0.215,
sabiendo que el peso molecular es 328?
60.
61. 0.215=3257 c m1 mol1 x 1 xC
62. C=6.6012 x 105 mol
5

63. C=6.6012 x 10 mol

328 g
=0.0217 g=21.7 mg
mol

64.
VI.

BIBLIOGRAFIA:
1.
Gonzalez, G., Castellanos, O. 2003. Alternativas de modificacion del
metodo de Somogyi- Nelson para la determinacion de azcares reductores
a partir de sus posibilidades quimicas. Revista de Ingenieria Investigacion

(52): 5-17.
Nelson, N. 1944. A photometric adaptation of the Somogyi method for the
determination of glucose. J. Biol. Chem. 153: 375380

McKee, T. M. (2009). Bioqumica las bases moleculares de la vida . China :

Mc Graw Hill pag 155-159.

https://www.google.com.pe/url?
sa=t&source=web&rct=j&url=http://www.bdigital.unal.edu.co/8545/27/12_Ca
p10.pdf&ved=0ahUKEwj2hMT1pO_MAhXFKx4KHbDYBfMQFggnMAY&usg

=AFQjCNEidhYbKI1KshNLcdihznF9Qavp3A
https://www.google.com.pe/url?
sa=t&source=web&rct=j&url=http://ecaths1.s3.amazonaws.com/organicaybi
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6kC0nc5NEfyvwvlw8vZyQ http://materialpractico.blogspot.pe
https://www.google.com.pe/url?
sa=t&source=web&rct=j&url=http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/quimicabiologic
a1/wp-content/uploads/2010/08/TP-Proteinasgeneralidades.pdf&ved=0ahUKEwiWrYeW47MAhWKKB4KHY30DokQFggfMAM&usg=AFQjCNFrF4Oby5VxE_PbFBhY
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