Las estrategias para el descubrimiento, identificacin y

validacin de la leche la protena derivada de pptidos

bioactivos
Antecedentes: El flujo de trabajo utilizado para el descubrimiento de nuevos
pptidos bioactivos derivados de las protenas de la leche (BAP) ha
evolucionado significativamente en los ltimos aos. Muchos de los
enfoques descritos actualmente en la literatura para el estudio de los
pptidos bioactivos derivados de las protenas de la leche (BAP) han tomado
rutas similares como los que se utilizan convencionalmente en el
descubrimiento de frmacos. Sin embargo, debido a que los pptidos
bioactivos derivados de las protenas de la leche (BAP) se preparan a partir
de fuentes alimenticias y de una manera de calidad alimentaria, se
diferencian de los frmacos en que estn generalmente presentes en una
mezcla compleja en comparacin con compuestos activos de medicamentos
que generalmente se producen sintticamente, que tienen relativamente un
alto nivel de pureza. Alcance y enfoque: Esta revisin evala la utilizacin
de mtodos de descubrimiento de frmacos para la identificacin de nuevos
pptidos bioactivos derivados de las protenas de la leche (BAP). Diferentes
mtodos pertinentes para el descubrimiento de frmacos ya han
demostrado su eficacia para el descubrimiento de nuevos PAB de protenas
de la leche. resultados y conclusiones clave: Sin embargo, invirtiendo el flujo
de trabajo, a partir de la identificacin de pptidos in vivo para la deteccin
in vitro seguido de enfoques de descubrimiento de frmacos convencionales
pueden tener varios mritos. Estos incluyen (a) el diseo de estudios ms
especficos, (b) el desarrollo de nuevos enfoques para la generacin de
hidrolizados de protenas de la leche y (c) el descubrimiento de BAPs de
leche que puede ser biodisponible en seres humanos. Estos BAPs pueden
encontrar aplicaciones en la generacin comercial de ingredientes de la
dieta con la salud efectos en seres humanos la promocin.
1. Introduccin
Los alimentos de protenas derivadas de pptidos bioactivos (BAPs) han sido
ampliamente estudiados en relacin con sus posibles efectos sobre la salud
en los seres humanos.
A pesar de los grandes avances en las ciencias mdicas y farmacuticas, as
como un acceso ms amplio a las estructuras de salud en algunos pases,
las enfermedades metablicas especficas ahora parecen ser ms
frecuentes en todo el mundo. El sndrome metablico (sndrome metablico)
se define como una combinacin de factores de riesgo como la obesidad
abdominal, resistencia a la insulina junto con la alta colesterolemia y la
presin arterial (BP). Se estima que aproximadamente el 25% de la
poblacin mundial se ve afectada por los Mets (IDF, 2006). Diferentes
estrategias para gestionar las complicaciones de los Mets (es decir, las
enfermedades cardiovasculares (ECV), la diabetes tipo 2 (DM2) y la
obesidad) se han propuesto como las modificaciones del estilo de vida (las
intervenciones dietticas y la participacin en la actividad fsica) y / o la
medicacin se recomienda a menudo como enfoques preventivos y

curativos. Sin embargo, el uso de frmacos se asocia a veces con efectos

secundarios, por esta razn, la bsqueda de alternativas naturales
procedentes de alimentos compuestos dietticos / ha aumentado (Li-Chan,
2015). En este contexto, BAPs derivados de protenas de la leche
cientficamente validados tienen el potencial de ser formulado en alimentos
para proporcionar sus propiedades promotoras de la salud para la poblacin
general.
El objetivo de esta revisin fue evaluar las estrategias actuales para el
descubrimiento de BAP derivado de protena de la leche. Hasta la fecha,
parece que numerosas metodologas que surgen directamente de los
enfoques de descubrimiento de frmacos se han aplicado a BAPs
seleccionados. Un intento de comprender las limitaciones de la utilizacin
de un enfoque de descubrimiento de frmacos convencionales para el
estudio de la leche PAB derivados de protenas se ha realizado en el
presente documento. Por ltimo, una estrategia alternativa se describe lo
que puede ser beneficioso para aumentar la tasa de descubrimiento de
secuencias de BAP novedosos dirigidos a las condiciones especficas de la
enfermedad / salud humana.
2. Flujo de trabajo general para el descubrimiento de frmacos y
paralelismos con la generacin de BAP leche, identificacin y validacin
El descubrimiento de frmacos comprende varias etapas (Fig. 1), incluyendo
la identificacin de compuestos especficos para permitir la deteccin de la
seleccin de potenciales compuestos farmacolgicos. El candidato (s)
prometedores se evalu luego para la seguridad, la biodisponibilidad y
potencia, los parmetros que se determinan generalmente en modelos de
cultivo celular y animales. Las molculas son evaluadas posteriormente en
diferentes estudios de intervencin humana antes de pasar por una fase de
aprobacin por el organismo regulador competente. La analoga de un
embudo se puede aplicar al proceso de descubrimiento de frmacos, con el
nmero de candidatos prometedores (> 1000) est disminuido en cada paso
(es decir, la seleccin de compuesto, cribado, seleccin de compuestos de
inters, estudios en animales, los estudios en humanos y la aprobacin
reglamentaria ) del proceso (Fig. 1) para finalmente seleccionar un
medicamento

Figura 1. Esquemtizacin del flujo de trabajo de uso comn en el

descubrimiento de frmacos y flujo propuesto de trabajo invertido (de
identificacin de pptidos in vivo para la deteccin in vitro) para la
identificacin de pptidos de la dieta y de validacin.

En trminos de la leche PAB derivados de protenas, slo tres grupos de

compuestos aparecen, hasta la fecha, que han ido a travs de todo el ciclo
del flujo de trabajo de descubrimiento de frmacos. Estos son
caseinophosphopeptides (CPP, por ejemplo, fosfato de calcio amorfo (ACP)
-CPP), pptidos opioides (por ejemplo, b-caseinomorphin 7 (Tyr-Pro-Phe-ProGly-Pro-Ile)) y enzima convertidora de angiotensina (ACE) pptidos
inhibidores (es decir, el pptido C12 (Phe-Phe-Val-Ala-Pro-Phe-Pro-Glu-ValPhe-GlyLys), as1-casena (CN) (f 23-34) y los lactotripptidos (LTP) IlePro-Pro
(b-CN (f 74-76) y k-CN (f 108-110)) y Val-Pro-Pro (BCN (f 84-86)))

La principal diferencia entre las drogas y PAB derivados de la protena de la

leche est en su potencia relativa y el nmero limitado de estructuras
qumicas que estn disponibles en trminos de PAB. Adems, tambin
existen diferencias en la pureza entre las drogas farmacuticas y BAPs
derivados de protenas de leche que generalmente estn presentes como
mezclas relativamente complejas de compuestos (es decir, en hidrolizados o
fermentos). Por esta razn, la base del embudo en la Fig. 1 es ms ancha
para BAPs leche en comparacin a las drogas. Adems, los frmacos
sintticos no estn normalmente presentes dentro del cuerpo humano a
menos que se suministren intencionalmente. Por otro lado, BAPs pueden
estar presentes en los seres humanos, ya que pueden surgir de la digestin
de los alimentos (Boutrou et al., 2013) o de gastrointestinal (GI) protenas
endgenas (Dave, Montoya, Rutherfurd, y Moughan, 2014). Estas diferencias
pueden llevar retos adicionales para el descubrimiento de BAPs la leche y
para la evaluacin de su eficacia en seres humanos (Nongonierma y
FitzGerald, 2015c).
Numerosos frmacos se han desarrollado con xito, validado y aprobado
para el manejo de enfermedades. Por otro lado, la leche PAB no estn
destinados a sustituir a las drogas farmacuticas, sino ms bien a ser
utilizados como agentes profilcticos de enfermedades. Por el contrario,
mientras que parece haber sido validada cientficamente en trminos de
mejora de la salud una serie de leche PAB derivados de protenas, su
aprobacin regulatoria sigue representando un obstculo importante (Fig.
1).
3. Identificacin y validacin de compuestos objetivos de salud
El primer paso en el proceso de descubrimiento de frmacos consiste en la
identificacin y validacin de compuestos especficos de salud (Fig. 1). Al
igual que en el proceso de descubrimiento de frmacos, los objetivos de la
salud de la leche PAB se seleccionan utilizando diversas razones. Estos por
lo general tienen en cuenta la prevalencia mundial de las enfermedades, la
necesidad de nuevos compuestos dirigidos a la enfermedad (por ejemplo,
para aumentar la potencia, reducir los efectos secundarios o mejorar las
caractersticas sensoriales y la estabilidad de la molcula), junto con los
motores econmicos.
Los compuestos objetivos para enfermedades especficas, junto con los
medicamentos correspondientes, han sido recopiladas en bases de datos
(Tabla 1) como la Base de Dato Objetivo Teraputica (TTD) y el Banco de
Drogas. Informacin adicional sobre ensayos clnicos llevados a cabo con
frmacos especficos estn disponibles actualmente en el portal web
ClinicalTrials.gov que comprende los resultados de> 190.000 ensayos
clnicos en seres humanos completos o visitando.

pptidos derivados de protenas de la leche Varios han sido descubiertos

usando compuesots objetivos similares a las empleadas en el
descubrimiento de frmacos. Tabla 2 contiene una lista de objetivos in vitro
que se han utilizado para evaluar la salud mejora de las propiedades de la
leche PAB derivados de protenas. Estos compuestos objetivos incluyen
enzimas metablicas (es decir, ACE, inhibidores de la dipeptidil peptidasa-IV
(DPP-IV), a-glucosidasa), diversos marcadores de modificaciones
morfolgicas de la salud y la enfermedad (es decir, el nivel de citoquinas, la
glucemia, colesterolemia) o en los seres humanos (por ejemplo, msculo la
ganancia de masa, la prdida de masa grasa). Para ciertas condiciones de
salud, se han descrito varios objetivos. Por ejemplo, los pptidos
hipotensores pueden dirigirse ACE in vitro y la inhibicin de la renina, as
como diferentes marcadores antioxidantes (especies reactivas de oxgeno e
ROS, lpidos oxidados, etc.).

4. Identificacin y generacin de los pptidos objetivos

Despus de la seleccin del compuesto objetivo o los compuestos objetivos

de salud, el siguiente paso en el descubrimiento de frmacos consiste en la
deteccin y la generacin del compuesto (Fig. 1). En el descubrimiento de

frmacos, los compuestos de inters que se seleccionan para la deteccin

posterior a menudo se originan a partir de una molcula bien conocida que
ha sido previamente demostrado que tienen un efecto en el objetivo de la
salud. Esta molcula se denomina un "compuesto de plomo". Bases de
datos que compilan compuestos activos previamente de haber sido
informado para objetivos especficos estn disponibles al pblico (Tabla 2).
La utilizacin de consultas especficas (es decir, las similitudes estructurales
entre los compuestos, compuestos adecuados que pueden interactuar con
un objetivo especfico, etc.) se ha descrito el uso de diferentes flujos de
trabajo (automatizacin de procesos, gestin, anlisis y recuperacin de
datos). Los flujos de trabajo que se utilizan para el diseo de nuevos
frmacos pueden ser construidos y visualizaron utilizando software
disponible pblicamente, tal como la tubera piloto, KNIME y Taverna. Los
conceptos farmacolgicos Abiertas Triple tienda (Open PHACTS) plataforma
de descubrimiento ha combinado varias bases de datos disponibles
pblicamente para las drogas, los objetivos, las vas y las enfermedades
(para una revisin, vase: Chichester et al, 2015).. Del mismo modo, para
los pptidos de la dieta, varias bases de datos disponibles pblicamente
(por ejemplo, BIOPEP, PepBank, etc.) comprenden secuencias de BAP (Tabla
3) se ha informado de diversas bioactividades (por ejemplo,
antimicrobianos, contra el cncer junto con ACE y DPP-IV propiedades
inhibidoras). bases de datos especficas han compilado BAPs procedentes de
organismos especficos (plantas, caracoles, rumiantes, etc.). Adems, una
serie de herramientas tales como metabases MetaComBio y OMIC estn
disponibles en lnea. Estos permiten la combinacin de varias herramientas
OMIC as como informacin comprendida en varias otras bases de datos
relacionadas con la bioactividad, la seguridad y eficacia de los compuestos,
por lo que las bsquedas y anlisis de datos ms completa.
Otras estrategias que se pueden utilizar para identificar los pptidos
objetivos. Diversas herramientas protemicas y peptidomic para el anlisis
de BAPs dietticos han sido descritas en la reciente revisin de Iwaniak,
Minkiewicz, Darewicz, Protasiewicz, y Mogut (2015). las secuencias de
protenas de la leche se puede acceder a las bases de datos en lnea, como
UniProt / Swiss-Prot (http://www.uniprot.org/uniprot/). En silico mtodos
(basados en software) se pueden utilizar para dilucidar la leche
proteinderived pptidos candidatos para pruebas posteriores in vitro (Dziuba
y Dziuba, 2014). Mientras que un sustrato protena especfica puede ser
indicada como una rica fuente de PAB, es necesario identificar
posteriormente las estrategias de hidrlisis enzimtica para liberar de forma
ptima estos pptidos (Dziuba, Dziuba, y Iwaniak, 2009). Un uso comn de
los mtodos in silico es la utilizacin de programas de corte de pptidos que
estn disponibles en una amplia gama de herramientas protemicas en
lnea, por ejemplo, ExPASy, BIOPEP, Merops, MS-Digesto (Protein
Prospector), PROSPER, etc. Una lista de lnea cortadores de pptidos est
disponible de BIOPEP en el siguiente enlace:
http://www.uwm.edu.pl/biochemia/index.php/pl/ BIOPEP / 42-protelisis.
cortadores de pptidos han sido diseados para predecir la escisin de
estructuras de protenas primarios que utilizan enzimas de especificidad
conocida. En realidad, las protenas generalmente tambin poseen una una
estructura cuaternaria secundaria, terciaria y posiblemente. Este es el caso

en particular para las protenas de suero nativas (WPS). Por ejemplo,

blactoglobulin nativo (b-Lg) y a-lactoalbmina (a-La) comprenden enlaces
disulfuro de 2 y 4, respectivamente. Las estructuras secundarias, terciarias
y cuaternarias pueden afectar la capacidad de las herramientas de silico
para predecir los sitios de escisin de las protenas nativas.
En otros casos, los pptidos seleccionados pueden ser elegidos en base a
sus propiedades fisicoqumicas (por ejemplo, masa molecular e
hidrofobicidad). Varias calculadoras de pptidos permiten una estimacin de
diversas propiedades fsico-qumicas de pptidos. Ejemplos de este tipo de
software se pueden encontrar en el siguiente enlace BIOPEP: En el contexto
de la leche PAB derivados de la protena, puede ser til para disear una
"base de datos de protenas de la leche" (Le Maux, Nongonierma, y
FitzGerald, 2015) con el fin de restringir el espacio de bsqueda de pptidos
candidatos
5. Proyeccin de potenciales candidatos peptdicos para un objetivo
determinado salud
El siguiente paso despus de la seleccin de los candidatos de pptidos es
la deteccin de bioactividad de los pptidos (Fig. 1). el cribado de pptidos
puede llevarse a cabo de diversas maneras, utilizando in silico, en
bioensayos in vitro o directamente utilizando modelos animales (ex vivo, in
situ e in vivo) o sujetos humanos. Un enfoque sistemtico mediante el cual
BAPs se pueden evaluar de forma secuencial usando los cuatro modos de
deteccin (es decir, in silico, in vitro, ex vivo / in situ e in vivo) puede ser
utilizada. En teora, el nmero de pptidos potenciales debe reducirse en
cada etapa del proceso de seleccin. En general, la seleccin previa se lleva
a cabo porque las pruebas in vivo puede ser relativamente lento, costoso y
requiere la aprobacin tica (Foltz, van der Pijl, y Duchateau, 2010).
5.1. En el cribado in silico
En el cribado silico se puede aplicar a la leche PAB a (a) predecir su
actividad biolgica, (b) el estudio de su mecanismo de accin o (c)
establecer relaciones entre los parmetros fsico-qumicas y las propiedades
bioactivas.
Enfoques quimiomtricos tales como la relacin cuantitativa estructura
actividad (QSAR), redes neuronales artificiales (ANN) y el cribado virtual se
han revisado recientemente (Iwaniak et al., 2015). RNA, que se basan en
algoritmos de aprendizaje automtico, se han utilizado en algunos casos
para ayudar en el descubrimiento de nuevos BAPs leche tales como
pptidos antimicrobianos (AMP) (Dziuba y Dziuba, 2014). Otros mtodos in
silico como acoplamiento molecular y QSAR se describir en los prrafos
siguientes.
acoplamiento molecular, es un mtodo de clculo que predice la unin a
sitios especficos (por ejemplo, los receptores y los sitios activos de las
enzimas) de las protenas de pptidos y cuantitativamente evala energa
de enlace utilizando un sistema de puntuacin (Pripp y Ardo, 2.007 ). En el
contexto de la leche PAB derivados de protenas, la mayora de los estudios
parecen haber sido llevado a cabo con pptidos inhibidores de la ECA

(Norris, Casey, FitzGerald, Shields, y Mooney, 2012; Pan, Cao, Guo, y Zhao,
2012). Dos pptidos inhibidores de la ECA novela, Asp-Trp y Trp-Pro, se
identificaron utilizando acoplamiento molecular (Norris et al., 2012).
acoplamiento molecular ha demostrado que la unin de Leu-Leu, un pptido
derivado de la protena de suero de leche, a la ACE interacciones
hidrofbicas involucradas y tambin la interaccin con Zn2, un cofactor
para la inhibicin de ACE (Pan et al., 2012). Algunos ejemplos se encuentran
tambin con DPP-IV y la xantina oxidasa (XO) pptidos inhibidores
(Nongonierma, Mooney, Shields, y Fitzgerald, 2013; Nongonierma, Mooney,
Escudos, y FitzGerald, 2014). Para llevar a cabo acoplamiento molecular
significativa, el conocimiento previo del sitio de interaccin de los pptidos
(discriminacin entre inhibidores competitivos y no competitivos de la DPPIV) es muy relevante (Nongonierma et al., 2014). Esto se debe a
acoplamiento molecular La encuadernacin de BAPs a sitios especficos, por
ejemplo, el sitio activo de las enzimas metablicas clave.
QSAR se basa en un modelo matemtico que une las caractersticas
estructurales de las molculas a sus propiedades biolgicas (para
revisiones, ver: Jenssen, 2011; Pripp, Isaksson, Stepaniak, Srhaug, y Ardo
de 2005 ). descriptores escalares para los aminocidos se han desarrollado
para el anlisis QSAR (Hellberg, Sjoestroem, Skagerberg, y Wold, 1987; Tian
et al, 2015).. pptidos diana se describen con un enfoque multivariante
mediante sus descriptores de aminocidos. Un modelo matemtico que une
las caractersticas estructurales (descriptores pptido E variables
independientes) a la actividad biolgica (variable dependiente), se va
creando basa en mtodos computacionales (por ejemplo, regresin parcial
por mnimos cuadrados (PLSR), la regresin lineal mltiple (MLR), anlisis de
componentes principales ( PCA) o RNA) (Jahangiri, Soltani, y Barzegar,
2014). Cuando los datos de actividad biolgica se ha tomado de diferentes
fuentes, se debe tener cuidado para seleccionar los datos que se obtuvo en
condiciones experimentales que son tan similares como sea posible (Pripp et
al., 2005). Los estudios QSAR se han llevado a cabo con pptidos derivados
de protenas de la leche El QSAR enfoques utilizados para el anlisis de
pptidos inhibidores de la ECA se han revisado recientemente (Jahangiri et
al., 2014). Di- y tripptidos con grandes cidos voluminosos y hidrfoba
amino (es decir, Trp, Tyr y Phe) en el C- y N-terminal o un Pro en el extremo
C-terminal y los aminocidos alifticos lado en el Nterminus ramificado se
prev que sea potente pptidos inhibidores de la ECA. Para los pptidos> 3
aminocidos, se demostr que los inhibidores de la ECA potentes de poseer
generalmente cidos voluminosos e hidrofbicas aminocidos C-terminal y
el aminocido N-terminal tuvo una influencia menor en la inhibicin de ACE
(Pripp et al, 2004;.. Wu et al, 2006b). QSAR se acerca permitido la
identificacin de pptidos lcteos derivados de protenas con similar (Ile-ValPro (as1-CN (f 86-88)) y Val-Ile-Pro (AS2-CN (f 215-217))) (Jing et al., 2014) o
inferior (Tyr-Phe (a-la (f 122-123)) y Leu-Arg-Phe (as1-CN (f 36-38))) (Wu et
al., 2006a) medio ACE Los valores de concentracin inhibitoria mxima
(IC50) en comparacin con IlePro-Pro.
QSAR tambin se ha utilizado para el estudio de AMP (para una revisin, ver
Jenssen, 2011). Una serie de anlisis QSAR con los amplificadores de la
leche se han llevado a cabo (Nakai, Chan, Li-Chan, Dou, y Ogawa, 2003;

Strm, Stensen, Svendsen, y Rekdal, 2001). Estos han tratado de identificar

nuevos anlogos de la lactoferricina (LFcin), un AMP bien conocido derivado
de lactoferrina (LF). anlogos de murino LFcin han sido estudiados por QSAR
para su actividad antimicrobiana, que ha permitido la prediccin de la
actividad antimicrobiana de un derivado LFcin bovina, LF (f 17-31) (Strm et
al., 2001). Los parmetros que se correlacionaban con la actividad
antimicrobiana se mostraron como la a-hlice formando-propensin de
posiciones 4E9 de LFcin (Nakai et al., 2003), la carga catinica y la afinidad
de micelas de los pptidos (Strm et al., 2001) .
Otros estudios QSAR han encontrado aplicacin en el descubrimiento de
pptidos antioxidantes. Las caractersticas tanto de la C- (hidrofilicidad,
enlace de hidrgeno y propiedades electrnicas) y N-terminal
(hidrofobicidad y propiedades electrnicas) aminocidos se correlacionaron
con la actividad antioxidante de tri- y tetrapptidos (Li, Li, He, y Qian,
2011) . Las propiedades electrnicas de los pptidos se muestran a jugar el
papel ms importante en la actividad de eliminacin de radicales, junto con
la presencia de un aminocido hidrfobo voluminoso en el extremo Cterminal de pptidos (Li & Li, 2013). Una evaluacin sistemtica de la
capacidad antioxidante (frrico reducir el poder antioxidante e FRAP) de
todos los posibles tripptidos (172 secuencias nicas) desde b-Lg se llev a
cabo (Tian, Yang, Lv, Yang, y Zhou, 2009). Cys y Trpcontaining tripptidos se
asociaron con una alta actividad antioxidante. El efecto de los dos residuos
de aminocidos ha sido explicado por su capacidad de interactuar con los
radicales libres a travs de hidrgeno (-SH y el grupo indol), de electrones
(S) o de protones (anillo aromtico de Trp) donacin. Se encontr que 3
tripptidos b-LG (Leu-Thr-Cys, CysGln-Cys y Gly-Thr-Trp) tenan una actividad
antioxidante ms alta que la conocida glutatin antioxidante fisiolgico (GluCysGly).
Hasta la fecha varios estudios in silico con leche PAB han sido reportados en
la literatura. Sin embargo, slo unos pocos de estos estudios se han
validado con anlisis adicionales. Varios ejemplos de estudios que combinan
in silico, siendo utilizados como una herramienta predictiva para la
liberacin enzimtica de BAPs leche potentes, e in vitro existen estudios de
antioxidante (Nongonierma y FitzGerald, 2012b), ACE (Norris et al, 2012;.
Norris, Poyarkov , O'Keeffe, y FitzGerald, 2014; Wang, Zhang, Wang, Feng, y
Shan, 2011) y de la DPP-IV (Nongonierma y FitzGerald, 2013; Tulipano,
Faggi, Nardone, Cocchi, y Caroli, 2015) pptidos inhibidores. En general,
haba una buena concordancia entre la prediccin in silico y las propiedades
bioactivas in vitro de los hidrolizados resultantes. En el estudio de Tulipano
et al. (2015), b-Lg se predijo para producir un mayor nmero de DPP-IV
pptidos inhibidores siguiente en la digestin GI silico de a-La. Esto se
verific in vitro con DPP-IV valores de IC50 de 0,74 y 1,7 mg mL1 de b-LG y
a-La, respectivamente. Muchos estudios han identificado pptidos dentro de
las fracciones de hidrolizado y posteriormente los sintetizada para evaluar
su actividad in vivo (Kaiser et al, 2016;. Nakamura, Yamamoto, Sakai, y
Takano, 1995;. Snchez-Rivera et al .; Sawada et al, 2015 ;? Uenishi, Kabuki,
Seto, Serizawa, y Nakajima, 2012;. Yamada et al, 2015). Estudios limitados
estn disponibles en las predicciones in silico de BAPs leche, que adems
han sido validados en vivo. Dicho estudio se ha informado de pptidos

derivados de CN, Ile-Val-Pro (as1-CN (f 71- 73) y as1-CN (f 111-113)) y ValIle-Pro (AS2-CN (f 200-202)), que se han predicho por QSAR para inhibir ACE.
Cuando se evalu en ratas, estos pptidos indujo una reduccin de la PAS
(Jing et al., 2014).
la presin arterial sistlica (PAS)
5.2. El cribado in vitro
Diferentes bioensayos in vitro, que son de naturaleza similar a los utilizados
en el cribado farmacutica, se puede encontrar una amplia gama de
objetivos BAP leche tal como se describen en la Tabla 2. La ensayos in vitro
descritos para evaluar BAPs protena de la leche se pueden clasificar en
qumica, enzimticos o de cultivo de clulas pruebas. Por ejemplo, la ms
corriente en vitro y en mtodos in vivo utilizados para evaluar el potencial
antioxidante de los pptidos en la dieta han sido resumidos en una revisin
reciente por de Castro y Sato (2015).
La correlacin entre los bioensayos in vitro e in vivo obtenidos con la dieta
en BAPs menudo ha sido cuestionada (Foltz et al., 2010La razn de la falta
de acuerdo entre los bioensayos in vitro y en los resultados in vivo puede
ser debido a la baja biodisponibilidad y la estabilidad de BAPs en animales y
humanos, propuesto pruebas de BAPs en concentraciones y tiempos que
son fisiolgicamente relevantes.. Esto es particularmente pertinente ya que
se demostr, por ejemplo, que la concentracin de enzima usada en
bioensayos in vitro podra afectar el nivel de bioactividad medida (Murray,
Walsh, y FitzGerald, 2004). Adems, el origen del material biolgico tambin
es importante. Diferentes grados de inhibicin de la DPP-IV in vitro se
obtuvieron con pptidos incubadas con porcino o recombinante humano
DPP-IV, posiblemente debido a las regiones en el sitio cataltico de DPP-IV
que no estn conservados entre las especies (Lacroix y Li-Chan, 2015)
5.3. Ex vivo y en el cribado situ
Los fluidos biolgicos (por ejemplo, sangre, suero o plasma) se pueden
utilizar para estudiar BAPs protena de leche. Por ejemplo, existen
similitudes estructurales entre el fibringeno y caseinomacropptido bovina
(CMP, k-CN (f 106-169)). CMP de vaca y fragmentos de pptidos asociados
(Lys-Asp-AsnGln-Lys y Met-Ala-Ile-Pro-Pro-Lys-Lys-Asn-Gln-Asp-Lys) han sido
evaluadas por su actividad antitrombtica. CMP (5 mg kg1), fragmentos de
pptidos de CMP (es decir, Lys-Asn-Gln-AspLys (5 mg kg1), Met-Ala-Ile-ProPro-Lys-Lys-Asn-Glu-Asp-Lys (10 mg kg1)) se administraron por inyeccin
intravenosa (IV) a cobayas (Bal DIT Sollier et al., 1996). Sin efecto
antitrombtico puede ser visto cuando la adenosina difosfato (ADP) inducida
por la agregacin de plaquetas se evalu ex-vivo utilizando un enfoque
turbidimtrico. Esto estaba en contraste con el hecho de que estos pptidos
muestran actividad antitrombtica in vivo, lo que sugiere que pueden haber
estado implicados diferentes mecanismos de accin.

Otros mtodos ex-vivo se han basado en la evaluacin de BAPs leche en las

clulas cosechadas a partir de tejidos animales. La capacidad de secretar
insulina fue restaurada en las clulas del pncreas de ratones ob / ob

tratados (100 mg kg1 durante 8 semanas) con un hidrolizado de WP

insulinotrpico (WPH) en comparacin con los ratones de control (29 2
frente a 12 2 fmol insulina Islet1 L1, respectivamente) (Gaudel et al.,
2013). Las propiedades anti-inflamatorias (baja regulacin de citoquinas
proinflamatorias tras una entrada de lipopolisacrido) de una ultrafiltracin
(UF) fraccin (5 kDa retenido y 1 kDa retenido) de un hidrolizado de
caseinato de sodio se demostraron ex vivo usando tejido colnico porcino
(Mukhopadhya et al ., 2015). A. B.
El uso de protocolos ex vivo ha sido ampliamente descrito para la
evaluacin de las propiedades anticaries y mineralizacin relacionados CPP
(para una revisin, vase: Lenton, Nylander, Teixeira, y Holt, 2015;
Nongonierma y FitzGerald, 2012a). El aumento de la absorcin de Ca se ha
informado en la presencia de CPP en los segmentos ligados leon de rata
(Lee, Noguchi, y Naito, 1983; Sato, Noguchi, y Naito, 1986), sacos intestinal
dado la vuelta y bucles de duodeno de los pollitos (Mykknen y Wasserman,
1980 ) y bucles duodenales de rata (Per? es et al., 1999). absorcin de Ca
en presencia de CPP en ilea rata evertido se estudi y se demostr que
depender de la Ca: Pi (Erba, Ciappellano, y Testolin, 2001), as como CPP:
relacin de Ca (Erba, Ciappellano, y Testolin, 2002 ). La inestabilidad de bCN (f 1-25) -Fe se demostr que involucrar la accin de peptidasas /
proteinasas y tambin las actividades de la fosfatasa en la rata bucles
duodenales (Bouhallab et al., 1999).
Otros protocolos que se clasifican como in situ tambin se han utilizado para
estudiar las propiedades remineralizantes de CPP con aparatos dentales
colocados directamente en la cavidad oral de los seres humanos
(Ferrazzano, Amato, Cantile, Sangianantoni, y INGENITO, 2011).
La actividad hipotensora de la leche pptidos derivados de protenas se ha
evaluado mediante la determinacin de su efecto sobre la capacidad de
contraccin de las arterias de los animales pequeos despus de la
estimulacin con angiotensina-I ex vivo. pptidos derivados de LF
(Fernndez-Musoles et al, 2014;?. Ruiz-Gimnez et al., 2010?), un
hidrolizado de LF y un 3 kDa UF permeado de un hidrolizado de LF (helecho
(RuizGimenez et al., 2007?) ? Andez-Musoles et al., 2014), se mostr a
reducir la angiotensina-I dependiente de la contraccin de la arteria cartida
ex-vivo en conejos. Del mismo modo, Met-Lys-Pro (AS2-CN (f 190-192))
redujo la vasoconstriccin inducida por angiotensina-I en aorta torcica de
ratas espontneamente hipertensas (SHR) (Yamada et al., 2015).
5.4. evaluaciones de biodisponibilidad y seguridad
La toxicidad y biodisponibilidad se evala generalmente despus de la
deteccin de los compuestos diana (Fig. 1). La toxicidad puede ser evaluada
en cultivos de clulas de invertebrados, o animales pequeos mediante
ensayos de viabilidad celular y la determinacin de la dosis letal 50 (DL50)
(para una revisin, ver: Doke y Dhawale, 2015). Diferentes ensayos de
citotoxicidad de compuestos naturales que permiten la evaluacin de (a) el
metabolismo (por ejemplo, 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazolio
(MTT) y 3- (4, 5-dimethylthiazol- 2-il) -5 (3- carboxymethonyphenyl) -2- (4sulfofenil) 2H-tetrazolio, sal interna (MTS)), (b) integridad de la membrana

(por ejemplo, lactato deshidrogenasa (LDH), la tincin fluorescente), ( c) el

dao oxidativo (por ejemplo, sondas fluorescentes) y (d) el cido
desoxirribonucleico (ADN) (por ejemplo, el ensayo del cometa) se han
revisado recientemente (Bunel, Ouedraogo, Nguyen, Stevigny,? y Duez,
2014).
Dado que la leche PAB derivados de protenas son componentes naturales
que son liberados durante la digestin gastrointestinal, que son
generalmente considerados como seguros para el consumo humano. Un
nmero de estudios han evaluado la citotoxicidad de PAB especficas de la
leche. Citotoxicidad in vitro (rata fi-fibroblastos) de una pasta comercial CPPACP (Tooth Mousse ) se llev a cabo (Bussadori et al., 2010). A baja
citotoxicidad fue visto despus de 4 das HE7 la exposicin, lo que resulta en
<30% de disminucin en la viabilidad celular (L929 de fibroblastos), que fue
ligado con los aditivos presentes en Tooth Mousse en lugar de CPP-ACP
(Cehreli, Gurpinar, Onur, y Dagli , 2008). Los LTP, Ile-Pro-Pro y Val-Pro-Pro, se
evaluaron como seguro en cultivos celulares y en estudios con animales
pequeos (para una revisin, vase: Phelan, Aherne, FitzGerald, y O'Brien,
2009). Los estudios en humanos han demostrado que la AMP, LF (f 1-11), no
se asoci con efectos citotxicos (Brouwer, Rahman, y Welling, 2011; van
der Velden, van Iersel, BLIJLEVENS, y Donnelly, 2009).
evaluacin de la biodisponibilidad es crucial para comprender si el pptido
tiene el potencial de (a) sobrevivir en el tracto gastrointestinal (GIT), (b)
permear a travs del epitelio intestinal (c) permanecer estables en la
circulacin y (d) alcanzar el tejido diana (s) / rgano (s). Estudios anteriores
han estimado que cantidades significativas de BAPs estaban presentes en el
GIT de los seres humanos. Los diferentes pptidos de protena de leche
derivados que han sido identificados en los lodos de humanos despus de la
leche o productos lcteos ingesta de alimentos (Boutrou et al, 2013;..
Chabance et al, 1998;. Meisel et al, 2003; Svedberg, de Haas, Leimenstoll,
Paul, y Teschemacher, 1985) se resumen en la Tabla 4. Curiosamente, estos
pptidos, que van desde 4 (Tyr-Pro-PROPHE, b-CN (f 60-63), bovino bcasomorfina-4) a 64 (CMP ) aminocidos de longitud, parecen originarse
principalmente de b-CN. Por ejemplo, se estima que por 250 g de leche
ingerida, 120 mg CPP eran potencialmente presentes en el leon (Meisel et
al., 2003). Una concentracin de 600 mM CMP se encontr en los contenidos
del yeyuno despus de la ingestin de suero de leche, vs. 45 y 5 mM
siguiente CN y la ingesta de yogur, respectivamente (Ledoux et al., 1999).
Mientras que las concentraciones de 17 mM bcasomorphin-7 (b-CN (f 6066)) y 900 mM de b-CN (f 108-113), un opioide y el pptido inhibidor de la
ECA, respectivamente, fueron encontrados en el yeyuno (Boutrou y col .,
2013). Sin embargo, la capacidad de los pptidos en la dieta para alcanzar
la circulacin de los seres humanos en cantidades suficientes para la
bioactividad pantalla sigue siendo un tema de mucho debate (para revisin:
ver Miner-Williams, Stevens, y Moughan, 2014).
Con el fin de obtener datos ms relevantes in vitro, es una prctica comn
utilizar los procedimientos de simulacin de digestin gastrointestinal (SGID)
para evaluar la estabilidad de PAB para favorecer la digestin por las
enzimas gastrointestinales (Raikos y Dassios, 2014; Stuknyte, Cattaneo,
Masotti, _ & De Noni, 2015;. Walsh et al, 2004). regiones especficas de

protenas de la leche han demostrado ser relativamente resistente a las

actividades hidrolticas de enzimas GI. Estos incluyen el pptido alergnico
b-Lg (f 125-135), CPP fosforilada (as1-CN (f 104-119) y b-CN (f 26-41)) y las
regiones hidrofbicas de la CN (CN-b (f 76 -93), AS2-CN (f 36-75) y KCN (f
106-169)) (Picariello et al., 2010). La resistencia particular de CPP a SGID se
ha relacionado con su alto nivel de fosforilacin (Vegarud, Langsrud, y
Svenning, 2000). La estabilidad de bcasomorphins (3, 4, 5, 6 y 7) durante
SGID de muestras de queso se estudi (De Noni, Stuknyte, _ & Cattaneo,
2015). Slo b-casomorfina 4 y 7 podra ser detectado despus de la SGID de
diferentes muestras de queso. Sobre la base de este estudio SGID, se
estim que tras el consumo de 30 g de queso entre 0,02 y 0,16 mmol L1 de
bcasomorphin 7 puede ser liberado en los efluentes del yeyuno en los seres
humanos, lo que se consider demasiado baja para ser compatible con la
modificacin de la actividad opioide in vivo. Foltz, van Buren, Klaffke, y
Duchateau (2009) disearon un modelo para predecir la estabilidad
intestinal de dipptidos. Este modelo fue validado mediante simulacin in
vitro resultados de digestin de 228 dipptidos sintticos. Se inform de que
~ 50% de los dipptidos evaluados fueron relativamente estables a la
hidrlisis intestinal in vitro. Recientemente, la estabilidad de los pptidos
inhibidores de la ECA (Ile-Pro-Pro y Leu-Lys-Pro (b-Lg (f 46-48)) y albmina
de suero bovino (BSA) (f 121-123)) para rata y GI homogeneizados de
hgado se ha demostrado (Gleeson, Heade, Ryan, y Brayden, 2015).
Otros protocolos para evaluar la biodisponibilidad de BAPs leche se basan en
la medicin de su permeabilidad a travs de Caco-2 monocapas de clulas,
un modelo in vitro del epitelio intestinal. Varios estudios han informado de
que BAPs de leche fueron degradados por las peptidasas del borde en
cepillo durante la permeabilidad intestinal (Miner-Williams et al, 2014;..
Picariello et al, 2013; Shimizu, Tsunogai, y Arai, 1997). Sin embargo, la
penetracin de los pptidos intactos se podra medir en el compartimiento
apical como fue el caso de b-CN (f 193-209) (Regazzo et al., 2010) y b-Lg (f
127-135) (Picariello et al. , 2013).
La estabilidad de la leche PAB a peptidasas del suero, lo cual es
particularmente relevante para los pptidos con un objetivo sistmico,
tambin ha sido investigado. El pptido inhibidor ACE b-Lg (f 142-148) se
degrad despus de la incubacin con suero de sangre humana (Walsh et
al., 2004). Otro estudio mostr que la leche inhibitoria dipptidos derivados
de la protena de la ECA (Val-Phe y Val-Tyr) no fueron degradados, mientras
que se observ un 10% de la degradacin de Ala-Trp tras 30 minutos de
incubacin con suero de sangre humana (Pentzien 32 AB Nongonierma, RJ
FitzGerald / Tendencias en Ciencia y tecnologa 50 (2016) 26e43 y Meisel,
2008) Alimentacin.
En resumen, como BAPs leche se encuentran naturalmente en el GIT de los
seres humanos, no hay preocupacin importante en trminos de su
seguridad. La medicin de la biodisponibilidad del pptido leche
principalmente se ha evaluado utilizando modelos in vitro. Hasta la fecha,
no est claro cmo este cuerpo de informacin puede estar relacionada al
pptido biodisponibilidad en seres humanos. La principal preocupacin de
utilizar en modelos in vitro para evaluar la biodisponibilidad BAP es que
pueden ser demasiado simplista y no suficientemente integradora para

imitar el cuerpo humano. Idealmente, la evaluacin de la biodisponibilidad

del pptido debe llevarse a cabo in vivo para generar datos ms
significativos.
5.5. En el cribado in vivo
Evaluacin de las sustancias activas en animales pequeos y en los seres
humanos es esencial para validar su actividad biolgica (Fig. 1). Diferentes
modelos animales que son relevantes para estudiar los componentes del SM
se han descrito en la literatura cientfica (para una revisin, vase:. Aydin et
al, 2014; Nelson y Reusch, 2014). Muchos de estos modelos animales, que
estn modificados genticamente o que son mutantes, estn disponibles
comercialmente. Adems, los modelos animales se pueden desarrollar en la
empresa, por ejemplo, sometiendo a los animales sanos a un exceso de
alimentos (modelos de obesidad), alrgenos (modelos de alergenicidad de la
protena de la leche de vaca) o productos qumicos nocivos (por ejemplo,
cido trinotrobenzene sulfnico (TNBS) - modelo de colitis del sndrome del
intestino irritable). Otros modelos animales que comprenden modelos
negativos o hurfanos tambin se pueden utilizar (para una revisin, vase:
Hau, 2008).

Leche PAB derivados de protenas se ha demostrado en estudios con

animales para mostrar efectos significativos en una amplia gama de
resultados como la reduccin de la PA, la modulacin inmune, la unin de
minerales, antidiabtico, efectos anticancergenos y hipocolesterolmicos
(para una revisin, vase:? Hern Andez-Ledesma et al, 2014;. Nongonierma
y FitzGerald, 2012a; Raikos y Dassios, 2014). La biodisponibilidad de los
pptidos de la leche se ha demostrado tanto en estudios en animales y
humanos. Ile-Pro-Pro, se ha identificado en la heptica, renal, tejidos
suprarrenales y articos de rata cuando se administra en dosis de 7 mg kg1
(Jauhiainen et al., 2007). concentraciones relativamente bajas de LTP (~
1e10 nmol L1) se han reportado en el suero de los lechones (van der Pijl,
Kies, ten Have, DUCHATEAU, y Deutz, 2008) y humanos (Foltz et al., 2007).
Esto se relacion con una biodisponibilidad relativamente baja de 0,1% ((bCN Ile-Pro-Pro, Val-Pro-Pro y Leu-Pro-Pro (f 151-153) y BSA (f 307-309)))
encontrado en lechones adems de una relativamente corta vida media de
absorcin (5 min) y eliminacin (10 min) (van der Pijl et al., 2008). Un
estudio similar se llev a cabo con el pptido inhibidor ACE Su-Leu-Pro-LeuPro (b-CN (f 134-138)), tambin revela una biodisponibilidad oral baja de
5,18% en la rata (Snchez-Rivera et al., 2014?). Recientemente, Yamada et
al. (2015) tambin han demostrado que la Met-Lys-Pro (AS2-CN (f 190-192))
tena una baja biodisponibilidad en la rata, con una mayor concentracin de
0,90 mM detectados en el plasma. En general, la baja biodisponibilidad
general de la leche PAB ha planteado cuestiones sobre su papel en el efecto
hipotensor observado in vivo. Por lo tanto, se ha sugerido que las
propiedades bioactivas de la LTP pueden implicar mecanismos de accin
distinto de la inhibicin de la ECA, por ejemplo, las interacciones con los
receptores intestinales. Adems, se ha informado de acumulacin de IlePropro y Val-Pro-Pro en varios tejidos (hgado, rin, pulmn y aorta) de
SHR. se inform de concentraciones de pptido (> 10 mm), que son

menores que los valores de IC50 ACE, en el tejido artico (Kawaguchi,

Nakamura, Kamiie, Takahashi, y Yamamoto, 2012), que puede estar
vinculado con sus propiedades bioactivas. Un estudio reciente llevado a
cabo con cerdos ha demostrado el aumento de la biodisponibilidad de IlePro-Pro (4,7), Val-Pro-Pro (121) y LeuPro-Pro (2,5) cuando se co-ingerida con
hidrolizados de protenas de leche o comidas. El aumento de la
biodisponibilidad en presencia de otros componentes de los alimentos
puede ser debido a una menor velocidad de vaciado gstrico, as como la
eliminacin prolongada y el metabolismo de rganos diferencial (Ten Have,
van der Pijl, Kies, y Deutz, 2015).
El cribado de compuestos en los seres humanos en general, implican
ensayos experimentales que permiten la recogida de datos en grupos
relativamente pequeos de sujetos humanos (Townsend, McFadden, Ford, y
Cadee, 2004?). Mientras que los ensayos piloto pueden dar algunas
indicaciones para la puesta a punto de los estudios a ms largo plazo de
intervencin humana (por ejemplo, dosis, duracin, etc.), por lo general son
estadsticamente insuficiente, a menudo representacin interpretacin de
los datos desafiante. Los diferentes enfoques de seleccin descritos son
complementarias y que pueden ayudar a predecir mejor las propiedades
biolgicas de la leche PAB derivados de protenas en los seres humanos.
6. Estudios de intervencin en humanos
Estudios en humanos se llevan a cabo despus de la deteccin y la
identificacin de los componentes potencialmente activos (Fig. 1). Sin
embargo, hay que sealar que una correlacin relativamente pobre entre los
resultados en animales y estudios humanos ha sido reportado. Se dijo que
slo ~ 1/3 de los resultados de investigacin animal muy citados con
compuestos farmacuticos estaban de acuerdo con ensayos aleatorios
humanos (Hackam y Redelmeier, 2006). La falta de concordancia entre los
estudios en animales y humanos se ha atribuido a las diferencias biolgicas
entre ambos grupos (es decir, las diferencias interindividuales, el sexo y la
etiologa de la enfermedad) y las diferencias en la puesta en marcha
experimental (diseo del estudio, dosis, tiempo, duracin, etc. ). Por ello, ha
sido recomendado para disear estudios en humanos y animales en
condiciones que sean lo ms similares posible para permitir la comparacin
directa entre ambos (McGonigle y Ruggeri, 2014). Por otra parte, las
recomendaciones para la realizacin de una revisin sistemtica y metaanlisis antes de embarcarse en un estudio de intervencin humana se han
hecho con el fin de disear el estudio de una manera ms informada.
Las evaluaciones de la leche PAB en los seres humanos se han llevado a
cabo principalmente por su hipotensor, unin mineral, antidiabtico,
saciante y las propiedades cognitivas. Adems, varios meta-anlisis que
evalan el potencial de BAPs leche para sus propiedades anticaries
hipotensor y estn disponibles en la literatura cientfica. Numerosos
metaanlisis han sugerido un efecto positivo de la ingestin BAP derivado
de protena de la leche en ciertos resultados de salud en los seres humanos,
es decir, la reduccin de la PA y los dientes remineralizacin. Sin embargo,
tambin se han reportado resultados contradictorios, sin ninguna

modificacin en el estado de salud de los seres humanos tras el consumo de

leche PAB (para una revisin, vase: Nongonierma y FitzGerald, 2015c).
Hasta la fecha, no parece haber sido demostrado de manera inequvoca
evidencia cientfica definitiva para el papel de BAPs especficas de la leche
en la salud humana. Se han propuesto varias razones de los resultados
contradictorios observados en los ensayos realizados con humanos BAPs
leche. Estos incluyen (a) la falta de caracterizacin de los componentes
bioactivos dentro de hidrolizados de protenas de leche complejos (b) la falta
de conocimientos sobre los mecanismos de accin implicados (c) baja
biodisponibilidad in vivo / estabilidad y potencia de los PAB leche (d) de gran
tamao las diferencias interindividuales entre los sujetos humanos (por
ejemplo, diferencias genticas, estado de salud, raciales, etc.) (e)
cuestiones metodolgicas (por ejemplo, ensayos de poca potencia humanos
de intervencin, los controles no relevantes, cegamiento inadecuado, el
momento de la intervencin, efectos de matriz de alimentos, etc. .)
(Nongonierma y FitzGerald, 2015c). Adems, algunos intentos para
cuantificar con precisin las cantidades de pptidos detectados en los seres
humanos se han llevado a cabo (Boutrou et al, 2013;.. Meisel et al, 2003).
Por lo tanto, es difcil de entender si estos pptidos tienen una relevancia
biolgica para la salud humana o no. La dificultad actual con estudios
humanos especficos evaluar BAPs surge del hecho de que estn
generalmente dirigidos a dianas sistmicas (por ejemplo, ACE, renina,
huesos, cerebro, etc.). Sin embargo, varios objetivos estn presentes en la
cavidad oral (por ejemplo, dientes) o en el GIT (por ejemplo, ACE, DPP-IV, los
microorganismos, las clulas inmunes seleccionadas, etc.) y puede tener
potencial para ser modulada positivamente por BAPs leche.
Una cuestin importante, que tambin se encuentra con estudios de
intervencin humana llevados a cabo con las drogas farmacuticas, se
relaciona con los sujetos que no responden. El posible papel de las
variaciones genticas y raciales se ha sugerido en los meta-anlisis
realizados sobre los LTP lactotriptidos hipotensores (Cicero, Gerocarni,
Laghi, y Borghi, 2011). Se ha tratado de entender los factores que diferan
entre respondedor vs. no respondedor (presin arterial sistlica (PAS)
reduccin <5 mm Hg a lo largo de la intervencin 8 semanas) sujetos
humanos a componentes de la leche hipotensores. Sin embargo, no hay
diferencias significativas en los parmetros evaluados (es decir, la edad, el
ndice de, sexo, frecuencia cardaca de masas y los parmetros del sistema
renina-angiotensina-aldosterona) podran ser identificados (Usinger, Jensen,
Flambard, Linneberg, y Ibsen, 2010) . Estos resultados plantean desafos
para el anlisis de los datos.
Se han hecho recomendaciones para la configuracin de los estudios de
intervencin en humanos dirigidos efectos probiticos. Estos tambin estn
en lnea con las directrices para llevar a cabo estudios ms especficos de
intervencin / eficientes humanos con leche PAB. Consisten en el
establecimiento de objetivos claros en trminos de los resultados biolgicos
a medir (objetivos y el alcance de la respuesta) y establecer una mejor
seleccin de la poblacin basada en marcadores genticos o caractersticas
biolgicas, tales como marcadores de enfermedades (Reid et al., 2010).
metodologas basadas en la expresin de genes pueden ser utilizados para

identificar con precisin los motivos o temas que tienen una predisposicin
a la hipertensin y otras comorbilidades asociadas con el sndrome
metablico humanos no respondedores (Siffert, 2005; Thomson et al,
2015).. Adems, se ha propuesto la microbiota intestinal de desempear un
papel en la salud humana y en la capacidad de respuesta a las
intervenciones nutricionales (Dore y Blottire, 2015;? West et al, 2015).. Por
primera vez, biomarcadores microbiana intestinal han sido identificadas
para explicar las diferencias en las respuestas de la dieta de los sujetos
humanos obesos (Korpela et al., 2014). En este estudio, se sugiri que los
cambios en la microbiota (ms particularmente de especies de Clostridium)
se observaron porque cepas especficas eran sensibles a las modificaciones
en el medio ambiente intestinal. Por ejemplo, la abundancia de sphenoides
Clostridium aument con una reduccin en el nivel de colesterol en la
sangre.
7. Otros aspectos en el desarrollo BAP leche
Varios otros aspectos deben ser tenidos en cuenta cuando se estudia la
leche PAB derivados de protenas como se evala la novedad de la
secuencia del pptido. Varias bases de datos de BAPs dietticos estn
disponibles al pblico (Tabla 3). Estas bases de datos no son exhaustivas y
fuentes adicionales de informacin a veces pueden estar disponibles en la
literatura de patentes. Hasta donde sabemos, no hay tal base de datos que
captura la informacin disponible en la literatura de patentes en el formato
de una base de datos de libre acceso. Si bien no se revisa arbitradas esta
informacin, todava podra ser muy relevante para informar a los
investigadores en la seleccin de las secuencias de BAP para estudios
posteriores. Esto tambin es muy importante para las empresas de
alimentos poniendo esfuerzos significativos en el desarrollo de los
hidrolizados de protenas de alimentos patentados.
El rendimiento de la produccin para BAPs es tambin un parmetro
importante. El diseo especfico de los experimentos se ha aplicado a liberar
de manera ptima BAPs leche durante la hidrlisis enzimtica. Varios
ejemplos se encuentran para ACE inhibitoria (Naik, Mann, Bajaj, Sangwan, y
Sharma, 2013; van der Ven, Gruppen, de Bont, y Voragen, 2002) y pptidos
antioxidantes (Contreras, Hernndez-Ledesma, Amigo,? ?-Martn lvarez, y
Recio, 2011;. Naik et al, 2013). La optimizacin de los parmetros de
hidrlisis implica el diseo de un modelo multifactorial en el que los
parmetros independientes estn procesando parmetros (es decir, el
tratamiento previo del sustrato, la temperatura, el pH, la enzima al sustrato
proporcin, tiempo, etc.) y las variables dependientes son los resultados
bioactivos y propiedades fisicoqumicas de los hidrolizados. Este enfoque
proporciona una metodologa sistemtica para producir hidrolizados de
protenas de leche con propiedades bioactivas mejoradas utilizando un
nmero limitado de experimentos. Tambin permite una mejor comprensin
de los parmetros de procesamiento y sus efectos interactivos que regulan
la liberacin de los BAPs
defectos sensoriales suelen presentarse con hidrolizados de protenas de la
leche, la amargura fue notablemente un problema importante. Se ha
propuesto que la amargura pptido est ligado con su hidrofobicidad, as

como su tamao y las caractersticas estructurales tales como la presencia

de residuos de Pro dentro de la secuencia de pptidos (para una revisin,
vase: FitzGerald y O'Cuinn, 2006). Se han identificado pptidos especficos
relacionados con el aumento de la amargura de hidrolizados de protenas de
leche. Las secuencias de pptidos amargos pueden encontrarse en bases de
datos tales como BAP BIOPEP y amargo DB (Wiener, Shudler, Levit, y Niv,
2012). Tres pptidos (Gly-Pro-Phe-Pro-Val-ILEU (desconocidos), Phe-Phe-ValAla-Pro-Phe-Pro-Glu-Val-Gly-Phe-Lys (as1-CN (f 23- 36 )), Phe-Ala-Leu-Pro-GlnTyr-Leu-Lys (AS2-CN (f 174-181))) a partir de un hidrolizado trptico CN
amargo, se mostr a ser responsable de la amargura (Matoba, Hayashi, y
Hata, 1970). Del mismo modo, un fragmento liberado de b-Lg por la
actividad endopeptidasa glutamil, Val-GluGlu-Leu-Lys-Pro-Thr-Pro-Glu-GlyAsp-Leu-Glu-Ile-Leu (b-Lg (f 43- 57 )), ha demostrado ser implicados en la
amargura de un hidrolizado de WP (Spellman, O'Cuinn, y FitzGerald, 2009).
Cuatro pptidos amargos fueron identificados en un hidrolizado de
PROTEINAS DE SUERO WP, Tyr-Gly-Leu-Phe (a-La (f 50- 53)), Ile-Pro-Ala-ValPhe (b-Lg (f 79-82)), Leu-Leu-Phe (b-Lg (f 103- 105), LF (f 298-300) y LF (f
659-641)) y Tyr-Pro-Phe-Pro-GlyPro-Ile-Pro-Asn (b -CN (f 60-68)). Estos 4
pptidos mostraron ser responsables del 88% de la amargura del hidrolizado
WP (Liu, Jiang, y Peterson, 2014). enfoques QSAR se han utilizado para
entender mejor las caractersticas de pptidos que son responsables de los
atributos de la amargura. Se ha demostrado que los cidos hidrfobos
voluminosos y bsicos amino en la posicin C- y N-terminal de los pptidos
(229 pptidos de residuos de cido 2e14 aminocidos de longitud
evaluados) correlacionados con la amargura (Kim & Li-Chan, 2006). Wu y
Aluko (2007) han demostrado el uso de QSAR que la amargura de di- y
tripptidos aumenta cuando un aminocido voluminoso (por ejemplo, Trp,
Arg, Tyr) era adyacente a un aminocido hidrofbico en la posicin Cterminal del pptido. Basado en el anlisis QSAR, una correlacin positiva
entre la bioactividad seleccionados (por ejemplo, la inhibicin de la ECA y la
actividad antioxidante) de di- y tripptidos y su amargura se ha propuesto
(Pripp y Ardo, 2007;. Wang et al, 2013 ). Por esta razn, se sugiri que los
pptidos ms grandes son beneficiosos para estas propiedades bioactivas
mismo tiempo que muestran un perfil ms bajo amargor (Pripp y Ardo de
2007 ).
soluciones de eliminacin del amargor comprenden la utilizacin selectiva
de preparaciones disponibles comercialmente de grado alimenticio de
enzimas, precipitacin isoelctrica, la extraccin con disolventes de calidad
alimentaria, enmascarando agentes (es decir, sabores y edulcorantes) y la
adsorcin en resinas cromatogrficas o de carbn activado (para revisiones,
vase: FitzGerald y O'Cuinn, 2006; Sun-Waterhouse & Wadhwa, 2013).
Recientemente, una interesante revisin proporcionar alguna informacin
relevante sobre los enfoques de amargor enmascaramiento utilizados en la
industria farmacutica y alimentaria ha sido compilada (Coupland y Hayes,
2014). La amargura de un trptico b-CN (un sustrato particularmente rica en
Pro) hidrolizado se ha demostrado que aumenta con el grado de hidrlisis
(DH). Eliminacin del amargor del hidrolizado b-CN en la incubacin con las
actividades de aminopeptidasa (X-prolyldipeptidyl aminopeptidasa (PepX)
seguido de leucina aminopeptidasa (LAP)) ha sido reportado (Barry, O'Cuinn,
Harrington, O'Callaghan, y Fitzgerald, 2000). Los parmetros de

procesamiento, tales como el nivel de slidos totales (ST) utilizados durante

la hidrlisis tambin pueden ayudar a reducir el amargor. Por la misma DH,
un amargor significativamente menor en los hidrolizados de WP se puede
lograr para la hidrlisis llevada a cabo en 300 vs. 50 g TS L1 (Spellman,
O'Cuinn, y FitzGerald, 2005). Una correlacin lineal podra establecerse
entre la cantidad de b-Lg (f 43-57), que estuvo presente en concentraciones
ms altas en los hidrolizados de TS ms bajos, y la amargura de los
hidrolizados. Recientemente, eliminacin del amargor de un hidrolizado de
WP ACE inhibidor xito se ha conseguido que la utilizacin de exopeptidasas
disponibles en el mercado, manteniendo su bioactividad (Cheung, Aluko, del
acantilado, y Li-Chan, 2015). Adems, las tcnicas de encapsulacin pueden
ayudar a reducir el amargor percibido y defectos sensoriales de los
hidrolizados de protenas de la leche (para una revisin, vase: Celli,
Ghanem, y Brooks, 2015; orCevi C et al, 2015?.). La encapsulacin de los
hidrolizados de protenas de leche se ha descrito el uso de secado por
aspersin (Ma et al, 2014;. Subtil et al, 2014)., Coacervacin (Mendanha et
al., 2009), lipoesferas (Morais et al., 2004, Pinho y da Silva, 2013) y
liposomas (Morais et al., 2004).
La estabilidad de los pptidos a diferentes procesos tecnolgicos, as como
de almacenamiento deben ser evaluados (Lpez-Fandi? No, Otte, ~ & Van
Camp, 2006). La estabilidad de Ile-Pro-Pro y Val-Pro-Pro dentro de
Lactobacillus helveticus en polvo fermentos lcteos se ha informado de ms
de 6 meses de almacenamiento a 20? C (Maeno, Nakamura, Mennear, y
Bernard, 2005). Se demostr por los pptidos inhibidores de la ECA, Arg-TyrLeu-Gly-Tyr (as1-CN (f 90-94)) y Ala-Tyr-PheTyr-Pro-Glu-Leu (as1-CN (f 143149 )), que homogeneizacin, pasteurizacin y la atomizacin no
modificaron sus cantidades en un hidrolizado de CN. Adems, no se
degradan durante el almacenamiento a 4 C durante 4 semanas en una
matriz de yogur (Contreras, Sevilla, et al., 2011). Las modificaciones de las
propiedades fisicoqumicas (temperatura de transicin vtrea Tg) e
hidrolizados de WP se han reportado como una funcin de la humedad
relativa (HR) y temperatura de almacenamiento. La Tg disminuy a las ms
altas de humedad relativa y GRADO DE HIDROLISIS DH valores (Zhou, Liu,
Chen, Chen, y Labuza, 2014). Una disminucin de la Tg es perjudicial para la
estabilidad de la matriz ya que a temperaturas de almacenamiento> Tg, se
producen modificaciones en la microestructura (cambios de estado a partir
de vidrio a goma). Ninguna modificacin en el perfil de pptido de los
hidrolizados podra ser visto bajo diferentes condiciones de almacenamiento
despus de 2 semanas. La desnaturalizacin trmica y pH de WP antes de la
hidrlisis enzimtica se ha demostrado que afectan a las propiedades
bioactivas (Leeb, Gotz, Letzel, Cheison, y Kulozik, 2015; O'Loughlin,
Murray, FitzGerald, Brodkorb, y Kelly, 2014).
El ltimo paso del flujo de trabajo de descubrimiento de frmacos es la
aprobacin reglamentaria de la molcula de nuevo desarrollo (Fig. 1). BAPs
leche han sido evaluadas por los organismos reguladores como la Autoridad
Europea de Seguridad Alimentaria (AESA). Hasta la fecha, las evaluaciones
de la EFSA de leche PAB han dado lugar a dictmenes cientficos negativos
con respecto a sus posibles efectos bioactivos (hipotensor, remineralizantes
y opioides) en los seres humanos. Varias de estas opiniones negativas se

han atribuido a la falta de relacin causa-efecto entre los PAB y sus

beneficios para la salud presupuestas para los seres humanos y tambin
debido a los datos de intervencin humana no concluyentes (Nongonierma y
FitzGerald, 2015c). Hasta la fecha, ninguna protena de la leche
reivindicacin hidrolizado ha sido aprobado por la AESA. En los EE.UU., La
FDA concede crditos sanitarios cualificados para los productos basados en la evidencia
cientfica. la Administracin de Alimentos y Medicamentos (FDA) concede

demandas de la salud calificados a los productos basados en la evidencia

cientfica (Aryee y Boye, 2015 Hasta la fecha, ninguna reclamacin de salud ha sido
atribuido a los hidrolizados de protena de leche por la FDA. Por el contrario, BAPs de
protenas de la leche de varios se han concedido la autorizacin sanitaria en
Japn. Estos ingredientes se han formulado en los alimentos clasificados
como alimentos para uso sanitario especfico (FOSHU). FOSHU con leche
PAB comprenden pptidos hipotensos, mineral vinculantes, antimicrobianos,
inmunomoduladores y pptidos para reducir el estrs (Shimizu y
Hettiarachchy, 2012). A pesar de numerosos estudios realizados conPABs de
leche, la aprobacin regulatoria, particularmente en L a Unin Europea,
sigue siendo un obstculo importante para las demandas de salud
desarrollados (Lalor y Wall, 2013).
8. Conclusiones y recomendaciones
El flujo de trabajo para estudiar la leche PAB derivados de protenas
utilizando enfoques convencionales de descubrimiento de frmacos se ha
esbozado en esta revisin. Las drogas y el PAB dietticos son, en esencia,
bastante diferentes en trminos de (a) la potencia, (b) la pureza y (c) la
aparicin natural in vivo. Sobre la base de estas diferencias, las principales
cuestiones que han surgido durante la preparacin de esta revisin son los
siguientes: "Es adecuado para estudiar BAPs leche usando la metodologa
de descubrimiento de frmacos?" Y "cules son los enfoques alternativos?"
Para responder a estas preguntas, creemos que los enfoques de
descubrimiento de frmacos proporcionan excelentes herramientas
metodolgicas que han demostrado ser fundamental para el avance de la
investigacin en el campo de la PAB dietticos. Sin embargo, parece muy
claro que la leche estudiar BAPs derivados de protenas que toman un
enfoque diferente para el descubrimiento de frmacos convencionales
pueden ser beneficiosos. Es evidente que la composicin compleja de los
hidrolizados de protenas de la leche es un problema importante. De hecho
se han realizado la mayora de los estudios de intervencin humana con
hidrolizados en lugar de con la secuencia de BAP aislado. Esto a menudo
hace que sea casi imposible de entender que la bioactividad est viniendo y
qu efectos antagonistas / agonistas pueden influir en el resultado biolgico
general. Esto sugiere que los nuevos enfoques deben ser desarrollados para
maximizar los resultados cientficos. En este contexto, vale la pena
considerar revertir el flujo de trabajo del enfoque de descubrimiento de
frmacos convencional, a partir de datos in vivo y luego va a las pruebas in
vitro (Fig. 1). Esto puede ayudar a mejorar el descubrimiento de BAPs leche
y para fortalecer la probabilidad de efectos en los seres humanos
posteriormente validar. La baja traduccin entre in vitro e in vivo en la
actualidad es un obstculo importante en el desarrollo de BAPs leche con
actividad biolgica en los seres humanos. Foltz et al. (2010) propusieron el

diseo de estrategias de investigacin que integre mejor conocimiento del

comportamiento de BAPs in vivo (es decir, las concentraciones plasmticas
y la cintica de absorcin). Por lo tanto, sugirieron la importancia de
estudiar pptidos que son relativamente estables a la actividad hidroltica
de proteinasas y peptidasas, as como tener la absorcin fisiolgicamente
relevante, distribucin, metabolismo, y los perfiles (ADME) de excrecin.
Esta aplicacin permitira de un "filtro" preliminar para los pptidos
candidatos a ensayar in vitro. Adems, BAPs deben ser probados a
concentraciones tan bajas como las que se encuentran dentro de los fluidos
biolgicos (pM vs. mM a mM en el enfoque convencional) y durante tiempos
ms cortos (min vs. h en el enfoque convencional).
Si bien este enfoque in vivo para in vitro parece ms relevante que el
enfoque convencional actualmente en vigor para el descubrimiento de BAPs
dietticos, existen serias limitaciones. Existe la necesidad de intensificar los
esfuerzos de investigacin en la caracterizacin de los pptidos de la leche
en los seres humanos despus de la ingestin de leche y productos lcteos.
Hasta hace poco, no exista tal base de datos que resume las secuencias de
pptidos que han sido identificados, ya sea en el digestato o en la
circulacin de los seres humanos despus de la ingestin de protenas de la
leche intactas o hidrolizadas. Sin embargo, la informacin recopilada en esta
revisin (Tabla 4) y en artculos de revisin recientes (Boutrou, Henry, y
Snchez-Rivera, 2015; Nongonierma y FitzGerald, 2015c) ahora se puede
utilizar como punto de partida para disear estudios ms informadas.
Adems, las secuencias de pptidos se pueden identificar ms fcilmente en
las muestras de humanos con el desarrollo de la espectrometra de masas
de cromatografa lquida en tndem (LC-MS / MS) estrategias tales como los
descritos para la identificacin de pptidos cortos dentro de los hidrolizados
de protenas de leche complejo (Le Maux et al ., 2015). Se piensa que estos
pptidos cortos a ser relativamente resistentes a la accin proteoltica de
proteinasas y peptidasas y tambin se han asociado con buenos perfiles de
biodisponibilidad (Foltz et al., 2009).
QSAR enfoques se han utilizado tambin para aumentar el nivel de
comprensin de las caractersticas estructurales de los pptidos que estn
vinculados con actividades biolgicas especficas y las propiedades
sensoriales. QSAR ha permitido el diseo y descubrimiento de BAPs ms
potentes. La produccin de hidrolizados de protenas de leche enriquecidos
con estos potentes BAPs puede conseguirse mediante la utilizacin de
diseo de experimentos en combinacin con herramientas bioinformticas
para predecir parmetros de hidrlisis ptimas lo cual producira liberacin
enzimtica mejorada de la PAB.
Los vehculos usados en el sector farmacutico que sean compatibles con la
proteccin y administracin de pptidos y protenas, as como estrategias
de encapsulacin pueden ayudar a mejorar la biodisponibilidad de leche PAB
(Moutinho, Matos, Teixeira, y Balcao 2012 ~). Se ha sugerido que los
portadores basados en lpidos (por ejemplo, emulsiones, liposomas,
nanoemulsiones, micelas y las partculas lipdicas slidas) se pueden utilizar
como vectores para BAPs para aumentar su biodisponibilidad en seres
humanos. Por lo que sabemos, ningn estudio parece haber evaluado el
impacto de la encapsulacin de leche PAB en los seres humanos. Esta

brecha en el conocimiento debe ser abordado con urgencia. Recientemente,

un estudio ex vivo animal ha demostrado que en presencia de cidos de
cadena media graso (MCFA, es decir, caprato de sodio y la sal de sodio del
cido 10-undecilnico), fue posible aumentar pptido inhibidor ACE (Ile-ProPro y Leu-Lys-Pro) de permeacin de hasta 3,6 y 14 veces en el yeyuno y el
colon, respectivamente (Gleeson et al., 2015). Se ha demostrado en
animales que la co-ingestin de leche de la ECA BAPs inhibitoria y alimentos
tenido un efecto positivo sobre las propiedades hipotensoras in vivo (Ten
Have et al., 2015). Un aumento en la biodisponibilidad puede requerir un
tiempo apropiado de la ingestin de BAPs leche y la ingesta de comida junto
con la utilizacin de potenciadores de la permeacin AGCM.

Otra va es sin explorar las interacciones entre medicamentos de alimentos.

En pruebas in vitro existe, lo que demuestra que sitagliptina, un
antidiabtico BAPs de drogas y la leche en una mezcla tiene efectos aditivos
o sinrgicos en la inhibicin de la DPP-IV (Nongonierma y FitzGerald, 2015d).
Recientemente, los efectos interactivos entre el frmaco hipotensor
Enaprilat (3 mg kg1) y los LTP (3,5 mg KG1), Ile-Pro-Pro y Val-Pro-Pro, se han
reportado en ratas hipertensas (Watanabe et al., 2015). Cuanto mayor sea
la reduccin de la PAS observada con el tratamiento secuencial de Enaprilat
y LTP en comparacin con solo Enaprilat slo se observ en el estudio a
largo plazo (6 semanas). Por el contrario, en el estudio agudo se midi una
mayor reduccin de la PAS con la Enaprilat solo comparado con la
combinacin Enaprilat LTP. Esto puede haber sido relacionado con efectos
competitivos a nivel intestinal para la absorcin de pptidos. Sera muy
interesante estudiar las implicaciones de estos efectos interactivos en los
seres humanos con el fin de entender si BAPs leche podran utilizarse en
combinacin con frmacos teraputicos para aliviar enfermedades en los
seres humanos.

En general, ha habido un creciente inters en los ltimos aos para el

descubrimiento de la leche PAB. Sin embargo, las inversiones de la industria
de la alimentacin en esta rea no han sido comparable a la de sector
farmacutico en el descubrimiento de frmacos. Los costes derivados de la
incorporacin de una nueva entidad molecular (NME) al mercado se han
estimado en $ 1,8 mil millones, con un proceso de descubrimiento y
desarrollo de medicamentos que puede tomar hasta 13,5 aos (Paul et al.,
2010). No hay duda de que un nivel tan significativo de la inversin y el
compromiso de tiempo en el descubrimiento de BAPs permitira una mayor
los avances en el rea. Por ltimo, la integracin de los conocimientos
multidisciplinarios puede conducir a un mejor descubrimiento y la
produccin de leche PAB. La buena prctica clnica debe ser tomado en
cuenta para el diseo de estudios de intervencin humana robustos. Estos
incluyen la mejor montaje experimental (ensayo clnico aleatorizado, doble
ciego, de manera adecuada estadsticamente estudio de potencia, etc.) y
una cuidadosa seleccin de la cohorte para el estudio en funcin de su
estado de salud / nutricin / gentica. Todas las recomendaciones anteriores

dirigidas a: (a) mejorar la tasa de descubrimiento de leche PAB derivados de

protenas y (b) llevar a cabo estudios de intervencin en humanos
cientficamente validados se resumen en la Fig. 2 como un "llevar a casa el
mensaje".

Los conflictos de intereses

Los autores declaran que no tienen ningn conflicto de intereses.

Expresiones de gratitud

El trabajo descrito en este documento fue apoyado por Enterprise Ireland

bajo nmero de concesin TC2013-0001.

ACE Enzima convertidora de angiotensina

Los inhibidores de la enzima convertidora de la angiotensina (IECA) bloquean

los efectos de una hormona producida naturalmente por los riones
denominada angiotensina II. Al bloquear el efecto de la angiotensina II, los IECA
relajan los vasos sanguneos, lo que disminuye la presin arterial. Esto significa
que su corazn no tiene que trabajar tanto para llevar la sangre al organismo.

pptidos antimicrobianos (AMP)

Los pptidos antimicrobianos son protenas de origen natural que tienen
propiedades antibiticas, generalmente estn constituidos entre 12 y 50 aminocidos.
Estos pptidoshan sido fabricados por la naturaleza para actuar como medio de defensa
en contra de enfermedades producidas por diversos microorganismos, presentan actividad
contrabacterias tanto gram positivas como gram negativas, hongos y virus. Existen una
gran cantidad de pptidos antimicrobianos as como una gran variedad de fuentes, los
podemos encontrar en plantas, insectos, virus y mamferos.

El sndrome metablico es un grupo de cuadros que lo ponen en riesgo de desarrollar

unaenfermedad cardiaca y diabetes tipo 2. Estos cuadros son:
Hipertensin arterial

Glucosa (un tipo de azcar) alta en la sangre

Niveles sanguneos elevados de triglicridos, un tipo de grasas
Bajos niveles sanguneos de HDL, el colesterol bueno
Exceso de grasa alrededor de la cintura
META-ANALISIS

Existen diferentes definiciones del trmino, que adecuan su

empleo a las disciplinas biomdicas. Sack lo define como:
"nueva disciplina cientfica que revisa crticamente y combina
estadsticamente los resultados de investigaciones previas";2
para Laporte es: "integracin estructurada y sistemtica de la
informacin obtenida en diferentes estudios sobre un
problema determina do. Tipo de revisin sobre una cuestin
que debe dar una estimacin cuantitativa y sinttica de todos
los estudios disponibles"3 y Spilker lo considera: "proceso de
ir combinando de forma sistemtica y evaluar los resultados
de ensayos clnicos que ya han sido terminados y puede ser
considerado como un resumen cuantitativo de estas investiga
ciones".4 Un trmino semejante al de meta-anlisis utilizado
principalmente en el Reino Unido es el de overview (visin o
revisin de conjunto), aunque hay autores que lo utilizan para
diferenciar el MA de los estudios que no han sido realizados
exactamente sobre la misma enfermedad, sino sobre
enfermedades similares, o que pudieran ser consecuencia de
la accin de los mismos factores de riesgo y de una evolucin
etiopatognica paralela
1.4 Pptidos bioactivos Los pptidos bioactivos se definen como
fragmentos proteicos exgenos especficos que producen un impacto
positivo en las funciones del cuerpo humano de manera de producir
finalmente un efecto benfico sobre la salud independientemente del
nutricional. En las ltimas dcadas se ha reunido suficiente evidencia
experimental que indica que las protenas alimentarias son una fuente de
pptidos bioactivos. Dichas investigaciones se han enfocado en la liberacin
de los pptidos, los cuales se encuentran encriptados en las protenas, con
el objeto de utilizarlos como potenciales ingredientes de alimentos
funcionales (Ryan y col., 2011). Los pptidos bioactivos afectan los
principales sistemas: cardiovascular, nervioso, gastrointestinal e inmune
(Figura I.9). Despus de la digestin, los pptidos pueden ser absorbidos por
el intestino para entrar de manera intacta en la circulacin de la sangre y
ejercer efectos sistmicos, o producir efectos locales en el tracto
gastrointestinal CAPTULO 1 INTRODUCCIN 28 (Erdmann y col., 2008). Se
han aislado y secuenciado pptidos con actividad opioide, quelante,
anorexignica, antimicrobiana, inmuno y citomoduladora,

hipocolesterolmica, antihipertensiva, antioxidante y antitrombtica

(Hartman y Meisel, 2007).
La presencia de bioactividad depende de la secuencia aminoacdica y del
tamao de los pptidos, que generalmente vara entre 2 y 20 aminocidos,
aunque en algunos casos puede consistir en ms de 20 aminocidos. Un
ejemplo es lunasina, pptido con actividad antitumoral de 43 aminocidos
(De Lumen, 2005). Muchos de estos pptidos presentan propiedades
multifuncionales. Aunque las protenas de la leche bovina y sus derivados
son los precursores ms frecuentes y estudiados (Fiat y col., 1993; Shah,
2000; Meisel, 2001; Gobbetti y col., 2002; Korhonen y Philanto, 2006),
tambin se han podido caracterizar pptidos bioactivos en protenas
alimentarias provenientes de huevo, pescado, arroz, soja, trigo, carne
(Vioque y col., 2000; Gobbetti y col., 2004; Hartmann y Meisel, 2007; Ryan y
col., 2012). El hecho de que los biopptidos provengan de diferentes fuentes
de origen animal y vegetal, abre un campo muy interesante para revalorizar
fuentes alimentarias poco explotadas as como subproductos derivados de
diferentes industrias, tales como las industrias de la carne y de los
alimentos marinos. El amaranto, as como otros granos de origen andino,
resulta en este sentido un cultivo que reviste mucho inters, tanto por su
potencial agronmico como el alto valor nutricional de sus hojas y semillas.
Por otra parte en los ltimos aos distintos estudios han mostrado el
potencial de pptidos bioactivos CAPTULO 1 INTRODUCCIN 29 encriptados
en las protenas presentes en el grano, lo que ha renovado y dado nuevo
impulso a este antiguo cultivo (Escudero y col., 2005; Silva-Sanchz y col.,
2008; Vecchi y An, 2009; Tiengo y col., 2009; Mendoa y col., 2009; Barrio
y An, 2009; Tironi y An, 2010; Orsini y col., 2011; Fritz y col., 2011;
Huerta-Ocampo y Barba de la Rosa, 2011; Caselato-Sousa y Amaya-Farfn,
2012). Algunas de las bioactividades descriptas han sido determinadas
ltimamente en nuestro laboratorio. Se ha comprobado que las protenas de
amaranto son fuentes de pptidos bioactivos que se encuentran encriptados
en las secuencias y presentan actividad antihipertensiva (Vecchi y An,
2009; Fritz y col., 2011; Quiroga y col., 2012), antioxidante (Tironi y An,
2010; Orsini y col., 2011) y citomoduladora (Barrio y An, 2009; Quiroga y
col., 2014) entre otras