LAPORAN KASUS

PATOLOGI/BIOLOGI

Mara de Lourdes Chvez-Briones,1,2 M.D.; Raquel Hernndez-Corts,2 B.S.; Porfirio DazTorres,2 B.S.; Alberto Niderhauser-Garca,1 M.D.; Jess Ancer-Rodrguez,1 M.D.; Gilberto
Jaramillo-Rangel,1 Ph.D.; and Marta Ortega-Martnez,1 Ph.D.

Identifikasi Sisa-Sisa Pada Manusia dengan Analisis DNA Isi Gastrointestinal dari Larva
Lalat

ABSTRAK: Larva lalat Dipterous (belatung) sering dikumpulkan dari mayat selama investigasi
kasus kriminal. Studi sebelumnya menunjukkan bahwa analisis DNA dari isi gastrointestinal
belatung dapat digunakan untuk menunjukkan identitas korban. Namun, pendekatan ini belum
digunakan hingga saat ini dalam penyelidikan hukum, dan dengan demikian kemudahannya
dalam penggunaan masih tidak diketahui. Sebuah badan yang terbakar parah ditemukan dengan
wajah dan leher dikerumuni oleh larva lalat. Mengingat kondisi tubuh, identifikasi tersebut tidak
memungkinkan. Pencetakan Short Tandem Repeat (STR) dilakukan dengan menggunakan
kandungan saluran gastrointestinal belatung yang dikumpulkan dari korban dan dibandingkan
dengan profil STR diperoleh dari seorang yang diduga ayah korban. Probabilitas paternitas
adalah 99,685%. Tes DNA komparatif ini memungkinkan identifikasi yang meyakinkan dari
sisa-sisa. Ini adalah kasus pertama yang dilaporkan dari analisis DNA manusia diisolasi dari
saluran pencernaan pada belatung yang digunakan untuk mengidentifikasi korban dalam kasus
pidana.

KATA KUNCI: ilmu forensik, entomologi forensik, pencetakan DNA, sisa-sisa manusia, larva
lalat, identifikasi korban.

Entomologi forensik adalah analisis pada serangga untuk kepentingan forensik dan tujuan
peradilan (1). Aplikasi yang paling umum berdasarkan entomologi dalam penyelidikan tindak
kriminal adalah untuk menjelaskan jarak postmortem, yaitu waktu antara kematian dan
penemuan mayat (2). Selain itu, studi entomotoksikologi menganalisis penerapan analisis
toksikologi serangga hadir pada sisa-sisa manusia dalam ketiadaan jaringan dan cairan yang
biasanya diambil untuk tujuan tersebut (3). Pada akhirnya, penyelidikan forensic dengan
entomologi mendapatkan keuntungan dari berbagai metode genotip molekul dipraktekkan secara
luas. Yang paling umum digunakan adalah identifikasi spesimen berbasis DNA. Aplikasi lain
termasuk karakterisasi struktur genetik populasi spesies serangga yang penting bagi forensik
penting identifikasi isi usus serangga (4). Analisis genetik forensik isi usus serangga memiliki
beberapa kegunaan potensial (5). Larva lalat Dipterous (juga disebut belatung) dapat menjadi
sumber yang cocok dari DNA manusia. Wells et al. (6) urutan mitokondria DNA manusia dari isi
usus belatung meningkat jaringan manusia. Juga, Zehner et al. (7) analisis nuklir Short Tandem
Repeat (STR) lokus DNA manusia berasal dari belatung pada tubuh yang membusuk. Dengan
demikian, secara teoritis, mencetak DNA manusia berasal dari saluran pencernaan belatung dan
perbandingan dengan profil genetik yang ada dapat membantu mengungkap identitas korban.
Namun, studi sebelumnya yang dilakukan di bawah kondisi terkontrol; pendekatan ini belum
digunakan hingga saat ini dalam penyelidikan hukum, dan dengan demikian kemudahannya
belum diketahui. Di sini, kami melaporkan kasus pertama analisis DNA manusia diisolasi dari

saluran pencernaan belatung yang digunakan untuk mengidentifikasi korban dalam kasus pidana.
Juga, ini adalah kasus pertama yang dilaporkan dari penerapan entomologi forensik di Meksiko.

Laporan kasus.

Sebuah badan terbakar parah ditemukan di daerah hutan daerah jalanan terpencil. Mayat
tersebut dalam posisi seperti bertinju, dengan kaki dan tangan hilang. Wajah dan leher secara luas
dikerumuni oleh larva lalat. Mengingat kondisi fisik tubuh, investigasi tidak dapat menentukan
baik jenis kelamin atau perkiraan usia korban.

Di tempat kejadian, terdapat bagian yang dibakar di dalam tanah dan di sekitar tubuh.
Tidak ada bukti fisik yang ditemukan di dekat sisa-sisa mayat, kecuali sebuah cincin kelulusan
sekolah. Jenazah itu dibawa ke kantor untuk diautopsi, yang menunjukkan cedera kepala terbuka.
Karena keadaan mayat, jaringan lunak yang tidak tersedia untuk analisa lebih lanjut, dengan
pengecualian dari sebuah fragmen kecil hati yang sedikit terbakar. Tiga belatung dikumpulkan
dari korban dan diidentifikasi dengan pengamatan morfologis sebagai spesimen dari lalat
(Diptera: Calliphoridae) dan lalat daging (Diptera: Sarcophagidae) (8). Semua belatung
dipisahkan masing-masing pada tabung steril microcentrifuge 1,5 mL dan diawetkan dalam
etanol 70% pada suhu 4 C.

Seorang wanita dilaporkan hilang oleh ayahnya, yang mengklaim bahwa putrinya diculik
oleh beberapa pelaku 10 hari sebelum sisa-sisa yang ditemukan. Pria ini mengakui cincin
kelulusan sekolah yang didapatkan di tempat kejadian adalah milik putrinya. Namun, tubuh itu

begitu parah terbakar dan ia tidak dapat mengidentifikasi dengan ciri-ciri fisik wajah atau
lainnya. Beberapa upaya untuk mendapatkan profil genetik dari fragmen hati yang didapatkan
pada otopsi tidak berhasil. Kami menduga bahwa akan ada kemungkinan untuk mengidentifikasi
tubuh dengan analisis genetik dari isi usus belatung.

Setiap belatung diproses secara terpisah. Setiap larva dicuci dan dibedah dengan
menggunakan metode dijelaskan sebelumnya (9) untuk menghilangkan crop, divertikulum dari
akhir cephalic dari usus. Ekstraksi DNA dari crop dilakukan dengan menggunakan ekstraksi
fenol-kloroform standar dan presipitasi etanol (10). DNA dari yang diduga ayah korban
diekstraksi dari sampel bukal menggunakan protokol Chelex (11).
Polymerase chain reaction dilakukan dengan ekstrak DNA dari isi crop dan sampel bukal
menggunakan multipleks kit AmpF'STR Identifiler (Applied Biosystems, Foster City, CA)
sesuai dengan protokol pabrik yang direkomendasikan. Elektroforesis kapiler dilakukan dengan
ABI PRISM 310 analiser genetik (Applied Biosystems). Sampel dijalankan pada kapiler yang
berisi POP-4 polimer, standar GeneScan -500 LIZ digunakan untuk ukuran alel, dan data
dianalisis dengan perangkat lunak analisis GeneMapper ID ver-sion 3.2 (Applied Biosystems).
Probabilitas paternitas dihitung menggunakan data Meksiko populasi pada STR alel frekuensi
(12,13) dan perangkat lunak PATPCR versi 2.0.2 (14,15).

Profil genetik yang dihasilkan dari sampel disajikan pada Tabel 1. Hasil yang sama
diperoleh dari tiga belatung yang berbeda. Lokus amelogenin pada belatung menunjukkan
peningkatan pada sisa-sisa seorang perempuan. Selanjutnya, sampel ini memunculkan 12 lokus,
yang masing-masing memiliki setidaknya satu alel dengan lokus STR yang sesuai dihasilkan dari

terduga ayah korban. Probabilitas paternitas adalah 99,685%. Paternitas diakui ketika tes genetik
menghasilkan probabilitas 99% atau lebih (16). Dengan demikian, tes DNA pembanding yang
digunakan memungkinkan identifikasi yang meyakinkan dari sisa tersebut. Hasilnya kemudian
diverifikasi oleh analisis DNA dari tulang yang berasal dari sisa-sisa. Prosedur ini hanya
mungkin setelah banyak usaha yang dilakukan.

Tabel 1. Perbandingan hasil short tander report yang didapatkan dari larva dan yang diduga ayah
korban

Lokus
Amelogenin

Korban
XX

Terduga Ayah Korban

XY

D8S1179

13/15

13/15

D21S11

29/30.2

30.2/33.2

D7S820

10/10

10/11

CSF1PO

n/r

10/11

D3S1358

14/17

16/17

TH01

7/7

7/9.3

D13S317

12/13

9/13

D16S539

10/11

11/12

D2S1338

24/25

17/25

D19S433

15/16

13/15

vWA

16/18

15/16

TPOX

8/8

8/8

D18S51

n/r

14/15

D5S818

12/12

11/12

FGA

n/r

18/26

* hasil yang sesuai ditandai dengan cetak tebal

tidak ada hasil yang keluar

Diskusi

Mengingat akurasi dan reliabilitas teknik, DNA genotip secara luas digunakan dalam
bidang forensik untuk mengidentifikasi sisa-sisa manusia. Sumber yang ideal untuk genotip tidak
hanya harus banyak dan mudah untuk mengumpulkan, tetapi juga memungkinkan ekstraksi DNA
dengan kualitas yang baik. Namun, dalam korban yang tubuhnya mengalami trauma yang
signifikan atau terbakar kadang-kadang sulit untuk mendapatkan bahan biologis yang cocok
untuk analisis genetik. Pada artikel ini, kami melaporkan identifikasi dari tubuh terbakar parah
dengan cara analisis genetik dari isi gastrointestinal belatung yang meningkat dan perbandingan
dengan profil genetik dari seorang yang diduga berhubungan.

Profil STR diperoleh dari belatung tidak lengkap. Namun, jumlah lokus berhasil
diamplifikasi adalah cukup untuk melakukan tes DNA pembanding terhadap terduga ayah
korban, yang cukup memadai untuk meyimpulkan identifikasi sisa-sisa. Ada banyak faktor yang

dapat mempengaruhi keberhasilan hasil cetak DNA. Faktor utama yang terlibat dalam analisis
DNA manusia berasal dari belatung sebelumnya telah dieksplorasi, dan telah dikembangkan
panduan untuk aplikasi yang tepat dari prosedur tersebut (1,2,4-7,9,17). Kami mengikuti
panduan ini sedekat mungkin, meskipun menurut Linville et al. (17) metode terbaik untuk
menyiapkan belatung sebelum dianalisis adalah menyimpannya tanpa cairan apapun pada suhu
70C, sedangkan kami menyimpan belatung dalam etanol 70% pada suhu 4C. Namun, profil
STR lengkap dapat diperoleh dari belatung bahkan setelah 2 bulan penyimpanan dalam etanol
70% (7) membenarkan fakta bahwa etanol adalah bahan pengawet yang berguna untuk
menyiapkan jaringan yang ingin dianalisis DNA (7,18,19).

Dengan demikian, memungkinkan bahwa kualitas ekstraksi DNA dari belatung dalam
fungsinya pada keadaan sisa-sia yang muai terurai. Asumsi ini didasarkan pada kenyataan bahwa
setiap belatung diproses secara terpisah, dan hasil yang sama diperoleh dari masing-masing.
Selanjutnya, takson dari belatung, yang dianalisis untuk pencetakkan STR, tampaknya tidak
memiliki pengaruh pada hasil. Profil STR lengkap dapat diperoleh tanpa keluarga Diptera (7).

Dalam aplikasi masa depan metode ini, kami sarankan mengikuti pedoman yang
ditetapkan dan mengakui bahwa degradasi parah pada tubuh tidak memungkinkan diidentifikasi
menggunakan metode ini. Di sisi lain, hingga saat ini, belum ada laporan tentang penerapan
entomologi forensik dalam penyelidikan hukum di Meksiko. Hal ini diperlukan bahwa hakim,
jaksa, dan agen penegak hukum dapat mengakui data dengan serangga sebagai dasar dalam
memecahkan kasus kriminal.

Kesimpulannya, ini adalah kasus pertama yang dilaporkan dari analisis DNA manusia
diisolasi dari saluran pencernaan larva lalat dipterous (belatung) yang digunakan untuk
mengidentifikasi korban dalam kasus pidana. Jika belatung ditemui dalam hubungan dengan
sisa-sisa manusia, peneliti dapat memanfaatkan pendekatan ini jika ekstraksi DNA dari sumber
lain bukanlah hal yang mustahil.