FACULTAD DE

QUMICA

UNIVERSIDAD AUTNOMA DE YUCATN

FACULTAD DE QUMICA

LABORATORIO DE ANLISIS MICROBIOLGICO

ANGEL SILVA PREZ

KAREN ALEJANDRA AGUILAR ESPAA

TAREA
REPORTE DE LA PRCTICA 1: INFECCIONES DEL TRACTO RESPIRATORIO
SUPERIOR

LABORATORIO 3

Mrida, Yucatn a 9 de Septiembre del 2016

PRCTICA 1.
INFECCIONES DEL TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR.

OBJETIVO.
Identificar los microorganismos causantes de infecciones del tracto respiratorio superior a
travs de las pruebas empleadas en el laboratorio.

INTRODUCCIN.
La faringoamigdalitis es la enfermedad ms comn que se da en el tracto respiratorio
superior. Esta enfermedad, es un proceso agudo febril con inflamacin de las mucosas de
rea faringoamigdalar.
De las bacterias que la causan, streptococcus pyogenes es la ms importante.
Numerosos microorganismos son causa de faringoamigdalitis y con diferente inters
clnico; la infeccin por pyogenes es ms comn en el invierno y principios de primavera y
se estima que es la causa del 15-30% de casos de FA en nios de 5 a 15 aos. Estos
estreptococos, no son parte de la biota normal de la nasofaringe, y tienen un periodo de
incubacin de 12 horas a 4 das aproximadamente.
Otras bacterias infecciosas con inters clnico son los estreptococos -hemolticos de
grupos C y G, Arcanobacterium haemolyticum y Mycoplasma pneumoniae.
Existen otras bacterias aunque de frecuencia muy rara y con menor inters clnico como
la Neisseria gonorrhoeae, Corynobacterium diphteriae, Yersinia enteroltica y pestis,
Treponema pallidum y Francisella tularensi.
Otras de los microorganismos causales son los virus, entre ellos estn los adenovirus,
Herpes, Parainfluenza, Gripe A y B, rinovirus, coronavirus entre otros, sin embargo si se
tiene la presencia de tos, se dice que la infeccin es viral y no bacteriana.
Para la identificacin de la causa, es necesario realizar un cultivo de garganta, ya que la
especificidad de este puede ser hasta del 99%. Es importante que se indique en el
laboratorio la pesquisa de Pyogenes, aunque en el cultivo se pueden aislar otras bacterias
que causen la enfermedad menos frecuente, pero muchos laboratorios no las identifican
rutinariamente al menos que se especifique.1
Otras de las enfermedades que ocurren a nivel superior en el tracto respiratorio son la
otitis y la sinusitis.
La sinusitis, suele aparecer en el curso de un resfriado o una enfermedad gripal y tiende a
ser auto limitada con una duracin de 1 a 3 semanas. Los sntomas consisten en

secrecin nasal y pos nasal purulenta, sensacin de presin sobre las reas de los senos
faciales, tos y un tono nasal de la voz. Aveces hay fiebre.
Los patgenos ms frecuentes de la sinusitis, se encuentran Haemophilus influenzae,
Streptococcus pneumonie, Streptococcus pyogenes y Moraxella Catarrhalis en adultos
jvenes, en los nios, con frecuencia se encuentran como patgenos de la sinusitis a S.
pneumonie, H. influenzae y M. catarrhalis hablando de bacterias, otro patgeno
importante es el rinovirus; sin embargo, en las 2 ltimas dcadas indican que S.
pneumonie y H. influenzae son los patgenos bacterianos principales en adultos con
sinusitis, tambin se cultivan otras especies, como estreptococos -hemolticos y hemolticos, staphylococcus aureus y anaerobio, pero con menos frecuencia.
Una vez recibido el material en el laboratorio deben realizarse frotis teidos con Gram y
cultivos en aerobiosis y anaerobiosis. Los medios de cultivo para aerobios deben incluir
agar sangre, agar chocolate y agar MacConkey.2
En cuanto a la otitis, la otitis se refiere a la inflamacin del odo medio. La otitis media
ocurre principalmente en nios de 6 meses a 5 aos, con la incidencia mxima entre los
nios menores de 3 aos.
Las causas ms comunes de la otitis media aguda sin Streptococcus pneumoniae, H.
influenzae y Moraxella catarrhalis, y el 25% al 66% son causadas por H. influenzae.3

METODOLOGA.
Da 1. Cultivo de la muestra.
Sembrar por estra cruzada los medios de agar sangre, MacConkey y sal y manitol,
seguidamente incubar las cajas Petri de agar sangre en atmsfera parcial de CO 2 a 37C.
durante 24 horas.
Dia 2. Identificacin
Observar y describir la morfologa colonial y la presencia de hemlisis, hacer frotis de las
colonias y dejarlos secar al aire luego se fijara el frotis con calor y se teir con la tincin
de Gram.
Ya realizada la tincin de Gram, describir la morfologa microscpica y el agrupamiento,
despus de observar, realizar la prueba de catalasa para cada cepa sospechosa.
Por otra parte, se sembrara masivamente la colonia B- hemoltica en 2/4 de agar sangre,
depositar en el agar un disco de Bacitracina y un disco de Trimetropim con
Sulfametoxazol en el centro del rea de siembra, se presionara suavemente cada disco
con una pinza de modo que se adhiera en la superficie del agar. Seguidamente, sembrar
masivamente la colonia alfa-hemoltica en del agar sangre y depositar un disco de
Optoquina en el centro del rea de siembra, se presionara suavemente el disco con una
pinza estril de modo que se adhiera a la superficie del agar e inocular una colonia
sospechosa en dos tubos con 5 mL de caldo BHI.
Realizar la prueba de la coagulasa
fermentadoras de manitol:

en placa (Coagulasa ligada) a las colonias

a) Depositar 1-2 gotas de plasma con EDTA en un portaobjetos, tomar una colonia
del crecimiento en el agar sangre y realizar una suspensin con el plasma, se
debe observar la formacin de grumos en 10 segundos.
Realizar la prueba de coagulasa en tubo (Coagulasa libre) a las colonias fermentadoras
de manitol:
a) Mezclar 0.5 mL de plasma sin diluir a 2-4 colonias sospechosas de 18-24 horas de
incubacin de 37C. Examinar en 1-4 horas la formacin de cogulo (Conservar
los tubos negativos durante toda la noche a temperatura ambiente y examinar a la
maana siguiente).
b) Suspender una colonia de un cultivo en agar sangre en 1 mL de plasma diluido 1:6
en solucin salina e incubar a 37C en bao de agua. Examinar en 1-4 horas la
aparicin del cogulo.
Por otro lado, inocular por estra nica gruesa el medio de agar DNAsa por cada cepa
fermentadora de manitol y que de positiva la prueba de la coagulasa. Realizar la prueba
de motilidad a 25C y a 37C inoculando por picadura las colonias sospechosas de
bacilos gram positivos, catalasa negativos y que permiten beta- hemlisis.
Luego, llevar a cabo la prueba de CAMP inversa a los bacilos gram positivos, catalasa
negativos, beta-hemolticos:
a) Hacer una estra central en el agar sangre utilizando una cepa de S. aureus
productor de B- hemolisinas.
b) Inocular perpendicularmente las colonias sospechosas a 2 o 3 mm de la estra
central.
Da 3 Observacin de resultados.
Realizar la lectura de la prueba de bacitracina y STX, si la bacteria es sensible, se notar
un halo de inhibicin. Seguidamente, realizar la lectura de la prueba de optoquina, si la
bacteria es sensible se notar un halo de inhibicin (Si el organismo exhibe una zona de
10 mm o menos, probar la solubilidad de bilis y realizar su lectura).
Aadir una gota de 0.5 mL de desoxicolato de sodio al 10% a uno de los tubos de BHI
inoculado con alfa- hemoltico (Debe tornarse claro). Aadirle al otro tubo 0.5 mL de
solucin salina (Se debe tornar turbio).
Realizar la prueba de la DNAasa:
a) Examinar la caja buscando la presencia de un halo de color rosa alrededor de la
estra (una pequea zona clara alrededor de la estra se interpreta como negativa).
Por ltimo, observar el test de CAMP inverso la formacin de una punta de flecha al inhibir
la hemlisis producida por S. aureus.

RESULTADOS.
a) Exudado Farngeo:
Persona enferma, aislamiento de Moraxella Catarrhalis.

No se encontr crecimiento en Agar MacConkey ni en agar MSA.

Figura 1. Agar MacConkey inoculado con Moraxella Catarrhalis.

En el agar Sangre (SBA) se encontr el crecimiento de la bacteria, expresando la hemlisis, y colonias blancas.

Figura 2. Agar sangre inoculado con Moraxella Catarrhalis.

En cuanto a su tincin de Gram, se observaron diplococos Gram negativos.

Figura 3. Tincin de Gram de Moraxella Catarrhalis obsrvada desde el microscopio a

100x.

Exudado farngeo con persona sana, inoculando S. Pyogenes.

No hubo crecimiento en el agar MacConkey.

Fig. 4 Agar MacConkey inoculado con S. pyogenes.

Para el agar MSA, tampoco se encontr crecimiento. En cuanto al agar sangre, si hubo
crecimiento de la bacteria, expresndose la -hemlisis muy notablemente y colonias
pequeas.

Fig. 5 Agar SBA inoculado con pyogenes.

Por otra parte, para la tincin de Gram, se observaron cadenas de cocos Gram negativos.

Fig. 6 Tincin de Gram

de S. pyogenes
observada a 100x.

Cepa de Arcanobacterium haemolyticum.

Se sembr en Agar sangre, y se obtuvo lo siguiente:

Para el agar sangre, hubo crecimiento de la bacteria, observndose colonias grisceas
pequeas, y una -hemlisis, esto a las 48 horas de ser inoculada en el agar.

Fig. 7 A.

haemolyticum inoculado en SBA

En cuanto a la tincin de A. haemolyticum, se observaron bacilos Gram positivos.

Fig.8 Tincin de
haemolyticum

Gram de A.
observada a travs del
microscopio a 100x.

b) Exudado tico
Cepa pura de S. Pneumonie.
Pasando a la cepa de S. pneumonie, en el agar MacConkey y en el agar MSA no hubo
crecimiento de colonias.

Fig. 9 Agar MSA inoculado con S. pneumonie.

Fig. 10 Agar MacConkey

inoculado con S. pneumonie.

En cuanto al agar sangre (SBA), hubo crecimiento de las colonias grisceas pequeas,
expresndose una -hemlisis.

Fig. 11 Agar SBA inoculado con S. pneumonie.

En la tincin de Gram de la S. pneumonie se observ la morfologa de cocos Gram

positivos, agrupados en diplococos.

c) Exudado Nasal
Cepa pura de S. Aureus.
Al ser cepa pura, no hubo crecimiento en agar MacConkey, en cuanto al agar MSA, hubo
crecimiento de la colonia, observndose el viraje de color en el agar del rojo-naranja a un
amarillo entre rosado, esto se debe a la fermentacin del manitol por parte de la cepa, y
colonias pequeas blanquecinas.

Fig.12. Agar MSA inoculado con

S. Aureus

Para el agar sangre, se observaron colonias grandes, expresndose una -hemlisis muy
notable.
En la tincin de gram de esta cepa, se observaron cocos Gram positivos.

Fig. 13 Tincin de Gram de S. aureus observado a travs del microscopio a 100x

d)

Pruebas de Catalasa a las cepas sospechosas.

S. Aureus, catalasa (+)
S. pyogenes catalasa (-)
M. Catarrhalis catalasa (+)
S. penumonie Catalasa (-)
A. haemolyticum Catalasa (-)

e) Prueba Bacitracina para cocos -hemolticos.

Se obtuvo que S. pyogenes es Sensible a la bacitracina, no se llev a cabo la prueba con

el disco de STX.

f)

Prueba de Optoquina para cocos -hemolticos.

Se obtuvo que S. penumonie es positivo, ya que se obtuvo un halo con un dimetro de

distancia de 18 mm.

Fig. 14 Antibiograma con Bacitracina y Optoquina

g) Prueba de la coagulasa ligada y libre a colonias fermentadoras de manitol.

S. Aureus, resultado positivo para la prueba de la coagulasa ligada. La prueba de la
coagulasa libre no se realiz.

h) Camp Reversa a bacilos Gram positivos, catalasa negativos, -hemolticos.

Fig. 15 Camp reversa de A.

haemolyticum

i)

Prueba de Camp a cocos Gram positivos, catalasa negativos, -hemolticos

Fig. 16 Camp a S. pyogenes.

j)

Prueba de Hipurato de sodio a S. agalactiae.

Se obtuvo un resultado negativo.

Fig. 17 Prueba de Hipurato de sodio a S. agalactiae

ANLISIS Y DISCUSIONES DE LOS RESULTADOS.

En cuanto a la observacin de la tincin de Gran del Streptococcus pyogenes, se
observaron cocos Gram negativos, de acuerdo a la literatura, estos son cocos Gram
positivos, por lo que se cree que se obtuvo este resultado por que el lugol no estaba en
buen estado, causando la decoloracin en la tincin de Gram, y que el lugol tiene su
funcin en la Tincin de Gram como mordiente, es decir favorece la fijacin del cristal
violeta dejando a las bacterias tanto positivas como negativas color morado, ya despus
el alcohol-cetona lava y decolora a las gram negativas.4
Para la prueba del hipurato, se obtuvo un resultado negativo, este debera ser positivo ya
que la S. agalactiae tiene la capacidad de hidrolizar al hipurato de sodio mediante la

enzima hipuricaza, por lo tanto, debi observarse un color morado intenso que indica la
presencia de la glicina dando as el resultado positivo. Si el hipurato no se hidroliza a
glicina, tras la adicin del reactivo de ninhidrina no habr cambio de color dando como
resultado una prueba negativa, que es lo que nos ocurri, por lo que se piensa que en
realidad no a la S. agalactiae se le hizo la prueba si no a alguna otra bacteria que no
hidroliza al hipurato.5
En cuanto a las pruebas de Camp con S. pyogenes, se obtuvo el CAMP (-). Los
estreptococos del grupo A en este caso S. pyogenes se han considerado durante mucho
tiempo CAMP negativa, pero resultando el factor de camp positivo (factor de monofosfato
de aninina cclica).6 y esta reaccin comnmente se ha utilizado para distinguir a los
estreptococos del gurpo A de S. agalactiae. 7
La prueba de bacitracina se toma como sensible cuando se observa la presencia de un
halo de inhibicin, eso independientemente del dimetro alrededor del disco. En este caso
se tom sensible, ya que los estreptococos del grupo A beta hemolticos son sensibles a
esta.8
Para la prueba de la optoquina, se consider positivo el resultado por que se form un
halo con un dimetro de distancia de 18 mm, ya que la literatura indica que es
considerada positiva cuando el halo de inhibicin del desarrollo microbiano, es de un
dimetro mayor o igual a 14 mm. Las zonas de inhibicin inferiores a 14 mm de dimetro
son cuestionables para Streptococcus pneumoniae y deben ser confirmadas por pruebas
adicionales, como ser la prueba de solubilidad en bilis. 9 Esto para los discos de 6mm, que
fueron los que se utilizaron al realizarse esta prueba.
Para la CAMP inervsa, la hemlisis producida por algunos microorganismos se inhibe por
la -hemolisina de S. aureus, en este caso la produccin de la fosfolipasa D de la A.
haemolyticum.10
CONCLUSIONES
En conclusin, se lleg a que el objetivo de la prctica se ha cumplido, ya que se pudieron
Identificar los microorganismos causantes de infecciones del tracto respiratorio superior
(Faringoamigdalitis, sinusitis y otitis) a travs de las pruebas mencionadas anteriormente.
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Atencin Primaria, Chapela, Vigo.
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8. http://www.britanialab.com/productos/196_hoja_tecnica_es.pdf
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9. http://www.britanialab.com/productos/194_hoja_tecnica_es.pdf
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10.Emilia Cercenado, Rafael Cantn. Mtodos de identificacin bacteriana en el
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