Esterilizacin bacteriolgica

Esta operacin comprende todos los procedimientos fsicos, mecnicos y

qumicos, que se emplean para destruir, inactivar o retener grmenes en general y
patgenos en particular. A travs de esta, los materiales de laboratorio para
determinados diagnsticos y los elementos quirrgicos y la piel del enfermo
alcanzan un estado de desinfeccin que evita la contaminacin operatoria.
MTODOS FSICOS:
Calor
La utilizacin de este mtodo y su eficacia depende de dos factores: el tiempo de
exposicin
y
la
temperatura.
Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la accin del
calor. El calor provoca desnaturalizacin de protenas, fusin y desorganizacin de
las membranas y/o procesos oxidantes irreversibles en los microorganismos.
Fuego Directo:
Este procedimiento consiste en exponer a la llama de un mechero de Bunsen el
objeto que se desea esterilizar. Cuando ste es de metal se deja permanecer en el
rea de reduccin de la llama hasta que se ponga al rojo (asas de cultivo; algunas
agujas, etc) . Si es de vidrio se deja un tiempo prudencial, procurando que la llama
llegue a todos lados. Antes de utilizar el objeto esterilizado es necesario dejarlo
enfriar en un sitio asptico. Este procedimiento tiene limitaciones debido a que
deteriora los objetos y si son de gran volumen, la esterilizacin nunca es perfecta.
Calor Seco:
El calor seco produce desecacin de la clula, esto es txico por niveles elevados
de electrolitos y fusin de membranas, residuos que quedan adheridos al objeto
estril. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a
los microorganismos que estn en contacto con stos.
An as se sigue utilizando el calor seco en todos los laboratorios para la
esterilizacin de placas de petri y pipeteros (recipientes metlicos para alojar
pipetas para la siembra de sustancias lquidas).
La accin destructiva del calor sobre protenas y lpidos componentes o nutrientes
de los microorganismos, requiere mayor temperatura cuando el material est seco
o la actividad de agua del medio es baja.
Estufas:
Para esterilizar por intermedio del aire caliente es necesario colocar los objetos
en aparatos especiales llamados ESTUFAS. Y llevar el aire interior a una
temperatura entre 150 y 190 C. Uno de los primeros aparatos utilizados para este
fin fu el horno de Pasteur, que luego se sustituy por estufas de aire caliente.
Estas constan de una doble cmara, el aire caliente generado por una resistencia
elctrica circula por la cavidad principal y por el espacio entre ambas cmaras, a
temperaturas vatriables, siendo la ms aconsejadas 170 C para el instrumental
metlico y a 140 C para el contenido de los tambores. Se mantiene una
temperatura estable mediante termostatos de metal denominados de par
bimetlico, consistente en dos metales de distinto coeficiente de dilatacin.
Cuando uno se dilata, el otro no lo hace y se arquea. Uno de los extremos de ste
dispositivo se halla en contacto con un interruptor que corta la alimentacin de la
resistencia calefactora.

En la actualidad la mayora de las estufas de esterilizacin o de cultivo se

termorregulan por medio de un termostato hidrulico que consiste en una ampolla
metlica con gas en su interior, hermtica, unida por medio de un capilar de metal
a un tambor que vara su volumen cuando aumenta la temperatura. Este tambor
est en contacto con una llave interruptora, de manera que si el gas interior del
tambor se dilata por el calor, la llave a la que est unido interrumpe el fluido
elctrico a la resistencia, manteniendo as la temperatura de la cmara.
Ventajas del calor seco:

No es corrosivo para metales e instrumentos.

Permite la esterilizacin de sustancias en polvo y no acuosas, y de

sustancias viscosas no voltiles.
Desventajas:
*Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo, debido a la
baja penetracin del calor.
Calor Hmedo:
El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas. Estos
efectos se deben principalmente a dos razones:
*El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas estructuras biolgicas
son producidas por reacciones que eliminan agua.
*El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho ms
elevado que el aire.
AUTOCLAVE
Se realiza la esterilizacin por el vapor de agua a presin. El modelo ms usado
es el de Chamberland.
Esteriliza a 120 a una atmsfera de presin (estas condiciones pueden variar) y
se deja el material durante 20 a 30 minutos.
Equipo:
Consta de una caldera de cobre, sostenida por una camisa externa metlica, que
en la parte inferior recibe calor por combustin de gas o por una resistencia
elctrica.
La caldera se cierra en la parte superior por una tapa de bronce sujetada por
bulones, mariposas o charnelas. Esta tapa posee tres orificios, uno para el
manmetro, otro para el escape de vapor en forma de robinete (tambin llamado
espita) y el tercero, para una vlvula de seguridad que funciona por contrapeso o a
resorte.
Funcionamiento y mtodo para esterilizar adecuadamente en Autoclave:
Se coloca agua en la caldera, procurando que su nivel no alcance a los objetos
que se disponen sobre una rejilla o canasta de metal. Se cierra asegurando la
tapa, ajustando los bulones y se da calor, dejando abierta la vlvula de escape
hasta que todo el aire se desaloje y comience la salida de vapor en forma de
chorro continuo y abundante.

Se cierra la espita de vapor y se espera hasta que llegue a la temperatura

adecuada. A partir de all se cuenta el tiempo de esterilizacin, luego del cual se
debe esperar al descenso de la temperatura para abrir la espita de purga y la tapa
del autoclave nuevamente.

Tiempos de esterilizacin en autoclave:

Del tiempo, temperatura y presin usados en la esterilizacin depende el xito
alcanzado. Generalmente los datos presin y temperatura son fijados, y el nico
factor que se vara es el tiempo. Los materiales necesitan diferentes tiempos de
esterilizacin dependiendo de su textura, porosidad, y otras caractersticas propias
de cada material. Algunos materiales como el hule, necesitan poco tiempo,
mientras otros como el metal quirrgico necesitan ms. Los siguientes datos han
sido tomados para una temperatura de esterilizacin de 250F (121C) a 15-20
PSI.

Tyndalizacin:
Esterilizacin por accin discontinua del vapor de agua, se basa en el principio de
Tyndall Las bacterias que resisten una sesin de calefaccin, hecha en
determinadas condiciones, pueden ser destruidas cuando la misma operacin se
repite con intervalos separados y en varias sesiones.
Se efecta por medio del autoclave de Chamberland, dejando abierta la vlvula de
escape, o sea funcionando a la presin normal. Puede tambin realizarse a
temperaturas ms bajas, 56 u 80 para evitar la descomposicin de las sustancias
a esterilizar, por las temperaturas elevadas.
Ventajas del calor hmedo:
Rpido calentamiento y penetracin

Destruccin de bacterias y esporas en corto tiempo

No deja residuos txicos

Hay un bajo deterioro del material expuesto

Econmico

Desventajas:
No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua
Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metlicos.
Ebullicin: Durante mucho tiempo se "hirvieron" los utensilios y materiales
quirrgicos o jeringas hipodrmicas para esterilizarlas. El agua a 100 C no
garantiza una adecuada esterilizacin, no obstante posee la propiedad de
desprender las colonias o los microorganismos y destruir aquellos que son
susceptibles a sta temperatura.
Un claro ejemplo de ello fue el sistema utilizado hasta hace pocos aos para
esterilizar jeringas de vidrio y agujas hipodrmicas de nquel con embocadura de
bronce en el mejor de los casos, platino, hirvindolos en agua.
FILTRACIN: Este procedimiento es aplicable a la esterilizacin de lquidos y
gases, especialmente los primeros. Cuando el lquido a filtrar no puede resistir, sin
descomponerse , la accin del calor, se aplica la tcnica de filtracin, la que puede
efectuarse mediante presin o aspiracin.
Se basa en el pasaje de lquidos a travs de sustancias porosas que detienen a
los microbios. Los antiguos filtros se fabricaban en forma de bujas que son
cilindros huecos abiertos por una extremidad y cerrados por otra, de paredes de
espesor variable.
La filtracin se reconoci como tcnica de esterilizacin a partir de las
observaciones de Koch en 1893, con la epidemia de clera y la presencia del
vibrin en el agua. Esta observacin fue ilustrada en la epidemia Hamburgo-Altona
en 1892. El agua del ro Elba, que contena Vibrio comma pasaba a las caeras
de agua de Hamburgo. Solo aparecieron unos pocos casos de clera en el
suburbio de Altona, donde el agua del Elba era filtrada por arenas (ntese el plural,
refirindose tal vez a varios grados de arena), antes de su distribucin.
Los filtros de porcelana se llaman "de Chamberland" y los de tierras infusorias
calcinadas se denominan "Berkefield"
En la actualidad se usan membranas filtrantes con poros de un tamao
determinado. El tamao del poro depender del uso al que se va a someter la
muestra. Los filtros que se utilizan no retienen virus ni micoplasmas, estos ltimos
estn en el lmite de separacin segn el dimetro de poro que se utilice. La
filtracin se utiliza para emulsiones oleosas o soluciones termolbiles. Su usa para
esterilizar aceites, algunos tipos de pomadas, soluciones oftlmicas, soluciones
intravenosas, drogas diagnsticas, radiofrmacos, medios para cultivos celulares,
y soluciones de antibiticos y vitaminas.
Existen tres tipos bsicos de filtros:
a- Filtros profundos o Filtros de profundidad:
Consisten de un material fibroso o granular prensado, plegado, activado, o pegado
dentro de los canales de flujo. En este tipo de filtros la retencin de las partculas
se produce por una combinacin de absorcin y de retencin mecnica en la
matriz.
b- Membranas filtrantes:
Tienen una estructura continua, y la retencin se debe principalmente al tamao

de la partcula. Partculas ms pequeas al tamao del poro quedan retenidas en

la matriza del filtro debido a efectos electrostticos.
La firma Millipore ha desarrollado membranas de 0,45 y 14 cm de dimetro, con
un soporte de papel siliconado para su proteccin debido a la fragilidad de la
misma, la ue debe ser monada en un soporte estril y que permita el ingreso del
lquido a esterilizar a presin.
c- Filtros de huella de nucleacin (Nucleoporo):
Son pelculas muy delgadas de policarbonato que son perforadas por un
tratamiento conjunto con radiacin y sustancias qumicas. Son filtros con orificios
muy regulares que atraviesan la membrana verticalmente. Funcionan como
tamices, evitando el paso de toda partcula con un tamao mayor al del poro.
MTODOS QUMICOS: Estos mtodos provocan la perdida de viabilidad de los
microorganismos.
En comparacin con los procedimientos fsicos, stos mtodos tienen una
importancia secundaria. Los antispticos son considerados venenos
protoplasmticos que, al actuar sobre los grmenes, los destruyen. Algunos de
ellos ejercen su accin nociva sobre todas las clulas, por lo cual se les considera
venenos generales, por el contrario otros actan sobre algunas especies
bacterianas, mostrndose como venenos especficos. Este mtodo es ptimo para
la antisepsia de las manos del operador, de locales, de mesas de trabajo, de
jaulas de animales, y para destruir grmenes que puedan caer en lugares de
trabajo.
AGENTES QUMICOS
La Iodopovidona (pervinox), el Cloruro de Benzalconio (sal de amonio cuaternario
o Cloruro de Zefirano) son ejemplos de antispticos tiles para desinfectar manos
y superficies. Cuando la superficie es resistente, el mejor agente biocida es el
Hipoclorito de Sodio (agua lavandina).
ESTUFAS DE ESTERILIZACION POR OXIDO DE ETILENO
Destruye todos los organismos y microorganismos conocidos, incluso esporas y
virus. Esteriliza sin deterioro artculos de goma, plstico, metal, madera, lana, piel,
papel, productos farmacuticos.
Esterilizacin con embalajes: a este gas son permeables sustancias como
polietileno, nylon, celofn, etc.
En 1928, autores americanos: Bac, Cotton y Ellington; Schrader y Bossert y
Autores alemanes: Gassner y Hase, descubrieron las propiedades del xido de
etileno.
En 1933 fueron certificadas las propiedades del xido de etileno en un laboratorio
de La Sorbona y en 1939 se estudi en un laboratorio de investigacin del Ejercito
de U.S.A.
El xido de etileno era bactericida, esporicida, con gran poder de penetracin,
efectivo a bajas temperaturas y penetra sustancias porosas; para evitar su poder
explosivo y su alto potencial inflamable se mezcl con CO2 en una proporcin de
7,15 veces el volumen de xido de etileno.
Trabajo de Phillips y Kaye.
El tiempo de esterilizacin que requiere el material depende de mltiples variables,

el vaco que se produce, la humedad, la concentracin del gas expresado en gs./l

y la temperatura, es decir que reduciendo la temperatura aumenta el tiempo de
exposicin requerido.
El gas se adquiere en botellas metlicas o cartuchos que se vaporizan, cambian
de lquido a gas a 10 C.
Todos los artculos debern airearse por 6 hs. despus de una esterilizacin.
El Oxido de etileno es un agente alquilante que se une a compuestos con
hidrgenos lbiles como los que tienen grupos carboxilos, amino, sulfhidrilos,
hidroxilos, etc.
Es utilizado en la esterilizacin gaseosa, generalmente en la industria
farmacutica. Destruye todos los microorganismos incluso virus. Sirve para
esterilizar material termosensibles como el descartable (goma, plastico, papel,
etc.), equipos electrnicos, bombas cardiorrespiratorias, metal, etc. Es muy
peligroso por ser altamente inflamable y explosivo, y adems cancerigeno.
Con aldehdos
Son agentes alquilantes que actan sobre las protenas, provocando una
modificacin irreversible en enzimas e inhiben la actividad enzimtica. Estos
compuestos destruyen las esporas.
Glutaraldehdo:
Consiste en preparar una solucin alcalina al 2% y sumergir el material a
esterilizar de 20 a 30 minutos, y luego un enjuague de 10 minutos.
Este mtodo tiene la ventaja de ser rpido y ser el nico esterilizante efectivo fro.
Puede esterilizar plstico, goma, vidrio, metal, etc.
Alcoholes
Iodo
Antispticos

Agentes catinicos, aninicos y anfteros

Organo Mercuriales
Colorantes
Cloro y Compuestos clorados
Aldehdos

Desinfectantes y/o Esterilizantes

Oxido de Etileno
Compuestos Fenlicos
Acidos y Alcalis

Formaldehdo:
Se utilizan las pastillas de paraformaldehido, las cuales pueden disponerse en el
fondo de una caja envueltas en gasa o algodn, que despus pueden ser
expuesta al calor para un rpida esterilizacin (accin del gas formaldehdo).
Tambin pueden ser usadas en Estufas de Formol, llamadas tambin de formalina,
que son cajas de doble fondo, en cuya base se colocan las pastillas y se calienta

hasta los 60 C y pueden esterilizar materiales de ltex, goma, plsticos, etc.

Las pastillas de formalina a temperatura ambiente esterilizan en 36 hs.
RADIACIN:
Su accin depende de:
El tipo de radiacin

El tiempo de exposicin

La dosis
Radiaciones Ionizantes:
Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los cidos nucleicos,
estructuras proteicas y lipdicas, y componentes esenciales para la viabilidad de
los microorganismos.
Tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales termolbiles
(termosensibles) como jeringas
descartables, sondas, etc. Se utilizan a escala industrial por sus costos.
Rayos Ultravioleta:
Afectan a las molculas de DNA de los microorganismos. Son escasamente
penetrantes y se utilizan para superficies, se utilizan para la esterilizacin en
quirfanos.
Rayos Gamma:
Su empleo esta basado en los conocimientos sobre la energia atomica. Este tipo
de esterilizacin se aplica a productos o materiales termolbiles y de gran
importancia en el campo industrial. Puede esterilizar antibiticos, vacunas,
alimentos, etc.
Control de calidad: La correcta esterilizacin se puede controlar mediante dos
mtodos, siendo el segundo el ms seguro.
Indicadores: Cintas comerciales que se colocan en el paquete o caja a esterilizar,
que viran de color, cuando se alcanzan las temperaturas adecuadas para la
esterilizacin.
Se describe la composicin de los llamados "testigos de esterilizacin" preparadas
por sustancias qumicas.
1- Mezcla de Demande:
Safranina............... 0,01 g.
Benzonaftol........... 100,00 g.
sta mezcla se colorea de rojo cuando sufre una temperatura de 110 C.
2- Mezcla de Grard:
Fucsina................ 1 g.
Benzonaftol...........250 g.
Esta mezcla toma un color rojo rub a 110 C.
3.
Mezcla de Grard
4.

Verde Brillante......... 1 g.
Acetanilida............100 g.

Esta mezcla es azul a la temperatura ordinaria, a 115 C toma un color verde

oscuro)
5.
Mezcla de Grard
Metil Violeta...........1 g.
Hidrato de Terpina....100 g.
Mezcla violeta plido que a 117 C se vuelve violeta oscuro.
Las mezclas se colocan en ampollas y se cierran a la lmpara, colocndose junto
con el material a esterilizar.
Pruebas de cultivo:
Tambin pueden colocarse grmenes vivos, especialmente esporulados y los que
presentan mayor resistencia como el bacilus subtilis o el b. Mesentericus de la
papa (tambin responsable de la filamentacin en el pan), esterilizndose
conjuntamente con el material para luego sembrar una suspensin de los
grmenes para observarse en agar nutritivo a las 24 Hs. Si existe o n desarrollo
de colonias.