INTRODUO

Segundo TRABULSI,2008 a identificao de bactrias baseia-se na

anlise morfolgica da clula bacteriana, nas caracteristicas culturais,
fisiolgicas, serolgicas, aco patognica e caracteristicas moleculares. A
forma da bactria, observada ao microscpio aps colorao diferencial, a
forma da colnia obtida aps cultura em meio slido apropriado, a capacidade
de metabolizao de substratos particulares, so alguns dos indicadores
utilizados na identificao de uma bactria.
Um teste bioquimico utilizado para distinguir uma dada espcie, pode
no ser significativo na identificao de uma outra espcie. Assim o facto da
Escherichia coli fermentar a lactose com produo de gs, constitui um teste
importante para distinguir esta bactria de outros microrganismos gram (-)s
com forma de bastonete. Esta reaco particular importante entre as
bactrias entricas, mas sem significado para outros grupos de bactrias. No
caso do gn. Streptococcus , um coccus, o teste da catalase importante para
o distinguir do gn. Staphylococcus, pois este ltimo produz a enzima catalase,
enquanto que o Streptococcus no a produz. Este ltimo teste no tem
qualquer aplicao na distino do grupo Escherichia-Enterobacter pois todos
so catalase (+)s.
A familia Enterobacteriaceae inclui vrias bactrias gram (-)s com forma
de bastonete curto. Estas bactrias podem ser identificadas atravs de vrios
testes de fermentao de diversos acares, uma tcnica demorada e com
custos elevados. Por isso se desenvolveram mtodos de identificao mais
rpidos, multitestes miniaturizados como o sistema API 20E (BioMrieux) e o
Enterotubo da Roche, os quais so teis na identificao das bactrias
entricas. Para outros grupos de bactrias existem tambm testes API
apropriados bem como testes desenvolvidos por outras empresas
(SOUSA,2000).
- Prova de Voges-Proskauer
O objetivo determinar a capacidade dos microrganismos produzirem
produtos finais no cidos ou neutros, como o acetilmetilcarbinol, a partir dos
cidos orgnicos que resultam da metabolizao da glicose. Efetua-se tambm
no meio MR - VP (Methyl Red, Voges - Proskauer).
A adio do reagente de Barritts (soluo 40% KOH e soluo de naftol em etanol absoluto) permite detectar a presena de acetilmetilcarbinol
(acetona) que percursor da sntese de 2,3 butanediol, pois ocorre a formao
de um complexo rosa/vermelho que d essa cor ao meio de cultura. O
desenvolvimento de uma cor rosa/vermelha na cultura, 15 minutos aps a
adio do reagente de Barritts representa uma prova positiva. A ausncia
dessa cor uma prova negativa.

- Prova da utilizao do Citrato

Permite diferenciar microrganismos atendendo sua capacidade para
usar o citrato como nica fonte de carbono. Efetua-se no meio de citrato ou
meio de Simmons. Na ausncia de glicose ou lactose fermentveis, alguns
microrganismos so capazes de usar o citrato como nica fonte de carbono
para produzir energia. Esta capacidade depende da presena de citrato
permease que facilita o transporte do citrato para o microrganismo. Uma vez
dentro da clula o citrato degradado pela enzima citrase, produzindo cido
oxalactico e acetato. Estes produtos so depois convertidos enzimaticamente
em cido pirvico e CO2.
O meio de Simmons contm citrato de sdio como nica fonte de
carbono, NH4+ como fonte de azoto e o indicador de pH, azul de bromotimol.
Esta prova feita em tubos em rampa, uma vez que o O 2 necessrio para a
utilizao do citrato. Quando o microrganismo remove o citrato do meio e o
oxida, ocorre libertao de CO2. Durante esta reaco o meio torna-se alcalino,
pois o CO2 gerado combina-se com sdio (fornecido pelo citrato de sdio) e
gua para formar carbonato de sdio, que um produto alcalino. A presena de
carbonato de sdio faz aumentar o pH e virar o indicador de pH do meio de
verde para azul forte.
Aps incubao, as culturas citrato positivo so identificadas pela
presena de crescimento, na superfcie da rampa, acompanhado de colorao
azul no meio de cultura. Nas culturas citrato negativas a cor do meio mantmse verde e no apresentam crescimento no meio de cultura.
- Prova do Vermelho de Metilo
Tem como objectivo determinar a capacidade dos microrganismos para
oxidar a glicose com produo e manuteno de concentraes altas de
produtos finais cidos. Efetua-se no meio MR - VP (Methyl Red, Voges Proskauer).
A glicose o mais importante substrato oxidado por todos os
microrganismos intestinais para a produo de energia. No entanto, os
produtos finais deste processo variam, dependendo do equipamento
enzimtico presente na bactria. Apesar de todos os microrganismos intestinais
fermentarem a glicose com produo inicial de cidos orgnicos, h uns (ex.
Escherichia coli) que mantm um pH de 4 at ao fim da incubao, enquanto
outros (ex. Enterobacter aerogenes) durante o ltimo perodo de incubao
convertem esses cidos a produtos finais no cidos como o etanol e a
acetona, resultando assim num pH mais elevado (pH 6) no final da incubao.
Nesta prova o indicador de pH, vermelho de metilo, detecta a presena
de grandes concentraes de produtos finais cidos, pois tem um ponto de
viragem baixo. A pH 4, o vermelho de metilo vira para vermelho, o que indica
uma reaco positiva. Quando o pH 6, apesar de ainda ser cido, como h
menos ions hidrognio, o indicador muda para amarelo e uma prova
negativa.

OBJETIVO

O objetivo desse relatrio demonstrar atravs de teste bioqumicos a

presena ou ausncia de diferentes espcies de bactrias.
Tais testes so feitos devido a semelhana quanto ao formato e as
caractersticas da clula desses microrganismos.

RESULTADOS E DISCUSSO
Bactria
Pseudomonas
Staphylococcus Aureus
Escherichia Coli

Citrato
Positivo (+)
Negativo
(-)
Negativo
(-)

Teste IMVIC
Vermelho de Metila (6 gotas)
Positivo (+)

Voges Proskauer
Negativo (-)

Positivo (+)

Negativo (-)

Positivo (+)

Negativo (-)

Para o teste do citrato, o qual o meio o citrato de Simons, apenas as

bactrias pseudmonas foram capazes de utilizar o citrato como nica forma
de carbono para produzir energia. Nesse meio houve o aumento do pH, ou
seja, o mesmo ficou acima de 7, onde tal meio mudou da cor verde para a cor
azul.
J para o teste vermelho de metila, o qual foi utilizado o caldo Clark,
todas as bactrias (pseudmonas, S. Aureus e E. Coli) foram capazes de
fermentar a glicose, formando vrios cidos carboxlicos, tais como o cido
frmico, cido actico, cido ltico e cido succnico. Nesse meio houve a
diminuio do pH, ou seja, o mesmo ficou abaixo de 5, onde tal meio ficou com
sua superfcie vermelha.
E por ltimo para o teste de Voges Proskauer, o qual foi utilizado o caldo
Clark, onde nenhuma das bactrias (pseudmonas, S. Aureus e E. Coli) foram
capazes de fermentar a glicose formando a acetona acetilmetilcarbinol. Tal
acontecimento foi devido falta de oxidao, quando o hidrxido de potssio
(KOH) foi adicionado na presena de oxignio (O2). Nesse caso, no houve
mudana de cor e o meio continuou amarelado.

REFERNCIAS

Sousa, J.C.F. (2000). Enterobacteriaceae. Em Microbiologia. Vol. II, ed.

Ferreira, W.F.C. & Sousa, J.C.F. Lidel, Lisboa: 99-109.
TRABULSI, L.R. e cols. Microbiologia. 8 ed. Rio de Janeiro: Atheneu,
2008.
TORTORA, G.R. Microbiologia. 8 Ed. Porto Alegre: Artmed, 2005.