SKRIPSI
SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi
ii
iii
iv
ABSTRAK
Nama
Program Studi
Judul
vi
ABSTRACT
Name
Program Study
Title
This present study was conduct to investigate the antioxidant activity and
determine the total phenolic and flavonoid content of crude extract and fractions
(n-hexane, ethyl acetate and methanol) of fruit of Medinilla speciosa Blume
(Melastomataceae). Antioxidant activity was carried out by DPPH (2,2-diphenyl1-picrylhydrazyl) method. Total phenolic and flavonoid content were measured by
Folin-Ciocalteu and AlCl3 reagents respectively, which results were expressed in
gallic acid equivalent (mg of GAE/g of extract) and rutin equivalent (mg of RE/g
of sample). The result showed that ethyl acetate fraction gave the highest
antioxidant activity with IC50 value 20.43 g/mL, followed by methanol fraction,
crude extract and n-hexane fraction with IC50 value 46.65, 48.24 and 292.44
g/mL respectively, compared with positive control ascorbic acid (17.52 g/mL).
Ethyl acetate fraction gave the highest amount of total phenolic content with 580
GAE/g of extract followed by crude extract, methanol fraction and n-hexane
fraction with 408, 388 and 86 mg GAE/g of extract respectively. Ethyl acetate
fraction exhibited the highest amount of total flavonoid content with 184 mg RE/g
extract, followed by methanol fraction, crude extract and n-hexane fraction with
164, 156 and 82 mg RE/g extract respectively. These finding showed that fruit of
M.speciosa is potential for the development of an antioxidant agent.
Keywords : Medinilla speciosa Blume, antioxidant activity, DPPH, total phenolic
content, total flavonoid content.
vii
KATA PENGANTAR
Alhamdulillah, segala puji bagi Allah SWT atas segala nikmat dan
karunia-Nya sehingga saya dapat menyelesaikan penelitian dan penulisan skripsi.
Serta shalawat dan salam untuk baginda Nabi Muhammad SAW yang membawa
petunjuk bagi umat manusia, semoga kelak kita mendapatkan syafaat beliau.
Skripsi dengan judul Penentuan Kandungan Fenolat dan Flavonoid Total
Serta Uji Aktivitas Antioksidan dari Buah Parijoto (Medinilla speciosa Blume)
ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat untuk memperoleh gelar sarjana
farmasi di Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan
Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta.
Saya menyadari bahwa tanpa bantuan dan bimbingan dari berbagai pihak,
dari masa perkuliahan hingga penyusunan skripsi ini terasa sangat sulit bagi
penulis untuk menyelesaikan skripsi ini. Oleh karena itu, penulis mengucapkan
terima kasih kepada :
1. Prof.
Dr.
H.
Chairul,
Apt
selaku
pembimbing
pertama
dan
Ibu Dr. Azrifitria, M.Si., Apt selaku pembimbing kedua, yang memiliki
andil besar dalam proses penelitian dan penyelesaian skripsi saya ini,
semoga segala bantuan dan bimbingan bapak dan Ibu mendapat imbalan
yang lebih baik di sisi-Nya.
2. Kementrian Agama RI selaku pemberi beasiswa, sehingga penulis dapat
menempuh pendidikan di Program Studi Farmasi Fakultas kedokteran dan
Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta.
3. Dr. Bambang Sunarko selaku Kepala Pusat Penelitian Biologi Lembaga
Ilmu Pengetahuan Indonesia beserta staf atas penggunaan segala fasilitas
dan bantuannya selama penelitian.
4. Prof. Dr. (hc) dr. M.K. Tadjudin, Sp. And. selaku Dekan Fakultas
Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif
Hidayatullah Jakarta.
5. Drs. Umar Mansur, M.Sc., Apt selaku Ketua Program Studi Farmasi
Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif
Hidayatullah Jakarta.
viii
6. Bapak dan Ibu staf pengajar dan karyawan yang telah memberikan
bimbingan dan bantuan selama saya menempuh pendidikan di Program
Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitar Islam
Negerri Syarif Hidayatullah Jakarta.
7. Bapak H. Sapuan panutan dalam keluarga dan Ibu Hj. Indarti wanita
terhebat dalam hidup ini yang selalu memberikan doa, dukungan serta
nasihat. Serta Kak Khoirul Roziqin dan adik-adikku Anam, Firman, Anis
yang selalu memberikan keceriaan dalam kehidupan ini.
8. Bapak Rubawi dan keluarga yang telah membantu mengumpulkan sampel
buah parijoto (Medinilla speciosa Blume) dari Gunung Muria Kudus.
9. Rekan-rekan CSS MoRA 2009 (Community Santri Scholar of Ministry of
Religious Affair), teman-teman Farmasi 2009, teman-teman PIM
LOVERS, terkhusus untuk sahabat-sahabat terbaik Dila, Dhea, Nuyung,
Omi, Fina, Mila, Fitri, Fatimah, Wali, Ziza, Lulu, Ferry, Emma, Neneng,
Ainul, Dyah, Cucut, Nurul, Zaky, Gianti, Hani, Arif, yang selalu
memberikan keceriaan dalam masa perkuliahan hingga penulisan skripsi
ini selesai.
10. Laboran yang telah membantu keseharian penulis selama penelitian di
laboraturium LIPI, Teh Lina dan Teh Ana.
ix
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ..........................................................................................
HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS .............................................
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ..............................................
HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................
ABSTRAK ..........................................................................................................
ABSTRACT ........................................................................................................
KATA PENGANTAR ........................................................................................
HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH ...................
DAFTAR ISI .......................................................................................................
DAFTAR GAMBAR ..........................................................................................
DAFTAR TABEL ..............................................................................................
DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................
ii
iii
iv
v
vi
vii
viii
x
xi
xiii
xiv
xv
1
1
3
3
3
4
4
6
7
9
11
15
18
20
23
23
24
24
25
25
25
25
26
26
28
xi
32
32
32
32
33
33
36
38
40
xii
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Buah parijoto (Medinilla speciosa Blume) .........................................
Gambar 2. Struktur kimia 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil .........................................
Gambar 3. Struktur kimia asam galat ...................................................................
Gambar 4. Kerangka dasar flavonoid....................................................................
Gambar 5. Struktur kimia rutin .............................................................................
Gambar 6. Reaksi uji mayer .................................................................................
Gambar 7. Reaksi uji dragendorff ........................................................................
Gambar 8. Mekanisme reaksi pembentukan garam flavilium .............................
Gambar 9. Reaksi hidrolisis saponin dalam air ....................................................
Gambar 10. Skema instrumentasi spektrofotometer UV-VIS ..............................
Gambar 11. Kurva aktivitas antioksidan vitamin C ..............................................
Gambar 12. Kurva aktivitas antioksidan ekstrak kasar, fraksi n-heksan, fraksi
etil asetat dan fraksi metanol .........................................................
Gambar 13. Nilai IC50 dari vitamin C, ekstrak kasar, fraksi n-heksan, fraksi
etil asetat dan fraksi metanol ..........................................................
Gambar 14. Kurva standar asam galat .................................................................
Gambar 15. Kandungan fenolat total ekstrak kasar, fraksi n-heksan, fraksi
etil asetat dan fraksi metanol ..........................................................
Gambar 16. Kurva standar rutin ...........................................................................
Gambar 17. Kandungan flavonoid total ekstrak kasar, fraksi n-heksan, fraksi
etil asetat dan fraksi metanol ..........................................................
Gambar 18. Reaksi DPPH dengan antioksidan ....................................................
Gambar 19. Reaksi folin-ciocalteu dengan senyawa fenol ..................................
Gambar 20. Aktivitas antioksidan dari vitamin C ................................................
Gambar 21. Aktivitas antioksidan dari ekstrak kasar ...........................................
Gambar 22. Aktivitas antioksidan dari fraksi n-heksan .......................................
Gambar 23. Aktivitas antioksidan dari fraksi etil asetat ......................................
Gambar 24. Aktivitas antioksidan dari fraksi metanol .........................................
Gambar 25. Kandungan senyawa fenolat dari asam galat ...................................
Gambar 26. Kandungan senyawa fenolat dari ekstrak kasar ...............................
Gambar 27. Kandungan senyawa fenolat dari fraksi n-heksan ............................
Gambar 28. Kandungan Senyawa fenolat dari fraksi etil asetat ..........................
Gambar 29. Kandungan senyawa fenolat dari fraksi metanol .............................
Gambar 30. Kandungan senyawa flavonoid dari rutin .........................................
Gambar 31. Kandungan senyawa flavonoid dari ekstrak kasar ...........................
Gambar 32. Kandungan senyawa flavonoid dari fraksi n-heksan ........................
Gambar 33. Kandungan Senyawa flavonoid dari fraksi etil asetat ......................
Gambar 34. Kandungan Senyawa flavonoid dari fraksi metanol ........................
Gambar 35. Penapisan fitokimia alkaloid ............................................................
Gambar 36. Penapisan fitokimia saponin .............................................................
Gambar 37. Penapisan fitokimia flavonoid ..........................................................
Gambar 38. Penapisan fitokimia tannin ...............................................................
Gambar 39. Penapisan fitokimia antrakuinon ......................................................
Gambar 40. Penapisan fitokimia glikosida ..........................................................
xiii
5
10
13
13
15
15
16
16
17
21
33
35
35
36
37
38
39
43
46
64
64
64
65
65
66
66
66
66
66
67
67
67
67
67
68
68
69
69
70
70
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1. Berat masing-masing fraksi n-heksan, etil asetat dan metanol .......... 32
Tabel 2. Hasil uji Penapisan fitokimia ekstrak kasar, fraksi n-heksan, fraksi
etil asetat dan fraksi metanol ............................................................. 32
Tabel 3. Hasil uji susut pengeringan ekstrak kasar dan fraksi metanol ........... 33
Tabel 4. Aktivitas antioksidan dari vitamin C .................................................. 33
Tabel 5. Aktivitas antioksidan dari ekstrak kasar, fraksi n-heksan, fraksi
etil asetat dan fraksi metanol ............................................................. 34
Tabel 6. Nilai absorbansi standar asam galat.................................................... 36
Tabel 7. Kandungan fenolat total dari ekstrak kasar, fraksi n-heksan, fraksi
etil asetat dan fraksi metanol ............................................................. 37
Tabel 8. Nilai absorbansi standar rutin ............................................................ 38
Tabel 9. Kandungan Flavonoid Total dari ekstrak kasar, fraksi n-heksan,
fraksi etil asetat dan fraksi metanol ..................................................... 39
xiv
DAFTAR LAMPIRAN
xv
BAB 1
PENDAHULUAN
1.1
Latar belakang
Indonesia adalah negara tropis yang memiliki keanekaragaman hayati
terbesar kedua di dunia setelah Brazil (Farida et al., 2012). Kekayaan alam
tumbuhan di Indonesia terdiri atas 30.000 jenis tumbuhan dari total 40.000 jenis
tumbuhan di dunia, dimana 940 jenis diantaranya merupakan tumbuhan berkhasiat
obat (jumlah ini merupakan 90% dari jumlah tumbuhan obat di kawasan Asia)
(Nugroho, 2010).
Tanaman obat digunakan sebagai sumber obat hampir pada semua
kebiasaan di dunia. Selama dekade terakhir, penggunaan obat tradisional telah
berkembang. Hal ini terus dilakukan tidak hanya untuk perawatan kesehatan bagi
masyarakat miskin di negara-negara berkembang tetapi juga di negara-negara di
mana obat konvensional digunakan dalam perawatan kesehatan nasional
(Kamarian et al., 2013). Menurut WHO, obat-obatan herbal melayani kebutuhan
kesehatan sekitar 80% dari populasi dunia, terutama bagi jutaan orang di daerah
pedesaan di negara-negara berkembang (WHO, 2001).
Dewasa ini, dunia kedokteran banyak membahas mengenai radikal bebas
(free radical). Radikal bebas terlibat dalam penyakit degeneratif seperti
patogenesis diabetes, kerusakan hati, inflamasi, kanker, gangguan jantung,
gangguan syaraf dan proses penuaan (Onkar et al., 2012). Oleh sebab itu,
dibutuhkan antioksidan yang dapat membantu melindungi tubuh dari serangan
radikal bebas dan meredam dampak negatifnya (Winarsi, 2011). Antioksidan
merupakan senyawa yang dapat menghambat radikal bebas sehingga dapat
mencegah penyakit yang disebabkan oleh radikal bebas tersebut (Gutteridge,
2000). Sebagian besar antioksidan diproduksi secara sintetik. Beberapa contoh
antioksidan sintetik yang beredar adalah BHA (butylated hydroxyanisole), BHT
(butylated hydroxytoulene) dan TBHQ (tertiary butylated hydroquinone). Akan
tetapi antioksidan sintetik memiliki efek toksik dibandingkan dengan antioksidan
alami (Shirmila et al., 2013). Beberapa efek yang ditimbulkan oleh BHT, BHA
1
dan TBHQ adalah seperti alergi, asma, radang hidung, sakit kepala, kemerahan,
urtikaria, masalah pada mata dan perut, serta penurunan kesadaran (Race, 2009).
Baru-baru ini terjadi peningkatan pesat dalam pencarian antioksidan alami untuk
menggantikan antioksidan sintetik. Terdapat penelitian bahwa tumbuhan yang
mengandung senyawa metabolit sekunder berupa flavonoid dan fenol berguna
sebagai penangkap radikal bebas, yang memiliki aktivitas sebagai antioksidan
(Nishantini et al., 2012).
Famili Melastomataceae memiliki spesies sekitar 4500 dalam 150-166
genus (Maria et al., 2012). Telah dilaporkan beberapa jenis tumbuhan famili
Melastomataceae yang memiliki aktivitas sebagai antioksidan seperti Melastoma
malabathricum (Faravani, 2009) dan Osbeckia stellata (Suman, 2013). Salah
satu
1.2
Rumusan masalah
Berdasarkan latar belakang tersebut, maka dibuat rumusan masalah
sebagai berikut :
1.
Apakah ekstrak kasar metanol, fraksi non polar, fraksi semi polar dan
fraksi polar dari buah M. speciosa memiliki aktivitas antioksidan?
2.
Berapakah kadar fenolat total dari ekstrak kasar metanol, fraksi non polar,
fraksi semi polar dan fraksi polar dari buah M .speciosa?
3.
Berapakah kadar flavonoid total dari ekstrak kasar metanol, fraksi non
polar, fraksi semi polar dan fraksi polar dari buah M .speciosa?
1.3
Tujuan Penelitian
Dari rumusan masalah di atas, tujuan penelitian adalah sebagai berikut :
1.
2.
Mengetahui kadar fenolat total dari ekstrak kasar metanol, fraksi non
polar, fraksi semi polar dan fraksi polar dari buah M. speciosa.
3.
Mengetahui kadar flavonoid total dari ekstrak kasar metanol, fraksi non
polar, fraksi semi polar dan fraksi polar dari buah M. speciosa.
1.4
Manfaat Penelitian
Manfaat yang dapat diambil dari penelitian ini adalah :
1.
2.
BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA
2.1
2.1.1 Taksonomi
Klasifikasi tanaman parijoto adalah sebagai berikut :
Kingdom
: Plantae (Tumbuhan)
Kelas
Sub Kelas
: Rosidae
Ordo
: Myrtales
Famili
: Melastomataceae
Genus
: Medinilla
Spesies
(www.plantamor.com)
2.1.2 Pertelaan
Parijoto merupakan tanaman perdu dengan tinggi 1 - 2 m; batang bulat,
kulit dengan lapisan gabus jika tua, bergerigi, kasar, putih kecoklatan; daun
tunggal, bersilang berhadapan, tangkai pendek, bulat, lunak, warna ungu
kemerahan, helaian daun bentuk lonjong, pangkal dan ujung runcing, tepi rata,
panjang 10 - 20 cm, lebar 5 - 15 cm, pertulangan melengkung, permukaan atas
licin, berwarna hijau, permukaan bawah kasar, warna hijau kelabu; bunga
majemuk, di ketiak daun, sempurna, berkelamin ganda, kelopak 5 helai, ujung
runcing, pangkal berlekatan, panjang 3 - 8 mm, warna ungu tua, benang sari 2 kali
lipat jumlah mahkota, kepala sari berupa kuncup membengkok, warna merah
keunguan, kepala putik duduk di atas bakal buah, kepala putik bulat, ungu,
mahkota lepas, 5 helai, bentuk kuku, panjang 5-8 mm, warna merah muda; buah
buni, bulat, bagian ujung berbenjol bekas pelekatan kelopak, diameter 5-8 mm,
4
warna merah keunguan; biji bulat, jumlah banyak, kecil, putih; akar serabut, putih
kotor (Anonim, 2013).
2.2
Antioksidan
Antioksidan adalah senyawa yang dapat menunda, menghambat atau
mencegah oksidasi lipid atau molekul lain dengan menghambat inisiasi atau
propagasi dari reaksi rantai oksidatif (Javanmardi et al., 2003). Antioksidan
merupakan senyawa pemberi elektron (electron donor) atau reduktan. Senyawa
ini memiliki berat molekul kecil, tetapi mampu menginaktivasi berkembangnya
reaksi oksidasi, dengan cara mencegah terbentuknya radikal. Antioksidan juga
merupakan senyawa yang dapat menghambat reaksi oksidasi, dengan mengikat
radikal bebas dan molekul yang sangat reaktif. Akibatnya, kerusakan sel akan
dihambat (Winarsi, 2011).
Secara umum, antioksidan dikelompokkan menjadi 2, yaitu antioksidan
enzimatis dan non-enzimatis. Antioksidan enzimatis misalnya enzim superoksida
dismutase (SOD), katalase dan glutation peroksidase. Antioksidan non-enzimatis
dibagi dalam dua kelompok yaitu antioksidan larut lemak, seperti tokoferol,
karotenoid, flavonoid, quinon, dan bilirubin. Antioksidan non enzimatis yang
kedua adalah antioksidan larut air, seperti asam askorbat, asam urat, protein
pengikat logam, dan protein pengikat heme. Antioksidan enzimatis dan nonenzimatis tersebut bekerja sama memerangi aktivitas senyawa oksidan dalam
tubuh. Terjadinya stres oksidatif dapat dihambat oleh kerja enzim-enzim
antioksidan dalam tubuh dan antioksidan non-enzimatik (Winarsi, 2011).
Berdasarkan mekanisme kerjanya, antioksidan digolongkan menjadi 3
kelompok, yaitu antioksidan primer, sekunder, dan tersier (Winarsi, 2011).
a. Antioksidan primer (Antioksidan Endogenus)
Antioksidan primer meliputi enzim superoksida dismutase (SOD),
katalase, dan glutation peroksidase (GSH-Px). Seuatu senyawa dikatakan sebagai
antioksidan primer apabila dapat memberikan atom hidrogen secara cepat kepada
senyawa radikal, kemudian radikal antioksidan yang terbentuk segera berubah
menjadi senyawa yang lebih stabil. Enzim superoksida dismutase (SOD), katalase,
dan glutation peroksidase menghambat pembentukan radikal bebas, dengan cara
memutus reaksi berantai (polimerisasi), kemudian mengubahnya menjadi produk
yang lebih stabil.
Radikal Bebas
Radikal bebas (free radical) adalah suatu senyawa atau molekul yang
mengandung satu atau lebih elektron tidak berpasangan pada orbital luarnya.
Adanya elektron yang tidak berpasangan menyebabkan senyawa tersebut sangat
reaktif mencari pasangan, dengan cara menyerang dan mengikat elektron molekul
yang berada di sekitarnya. Senyawa radikal bebas juga dapat mengubah suatu
molekul menjadi suatu radikal. Apabila senyawa radikal baru tersebut bertemu
dengan molekul lain, akan terbentuk radikal baru lagi, dan seterusnya sehingga
akan terjadi reaksi berantai (chain reactions) (Winarsi, 2011).
Radikal bebas sangat penting untuk setiap proses biokimia dan merupakan
bagian penting dari proses aerob dan metabolisme (Tiwari, 2001). Selama
berjalannya metabolisme, terjadi pembentukan beberapa oksidan kuat, baik di sel
darah maupun di kebanyakan sel tubuh lainnya (Murray et al., 2009). Radikal
bebas atau yang disebut Reactive Oxygen Species (ROS) yang akan menyerang
molekul lain disekitarnya sehingga menyebabkan reaksi berantai terjadi dan
menghasilkan radikal bebas yang beragam, seperti anion superoksida (O 2-) dan
hidrogen peroksida (H2O2), hidroksi bebas (OH), asam hipoklorous (HOCl) dan
Fe+++ + OH- + OH
R1 + H2O
R2 + R1-H
R3 + R2-H
c. Tahap terminasi, yaitu bereaksinya senyawa radikal dengan radikal lain atau
dengan penangkap radikal, sehingga potensi propagasinya rendah.
R1 + R1
R2 + R1
R2 + R2
R1-R1
R2-R1
R2-R2 dst
Terdapat dua sumber radikal bebas, yaitu sumber endogen yang mana
radikal bebas yang dihasilkan dalam tubuh sebagai racun oleh produk yang dari
fungsi normal dalam tubuh dan sumber eksogen yang mana produksi radikal
bebas disebabkan oleh rangsangan eksternal (Vimala et al., 2003 ).
Sumber endogen berasal dari dalam tubuh sendiri. Di dalam tubuh, radikal
bebas sering dihasilkan selama proses aerobik, seperti metabolisme, reaksi
biokimia dalam sel, detoksifikasi di hati dan pembentukan energi oleh
mitokondria. Radikal bebas diproduksi di mitokondria selama metabolisme aerob
ketika oksigen digunakan untuk mengoksidasi makanan yang kita makan untuk
menghasilkan energi. Radikal bebas dan hidrogen peroksida juga dihasilkan oleh
tubuh sebagai bagian dari sistem kekebalan tubuh untuk menyerang dan
membunuh bakteri yang menyerang. Dengan demikian, tubuh tidak membutuhkan
dan menggunakan beberapa radikal bebas. Namun, radikal bebas yang berlebih
0 1
0
100 %
10
Fe(CN)64- + H+ + A=O
+ Fe2+
Fe3+
R
Radikal
Fe3+ + 6CNS-
Fe(CNS)63Merah
11
metabolit sekunder berupa flavonoid dan fenol berguna sebagai penangkap radikal
bebas, yang memiliki aktivitas sebagai antioksidan (Nishantini et al., 2012).
2.5.1
Senyawa Fenolat
Fenol adalah senyawa dengan gugus OH yang terikat pada cincin aromatik
12
tumbuhan antara lain sebagai transport elektron pada fotosintesis dan pengaturan
enzim tertentu. Selain itu juga berfungsi memacu perkecambahan biji (Robinson,
1995).
13
zat
antimikroba,
antivirus,
antiinsektisida,
dan
antioksidan
(flavonoid),
1,2-diarilpropan
(isoflavonoid),
1,1-diarilpropan
14
Jalur Shikimat
(cincin B)
C2-C2-C2
C6-C3-C6
Jalur Asetat-Malonat
(cincin A)
15
2.6
Penapisan Fitokimia
Tujuan utama dari penapisan fitokimia adalah menganalisis tumbuhan
Alkaloid
Alkaloid adalah senyawa nitrogen (N) yang merupakan hasil metabolit
putih.
Diperkirakan
endapan
kalium-
alkaloid. Pada uji alkaloid dengan pereaksi Mayer, diperkirakan nitrogen pada
alkaloid akan bereaksi dengan ion logam K+ dari kalium tetraiodomerkurat
(II) membentuk kompleks kalium-alkaloid yang mengendap. Perkiraan reaksi
yang terjadi pada uji Mayer :
16
Flavonoid
Flavonoid adalah senyawa polifenol yang mengandung C15 terdiri atas
dua inti fenolat yang dihubungkan dengan tiga satuan karbon. Struktur umum
flavonoid juga digambarkan sebagai deretan senyawa C6-C3-C6 (Guevera, 1985).
Pendeteksian adanya senyawa flavonoid dapat dilakukan dengan metode
wilstater sianidin. Uji Wilstater sianidin biasa digunakan untuk mendeteksi
senyawa yang mempunyai inti alfa-benzopiron. Warna merah yang terbentuk
pada pada uji Wilstater disebabkan karena terbentuknya garam flavilium
(Achmad, 1986).
Saponin
Saponin adalah senyawa aktif permukaan yang kuat, dapat menimbulkan
busa jika dikocok dengan air dan pada konsentrasi rendah dapat menyebabkan
hemolisis sel darah merah pada tikus. Identifikasi saponin dapat dilakukan dengan
mengocok ekstrak bersama air hangat di dalam tabung reaksi dan akan timbul
17
busa yang dapat bertahan lama, setelah penambahan HCl 2N busa tidak hilang.
Timbulnya busa pada uji Forth menunjukkan adanya glikosida yang
mempunyai kemampuan membentuk buih dalam air yang terhidrolisis menjadi
glukosa dan senyawa lainnya (Guevera, 1985). Reaksi pembentukan busa
pada uji saponin ditunjukkan pada gambar berikut :
Tanin
Istilah tanin pertama kalinya digunakan untuk bahan dari tumbuhan
18
reaksi warna spesifik dengan FeCl3, tetapi tidak memberikan endapan dengan
gelatin.
e.
Antrakuinon
Antrakuinon mungkin dijumpai baik dalam bentuk glikosida dengan ikatan
Glikosida
Glikosida merupakan senyawa alami yang terdapat pada berbagai jenis
Metode Ekstraksi
Menurut Ketut Ristiasa dalam Parameter Standar Umum Ekstrak
Tumbuhan Obat (2000) yang dimaksud dengan ekstraksi adalah proses penarikan
kandungan senyawa kimia dari simplisia nabati atau simplisia hewani
menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut
19
diuapkan dengan menggunakan alat yang sesuai. Berikut adalah beberapa cara
ekstraksi dengan menggunakan pelarut.
2.7.1 Cara Dingin
a.
Maserasi
Maserasi merupakan cara penyarian sederhana. Maserasi dilakukan dengan
cara merendam serbuk simplisisa dalam cairan penyari dengan beberapa kali
pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruang (kamar). Cairan penyari akan
menembus dinding sel atau masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat
aktif, zat aktif tersebut akan larut karena adanya perbedaan konsentrasi antara
larutan zat aktif di dalam sel dengan yang di luar sel. Larutan yang lebih pekat (di
dalam sel) didesak keluar sel, masuk ke dalam larutan di luar sel. Peristiwa
tersebut berulang sehingga terjadi keseimbangan konsentrasi antara larutan di luar
sel dan di dalam sel. Keuntungan cara penyarian dengan maserasi adalah cara
pengerjaan dan peralatan yang digunakan sederhana dan mudah diusahakan
(Ristiasa, 2000).
b.
Perkolasi
Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai
Refluks
Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya,
selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan
adanya pendingin balik. Umumnya dilakukan pengulangan proses pada residu
pertama sampai 3-5 kali sehingga dapat termasuk proses ekstraksi sempurna
(Ristiasa, 2000).
20
b.
Soklet
Sokletasi merupakan ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru
umumnya dilakukan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinu dengan jumlah
pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik (Ristiasa, 2000).
c.
Digesti
Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinu) pada
temperatur yang lebih tinggi dari temperatur ruangan, yaitu secara umum
dilakukan pada temperatur 40-500C (Ristiasa, 2000).
d.
Infus
Infus adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas air
(bejana infus tercelup dalam penangas air mendidih, temperatur terukur 96-980C)
selama waktu tertentu (15-20 menit). Infus pada umumnya digunakan untuk
menarik atau mengekstraksi zat aktif yang larut dalam air dan bahan-bahan nabati.
Hasil dari ekstrak ini menghasilkan zat aktif yang tidak stabil dan mudah tercemar
oleh kuman dan kapang, sehingga ekstrak yang diperoleh dengan infus tidak boleh
disimpan lebih dari 4 jam (Ristiasa, 2000).
e.
Dekok
Dekok adalah infus pada waktu yang lebih lama (> 30 menit) dan
Spektrofotometer UV-Vis
Spektrofotometer UV-VIS yang terdiri dari dua komponen utama yaitu
21
A = Absorbansi sampel
a = Absorbtivitas molar
b = Tebal kuvet
c = Konsentrasi sampel
2.8.2 Instrumentasi
Spektrofotometer UV-VIS pada umumnya tersusun dari dua komponen,
yaitu spektrometer (mengukur dan menghasilkan spektra dengan panjang
gelombang tertentu atau sinar monokromatis) dan fotometer (pengukur daya kuat
sinar monokromatis yang ditransmisikan atau diabsorpsi) (Day & Underwood,
2002).
Berikut ini skema instrumentasi Spektrofotometer UV-VIS :
a.
Sumber Cahaya
Sumber cahaya mempunyai fungsi untuk memberikan energi pada daerah
lampu
wolfarm
dengan
diatas
375
nm,
sedangkan
22
Monokromator
Monokromator adalah suatu alat yang berfungsi untuk mengubah cahaya
Kuvet
Kuvet adalah tempat disimpannya larutan contoh yang akan diukur
serapannya yang diletakkan pada jalan cahaya dari minokromator. Pada saat
cahaya monokromatis melalui kuvet, terjadi penyerapan sejumlah tertentu cahaya,
sedangkan sebagian lainnya diteruskan ke detektor (Day & Underwood, 2002).
Kuvet visibel dan UV yang khas mempunyai panjang lintasan 1 cm, ada juga yang
mempunyai ketebalan 0,1 cm sampai 10 cm atau bahkan lebih (Willard et al.,
1988).
d.
Detektor
Detektor berfungsi untuk mengubah energi cahaya yang ditransmisikan
atau diteruskan oleh kuvet, yang jatuh mengenainya menjadi suatu besaran yang
terukur. Detektor yang ideal harus mempunyai kepekaan tinggi, dan responnya
stabil pada daerah panjang gelombang pengamatan (Day & Underwood, 2002).
e.
Rekorder
Rekorder merupakan bagian akhir dalam alat ini. Sinyal listrik yang
BAB 3
METODE PENELITIAN
3.1
Alur Penelitian
Buah Segar
Buah diblender
Buah ditimbang
Maserasi dengan metanol
Ampas
Ekstrak kasar
+ 100ml MeOH 50 %
Ekstraksi dg n-heksan 100 ml hingga fase n-heksan jernih
Fraksi n-Heksan
Fraksi Metanol-air
Ekstraksi dg etil asetat 100 ml
hingga fase etil asetat jernih
Fraksi Etil Asetat
Fraksi Metanol
Spektrofotometer Visible
Analsisi Data
Kandungan fenolat
total dinyatakan dalam
ekuivalen asam galat
(mg GAE/g ekstrak)
Kandungan flavonoid
total dinyatakan dalam
ekuivalen rutin (mg
RE/g ekstrak)
23
IC50
24
3.2
3.3.1
Bahan Uji
Bahan uji yang digunakan adalah buah parijoto (Medinilla speciosa
Blume) dengan spesifikasi warna merah muda keunguan dan rasa asam sepat yang
berasal dari Desa Japan Kecamatan Dawe Kabupaten Kudus, Jawa Tengah yng
diambil pada bulan Januari. Bahan sebelumnya telah dideterminasi di Herbarium
Bogoriense, Pusat Penelitian Biologi LIPI, Bogor, Jawa Barat.
3.3.2
Bahan Kimia
Adapun bahan kimia yang digunakan meliputi: DPPH (2,2-difenil-1-pikril-
hidrazil) (SIGMA), NaNO2 5%, AlCl3 10%, NaOH 1M, Asam Galat, Na2CO3
20%, pereaksi Folin-Ciocalteu (MERCK), Vitamin C (Phytotechnology
Laboratoreis), Rutin (Nakarai Chemicals LTD), Asam galat, pereaksi dragendorff,
pereaksi Mayer, HCl pekat, HCl 2N, H2SO4 pekat, H2SO4 1M, Magnesium, NaCl
(10%), FeCl3 (1%), amoniak (25%), aquades, n-heksan teknis, etil asetat teknis,
metanol teknis dan metanol pro analisis.
3.3.3
Alat
Alat-alat yang digunakan yaitu peralatan gelas standar, mikropipet
25
3.4
Cara Kerja
rotary evaporator dengan suhu 450C. Maserasi dilakukan hingga maserat yang
diperoleh jernih. Total metanol yang digunakan untuk ekstraksi sebanyak 5000
mL Ekstrak yang diperoleh merupakan ekstrak kasar (crude extract).
3.4.3 Partisi Ekstrak Kasar
Ekstrak kasar ditimbang sebanyak 57,99 gam lalu dilarutkan kembali
dengan 100 mL metanol 50%, kemudian dimasukkan ke dalam corong pisah,
ditambah 100 mL n-heksan, dikocok beberapa saat lalu didiamkan hingga
terpisah, fase n-heksan di bagian atas dan fase metanol di bagian bawah. Partisi
dilakukan berkali-kali hingga fase n-heksan tidak berwarna. Total n-heksan yang
digunakan sebanyak 800 mL. Fase n-heksan dikumpulkan dan dipekatkan dengan
rotary evaporator tanpa menggunakan pemanasan hingga diperoleh ekstrak fraksi
n-heksan.
Fase metanol dipartisi kembali dengan etil asetat (perbandingan volume
1:1) dalam corong pisah. Partisi dilakukan berkali-kali hingga fase etil asetat tidak
berwarna lagi. Total etil asetat yang digunakan sebanyak 1500 mL. Fase etil
asetat dikumpulkan, dipekatkan dengan rotary evaporator dengan suhu 400C
hingga diperoleh ekstrak fraksi etil asetat.
26
Fase metanol yang telah dipisahkan dari etil asetat dipekatkan dengan
rotary evaporator suhu 500C. Ekstrak yang diperoleh lalu ditimbang.
3.4.4 Uji Susut Pengeringan
Parameter susut pengeringan dilakukan terhadap ekstrak kasar dan fraksi
metanol. Masing-masing ekstrak ditimbang sebanyak 1 gram ke dalam cawan
yang telah dipanaskan pada oven suhu 1050C selama 30 menit dan telah ditara.
Kemudian dimasukkan ke dalam oven dan dikeringkan pada suhu 1050C selama
30 menit atau hingga bobot tetap.
3.4.5 Penapisan Fitokimia
Penapisan fitokimia dilakukan terhadap ekstrak kasar, fraksi n-heksan,
fraksi etil asetat dan fraksi metanol. Uji penapisan fitokimia yang dilakukan
meliputi uji alkaloid, flavonoid, saponin, tannin, antrakuinon, dan glikosida.
Prosedur masing-masing pengujian adalah sebagai berikut (Guevara, 1985) :
1.
Identifikasi Alkaloid
Ekstrak kasar, fraksi n-heksan, fraksi etil asetat dan fraksi metanol masing-
Identifikasi Flavonoid
27
Identifikasi Saponin
Uji Forth
Ekstrak kasar, fraksi n-heksan, fraksi etil asetat dan fraksi metanol masingmasing ditimbang sebanyak 10 mg, lalu ditambahkan 10 mL air panas.
Selanjutnya dikocok kuat selama 10 detik, akan terbentuk buih yang mantap
setinggi 1-10 cm selama 10 menit. Kemudian ditambahkan 1 tetes HCl 2N dan
diamati.
4.
Identifikasi Tannin
Identifikasi Glikosida
Metode Keller-Kiliani
Ekstrak kasar, fraksi n-heksan, fraksi etil asetat dan fraksi metanol masingmasing ditimbang sebanyak 10 mg lalu ditambah 3 mL pereaksi FeCl3 kemudian
diaduk dan pindahkan campuran kedalam tabung reaksi. Diteteskan 1 mL larutan
asam sulfat pekat melalui dinding tabung reaksi. Biarkan campuran beberapa lama
sehingga terbentuk warna dari merah kecoklatan, yang mungkin berubah menjadi
biru atau lembayung. Perubahan tersebut menunjukkan reaksi positif terhadap 2deoksi-gula.
28
6.
Identifikasi Antrakuinon
Metode Borntragers
Ekstrak kasar, fraksi n-heksan, fraksi etil asetat dan fraksi metanol masingmasing ditimbang sebanyak 10 mg, lalu ditambahkan 5 mL benzen. Campuran
dibagi menjadi 2 tabung reaksi, salah satunya sebagain kontrol negatif dan yang
lainnya ditambahkan 5 mL amoniak 25%. Apabila terjadi warna merah muda pada
lapisan larutan amonia menunjukkan positif adanya senyawa antrakuinon.
3.4.6
hingga 50 mL.
4.
29
yang ditentukan
melalui persamaan :
% Inhibisi =
5.
x 100
Dihitung IC50
IC50 adalah konsentrasi yang dibutuhkan untuk mereduksi DPPH sebesar
50a
b
kandungan
fenolat
total
berdasarkan
metode
yang
dikembangkan oleh Orak et al. (2006) dan penetapan kandungan flavonoid total
berdasarkan metode yang dikembangkan oleh Zou et al. (2004).
3.4.6.1 Penentuan Kandungan Fenolat Total
1.
(1:1) hingga 5,0 mL (Konsentrasi larutan 1.000 g/mL). Dipipet 125, 250, 375,
30
500, 625, 750, 875, dan 1000 L ke dalam labu ukur dan ditambah
metanol:aquades (1:1) hingga 5,0 mL dan didapatkan konsentrasi sampel 25, 50,
75, 100, 125, 150, 175, dan 200 g/mL.
3.
(Konsentrasi larutan 1.000 g/mL). Dipipet 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400,
450, dan 500 L ke dalam labu ukur dan ditambah metanol hingga 5,0 mL dan
didapatkan konsentrasi sampel 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, dan 100 g/mL.
3.
hingga 25 mL.
4.
31
5.
6.
Analisis Data
Data yang diperoleh dianalisis dengan uji-t
antara kandungan fenolat dan flavonoid total terhadap aktivitas antioksidan dari
ekstrak kasar metanol, fraksi n-heksan, fraksi etil asetat dan fraksi metanol dari
buah M. speciosa. Nilai P < 0.05 menunjukkan hubungan yang signifikan.
BAB 4
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1
Hasil Penelitian
4.1.1
Berat (gram)
2,61
9,81
43,96
Randemen (%)*
4,51
16,92
75,79
32
33
4.1.3
metanol.
Tabel 3. Hasil uji susut pengeringan ekstrak kasar dan fraksi metanol
No.
Sampel
Bobot Awal
Bobot Akhir
Susut Pengeringan
1.
Ekstrak Kasar
1,0058
0,7758
22,86 %
2. Fraksi metanol
1,0062
0,8432
16,30 %
4.1.4
(DPPH) dan aktivitas antioksidan dinyatakan dengan nilai IC50. Kontrol positif
yang digunakan dalam penelitian ini adalah vitamin C.
Tabel 4. Aktivitas antioksidan dari vitamin C
Konsentrasi
Rerata
Sampel
(g/mL)
Absorbansi
(x)
Vitamin C
Rerata
IC50
% Inhibisi
(g/mL)
(y)
0,7976
6,04
10
0,6497
23,46
15
0,4873
42,59
20
0,3456
59,28
25
0,1879
77,86
30
0,0577
93,20
17,52
% inhibisi
y = 3.518x - 11.16
R = 0.999
10
15
20
25
30
35
Konsentrasi (g/mL)
34
Ekstrak kasar, fraksi n-heksan, fraksi etil asetat dan fraksi metanol diuji
aktivitas antioksidan diperoleh nilai absorbansi. Nilai absorbansi tersebut dihitung
aktivitas penghambatannya (% inhibisi) dibandingkan dengan absorbansi kontrol
negatif sehingga diperoleh nilai IC50 dari masing-masing sampel.
Tabel 5. Aktivitas antioksidan dari ekstrak kasar, fraksi n-heksan, fraksi etil asetat
dan fraksi metanol
Konsentrasi
Rerata
Rerata
Persamaan
IC50
Sampel
(g/mL)
% Inhibisi
Absorbansi
Regresi
(g/mL)
(x)
(y)
20
0,7184
18,82
30
0,6114
31,35
y = 1,0395 x -
40
0,5012
43,36
0,154
50
0,4047
54,26
r = 0,990
60
0,3598
59,34
20
0,8456
4,46
30
0,8373
5,39
y = 0,1692 x +
40
0,8273
6,50
0,518
50
0,8060
8,93
r = 0,979
60
0,7864
11,15
20
0,4119
47,30
30
0,2985
61,80
y = 1,1048 x +
40
0,2080
73,38
27,422
50
0,1227
84,30
r = 0,992
60
0,0680
91,29
20
0,6929
21,70
Fraksi
30
0,5852
33,87
y = 1,0062 x +
Metanol
40
0,4896
44,67
3,056
50
0,4011
54,67
r = 0,995
60
0,3397
61,61
Ekstrak
Kasar
Fraksi nheksan
Fraksi Etil
Asetat
48,24
292,44
20,43
46,65
35
100
90
80
% inhibisi
70
60
50
Ekstrak Kasar
40
Fraksi n-heksan
30
20
Fraksi Metanol
10
0
20
30
40
Konsentrasi (g/mL)
50
60
Gambar 12. Kurva Aktivitas Antioksidan Ekstrak Kasar, Fraksi n-heksan, Fraksi
Etil Asetat dan Fraksi Metanol
292.44
300
250
Ekstrak Kasar
(g/mL)
200
Fraksi n-heksan
fraksi etil asetat
150
fraksi metanol
100
48.24
50
vitamin C
46.65
20.43
17.52
0
IC50
Gambar 13. Nilai IC50 dari vitamin C, ekstrak kasar, fraksi n-heksan, fraksi etil
asetat dan fraksi metanol
36
4.1.5
Rerata
(g/mL)
Absorbansi
(x)
(y)
25
0,0415
50
0,0737
75
0,1122
100
0,1448
125
0,1710
150
0,2080
175
0,2346
200
0,2644
Sampel
Asam Galat
Persamaan
Regresi
y = 0,001 x +
0,012
2
R = 0,998
0.3
y = 0.001x + 0.012
R = 0.998
0.25
Absorbansi
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0
50
100
150
200
250
Konsentrasi (g/mL)
37
Nilai absorbansi dari ekstrak kasar, fraksi n-heksan, fraksi etil asetat dan
fraksi metanol diplotkan terhadap kurva standar asam galat dan dihitung
kandungan senyawa fenolatnya. Kandungan fenolat total dalam tumbuhan
dinyatakan dalam GAE (gallic acid equivalent) yaitu jumlah kesetaraan miligram
asam galat dalam 1 gram sampel.
Tabel 7. Kandungan fenolat total dari ekstrak kasar, fraksi n-heksan, fraksi etil
asetat dan fraksi metanol
Konsentrasi
Rerata
Kandungan Fenolat
Sampel
(g/mL)
Absorbansi
Total
(x)
(y)
Ekstrak Kasar
100
0,0528
408
Fraksi n-Heksan
100
0,0206
86
100
0,0700
580
Fraksi Metanol
100
0,0508
388
580
600
500
(mg GAE/g ekstrak)
408
388
400
Ekstrak Kasar
fraksi n-heksan
300
200
86
100
0
Kandungan Fenolat Total
Gambar 15. Kandungan Fenolat Total ekstrak kasar, fraksi n-heksan, fraksi etil
asetat dan fraksi metanol
38
4.1.6
Rutin
Rerata
(g/mL)
Absorbansi
(x)
(y)
10
0,0136
20
0,0220
30
0,0334
40
0,0422
50
0,0524
60
0,0622
70
0,0745
80
0,0833
90
0,0929
100
0,1024
Persamaan
Regresi
y = 0,001 x +
0,002
2
R = 0,999
0.12
y = 0.001x + 0.002
R = 0.999
Absorbansi
0.1
0.08
0.06
0.04
0.02
0
0
20
40
60
80
100
120
Konsentrasi (g/mL)
39
Nilai absorbansi dari ekstrak kasar, fraksi n-heksan, fraksi etil asetat dan
fraksi metanol diplotkan terhadap kurva standar rutin dan dihitung kandungan
flavonoid totalnya. Kandungan flavonoid total dalam tumbuhan dinyatakan dalam
RE (rutin equivalent) yaitu jumlah kesetaraan miligram rutin dalam 1 gram
sampel.
Tabel 9. Kandungan Flavonoid Total dari ekstrak kasar, fraksi n-heksan, fraksi etil
asetat dan fraksi metanol
Kandungan
Konsentrasi
Rerata
Flavonoid Total
Sampel
(g/mL)
Absorbansi
(mg RE/g
(x)
(y)
ekstrak)
Ekstrak Kasar
100
0,0176
156
Fraksi n-heksan
100
0,0102
82
100
0,0204
184
Fraksi Metanol
100
0,0184
164
184
200
180
164
156
160
140
Ekstrak Kasar
120
100
Fraksi n-heksan
82
80
Fraksi Metanol
60
40
20
0
Kandungan Flavonoid Total
Gambar 17. Kandungan Flavonoid Total ekstrak kasar, fraksi n-heksan, fraksi etil
asetat dan fraksi metanol
40
4.2
Pembahasan
Ekstraksi buah parijoto dilakukan dengan metode maserasi menggunakan
41
pada pelarut etil asetat lebih kecil dibandingkan dengan pelarut metanol namun
lebih besar dari pelarut n-heksan, hal ini mungkin adanya gugus etoksi yang
terdapat
pada struktur kimia etil asetat. Adanya gugus etoksi tersebut yang
menyebabkan etil asetat dapat membentuk ikatan hidrogen dengan senyawa yang
terdapat pada sampel. Ikatan hidrogen yang terbentuk pada pelarut etil asetat
lebih lemah dibandingkan dengan ikatan hidrogen yang terbentuk pada pelarut
metanol sehingga rendemen pada fraksi etil asetat lebih sedikit (Tursiman, 2012).
Dan rendemen pada fraksi n-heksan paling sedikit karena sampel merupakan buah
dimana buah sedikit mengandung senyawa non polar.
Uji penapisan fitokimia dilakukan terhadap ekstrak kasar buah parijoto,
fraksi n-heksan, fraksi etil asetat dan fraksi metanol menggunakan metode yang
dikembangkan oleh Guevera (1985). Penapisan fitokimia yang dilakukan adalah
untuk mengetahui
42
asetat dan fraksi metanol. Tannin yang terdapat pada buah ini adalah tannin
terhidrolisis.
Pengujian adanya saponin dalam ekstrak digunakan uji Forth. Saponin
merupakan senyawa aktif permukaan yang dapat membentuk busa apabila
dikocok. Dari hasil penapisan fitokimia, diketahui bahwa buah parijoto memiliki
kandungan saponin. Tetapi setelah dipartisi, saponin hanya terlihat pada fraksi etil
asetat dan fraksi metanol.
Glikosida merupakan senyawa yang terbentuk dari gugus non-gula
(aglikon) dan gugus gula (glikon). Pada uji glikosida ini dilakukan berdasarkan
gugus gulanya dengan metode Keller-Kiliani. Dari uji glikosida, didapatkan
bahwa buah parijoto mengandung glikosida. Tetapi pada fraksi n-heksan tidak
terlihat adanya glikosida.
Dari penapisan fitokimia fraksi n-heksan tidak terdapat alkaloid,
flavonoid, saponin, tannin, antrakuinon dan glikosida. Hal ini dikarenakan
senyawa-senyawa tersebut lebih banyak terpartisi ke pelarut semi polar ke polar
sehingga pada fraksi non polar tidak terdapat senyawa-senyawa tersebut
(Harbone, 1987).
Ekstrak kasar dan fraksi metanol dilakukan uji susut pengeringan untuk
mengetahui adanya kandungan air maupun sisa pelarut di dalam ekstrak. Pada
ekstrak kasar perlu dilakukan uji susut pengeringan karena sampel yang
digunakan merupakan sampel segar sehingga perlu dicek kandungan air yang
terdapat dalam ekstrak. Dari hasil uji susut pengeringan, ekstrak kasar diperoleh
susut pengeringan sebesar 22,86%. Sedangkan pada fraksi metanol dilakukan uji
susut pengeringan karena pada fraksi metanol terdapat kandungan air di
dalamnya. Hasil uji susut pengeringan, diperoleh nilai susut pengeringan sebesar
16,19% pada fraksi metanol.
Uji aktivitas antioksidan dari ekstrak kasar, fraksi n-heksan, fraksi etil
asetat dan fraksi metanol digunakan metode radical scavenger atau penangkal
radikal bebas (DPPH). Metode DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil) dilakukan
berdasarkan kemampuan antioksidan untuk menghambat radikal bebas dengan
mendonorkan atom hidrogen kepada DPPH, yang merupakan radikal bebas yang
stabil pada suhu kamar. Dipilih metode DPPH karena merupakan metode yang
43
cepat, sederhana dan murah untuk mengukur aktivitas antioksidan (Prakash et al.,
2001).
Reaksi DPPH dengan antioksidan akan menetralkan radikal bebas dari
DPPH dan membentuk DPPH tereduksi. Adapun reaksinya adalah sebagai beikut
+ R-H
+ R
(a)
(b)
Gambar 18. Reaksi DPPH dengan antioksidan, (a) Difenilpikrilhidrazil (bentuk
radikal), (b) Difenilpikrilhidrazin (non radikal) [ Sumber : Molyneux, 2004 ]
Hasil analisis kuantitatif terhadap sampel uji yang memiliki aktivitas
antioksidan dapat dilihat penurunan intensitas warna DPPH menjadi pudar.
Senyawa DPPH berwarna ungu karena adanya delokalisasi elektron pada atom
nitrogen menjadi kuning setelah direaksikan dengan senyawa antioksidan. Hal ini
dikarenakan ketika antioksidan mampu mendonorkan hidrogen yang bereaksi
dengan radikal DPPH, reaksi ini akan memberikan peningkatan kompleks non
radikal dan menurunkan radikal DPPH yang ditandai dengan terbentuknya warna
kuning. Penurunan absorbansi diukur menggunakan spektofotometer Vis dengan
panjang gelombang 516 nm dengan vitamin C sebagai kontrol positif (Reynetson,
2007).
Vitamin C digunakan sebagai kontrol positif dibuat dengan konsentrasi 5,
10, 15, 20, 25 dan 30 g/mL. Vitamin C merupakan suatu antioksidan yang larut
dalam air. Memiliki rumus molekul C6H8O6 yang diketahui memiliki aktivitas
antioksidan yang besar karena bersifat sebagai reduktor. Sifat reduktor tersebut
disebabkan oleh mudah terlepasnya atom-atom hidrogen pada gugus hidroksil
yang terikat pada atom C2 dan atom C3 (atom-atom C pada ikatan rangkap),
sehingga radikal bebas dapat dengan mudah menangkapnya dan membentuk
radikal bebas tereduksi yang stabil (Soewoto, 2001).
Setelah pengukuran didapat data absorbansi kemudian dihitung persen
inhibisinya. Persen inhibisi adalah kemampuan suatu sampel untuk menghambat
aktivitas radikal bebas yang berhubungan dengan konsentrasi suatu sampel.
Persen inhibisi didapatkan dari perbedaan serapan antara absorbansi kontrol
44
45
tubuh manusia. Adanya kandungan kimia pada tumbuhan seperti fenol, flavonoid
dan tannin, mengindikasikan kemungkinan adanya aktivitas antioksidan dan
aktivitas antioksidan ini dapat membantu mencegah terjadinya penyakit melalui
aktivitas penangkalan radikal bebas (Meenakshi et al., 2012).
Pengujian kandungan senyawa fenolat total merupakan dasar dilakukan
pengujian aktivitas antioksidan, karena diketahui bahwa senyawa fenolat berperan
dalam mencegah terjadinya peristiwa oksidasi. Fenolat total ekstrak buah M.
speciosa pada penelitian ini diukur dengan menggunakan prinsip Folin-Ciocalteau
yang didasarkan pada reaksi oksidasi reduksi. Reagen Folin-Ciocalteau digunakan
karena senyawa fenolik dapat bereaksi dengan Folin membentuk larutan berwarna
yang dapat diukur absorbansinya. Prinsip pengukuran kandungan fenolat dengan
reagen Folin-Ciocalteau adalah terbentuknya senyawa kompleks berwarna biru
yang dapat diukur pada panjang gelombang 765 nm. Pereaksi ini mengoksidasi
fenolat (garam alkali) atau gugus fenolik-hidroksi mereduksi asam heteropoli
(fosfomolibdat-fosfotungstat) yang terdapat dalam pereaksi Folin-Ciocalteau
menjadi suatu kompleks molibdenum-tungsten. Senyawa fenolik bereaksi dengan
reagen Folin-Ciocalteau hanya dalam suasana basa agar terjadi disosiasi proton
pada senyawa fenolik menjadi ion fenolat. Untuk menciptakan kondisi basa
digunakan Na2CO3 20%. Warna biru yang terbentuk akan semakin pekat, setara
dengan konsentrasi ion fenolat yang terbentuk; artinya semakin besar konsentrasi
senyawa fenolik maka semakin banyak ion fenolat yang akan mereduksi asam
heteropoli (fosfomolibdat-fosfotungstat) menjadi kompleks molibdenum-tungsten
sehingga warna biru yang dihasilkan semakin pekat (Apsari & Susanti, 2011).
Namun reagen ini tidak hanya mengukur total fenol, akan tetapi bereaksi dengan
zat pereduksi lain. Kemungkinan ada komponen lain yang dapat bereaksi dengan
reagen seperti gula atau asam askorbat (Saeed et al., 2012).
Asam galat
46
Senyawa Fenolat
Ion Fenolat
H3(PMo13O40)
H3PO4(MoO3)13
atau
H2(PMo13O40)
Pereaksi Folin-Ciocalteu
Kompleks molybdenum-blue
Senyawa Fenol
Kuinon
47
M.speciosa sebesat 156 mg RE/g ekstrak. Hal ini menunjukkan bahwa senyawa
flavonoid lebih banyak terekstrak pada semipolar ke polar. Dari hasil yang didapat
menunjukkan fraksi etil asetat mempunyai kadar fenolat dan flavonoid total yang
tertinggi dibandingkan dengan kedua fraksi lainnya.
Hubungan kandungan flavonoid total dengan aktivitas antioksidan
menunjukkan nilai korelasi r = 0,985 (P = 0,015) yang berarti terdapat hubungan
yang signifikan antara kandungan flavonoid total dengan aktivitas antioksidan dari
ekstrak buah M. speciosa. Hal ini sesuai dengan pada penelitian-penelitian
sebelumnya yang menyatakan bahwa kandungan total flavonoid berpengaruh pada
aktivitas antioksidan dari ekstrak bahan alam (Bala et al., 2011). Semakin tinggi
kadar flavonoid dari ekstrak kasar, fraksi n-heksan, fraksi etil asetat dan fraksi
metanol aktivitas antioksidannya semakin tinggi.
Sedangkan hasil analisa statistik antara kandungan fenolat total dengan
aktivitas antioksidan dari ekstrak kasar metanol, fraksi n-heksan, fraksi etil asetat
dan fraksi metanol-air didapatkan nilai korelasi r = 0,945 (P = 0,055) yang berarti
tidak ada hubungan yang signifikan antara kandungan fenolat total dengan
aktivitas antioksidan dari ekstrak buah M. speciosa. Tidak ada hubungan antara
fenolat total dengan aktivitas antioksidan adalah terlihat pada fraksi metanol dan
ekstrak kasar. Kandungan fenolat total lebih tinggi pada ekstrak kasar tetapi
aktivitas antioksidan lebih tinggi pada fraksi metanol. Kemungkinan bukan hanya
fenol yang bereaksi dengan reagen Folin-Ciocalteau akan tetapi bereaksi dengan
zat pereduksi lain (Saeed et al., 2012).
Berdasarkan hasil yang diperoleh dapat diketahui bahwa kadar senyawa
flavonoid berperan dalam menentukan besarnya aktivitas dari buah M. speciosa.
Walaupun demikian, adanya korelasi antara aktivitas antioksidan dengan kadar
flavonoid total dapat saja dihasilkan oleh adanya kesalahan atau galat yang ada
saat menentukan aktivitas maupun kadar seperti yang telah dijelaskan
sebelumnya. Selain itu pula telah diketahui bahwa aktivitas antioksidan suatu
ekstrak tumbuhan tidak hanya terbatas pada senyawa fenolat dan flavonoid saja.
Oleh karena itu, tidak ada hubungan yang sederhana antara kadar fenolat dan
flavonoid total ketika membandingkan aktivitas antioksidan antar ekstrak
tumbuhan (Akowuah et al., 2004).
BAB 5
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1
Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan, maka dapat
Dari empat ekstrak, terdapat tiga ekstrak yang aktif sebagai antioksidan
yaitu fraksi etil asetat, fraksi metanol dan ekstrak kasar dengan nilai IC50
masing-masing 20,34 g/mL, 46,65 g/mL dan 48,24 g/mL. ketiga
ekstrak tersebut dinyatakan sangat aktif sebagai antioksidan.
2.
3.
5.2
Saran
Saran yang dapat diberikan untuk penelitian selanjutnya adalah :
1.
2.
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut berupa isolasi senyawa aktif proses
pemurnian ekstrak fraksi etil asetat dengan cara kolom ataupun
menggunakan HPLC.
48
DAFTAR PUSTAKA
eupatorin,
3hydroxy-5,6,7,4-tetramethoxyflavone
and
49
50
(lodd) Blume Leaves. Asian Journal of Natural & Applied Sciences 1 (4) :
16- 21
Farnsworth, N.R. 1996. Biological and Phytochemical Screening of Plant, Jour.
Pharm. Soi., 55 (3) : 225-265
Guevera, B. Q., Recio, B.V. 1985. Phytochemical, Microbiological and
Pharmacological Screening of Medicinal Plants. Manila : UST Printing
Office
Gurav, S., Nilambari Deshkar, Vijay Gulkari, Nandkishore Duragkar, Arun Patil.
2007. Free Radical ScavengingActivity of Polygala Chinensis Linn.
Pharmacologyonline 2 : 245-253
Halliwell, B and Gutteridge, J.M.C. 2000. Free Radical in Biology and Medicine.
Oxford University Press. New York
Harborne, J.B. 1987. Metode Fitokimia, Penuntun Cara Modern Menganalisis
Tumbuhan. Penerjemah: Padmawinata, K. Terbitan kedua. Bandung:
Penerbit Institut Teknologi Bogor
Huang, C. J., Tang, K. W., Shu. C. C., Chao. Y. C. 2005. Identification of an
Antifungal Chitinase from a Potential Biocontrol Agent, Bacillus cereus.
Journal of Biochemistry and molecular Biology 38 : 82-88.
Hui YH. 2006. Handbook of Food Science, Technology, and
Engineering,
51
Maria, C., Buta Erszebet, Hor Denisa. 2012. Medinilla: An Exotic and Attractive
Indoor Plant With Great Value. Journal of Horticulture, Forestry and
Biotechnology. 16 (2) : 9-12
Marinova, G., Batcharov, V. 2011. Evaluation of The Methods For Determination
of The Free Radical Scavenging Activity By DPPH. Journal of
Agricultural Science, 17 (No 1) 2001, 11-24.
Markham, K. R. 1998. Cara Mengidentifikasi Flavonoid. Penerjemah: Dr.
Kosasih Padmawinata. ITB. Bandung. hlm. 27-35.
Marliana, S. D., Venty Suryanti, Suyono. 2005. Skrining Fitokimia dan Analisis
Kromatografi Lapis Tipis Komponen Kimia Buah Labu Siam (Sechium
edule jacq. Swartz.) Dalam ekstrak etanol. Jurnal Biofarmasi 3 (1): 26-31
Meenakshi, S., Umayaparvath, S., Arumugam, M. and Balasubramanian, T. 2012.
In vitro antioxidant properties and FTIR analysis of two seeweeds of Gulf
of Mannar. Asian Pac. J. Trop. Biomed., 2: 66 - 70
Middleton, E. C., Kandaswami, Theoharides. 1998. The effects of plant
flavonoids on mammalian cells: implications for inflammation, heart
disease, and cancer. Pharmacological Reviews 52:673-751.
Molyneux, Philip. 2004. The use of the stable free radical diphenylpicrylhydrazyl
(DPPH) for estimating antioxidant Activity. J. Science and Technology 26
(2) : 211-219
Nishanthini, A., A. Agnel Ruba, V.R. Mohan. 2012. Total Phenolic, Flavonoid
Contents and In Vitro Antioxidant Activity of Leaf of Suaeda monoica
Forssk ex. Gmel (Chenopodiaceae). International Journal of Advanced
Life Sciences (IJALS) 1 (5) : 34-43
Nugroho, Ignatius Adi. 2010. Lokakarya Nasional Tanaman Obat Indonesia.
Apforgen News Letter Edisi 2
Onkar, Pradnya., Jitendra Bangar and Revan Karodi. 2012. Evaluation of
Antioxidant activity of traditional formulation Giloy satva and
hydroalcoholic extract of the Curculigo orchioides Gaertn. Journal of
Applied Pharmaceutical Science 02 (06); 2012: 209-213
52
53
Peran
Radikal
Bebas.
Bagian
Biokimia
Fakultas
54
55
56
10 ppm
15 ppm
20 ppm
25 ppm
30 ppm
0,84890,7976
0,8489
0,84890,6497
0,8489
0,84890,4873
0,8489
0,84890,3456
0,8489
0,84890.,879
0,8489
x 100% = 6,04 %
x 100% = 23,46 %
x 100% = 42,59 %
x 100% = 59,28 %
x 100% = 77,86 %
0,84890,0577
0,8489
x 100% = 93,20 %
y = 3,518x-11,164
50 = bx + a
(x) IC50 =
IC50 =
50a
b
50+11.64
3,518
= 17,52 g/mL
2. Ekstrak Kasar
20 ppm
30 ppm
40 ppm
50 ppm
60 ppm
0,8851 0,7184
0,8851
0,8851 0,6114
0,8851
0,88510,5012
0,8851
0,8851 0,4047
0,8851
0,8851 0,3598
0,8851
x 100% = 18,82 %
x 100% = 31,35 %
x 100% = 43,36 %
x 100% = 54,26 %
x 100% = 59,34 %
57
Y = 1,0395x - 0,154
50+0,154
(x) IC50 =
IC50 =
1,0395
502,843
0,95
= 48,24 g/mL
3. Fraksi n-heksan
20 ppm
30 ppm
40 ppm
50 ppm
60 ppm
0,8851 0,8456
0,8851
0,8851 0,8373
0,8851
0,8851 0,8273
0,8851
0,8851 0,8060
0,8851
0,8851 0,7864
0,8851
x 100% = 4,46 %
x 100% = 5,39 %
x 100% = 6,50 %
x 100% = 8,93 %
x 100% = 11,15 %
y = 0,1692x + 0,518
(x) IC50 =
IC50 =
50a
b
500,518
0,1692
= 292,64 g/mL
30 ppm
40 ppm
50 ppm
60 ppm
0,7816 0,4119
0,7816
0,7816 0,2985
0,7816
0,7816 0,2080
0,7816
0,7816 0,1227
0,7816
0,7816 0,0680
0,7816
x 100% = 47,30 %
x 100% = 61,80 %
x 100% = 73,38 %
x 100% = 84,30 %
x 100% = 91,29 %
y = 1,1048x+27,422
(x) IC50 =
IC50 =
50a
b
5027,422
1,1048
= 20,43g/mL
58
5. Fraksi Metanol
20 ppm
30 ppm
40 ppm
50 ppm
60 ppm
0,8851 0,6929
0,8851
0,8851 0,5852
0,8851
0,8851 0,4896
0,8851
0,8851 0,4011
0,8851
0,8851 0,3397
0,8851
x 100% = 21,70 %
x 100% = 33,87 %
x 100% = 44,67 %
x 100% = 54,67 %
x 100% = 61,61 %
y = 1,0062 x + 3,056
(x) IC50 =
IC50 =
50a
b
503,056
1,0062
= 46,65 g/mL
59
0,0528 0,012
0,001
Fenol total =
=
= 40,8 ppm
( )
40,8 0,005
0,005
2. Fraksi n-heksan
y = 0,001x + 0,012
0,0206 = 0,001 x + 0,012
x=
0,0206 0,012
0,001
Fenol total =
=
= 8,6 ppm
( )
8,6 0,005
0,005
10 = 86 mg GAE/g ekstrak
0,0700 0,012
0,001
Fenol total =
=
= 58 ppm
( )
58 0,005
0,005
60
4. Fraksi metanol
y = 0,001x + 0,012
0,0508 = 0,001 x + 0,012
x=
0,0508 0,012
0,001
Fenol total =
=
= 38,8 ppm
( )
38,8 0,005
0,005
61
0,0176 0,002
0,001
Fenol total =
=
= 15,6 ppm
( )
15,6 0,005
0,005
2. Fraksi n-heksan
y = 0,001x + 0,002
0,0102 = 0,001 x + 0,002
x=
0,0102 0,002
0,001
Fenol total =
=
= 8,2 ppm
( )
8,2 0,005
0,005
10 = 82 mg RE/g ekstrak
0,0204 0,002
0,001
Fenol total =
=
= 18,4 ppm
( )
18,4 0,005
0,005
62
4. Fraksi metanol
y = 0,001x + 0,002
0,0184 = 0,001 x + 0,002
x=
0,0184 0,012
0,001
Fenol total =
=
= 16,4 ppm
( )
16,4 0,005
0,005
63
Correlation
Sig.
Pair 1
-.985
.015
Pair 2
-.945
.055
64
65
66
67
68
35 a. Ekstrak Kasar
35 b. Fraksi n-heksan
35 d. Fraksi metanol
36 d. Fraksi metanol
36 a. Ekstrak Kasar
36 b. Fraksi n-heksan
69
37 a. Ekstrak Kasar
37 b. Fraksi n-heksan
37 d. Fraksi metanol
38 d. Fraksi metanol
38 a. Ekstrak Kasar
38 b. Fraksi n-heksan
70
39 a. Ekstrak Kasar
39 b. Fraksi n-heksan
39 d. Fraksi metanol
40 a. Ekstrak Kasar
40 b. Fraksi n-heksan
40 d. Fraksi metanol