Anda di halaman 1dari 4

REVIEW JURNAL

Quantitative Determination of Luminal and Abluminal Membrane


Distributions of Transporters in Porcine Brain Capillaries by Plasma
Membrane Fractionation and Quantitative Targeted Proteomics

Disusun Oleh :
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.

Sabrina Nur Amalia


Sema Rachmawati
Siwi Vega Dilla
Slamet Nur Sholeh
Vivi Dwi Nur F
Wahyu Setyaningrum
Fauziah Drajat
Ana Pudji Astuti

1041411134
1041411139
1041411143
1041411144
1041411152
1041411153
1041411184
1041411186

PRODI S1 FARMASI
SEKOLAH TINGGI ILMU FARMASI
YAYASAN PHARMASI SEMARANG
2016

REVIEW JURNAL
Quantitative Determination of Luminal and Abluminal Membrane

Distributions of Transporters in Porcine Brain Capillaries by Plasma


Membrane Fractionation and Quantitative Targeted Proteomics

A. PENDAHULUAN
Barrier Darah-Otak (BBB), yang dibentuk oleh kapiler otak sel endotel
dihubungkan melalui persimpangan yang tebal, berfungsi untuk memisahkan jaringan
saraf dari darah. Ini merupakan sistem transportasi vectorial karena ekspresi
terpolarisasi dari berbagai transporter protein, dan sistem ini mengatur pertukaran
endogen dan senyawa eksogen antara otak dan darah.1,2 MDR 1 (MDR1 / P-gp /
ABCB1) dan resistensi protein pada kanker payudara (BCRP / ABCG2), yang
mewakili ATP-binding cassette (ABC) transporter, luminal terlokalisasi di membran
sel-sel endotel kapiler otak di manusia dan hewan pengerat.
Identifikasi lokalisasi transporter di kapiler otak sel endotel dianalisis melalui
metodologi imunohistokimia, meskipun dibatasi oleh ketersediaan antibodi spesifik
yang dibutuhkan untuk memvalidasi lokalisasi protein. Salah satu pendekatan adalah
fraksinasi membran. Metode protein kuantifikasi antibodi bebas menggunakan cairan
kromatografi-mass spectrometry (LC-MS / MS).
Dalam penelitian ini, peneliti menggabungkan dua metodologi, fraksinasi dan
QTAP, untuk mengatasi keterbatasan masing-masing metode. Metodologi ini
memungkinkan untuk mencapai analisis lokalisasi komprehensif protein membran di
BBB dan sel terpolarisasi lain tanpa penggunaan antibodi.

B. ISI

Sampel yang digunakan adalah fraksi membran kapiler otak sel endotel, yang
mewakili tidak lebih dari 0,1% dari volume otak. Penggunaan otak babi disebabkan
babi memiliki risiko menular spongiform encelopathy rendah.
Langkah pertama yang dilakukan yaitu isolasi sampel yang dilakukan dengan
mencincang otak babi yang telah dipisahkan dari meninges dan pembuluh darahnya
kemudian diencerkan dan disentrifugasi berulang hingga diperole fraksi yang kaya
kapiler otak. Sementara itu kandungan protein ditentukan menggunakan uji kit model
DC. Dari 100 gram otak babi tersedia protein 18,8 mg kapiler otak, dan setelah
ultrasentrifugasi tersedia 3,73 mg protein minyak mentah fraksi membran.
Selanjutnya Kuantifikasi Protein Membran menggunakan peptida probe yang
sama untuk transporter manusia. Data normalisasi dilakukan untuk menyelidiki
perbedaan spesies dimana dinyatakan Jumlah protein per mikrogram protein dalam
empat fraksi dinyatakan sebagai ekspresi protein. Persamaannya :

Sementara untuk memperkirakan lokalisasi protein, rasio distribusi luminal


(fL) dan abluminal (FA) untuk protein membran dihitung dengan persamaan (2) dan
(3). Jumlah luminal dan distribusi abluminal rasio (fL + FA) untuk setiap molekul
diperoleh

sebagai

jumlah fL dan fA nilai-nilai dihitung seperti yang ditunjukkan pada Persamaan 4.


fL

(PL / Pu) (Pu1 PA4 - PA1 Pu4) / (PL1 PA4 - PA1 PL4) (2)

fA

(PA / Pu) (Pu4 PL1 - PL4 Pu1) / (PA4 PL1 - PL4 PA1) (3)

fL+fA

(PL / Pu) (Pu1 PA4 - PA1 Pu4) / (PL1 PA4 - PA1


PL4) + (PA / Pu) (Pu4 PL1 - PL4 Pu1) /(PA4 PL1 PL4 PA1) (4)

fL+fA

{Uu1 / (UA1 - UL1) + Uu4 / (UL4 - UA4)} / {UL1 / (UA1


UL1) + UL4 / (UL4 UA4)} (5)

Untuk

menyelidiki

lokalisasi

protein

transporter

di

BBB

dengan

menggunakan analisis QTAP untuk mengukur nilai absolut dari beberapa protein
secara bersamaan dalam membran plasma terfraksinasi dari kapiler otak babi.
Peneliti memilih MDR1 dan ATA2, dimana MDR1 merupakan sistem
transporter untuk L-alanine, L-prolin, glisin, terlokalisir di membrane. GLUT1
merupakan transporter nutrisi. Sementara MCT1 adalah transporter nutrisi lain, yang
memasok badan keton dan laktat dari darah ke otak. Sedangkan FATP1 meupakan
transporter asam lemak. Rasio distribusi juga mengungkapkan lokalisasi luminal dari
OATP3A1 (Tabel 3), yang mengangkut benzilpenisilin dan prostaglandin E2,43
menunjukkan keterlibatan OATP3A1 di transportasi anion organik pada membran
luminal babi BBB. Di kapiler otak babi, pengamatan BCRP-dominan menunjukkan
bahwa substrat dari BCRP akan memiliki permeabilitas relatif lebih rendah pada babi
BBB. Monocarboxylates juga akan menunjukkan permeabilitas rendah pada babi
yang BBB, sebagai ungkapan MCT1 di kapiler otak babi jauh lebih rendah dari yang
di manusia. .
C. KESIMPULAN
Peneliti mengembangkan metode baru untuk menyelidiki lokalisasi membran
transporter pada Barier darah -otak, dengan menggunakan QTAP menduga jumlah
ekspresi protein di membran plasma terfraksinasi yang berlaku untuk berbagai jenis
sel terpolarisasi.