Solucin Sustrato almidn 500 mg/L, en buffer 0.01 M Acetato de sodio y CaCl2 0.003
M (pH 5.6)
Reactivo de yodo 0.01 eq/L de Yodo en HCl 0.02M
Enzima amilasa
Tubos de prueba y pipetas
Centrfuga clnica
Espectrofotmetro o fotocolormetro
Bao de mara a 37 C
Procedimiento
Se montar el siguiente set de trabajo:
Reactivos
1
1B
2
2B
3
3B
4
H2Od
(mL)
0.4 0.4 0.3 0.3 0.2 0.2 0.1
Substrato almidn (mL) 0.1 0.1 0.2 0.2 0.3 0.3 0.4
Enzima (L)
50
50
50
50
Inmediatamente mezcle e incube a 37C por 7.5 min
Solucin de Yodo (mL)
4.5 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5
Enzima (L)
50
50
50
Leer al espectrofotmetro a 640nm
El blanco para el espectrofotmetro se realizar mezclando 0.5mL
de solucin de yodo.
Mg. Carlos M. Santa Cruz C. (santacruzcm@yahoo.es)
4B
0.1
0.4
5
--0.5
50
5B
--0.5
4.5
50
4.5
4.5
50
Page 1
Resultados y Discusin.
A. Anote sus resultados y realice los clculos respectivos.
Tubo
Sustrato
[S]inicial
mL
mg/mL
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
Abs.
[S]final
Vel
1/V
1/S
mg/mL
mg/mL.min
mL.min/mg
mL/mg
Vmax =
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Materiales y Reactivos:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Solucin Sustrato almidn 500 mg/L, en buffer 0.01 M Acetato de sodio y CaCl2 0.003
M (pH 5.6)
Reactivo de yodo 0.01 eq/L de Yodo en HCl 0.02M
Enzima amilasa
Tubos de prueba y pipetas
Centrfuga clnica
Espectrofotmetro o fotocolormetro
Bao de mara a 37 C
Procedimiento:
Se montar el siguiente set de trabajo:
Reactivos
1
1B
2
2B
3
3B
4
H2Od
(L)
90
90
80
80
70
70
60
Substrato almidn (mL) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Enzima (L)
10
20
30
40
Inmediatamente mezcle e incube a 37C por 7.5 min
Solucin de Yodo (mL) 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5
Enzima (mL)
10
20
30
Leer al espectrofotmetro a 640nm
4B
60
0.5
5
50
0.5
50
5B
50
0.5
4.5
40
4.5
4.5
50
Resultados y Discusin:
A. Anote sus resultados y realice los clculos respectivos.
1
2
Enzima
ml
0.01
0.02
[S]inicial
mg/mL
10
10
3
4
5
0.03
0.04
0.05
10
10
10
Tubo
Abs.
[S]final
mg/mL
Vel
mg/mL.min
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BIBLIOGRAFA
1.
2.
Gutirrez R., Ana y Santa Cruz C., C. (1998) Gua de Prcticas Bioqumica.
Universidad Nacional Federico Villarreal.
WIENER LAB. 1995. Vademcum. Edicin Revisada y Actualizada. Rosario-Argentina.
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