2.

Eksperimental
2.1. Bahan
Asam oleat USP-NF (dari hewan dan nabati) yang dibeli dari Croda. (Mill Hall,
Pennsylvania, USA). Asam oleat standar acuan (C18 : 1, kemurnian> 99%) dan lima belas
asam lemak individu, termasuk asam laurat (C12 : 0), asam miristat (C14 : 0), asam
pentadecylic (C15 : 0), asam palmitat (C16 : 0), asam palmitoleat (C16 : 1), asam margaric
(C17 : 0), asam stearat (C18 : 0), asam linoleat (C18 : 2), asam linolenat (C18 : 3), asam
nonadecylic (19 : 0) , asam arachidic (C20 : 0), asam heneicosylic (C21: 0), asam behenic
(C22 : 0), asam tricosylic (C23 : 0) dan asam lignoceric (C24: 0), yang dibeli dari Sigma
Aldrich Co (St. Louis, Missouri, USA). Isopropanol (IPA) dan air Milli-Q yang diperoleh dari
Millipore direct.
Tabel 1 Batas spesifikasi dari profil asam lemak dalam bahan NF asam oleat
Nama
Asam miristat

Bond
C14 : 0

Komposisi (%)
5.0
16.0

Asam palmitat

C16 : 0

Asam palmitoleat

C16 : 1

Asam margaric

C17 : 0

Asam stearat

C18 : 0

Asam linoleat

C18 : 2

Asam linolenat

C18 : 3

Asam arachidic

C20 : 0

4.0
4.0

Asam oleat
2.2. Instrumen

C18 : 1

65.0-88.0

8.0
4.0
6.0
18.0

Sistem kromatografi gas Agilent 6890N yang dilengkapi dengan detektor ionisasi nyala
dan sample cair otomatis digunakan untuk pengembangan metode dan validasi metode.
2.3. Persiapan sampel
2.3.1. Larutan stok standar

isopropanol digunakan sebagai pengencer untuk asam oleat dan asam lemak yang terkait
karena kelarutannya. Asam oleat dan larutan stok asam lemak disiapkan dengan mengacu
cifications yang USP36 / NF31 spe (Tabel 1). Standar referensi asam oleat dilarutkan dalam
isopropanol untuk mendapatkan larutan stok pada konsentrasi sekitar 1.800 mg / mL.
Delapan asam lemak dilarutkan dalam labu ukur dengan isopropanol untuk mendapatkan
larutan stokdengan berbagai konsentrasi 1000-4400 mg / mL (Tabel 2).
2.3.2. Larutan campuran asam lemak
Larutan campuran asam lemak dibuat dengan mencampur 8,0 mL dari masing-masing
larutan stok asam lemak individu menjadi 100 mL dari labu ukur, termasuk asam oleat, dan
diencerkan dengan sampel pelarut.
2.3.3.Sampel kesesuaian sistem
Sampel kesesuaian sistem yang disiapkan dengan memipet 10 mL larutan stok asam oleat
dan 1 mL dari masing-masing asam palmitat, asam stearat, dan larutan stok asam linoleat
menjadi 100 mL pad labu ukur, dicampur dengan baik dan diencerkan dengan sampel pelarut.
2.3.4. Linearitas dan akurasi sampel
linearitas dan berbagai Sampel yang telah disiapkan dalam tiga rangkap dengan seri
pengenceran isopropanol, meliputi berbagai rentang kuantitasi.

Tabel 2 Pembuatan asam oleat dan larutan stok asam lemak.

Nama

Berat (mg)

Volume labu (mL)

Perkiraan konsentrasi stok (

g/mL)

50

1400

Asam palmitat

70 3.5
200 10

50

4000

Asam palmitoleat

100 5

50

2000

Asam miristat

Asam margaric
Asam stearat
Asam linoleat
Asam linolenat
Asam arachidic
Asam oleat

50 2.5
70 3.5

50

1000

50

1400

220 11
50 2.5

50

4400

50

1000

50 2.5
180 9

50

1000

100

1800

Tabel 3 Konsentrasi sampel lineritas dan hasil

Batas (QL) untuk 125% dari setiap tingkat komponen. Tiga tingkat (50%, 100% dan 150%)
dari sampel akurasi asam oleat yang dibuat dalam tiga rangkap dengan memipet 2,5, 5,0 dan
7,5 ml larutan stok asam oleat (1800 mg / mL) ke dalam 50 mL labu ukur dengan 1,0 mL
campuran asam lemak. Tiga tingkat (50%, 100% dan 150%) dari sampel asam lemak disusun
dalam tiga rangkap dengan memipet 3.0, 6.0 dan 9.0 mL campuran larutan asam lemak ke
dalam 50 mL labu ukur, masing-masing, dan spiking dengan 1,0 mL larutan stok asam oleat.
2.3.5. Sampel uji
Sampel bahan uji asam oleat disiapkan dengan menimbang 20 2.0 mg mg bahan
asam oleat ke dalam 100 mL labu ukur dan diencerkan dengan isopropanol sekitar 200 mg /
mL.