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Centro de Bachillerato Tecnolgico Industrial y de Servicios No128

Prctica 6. Halos de inhibicin (desinfectantes).


Sub mdulo 3: Ejecuta tcnicas de identificacin de microorganismos con base en las normas.
Equipo 3. Integrantes: Cabral Brandon, Gonzlez Lesly, Hernndez Nayelli, Hernndez Alan, Jimnez Fabiola,
Lagunas Itzel, Lira Vanesa, Mata Lizbet.
Facilitadora: Ing. Acosta Jessica
Fecha: Inici 5 de Noviembre del 2014, 12 de Noviembre del 2014.

Introduccin
Las bacterias presentan una gran adaptabilidad a
los ambientes en los que se desarrollan y algunas
pueden sobrevivir bajo ciertas condiciones
inusuales, pero a pesar de esto, existen
compuestos que pueden ocasionar la relativa
muerte de estos microorganismos. Estos agentes
actan penetrando la membrana externa de las
bacterias y destruyndola.
Para medir la eficacia de estos agentes
antibacteriolgicos, se emplea la tcnica de los
halos de inhibicin, la cual ayuda a comparar
diversos tipos de desinfectantes y antispticos para
identificar al agente ms efectivo sobre las
bacterias.
Los halos de inhibicin son reas circulares que se
forman alrededor de las muestras de desinfectantes
colocadas en un medio de cultivo, en estas reas,
se inhibe el crecimiento de algunas especies de
bacterias.

Resumen
En esta prctica, se aplic la tcnica de halos de
inhibicin para determinar la eficacia de algunos
desinfectantes y limpiadores comunes.
Primero, se prepararon una serie de placas de Petri
con medio nutritivo y se tomaron muestras con
hisopos, de distintos objetos: trapeador, manos,
mesa, lavabo, bao, cocina y trapo.
Luego, se inocularon las muestras en las placas de
Petri y en cada cuadrante de la caja se coloc un
cuadrado de 5 cm2 empapado de desinfectante. Se

colocaron 4 cuadrados con diversos desinfectantes


en cada placa.
Luego, las placas fueron colocadas en la
incubadora por 24 horas. Despus de este lapso,
se observ el crecimiento de algunas bacterias.
Pero no se apreciaron los halos de inhibicin. Se
realiz el anlisis morfolgico de las colonias y la
tincin de Gram para analizar la morfologa de las
bacterias.

Abstract
In this practice, the technique of inhibition halos was
applied to determine the effectiveness of some
common disinfectants and cleaners.
First, a serie of Petri dishes was prepared with
nutritious medium and was taken samples with
swabs of different objects: mop, hands, table, sink,
bathroom, kitchen and cloth.
Then, the samples were inoculated on the Petri
dishes and in each quadrant was placed a square of
5 cm2 of filter paper, wet with disinfectant. 4
squares with different disinfectants were placed in
each dish.
Then, the dishes were placed in the incubator for 24
hours. After this period, the growth of some bacteria
was observed. But the inhibition halos were not
appreciated. Morphological analysis of colonies and
Gram staining was performed to analyze the
morphology of the bacteria.

Materiales y mtodos

Preparacin del agar y vaciado


Materiales

Matraz Erlenmeyer
Agitador
Guante de asbesto
Mechero de Bunsen
Manguera de ltex
Esptula
Balanza granataria
Vidrio de reloj
7 placas de Petri
Papel peridico

Inoculacin y halos de inhibicin


Materiales

Axion
Pinol
Ajax
Cloro

Muestras de:

Procedimiento
Para cada agar:
1-Preparar la cantidad necesaria de solucin de
agar y agua para 42 cajas de Petri, tomando en
cuenta el margen de error. Hacerlo en un matraz
Erlenmeyer.
2-Tomar el matraz con el guante de asbesto y
ponerlo a calentar en el mechero, agitndolo
suavemente para diluir perfectamente el agar.
Realizar esto hasta que se haya diluido
correctamente y la solucin presente un tono
cristalino.
3-Envolver las placas de Petri con papel peridico
y tapar el matraz con el agar con una cubierta de
papel peridico.
4-Esterilizar en olla de presin las placas y los
matraces con los agares, por 15 minutos, a 15
libras de presin.
los

6-Colocar tres mecheros de Busen en forma de


tringulo y vaciar 20 ml de agar en cada placa de
Petri (hacerlo dentro de la figura).
7-Etiquetar las placas y dejarlas solidificar.

nutritivo

Limpiadores:

Agar Dextrosa papa


Agar Nutritivo
Agar Saboraud
Agua

5-Una vez esterilizados, desenvolver


instrumentos y prepararlos para el vaciado.

medio

Reactivos

Reactivos

7 placas de Petri (con


solidificado)
Hisopos para inocular
3 mecheros de Bunsen
3 mangueras de ltex

Trapeador
Manos
Mesa
Lavabo
Bao
Cocina
Trapo

Procedimiento
1-Tomar cada una de las 7 muestras con un
hisopo (procurando darle vueltas para poder
tomar mejor la muestra).
2-Inocular cada una de las muestras en cada una
de las 7 placas. Emplear el mtodo de estriado de
crecimiento y realizarlo dentro de un tringulo de
mecheros de Bunsen.
3-Una vez inoculadas, recortar cuadrados de 0.5
cm2 de papel filtro y empaparlos con cuatro
limpiadores o desinfectantes diferentes.
4-Colocar cuatro cuadros de papel filtro, cada uno
con un desinfectante diferente en cada placa de
Petri (colocar cada cuadro en cada cuadrante de
la placa).
5-Una vez realizado lo anterior, etiquetar las
placas de Petri correctamente y colocarlas en la

incubadora a 35C aproximadamente por 24


horas.
6-Una vez pasado el lapso, sacar las placas y
realizar un anlisis de la morfologa de las
colonias; la tincin de Gram a los cultivos y el
anlisis de la morfologa de las bacterias; y medir
los halos de inhibicin que se formaron alrededor
de cada cuadro de papel filtro.
7-Anotar todos los resultados.

En la prctica se obtuvieron los siguientes


resultados:
Se inocularon las muestras de la siguiente forma:

Medio

Nmero
1
2
3
4
5
6
7

Nutritivo

Morfologa de colonias
La mayora de las cultivos no presentaron
crecimiento de colonias, mientras que en las que
se formaron colonias, solo se presentaron unas
cuantas.
Medio

Color

Forma

Nutritivo
1
Nutritivo
3
Nutritivo
6
Nutritivo
6

Blanco

Circula
r
Puntifo
rme
Circula
r
Puntifo
rme

Amarill
o
Blanco

Supe
rficie
Plana
Plana
Plana
Plana

Borde
Redon
deado
Redon
deado
Redon
deado
Redon
deado

Morfologa de bacterias
Medio
Nutritivo 1
Nutritivo 3
Nutritivo 6

Bacilos

Morado

Gram positivo

Los cultivos no crecieron adecuadamente, por lo


que no se pudieron analizar los halos de
inhibicin.

Conclusin

Resultados

Blanco

(colonia
amarilla)
Nutritivo 6
(colonia
blanca)

Bacteria
Bacilos
Bacilos
Cocos

Color
Morado
Morado
Morado

Colo
nias
1
6
2
4

Cabral Brandon: Aplicando esto podemos saber


cuntas bacterias tienen los objetos y probar si el
producto de limpieza sirve para ayudar a su
limpieza

Gonzlez Lesly: En conclusin los halos de


inhibicin son las zonas que se forman alrededor
de un disco para saber qu calidad tiene un
antibitico, en este caso se utiliz para saber
cun bueno son los detergentes que utilizamos en
la vida diaria, debido al mal empleo de la prctica
y no seguir las instrucciones al pie de la letra la
prctica no present los halos de inhibicin
creciendo diferentes bacterias en donde no se
debera de haber crecido, sin tener la oportunidad
de haber medido el dimetro que se presenta en
los halos.

Hernndez
Nayelli:
Como
conclusin
determinamos que este se tiene que realizar en
un cultivo puro y que es empleado para
determinar la sensibilidad (Para realizar pruebas
de sensibilidad e identificacin se debe partir de
un cultivo primario en medio slido y se debe
procesar una colonia aisladas de cada tipo de
microorganismo que pueda tener rol patgeno) de
un agente microbiano, la limpieza como siempre
muy importante ya que se est trabajando con
hongos, el tener control acerca de este e inhibir.

Hernndez Alan: Los antibiogramas permiten


determinar la eficacia de los antibiticos para
inhibir el crecimiento de algunas bacterias, por lo
cual son muy empleados en medicina.

Tipo
Gram positivo
Gram positivo Una de las tcnicas de los antibiogramas consiste
Gram positivo en colocar crculos de papel empapados con

antibiticos, luego son colocados en un medio de


cultivo y se espera a que crezcan las colonias
para observar los halos que se forman.
El dimetro del Halo determinar la eficacia del
antibitico sobre las bacterias presentes en el
medio
analizado
y
permitir
establecer
comparaciones con los halos de otros
antibiticos.
En conclusin, las tcnicas que involucran halos
de inhibicin son muy importantes, ya que
permiten medir la eficacia de los desinfectantes y
antibiticos, lo cual puede ayudar en la creacin
de medicinas ms potentes y que ayuden a
combatir eficazmente a las bacterias patgenas
que entran al organismo.

Jimnez Fabiola: Se tiene como conclusin que


los halos de inhibicin es un antibiograma en el
que no se produce crecimiento bacteriano en una
placa de agar inoculada con el germen. Gracias a
esta prctica se observ y se consider la eficacia
de algunos desinfectantes ante diferentes
muestras, en los cuales en tales casos algunas
de las bacterias hasta se formaron por encima de
los halos de inhibicin dando a observar y deducir
que su eficacia para dar algn tipo de limpieza o
desinfeccin ante ciertas bacterias no es muy
eficiente y dando a deducir cuales lo son y cuales
no y as poder tomar en cuenta que tipo de
desinfectantes podras usar para la limpieza en tu
hogar o hasta en otras partes.

Lagunas Itzel: Los halos de inhibicin son una


prueba importante para comprobar la efectividad
de desinfectantes o antibiticos, el que presenta
un mayor dimetro es el que se considera ms
eficaz, teniendo en cuenta que los bordes no
siempre son uniformes. Deben medirse con
mucha
precisin.
Los desinfectantes que fueron analizados si
presentaron
un
funcionamiento
adecuado
mientras las bacterias se encontraban en su fase
de latencia.

Lira Vanessa: Conforme se van realizando las


practicas son cada vez nos vamos percatando
ms de lo importante que es observar cada tipo
de crecimiento que se obtiene ya que no siempre
ser el mismo y pues de igual manera podemos
extender nuestro conocimiento a todo lo que

vamos aprendiendo cada da en las practicas por


ejemplo en esta prctica respectivamente al hacer
tareas como la de los halos de inhibicin
principalmente estudiar lo que es el tema y
posteriormente aplicarlo en una prctica para as
poder realizar mejor las cosas y no equivocarnos
demasiado . Ya que de esa forma pues sabremos
identificar con mayor facilidad lo que estamos
trabajando debido a todos los procedimientos y
mtodos que hemos estado utilizando en el
laboratorio y en si cada prctica tiene algo nuevo
que mostrarnos y sobre esta se aprendi como es
que crecen bacterias al rededor del halo de
inhibicin y por qu crecen as. Como tambin
hacer con facilidad la tincin y reconocer el tipo
de bacteria que se observa al microscopio.

Mata Lucero: Al hablar de halos de inhibicin


estamos hablando de descubrimiento, ya que nos
ayudan a identificar cual de en este caso
desinfectantes de los que utilizamos es el ms
seguro e inhibe las bacterias en un mayor rango.
Nos son de mucha utilidad principalmente a
nosotros como laboratoristas qumicos, ya que
regularmente nos exponemos a cosas muy
contaminadas y al momento de la desinfeccin
podremos usar el desinfectante adecuado.
Tambin nos ayuda a saber cul es el de menor
inhibicin y por lo tanto el ms inseguro.

Melndez Araceli: El estudio de la sensibilidad


de los microorganismos a los antimicrobianos se
realiza principalmente por tcnicas de dilucin o
de difusin.
Se entiende por halo de inhibicin bacteriana a la
zona alrededor de un disco de antibitico en un
antibiograma en el que no se produce crecimiento
bacteriano en una placa de agar inoculada con el
germen. Es una medida de la potencia del
antibitico frente al germen

Discusin
Al momento de realizar esta prctica, algunos de
los mtodos o de las instrucciones indicadas
fueron hechas mal, ya que a las 24 horas no se
present ningn crecimiento de bacterias, ni la

presencia de los halos de inhibicin, pensamos


en la teora de que eran demasiado buenos los
desinfectantes utilizados, rechazando este teora
ya que los dems equipos si presentaron cambio
y los halos de inhibicin, a las 48 horas no se
volvieron a ver cambios notorios, por lo cual la
prctica no llego a su objetivo.

Bibliografa
Malibrn
C.,
(2008).
MANUAL
DE
PROCEDIMIENTOS Para la determinacin de la
sensibilidad a los antimicrobianos en bacterias
aisladas de humanos. Noviembre 14, 2014, de
INEI.
Recuperado
de:
http://www.cdc.gov/ncidod/dbmd/gss/publications/
documents/ArgentinaLevelI/Manual_procedimientos.pdf
Cercanado E. & Saavedra J., (2009). El
antibiograma. Noviembre 19, 2014, de AEP.
Recuperado
de:
http://www.apcontinuada.com/es/el-antibioigramainterpretacion-delantibiograma/articulo/80000504/

Anexos
Antibiogramas y los halos de inhibicin

El estudio de la sensibilidad de los


microorganismos a los antimicrobianos se
realiza principalmente por tcnicas de
dilucin o de difusin.

Las tcnicas de dilucin proporcionan


resultados cuantitativos (concentracin
mnima inhibitoria, CMI) y las de difusin
cualitativos
(sensible,
intermedio,
resistente).
Ambos
mtodos
son
comparables ya que hay una correlacin
directa entre el dimetro del halo de
inhibicin con un disco y la CMI.

Las tcnicas bioqumicas y genticas


permiten detectar el mecanismo o el gen
de resistencia en minutos u horas.

La realizacin de un antibiograma se
basa en el patrn de resistencia de cada
bacteria. As, los antibiticos a los que

esa
bacteria
es
intrnsecamente
resistente o cuya sensibilidad puede
inferirse por otros, no suelen informarse
en el antibiograma.

Los patrones de antibiograma poco


frecuentes
o
imposibles
requieren
confirmacin, ya que no responden a
mecanismos de resistencia conocidos.

Tcnicas de estudio de sensibilidad a los


antimicrobianos
El estudio de la sensibilidad in vitro de las
bacterias a los antimicrobianos se realiza
mediante mtodos fenotpicos (tcnicas de
dilucin y de difusin), bioqumicos y genticos.
Los mtodos fenotpicos (antibiograma) son los
ms utilizados. Consisten en enfrentar un
inculo bacteriano estandarizado a una nica o
a diferentes concentraciones de antibitico. La
interpretacin de los resultados obtenidos
permite clasificar a los microorganismos en
categoras clnicas: sensibles, intermedios o
resistentes. Hay que tener en cuenta que no
siempre un valor de CMI ms bajo indica mayor
actividad de este antimicrobiano, ya que las CMI
que definen la sensibilidad o resistencia son
diferentes para cada especie bacteriana y cada
antimicrobiano. Si un microorganismo es
sensible indica que con las dosis habituales se
espera una evolucin favorable de la infeccin,
siempre que se alcancen valores adecuados en
el lugar de la infeccin, lo que en ocasiones no
es posible (p. ej., en el sistema nervioso
central). Por el contrario, si el microorganismo
es intermedio o resistente, es probable que la
evolucin sea desfavorable. La interpretacin de
la sensibilidad predice mejor el fracaso (cuando
es resistente) que el xito de un tratamiento.
Entre los mtodos fenotpicos, las tcnicas de
dilucin determinan la CMI utilizando un medio
lquido (dilucin en caldo) o un medio slido
(dilucin en agar) para disolver las diferentes
concentraciones del antimicrobiano. El medio
estandarizado
para
la
realizacin
del
antibiograma es el medio Mueller-Hinton, al que
se le aade sangre u otros suplementos para
bacterias que no crecen en l. La CMI es la
dilucin ms baja de antimicrobiano en la que
no se observa crecimiento bacteriano. La
dilucin en caldo suele realizarse en

micromtodo (microdilucin), en paneles


multipocillos, y es el sistema mayoritariamente
adoptado por los sistemas automticos
comerciales para determinar la sensibilidad a
los antimicrobianos. En estos sistemas, la
lectura de los valores de CMI y la interpretacin
de resultados se realizan de forma automtica.
Las tcnicas de difusin emplean discos de
papel
impregnados
con
una
solucin
estandarizada de antibitico que se disponen
sobre la superficie de un medio slido
previamente inoculado en su superficie con una
suspensin bacteriana. Tras un perodo de
incubacin de 18 h, el dimetro del halo
formado est en relacin con el grado de
sensibilidad del microorganismo. La carga del
disco est ajustada para que los halos de
inhibicin
permitan
diferenciar
los
microorganismos sensibles de los resistentes y
pueda establecerse una correlacin con los
valores de CMI: halos pequeos se relacionan
con valores altos de CMI (resistentes) y halos
grandes con CMI bajas (sensibles) (fig. 1A).
Otra tcnica de difusin es el E-test, que
adems permite la determinacin directa del
valor de la CMI (fig. 1B). Utiliza tiras de plstico
impregnadas
con
un
antibitico
en
concentraciones decrecientes. Al contacto de la
tira con el agar, el antibitico difunde e impide el
crecimiento del microorganismo. Despus de la
incubacin se observa una zona de inhibicin en
forma de elipse: el valor de la CMI es el punto
de interseccin de la elipse con la tira y est
indicado en la escala impresa sobre la superficie
de la tira. Esta tcnica puede utilizarse
directamente sobre muestras clnicas para
obtener resultados preliminares en menos de 24
h, que siempre deben confirmarse mediante
pruebas de sensibilidad estandarizadas con
bacterias en cultivo puro.