TEMA:
DETERMINACIN DE PESTICIDAS EN VEGETALES MEDIANTE
CROMATOGRAFA DE GASES
ESTUDIANTE:
JULIO EDGAR CATARI CHURA
DOCENTE:
Lic. Ximena pozo
La paz Bolivia
02-05-2014
NDICE GENERAL
1. INTRODUCCIN
1.1. Hiptesis
1.2. Objetivo general
1.3. Objetivos especficos
2. ANLISIS DE FUNDAMENTOS
2.1. Generalidades sobre los pesticidas
2.2. Uso y control de pesticidas
2.3. Mtodos empleados en la
determinacin de pesticidas
2.3.1. Mtodos de extraccin de pesticidas
2.3.2. Extraccin con disolventes orgnicos
2.3.3. Mtodos de separacin, identificacin y cuantificacin de pesticidas
2.3.3.1. Tcnicas de separacin: Cromatografa
2.3.3.2. Tcnicas de identificacin: Detectores
2.4. Estudios relacionados
3. MATERIALES Y MTODOS
3.1. Reactivos y disolventes
3.2. Equipo, material en general e instrumentacin
3.3. Recoleccin y almacenamiento
3.4. Extraccin de residuos de pesticidas
5. CONCLUSIONES
6 ANEXO
1. INTRODUCCIN
La agricultura se beneficia de la aplicacin extensiva de pesticidas debido a que
disminuye la prdida de cultivos y aumenta la produccin. Al igual que en la mayor
parte del pas, la agricultura en la regin Mixteca Oaxaquea y Poblana involucra
el uso de diversos pesticidas para el control de pestes, enfermedades y todo tipo
de amenaza en los cultivos de vegetales, cereales y frutas.
La poblacin de la regin Mixteca de Oaxaca, demanda y consume una gran
variedad de vegetales cultivados a cielo abierto o en invernaderos en donde se
emplean diferentes pesticidas. El censo agrcola realizado por SAGARPA en 2005
determin que algunos de los vegetales de mayor consumo en la regin
mencionada son: calabacita (Cucurbita pepo), tomate verde (Physalis ixocarpa) y
jitomate saladette (Lycopersicum esculentum) (Anuario Estadstico de la
Produccin Agrcola, SAGARPA, 2005). Para la realizacin de este estudio, la
calabacita y el tomate verde se adquiri en el mercado Zaragoza de la ciudad de
Huajuapan de Len, Oaxaca, en los meses de noviembre y diciembre de 2008 y
enero de 2009. Adems, las muestras de jitomate saladette se adquirieron con
productores de la regin y en un mercado orgnico .
1.1. Hiptesis
La extraccin slidolquido y la GC-MS/MS-QqQ permiten la separacin,
identificacin y cuantificacin inequvoca de los pesticidas captan, carbofurn,
endosulfn, malatin y metamidofos, en ppm presentes en calabacita, tomate
verde y jitomate saladette.
1.2. Objetivo general
Determinar en calabacita, tomate verde y jitomate saladette residuos de captan,
carbofurn, endosulfn, malatin y metamidofos, empleando extraccin slidolquido seguida de cromatografa de gases acoplada a espectrometra de
masa/masa (GC-MS/MS-QqQ), y comparar la concentracin de residuos de stos
pesticidas con los LMRs establecidos por la CE.
1.3. Objetivos especficos
Realizar la extraccin slidolquido de los pesticidas en vegetales empleando
acetato de etilo como disolvente.
Establecer las condiciones de operacin en el equipo de GC-MS/MS.
2. ANLISIS DE FUNDAMENTOS
El uso intensivo de pesticidas en cultivos de vegetales propicia su persistencia en
estos, y dependiendo de la concentracin y toxicidad del pesticida puede llegar a
perjudicar la salud de los consumidores. Por tal motivo, la Comunidad Europea
(CE) y los gobiernos de Canad, Estados Unidos de Amrica, Japn, entre otros,
establecen lmites mximos residuales (LMRs) para regular cada pesticida en un
alimento en particular.
Realizar el anlisis de pesticidas en concentraciones de ppm ppb en alimentos
es una tarea delicada, debido a la composicin de la matriz y a la variedad de
pesticidas que existen.
Recientemente, la tendencia en el anlisis de pesticidas es el desarrollo de
mtodos multi-residuos que detectan un gran nmero de compuestos en un solo
proceso. En general dicho anlisis incluye extraccin, separacin, identificacin y
cuantificacin.
E., 2008). Por lo que es necesario que su monitoreo y control se convierta en una
actividad prioritaria para determinar la calidad y seguridad de los alimentos.
A continuacin se mencionan caractersticas generales de los pesticidas (segn su
grupo qumico) de mayor inters en esta investigacin.
Organoclorados.
Son de bajo costo y amplio espectro, su persistencia va desde moderada a muy
persistentes, y sus residuos se encuentran en el ambiente y en los seres vivos.
Son liposolubles, solubles en compuestos orgnicos de baja polaridad. Se
acumulan en el tejido graso y se metabolizan lentamente. Son estables qumica y
bioqumicamente. Se caracterizan por tener una estructura cclica y tomos de
cloro; dependiendo de dicha estructura, los pesticidas organoclorados se clasifican
en tres grupos principales.
a. Derivados halogenados de hidrocarburos alicclicos, como el lindano.
b. Derivados halogenados de hidrocarburos aromticos, como el DDT.
c. Derivados halogenados de hidrocarburos ciclodinicos, como el aldrn y el
endosulfn.
El lindano, los ciclodinicos (aldrn, dieldrn, endrn, clordano) y el endosulfn son
absorbidos a travs de la piel. La accin txica principal de estos pesticidas se
dirige al sistema nervioso, en donde estos compuestos inducen a un estado de
sobre-excitacin en el cerebro.
Organofosforados.
Son generalmente steres de cido fosfrico sustituidos. Se descomponen con
mayor facilidad y son menos persistentes en el ambiente que los organoclorados,
pero ms peligrosos debido a que tienen un grado alto de toxicidad. Son
que
se
degradan
lentamente,
pueden
almacenarse
Carbamatos.
Todos los carbamatos comparten la misma estructura base, son steres N
sustituidos del cido carbmico. Las diferencias en la longitud de sus
cadenas laterales determinan su toxicidad. Generalmente se consideran
menos txicos que los compuestos organofosforados. Son usados
principalmente como insecticidas de amplio espectro. Los tiocarbamatos y
ditiocarbamtos son generalmente insecticidas dbiles y tambin son usados
frecuentemente como herbicidas o fungicidas.
La mayora de los carbamatos son fcil y rpidamente absorbidos a travs de la
piel, pulmones, tracto gastrointestinal y mucosas. Se ha reportado que la
exposicin crnica causa debilidad, anorexia, prdida de la memoria y temblores
musculares.
Estructura
Accin
Grupo
Persistenci
NSCCl3 OO
especfica
Fungicida
qumico
aa
Dicarboxiimi No
(mg/kg)b
calabacita:
da
0.02
persistente
(hasta
semanas)
LMRs
2 tomate
verde,
jitomate
saladette:
Carbofurn
O Me Me Insecticida
OCONHMe
Carbamato
No
2.0
calabacita,
persistente
tomate
(4-8
verde,
semanas)
jitomate
saladette:
0.02
Endosulfn
O O S ClCl Insecticida
Organoclor
Moderadam
calabacita:
Cl Cl Cl Cl
ado
ente
0.05
(ciclodieno)
persistente
tomate
(5-8 meses)
verde,
jitomate
saladette:
Malatin
EtO2C
S Insecticida
CO2Et P S
OMe MeO
Organofosf
No
0.5
calabacita:
orado
persistente
0.02
(hasta
semana)
1 tomate
verde,
jitomate
saladette:
0.5
distintas (minerales,
Fabricante
Caractersticas
VF-5 ms
DB-5 ms
HP-5 ms
Agilent Technologies
m espesor de pelcula
Agilent Technologies
Tipo
Conductividad trmica
Caractersticas
Detector universal
Mide cambios en la conduccin del calor.
Se emplea para identificar hidrocarburos,
Captura de electrones
vegetales,
jugos,
cereales,
La muestra que es una mezcla de masas moleculares A > B > C > D > E se puede
separar dada la relacin m/z. Sin embargo, los iones fragmento de cada molcula
se encuentran solapados. El primer separador de masa est preparado para
seleccionar un in precursor, que se introduce en la cmara de colisiones donde
se produce la fragmentacin mediante colisiones con un gas como el argn o el
helio. Por ejemplo, supongamos que se selecciona el in B. Los iones que ahora
tenemos son iones B y los iones producto D, E, B1B4. stos se introducen en un
segundo separador de masa, el que genera el espectro de masa/masa.
Los experimentos de MS/MS pueden realizarse empleando diferentes tipos de
analizadores, los ms usados comnmente en el anlisis de pesticidas son la
trampa de iones y el triple cuadrupolo
Los espectrmetros de masa de trampa de iones pueden medir la relacin m/z de
los iones que se mantienen dentro de ellos. Tanto los espectrmetros de trampa
de iones como espectrmetros de transformada de Fourier son espectrmetros de
masa que pueden trabajar en modo de MS/MS. Una desventaja de la trampa de
se
analiza
nuevamente
para
realizar
la
confirmacin
cuantificacin.
En los instrumentos de trampa de iones, se aaden pasos intermedios que
dependen del tiempo necesario para mantener y mover iones. De esta manera, un
fragmento puede aislarse y fragmentarse, y volver a aislarse, y as llevar a cabo
numerosos anlisis (MS)n, donde n es el nmero de pasos intermedios, tambin
conocido como espectrometra de masa en cascada de multi-etapa.
La MS/MS es muy especfica en la identificacin de compuestos de inters,
proveen alta selectividad y sensibilidad. Incuestionablemente, con la MS/MS se
obtiene un mayor grado de certeza en la identificacin de analitos que en una
tcnica de MS de una sola etapa, debido a que se evitan las interferencias y se
puede resolver un espectro multi-componente.
Dado que las dos formas ms comunes de ionizar las muestras son el uso de
electrones a gran velocidad conocido como impacto electrnico (EI) y el uso de un
gas como hidrgeno, metano o amoniaco, llamada ionizacin qumica (CI), se
describe brevemente cada una de ellas.
Los iones que se forman por EI tienen casi la misma energa cintica y generan un
haz de iones mono-energtico. Por otro lado, las fuentes de CI suavizan las
condiciones de ionizacin de la muestra. En la CI se presenta una menor
fragmentacin que en la EI, debido a que hay menos energa en exceso (por
encima de la que se necesita para la ionizacin) disponible para romper y
reorganizar los enlaces qumicos. La diferencia en la fragmentacin entre EI y CI
muestra la divisin entre ionizaciones de baja y alta energa y colisiones que dan
lugar a diferentes fragmentaciones. Los procesos de alta energa incluyen la EI y
colisiones en la MS/MS en la cmara de colisiones seguida de separacin en el
sector magntico del instrumento.
Tcnica
Tcnica
Pesticid
Concen
LMR
Referen
extracci
identific
as
tracin
(mg/kg)
cia
acin y
identific
detecta
cuantifi
ados
da
cacin
(mg/kg)
Malatin
*
0.70
0.02b
Hill,
HPLC
Metami-
1.21
0.01c
R.
MS
dofos
Kiwi,
Slido-
GC
durazno
lquido
Pas
A. USA
C.;
Reynold
s, S. L.,
Fresas
Slido-
GC-
151
Validaci ---
2002
Plaza-
lquido
QqQ-MS
pesticida
Bolaos,
del
multi- mtodo
Pepino,
Slido-
GC-
clase
31
chile,
lquido
MS/MS
pesticida
Muestra
s
P. et al.,
---
2007
Martnez
por
-Vidal, J.
multi- arriba de
L. et al.,
jitomate,
sanda,
clase
meln
Espaa
LMR:
Espaa
2002.
Chile:
1.7%
pepino:
3.8
%,
jitomate:
Jitomate
Fase
GC/Capt
, chile
slida
ura
Captan
de Endosulf
electron
0.6%
0.006-
0.1d
Colum,
0.1
0.5e
A. et al.,
2001
Espaa
es
Disolvente/React
Pureza
ivo
(%)
Acetona
Acetato de etilo
Etanol
Hexano
Metanol
Cloruro
de
99.5
99.9
99.5
99.3
99.9
99.9
Marca
Temperatura
rotavapor
JT Baker
Fermont
Omnichem
Fermont
Sigma-Aldrich
Golden Bell
(C)
59 (sin vaco)
48 (con vaco)
--48 (con vaco)
-----
metileno
Sulfato de sodio 100
JT Baker
---
anhidro (Na2SO4)
Cloruro de sodio
La Fina
---
---
(NaCl)
Cafena
98
Analytyka reactivo --Para realizar las soluciones patrn de pesticidas, se pes la cantidad de polvo o
lquido de cada pesticida y se afor con etanol, las soluciones patrn se
almacenaron en congelacin a -20C. Las caractersticas de los pesticidas as
como las concentraciones de las soluciones patrn se muestran en la tabla . Se
prepar una solucin patrn etanlica de cafena con una concentracin de 50
ppm.
Caractersticas de los pesticidas utilizados como estndares
Pesticida
Pureza
(%)
Marca
Concentracin
solucin
patrn
(ppm)
Captan
99.1
Riedel-de Han 200
Carbofurn
99.9
Fluka Analytical 200
Endosulfn
99.9
Riedel-de Han 200
Malatin
96.1
Riedel-de Han 100
Metamidofos
98.4
Fluka Analytical 200
A partir de las soluciones patrn, se prepararon soluciones etanlicas de trabajo
STA con concentraciones de: 1.0, 5.0 y 10 ppm de cada pesticida, cada solucin
Velocidad
Tiempo
(C)
(C/min)
espera
(min)
20
20
20
25
20
(min)
1.5
1.0
0.6
1.0
-
1.50
6.50
7.50
9.35
11.35
12.85
100
180
200
225
250
280
de
Tiempo total
Especificacin
Pico a pico
Descripcin
Corrige variaciones en la
Tipo de medicin
rea
lnea base
Es ms recomendable que
Estndar interno
medir la altura
Relaciona el rea de la
Tipo de calibracin
Absoluto
Independiente
pesticida
El pico del in calificador y
cuantificador
se
integran
In(es) calificador(es)
intensidad
en
el
espectro
Se escogen los iones que
aparecen en el espectro de
% incertidumbre
30%
calificador/in
cuantificador
Se recomienda en anlisis
a nivel de trazas
Ancho de pico
418
Promedia irregularidades y
tiende a agrupar picos muy
Ventana de bsqueda
% mnima abundancia
pequeos y desplazados
12 segundos
Intensidades debajo del
0.20 min
200-700 cuentas
valor
designado
se
ignoraron
Para construir las curvas de calibracin, al cromatgrafo de gases se le inyect 1
L del extracto o de las soluciones estndar de los pesticidas. Se monitorearon
dos o tres iones producto de cada pesticida en el segmento correspondiente. El
in precursor y los iones producto de los pesticidas se muestran en la Tabla.
Adems, se crearon los mtodos de identificacin y cuantificacin para cada serie
de soluciones de trabajo (STA y STB). En ambos mtodos se construyeron tablas
de compuestos a partir de la solucin de trabajo ms diluida. En estas tablas, se
establecieron las condiciones de identificacin (iones calificadores, tiempo de
retencin, intensidad, porcentaje de tolerancia, amplitud de la ventana, entre otros)
y cuantificacin.
Iones precursores e iones producto de los compuestos monitoreados
Pesticida
Seg-mento
Duracin
del
segmento
In precursor,
Iones
m/z
producto,
(min)
STAa
Metamidofo
m/z (V)C
STBb
4.626.51
3.125.91
141
64 (-15), 79
(-15), 94 (-
Tetrahidro-
15)
79 (-10), 122
6.519.50
5.917.25
151
ftalimidad
(-10), 136 (-
Carbofurn
5)
122 (-5), 149
---
7.258.81
221
Cafena
Malatin
9.5011.01
11.0111.55
8.829.61
9.6210.36
194
173
109
(-15),
120
(-10),
137 (-5)
99 (-15), 127
(-10), 145 (-
alfa-
12.1012.85
10.36-12.85
241
Endosulfn
5)
133 (-5), 136
(-5), 170 (10), 206 (-
Compuesto
Metamidofos
(THFI)*
Malatin
7.948.34
11.0911.49
7.898.39
11.0411.54
8.14 0.20
11.29 0.20
136 (8.1)
127 (22.9)
bsqueda
(min)
Ventana de 10.3210.82 5.275.77
integracin
(min)
Tiempo
retencin
(min)
In(es)
137
79 (83.5)
calificador(e
(18.2)
64 (29.9)
s), m/z
(%
incertidumbr
e)a
In
109
94
79
99
cuantificado
r
rea
159 941
Ecuacin de -
14 113
34 078
118 244
y = 0.03 x2 y = 0.04 x2 y = 0.15 x2 + 1.13 x + 0.15
calibracin
+ 0.17 x + 0.24 x +
0.02
0.09
R2
0.999
1.0
0.999
se mencionan los iones cuantificadores y calificadores, stos son los iones
producto de cada compuesto. El in cuantificador fue el de mayor abundancia
relativa en el cromatograma y espectro de masa/masa correspondiente del
pesticida y del estndar interno. La abundancia relativa del in cuantificador de
cada compuesto en el espectro de masa/masa fue de 100%. Mientras que los
iones calificadores presentaron abundancias relativas de 5 a 85%.
se observa que para el metamidofos se identificaron dos iones calificadores
adems del in cuantificador. Para la cafena, la tetrahidroftalimida (THFI), el
malatin y el alfa-endosulfn, se identific un in calificador adems del in
cuantificador. Adems, en la Tabla 15, se muestra que para la cafena, el
carbofurn y el malatin se identific un in calificador, adems del cuantificador, y
para el metamidofos, la THFI y el alfa-endosulfn se identificaron dos iones
calificadores.
En estudios de identificacin y cuantificacin de residuos de pesticidas realizados
mediante espectrometra de masa/masa, es necesario identificar al menos un in
calificador adems del in cuantificador. Es decir, con la deteccin de dos iones
producto (un in cuantificador y un calificador), es posible confirmar la presencia
del pesticida y cuantificarlo.
Resultados para soluciones de trabajo STB (0.5, 1.0, 1.5 y 2.0 ppm y 0.5 ppm
cafena)
Parmetro
Cafena
Ventana
Metamidofos
8.739.13
Compuesto
Carbofurn
(THFI)*
3.924.32
5.896.29
Malatin
7.848.24
alfa-
Endosulfn
9.549.94 10.72
de
11.12
bsqueda
(min)
Ventana
8.689.18
3.874.37
5.846.34
7.798.29
9.499.99
de
10.58
11.28
integraci
n (min)
Tiempo de 8.93
4.12
6.09
8.04
9.74
10.93
retencin
0.20
0.20
0.20
0.20
0.20
0.20
(min)
In(es)
137
79 (5.4)
122 (30.6)
149 (30.6)
127 (61.4)
133 (44.6)
calificador
(38.5)
64 (40.9)
136 (12.7)
109
94
79
6 825
-
1 764
3 126
669
9 686
611
y = 0.049 y = 0.25 y = 0.004 y = - 0.41 y = 0.03
241 (22.9)
(es), m/z
(%
incertidum
bre)a
In
164
99
206
cuantifica
dor
rea
Ecuacin
de
calibraci
+ 0.49
x + 1.20
0.03
x 1.56
+ 0.18
0.896
0.999
0.996
0.994
0.936
n
R2
Al emplear los datos de calibracin resultado del anlisis de las soluciones patrn,
se realiz la identificacin y cuantificacin inequvoca de cada pesticida en los
vegetales estudiados.
se presentan los cromatogramas y espectros de masa del in cuantificador y los
iones calificadores obtenidos del experimento MS/MS para cada compuesto en la
solucin de trabajo de 1.0 ppm de pesticidas con 2.0 ppm del estndar interno
(cafena). As como, para la solucin de trabajo de 0.5 ppm de pesticidas con 0.5
ppm de cafena, respectivamente.
Cabe mencionar que para los vegetales analizados con los mtodos construidos a
partir de las soluciones de trabajo de 1.0, 5.0 y 10 ppm con 2.0 ppm de cafena
(STA), se hizo una sola inyeccin. En los mtodos construidos a partir de las
soluciones de trabajo de 0.5, 1.0, 1.5 y 2.0 ppm con 0.5 ppm de cafena (STB), se
hicieron tres inyecciones, monitoreando los dos o tres iones producto
seleccionados para cada compuesto. Cada pesticida fue confirmado en base a un
porcentaje de incertidumbre dentro del intervalo establecido para cada in
calificador en las soluciones de trabajo. En este caso, las muestras fueron
marcadas como no negativas y fueron cuantificadas. Para realizar la
cuantificacin, se eligi aquel in producto ms intenso, ste no correspondi a
ninguno de los iones calificadores.
4. RESULTADOS Y ANLISIS
Los vegetales muestreados para la realizacin de este trabajo fueron calabacita,
Cucurbita pepo (CAL), tomate verde, Physalis ixocarpa (TV) y jitomate saladette,
Lycopersicum esculentum (JSA, JSB y JSO). Estos vegetales se analizaron
mediante un mtodo multi-residuos de pesticidas para identificar y cuantificar
captan, carbofurn, alfa-endosulfn, malatin y metamidofos. Primero se efectu
una
extraccin
slidolquido
con
acetato
de
etilo
como
disolvente
En los cultivos de vegetales de la regin Mixteca son aplicados una gran variedad
de pesticidas. Por ello, el presente estudio se limit a pesticidas reportados por la
Brigada de Promocin del Desarrollo de la Universidad Tecnolgica de la Mixteca.
La informacin recabada gui a la bsqueda de residuos de captan, carbofurn,
endosulfn, malatin y metamidofos en calabacita, tomate verde y jitomate
saladette.
El uso de la tcnica de extraccin slido-lquido, nos permiti analizar muestras de
tamao pequeo (5 g aproximadamente), obtener el extracto para el anlisis en el
equipo de GC-MS/MS en tiempos relativamente cortos (60 minutos por rplica) y
evitar pasos de limpieza. Adems el acetato de etilo, tiene la capacidad de
extraccin adecuada para un amplio intervalo de pesticidas, provee buenas
recuperaciones de pesticidas con propiedades diferentes y es un disolvente
menos daino que los disolventes clorados.
Los resultados de la extraccin slido-lquido de los vegetales se muestran en la
Tabla , en sta se menciona el nmero de rplicas realizadas, as como los
porcentajes de extraccin. Los porcentajes de extraccin fueron diferentes para
cada vegetal, probablemente se debe a las diferencias en la composicin de la
matriz vegetal.
Porcentajes de extraccin con acetato de etilo de los vegetales estudiados
Vegetal
Clave
Porcentaje
de
Coeficiente
extraccin
variacin
(%)
2.90
2.22
2.81
Calabacita
Tomate verde
Jitomate
CAL
TV
JSA
(%)
0.1305 0.004
0.1312 0.003
0.1172 0.003
saladette A
Jitomate
JSB
0.1532 0.002
1.08
saladette B
Jitomate
JSO
0.1351 0.003
2.54
saladette
orgnico
de
Muestra (g)
STBb
15.07
15.07
15.07
5.03
5.02
15.08
15.06
15.07
15.08
15.08
orgnico
Los iones producto del estndar interno (109 y 137 m/z) tuvieron un
comportamiento distinto en cada vegetal. En la Tabla 18, se muestran las reas,
porcentajes de incertidumbre y tiempos de retencin de los iones producto del
estndar interno (109 y 137 m/z) en cada vegetal. Adems, se observa que en la
curva de calibracin STA, el porcentaje de incertidumbre ms bajo para el in
calificador (137 m/z) fue 20.5% en el jitomate saladette A y el ms alto de 32.7%
en el jitomate saladette B. Adems, en todos los vegetales, el in cuantificador
(109 m/z), tuvo un rea por encima del valor mnimo de abundancia requerido
(500). se observa que para la curva de calibracin STB, el in calificador (137 m/z)
tuvo porcentajes de incertidumbre entre 18.6-50.6 %, el porcentaje ms bajo
corresponde a la calabacita y el ms alto al jitomate saladette orgnico. En todos
los vegetales, el in cuantificador (109 m/z) tuvo reas por encima del valor
mnimo de abundancia requerido (500).
Caractersticas del in cuantificador y calificador de la cafena en los
vegetales estudiados
Parmetro
CALa
TVb
Tiemp
10
o
de .51
STA*
STB**
JSAc
JSBd
JSOe
CALa TVb
JSAc
10 10.56 10.58 10.55 8.88
8.90
8.92
JSBd
8.95
JSOe
8.94
25.4
50.6
.52
reten
cin
(min)
In
calific
ador
(137
m/z)
(%
incerti
dumbre)f
24
.5
23 20.5
.6
32.7
22.0
18.6
22.2
26.8
rea
190
229
179
13
185
13
58
25
11
11
del
514
184
322
272
025
684
761
852
054
543
in
cuanti
ficado
r (109
m/z)g
a. Calabacita.
b. Tomate verde.
c. Jitomate saladette A.
d. Jitomate saladette B.
e. Jitomate saladette orgnico.
f. Intervalo de confianza para STA: (0.141.7)%, y para STB: (13.253.2)%.
g. rea requerida: >= 500.
Compuesto
11.22 0.01
127 (34.0)
99
2 407 207.9
0.01 (0.15)
Compuesto
M
alatinb
THFI
THFI
Tiempo
alfa-Endosulfnc
de 6.09 0.12
retencin (min)
In(es)
122 (18.4)
calificador(es), m/z
136 (17.3)
9.76 0.07
10.89 0.04
127 (34.0)
133 (132.0)
241 (313.0)
(% incertidumbre)
In
cuantificador, 79
99
206
m/z
rea
662.5 71.4
Relacin de reas 0.04 (0.22)
579 21.2
0.03 (0.03)
122 41
0.01 (0.05)
(requerido)
a. Soluciones de trabajo de 0.5, 1.0, 1.5 y 2.0 ppm con 0.5 ppm de cafena.
b. Intervalo de confianza: 122 m/z (20.8-60.8)%, 136 m/z (0.1-32.6)%.
c. Intervalo de confianza: 127 m/z (0.1-62.0)%.
d. Intervalo de confianza: 133 m/z (0.1-47.4)%, 241 m/z (0.1-32.3)%
Para la cuantificacin del malatin, se identificaron dos iones producto (99 y 127
m/z) en la ventana de bsqueda a los 9.76 0.07 minutos, el in calificador (127
Compuesto
Malatinc
Metamidofosb
Tiempo de retencin 5.53
11.23
(min)
In(es)
127 (47.6)
calificador(es), 79 (92.9)
m/z
64 (49.0)
(% incertidumbre)
In cuantificador, m/z
rea
Relacin de reas
94
1 336
0.006 (0.003)
99
20 649
0.09 (0.15)
(requerido)
En la ventana de bsqueda asignada al metamidofos, se detectaron tres iones
producto (64, 79 y 94 m/z) a 5.53 minutos, Apndice 2. Los iones designados
como calificadores, 64 y 79 m/z tuvieron 49 y 92.9% de incertidumbre, valores
dentro del intervalo de confianza (0.155.8% y 59.9119.9%). El in cuantificador
(94 m/z) present un rea de 1 336, mayor a la mnima requerida (300) y relacin
de reas (0.006) fue vlida para la curva de calibracin (relacin mnima 0.003).
Para el malatin, los iones producto 99 y 127 m/z tuvieron un tiempo de retencin
de 11.23 minutos en la ventana de bsqueda, lo que permiti la identificacin del
pesticida.
En las correspondientes ventanas de bsqueda, no se identificaron los iones
producto para THFI y alfa-endosulfn.
La curva de calibracin STB permiti identificar a la THFI y cuantificar al malatin,
adems de los ya identificados (metamidofos y malatin) con la curva de
calibracin STA. En la Tabla 22 se observan los promedios, desviaciones estndar
y las caractersticas de los iones producto.
La cuantificacin del malatin, se hizo con los iones producto (99 y 127 m/z) a un
tiempo de retencin de 9.79 0.02 minutos. El in calificador (127 m/z) tuvo
33.7% de incertidumbre, que se encontr dentro del intervalo de confianza (0.1
60.5%). El rea del in cuantificador (99 m/z) fue de 25 735, ste valor estuvo por
encima del valor establecido (200) y la relacin de reas (0.10) fue adecuada para
la curva de calibracin (relacin mnima 0.03).
Caractersticas de los pesticidas determinados en tomate verde (TV) con la
curva de calibracin STBa
Parmetro
M
etamidofosb
Tiempo
Compuesto
Tetrahidroftalimida
(
de 4.15
Malatind
THFI)c
6.06 0.14
9.70 0.02
127 (33.7)
retencin (min)
In(es)
---
122 (53.0)
calificador(es), m/z
79 (9.7)
136 (22.4)
(% incertidumbre)
In
cuantificador, 94
79
99
m/z
rea
Relacin de reas
1 031 149
0.03 (0.22)
25 735 4093
0.10 (0.03)
514
0.009 (0.1)
(requerida)
Adems, se identific THFI, a partir de los tres iones producto (79, 122 y 136 m/z)
a 6.06 0.14 minutos. En el caso del metamidofos, se observaron los iones
Compuesto
Malatinc
Metam
idofosb
Endosulfn
JSAd
JSBe
JSB
JSAd
Tiempo
alfa-
e
de 5.57
5.37
11.23
12.34
127 (135.6)
---
retencin (min)
In(es)
79 (55.1)
79 (5.3)
calificador(es),
64 (43.0)
---
m/z
(%
incertidumbre)
In
cuantificador, 94
m/z
rea
Relacin
1 151
de 0.006 (0.003)
99
732
0.06(0.003)
170
2 589
0.01 (0.15)
773
0.06 (0.002)
reas
(requerida)
122 y 136 m/z a los 6.05 0.01 minutos. Se obtuvo una relacin de reas de 0.32,
vlida para la curva de calibracin (relacin 0.22). En JSB y JSO se identific
THFI, los iones 79, 122 y 136 m/z se detectaron a los 6.13 0.08 minutos en JSB
y a los 6.08 0.02 minutos en JSO, En los tres jitomates, el malatin fue
identificado y cuantificado. El tiempo de retencin de los iones 99 y 127 m/z (in
calificador) vari de 9.73 a 9.77 minutos. La relacin de reas estuvo entre 0.07 y
0.83, vlidas para la curva de calibracin (relacin 0.03).
En las muestras de JSB y JSO se identific alfa-endosulfn, pero slo en JSB
pudo cuantificarse, en este vegetal, el tiempo de retencin de los iones producto
(133, 206 y 241 m/z) fue de 10.91 0.07 minutos. La relacin de reas fue de
0.12, valor adecuado para la curva de calibracin (relacin 0.05), Como se
mencion anteriormente, en el JSA y JSB se detectaron residuos de metamidofos
(0.15
0.42
mg/kg,
respectivamente),
ambos
por
encima
del
LMR
Tetrahidr
oftalimida (THFI)b
M
alatinc
J
JSAe
Tiempo
JSBf
6.05
JSOg
SAe
JSBf
6.13
6.08
9.73
9.77
de
0.01
0.08
0.02
122
122
122
SOg
10.90
0.02
0.04
127
133 (2.4)
retencin
(min)
In(es)
127 (0.2)
calificador (45.3)
(32.8)
(57.6)
(es), m/z
136
136 (8.7)
136
(%
(14.6)
(23.3)
241 (23.8)
(18.6)
incertidu
mbre)
In cuantificador, m/z
79
rea
1 031 886 59
99
708 112
1 507
1 986 157 42
Relacin
149
0.32
0.09
0.09
0.07
750
0.26
0.02
de reas
(0.22)
(0.22)
(0.22)
(0.03)
(0.03)
(0.05)
(requerid
a)
4.2.5. Anlisis comparativo de pesticidas en los vegetales estudiados.
Al realizar una comparacin entre los vegetales estudiados, se observa que el
metamidofos fue identificado en 4 muestras vegetales pero slo fue cuantificado
en 3 de ellas, con base en su concentracin en mg/kg y en el nmero de veces
que representa el LMR (0.01 mg/kg) correspondiente se ordenan: JSB (0.42, 42
veces) > JSA y TV (0.15, 15 veces).
Por otro lado, el metamidofos se clasifica como no persistente en el ambiente, su
vida media tiene un valor de 6 a 12 das en el suelo. Debido a su baja persistencia,
su potencial de bioacumulacin es bajo. Sin embargo, puede causar diversos
sntomas de intoxicacin como debilidad muscular, incapacidad para pararse,
somnolencia, diarrea, salivacin excesiva, anorexia, prdida de peso, disnea,
cianosis, parlisis respiratoria y muerte (Catlogo de plaguicidas, CICOPLAFEST,
2004).
Clave
Coeficiente
de
variacin
Extraccin
Calabacita
CAL
Tomate verde
TV
Jitomate saladette JSA
(%)
Anlisis en el equipo de GC-MS/MS
2.90
2.28
2.22
4.99
2.81
16.10
A
Jitomate saladette JSB
1.08
10.48
B
Jitomate saladette JSO
2.54
12.69
orgnico
LDDa
(g/kg)
STBd
STAc
Metamidofos
(THFI)*
Carbofurn
Malatin
0.008
0.08
0.05
0.19
0.13
0.02
0.04
LDCb
(g/kg)
STBd
STAc
0.02
0.24
0.14
0.57
0.39
0.05
0.10
alfa-
0.004
0.14
0.01
0.41
Endosulfn
5. CONCLUSIONES
El uso de acetato de etilo permiti la extraccin de pesticidas organofosforados
(malatin y metamidofos), organoclorados (alfa-endosulfn) y dicarboxiimidas
(tetrahidro-ftalimida) de los vegetales estudiados.
La cromatografa de gases acoplada a espectrometra de masa/masa o en
cascada con triple cuadrupolo (GC-MS/MS-QqQ) permiti separar, identificar y
cuantificar inequvocamente los residuos de captan, carbofurn, alfa-endosulfn,
malatin y metamidofos en las muestras de calabacita, tomate verde y jitomate
saladette.
Para cada compuesto, se crearon mtodos de identificacin y cuantificacin. Para
la
identificacin
se
consideraron
caractersticas
de
los
iones
producto
6. ANEXOS
Propiedades de disolventes empleados comnmente en el anlisis de
residuos de pesticidas a 20-25C
Disolvente
Polaridad
Solubilidad
Densidad
Punto
en agua
(g/mL)
ebullicin
0.998
0.786
0.791
0.792
0.789
0.902
(C)
100.0
81.6
56.2
64.6
78.4
77.2
1.33
40.7
Agua
Acetonitrilo
Acetona
Metanol
Etanol
Acetato
de
10.2
5.8
5.1
5.2
5.2
4.4
(%, p/p)
100
100
100
100
8.7
etilo
Diclorometano
3.1
1.6
de
Ciclohexano
Hexano
0.2
0.0
0.006
0.014
0.789
0.660
80.7
69.0
Columna
Columnas
WCOT
Columnas PLOT
empacadas
d. i. de columna 36
y SCOT
0.100.53
0.320.53
(mm)
Longitud
de 13
3050
3050
columna (m)
Espesor
de
0.10.5
1225
recubrimiento (m)
Capacidad
total 100
0.055
0.055
(g/componente)
Superficie de la 0.2
10-610-7
10-610-7
0.55
2050
510
50100
fase
estacionaria
(m2)
Caudal (mL/min)
Flujo lineal (cm/s)
20100
1050