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Centro de Bachillerato Tecnolgico

Industrial y de Servicio N85


Dr. Jos Mara Liceaga
Tcnico Laboratorista Qumico

Submdulo:
3: Ejecuta Tcnicas de Identificacin de
Microorganismos con base en las normas
Reporte de prctica no. 5:
Prepara medios de cultivo (agar y caldos nutritivos) para aislar microorganismos

Profesor: QFB.

Integrantes de equipo:

Grado y Grupo:
Fecha de
entrega:

Ornelas

Mijangos

Jess Melesio

Apellido Paterno

Apellido Materno

Nombre(s)

Gmez Herrera Pablo


Jacinto Gatica Jared Geovanny
Mejia Bautista Bryan

3 ALV

Lunes, 19 de
Septiembre de 2016

Moreno Ortiz Erica Denisse


Ponce Lpez Oscar Eduardo

Equipo:
Lugar de entrega:

5
Coatzacoalcos, Ver

Tcnica.
1.-Ponerse la bata de laboratorio perfectamente abotonada, colocarse los guantes estriles y
el cubrebocas.
2.-Limpiar el rea de trabajo inmediata que es la superficie de acero inoxidable de la mesa
con agua y detergente lquido, enjuagar y secar.
3.-Desinfectar el rea de trabajo con la solucin de cloruro de benzalconio y secar.
4.- Esterilizar el rea de trabajo con la flama del mechero de Bunsen.
5.-Utilizar estas normas de bioseguridad para todas las prcticas de microbiologa que se
realicen.
Preparacin de un medio de cultivo
Puesto que la mayora de los medios de cultivo se encuentran deshidratados, para su
preparacin ser necesaria la adicin de agua destilada o desmineralizada con un pH
prximo a 7. Para preparar el medio de cultivo se utiliza un erlenmeyer limpio y enjuagado
con agua destilada o desmineralizada. El volumen del erlenmeyer deber ser el doble del
volumen de medio de cultivo que queramos preparar.
Pasos a realizar:

Dependiendo del volumen de medio de cultivo que vayamos a preparar, pesar en un


vidrio de reloj la cantidad necesaria del medio de cultivo deshidratado.
Medir en una probeta la cantidad de agua destilada necesaria.
Aadir parte del agua a un erlenmeyer adecuado al volumen que vamos a preparar.
Aadir al erlenmeyer el medio de cultivo.
Agitar hasta la disolucin parcial y calentar un poco.
Aadir el resto del agua que nos servir para limpiar la superficie del objeto utilizado
para pesar.
Colocamos el erlenmeyer sobre el mechero, apoyado en una rejilla que permita la
difusin del calor y calentamos durante un tiempo que vendr determinado en el
prospecto del producto.
Por ltimo debe pasar por el proceso de esterilizacin.

Todos los medios de cultivo se preparan en erlenmeyer, independientemente de si es slido


o lquido. Lo que diferencia su preparacin es la forma de esterilizar:

Medios de cultivo slidos en placa: se preparan y esterilizan en el erlenmeyer. Para la


esterilizacin se coloca un tapn de algodn envuelto en una gasa, tapado con papel y
sellado con una cinta masking.
Medios de cultivo slidos o lquidos en tubo: se preparan en el erlenmeyer y se esteriliza
en el tubo. Los tubos se llenan con un volumen que oscila entre los 5-10 ml (utilizamos
una pipeta o jeringa esterilizada), se tapan con un tapn metlico y cubiertos con papel y
cinta adhesiva. Se esterilizan colocados en una gradilla o un vaso de precipitado,
aunque para aumentar la superficie se suelen colocar de forma inclinada.

Dibujos y/o fotos a color


Caldo nutritivo

2) En una bascula pesar los gramos


necesarios para preparar el medio de
cultivo

1) Medio de cultivo

4) Aadir agua
destilada al matraz

3) 0.16 g necesarios
para preparar 20 ml
de caldo nutritivo

5) Con una esptula aadir el caldo al


agua destilada

6) 20 ml de caldo
nutritivo

7)Agregar 5 ml de caldo a cada tubo de


ensayo

8) Se utiliza un
mechero bunsen para
esterilizar a un radio de
15 cm

9) Con una pipeta o


jeringa se mide los
mililitros necesarios
para cada tubo

10) Se tapan con un tapn hecho de


papel y algodn, y se les coloca cinta
testigo

11) Los tubos de


ensayo pasan a la
autoclave para ser
esterilizados

12) Despus de que


hayan salido del
autoclave se deja
enfriar

Observaciones.
1) Tanto el caldo nutritivo como el agar tienen un tono de color amarillento.
2) Utilizamos una jeringa en lugar de una pipeta para aadir el caldo nutritivo a los tubos
de ensayo.
3) El agar es lquido a la temperatura de ebullicin y solidifica entre los 45-50C.
4) El caldo nutritivo no necesita calentarse.
5) Se coloc cinta testigo al material, este cambi de color al final del proceso de blanco
a negro.
6) El proceso de esterilizacin duro aproximadamente 1 hora
7) Al salir el material del autoclave, se dej enfriar alrededor de 20 minutos, para meterlo
al refrigerador.
8) La temperatura ideal a la que debe estar esta entre los 2-8C.

Clculos y resultados.
Caldo nutritivo

Agar nutritivo

Rehidratar 8 g del medio de cultivo en un


litro (1000 ml) de agua destilada
Se requiere preparar 20 ml de caldo nutritivo

Rehidratar 23 g del medio de cultivo en un


litro (1000 ml) de agua destilada
Se requiere preparar 100 ml de agar nutritivo

8 g 1000 ml
x g 20 ml

23 g 1000 ml
x g 100 ml

8 20
=0.16 g
1000

23 100
=2.3 g
1000

0.16 g de caldo nutritivo

2.3 g de agar nutritivo

Conclusin.
En esta prctica aprendimos a preparar caldo y agar nutritivos que son medios de cultivo,
adems que aprendimos a clasificar los medios de cultivo, segn: el estado fsico, la
naturaleza de sus constituyentes y los propsitos de uso.
De manera general se denomina medio de cultivo a cualquier material que presente una
adecuada combinacin de nutrientes para permitir el crecimiento o el incremento del nmero
de clulas de una poblacin microbiana.
En los Laboratorios de Microbiologa se utiliza una gran variedad de medios de cultivos para
mantener las cepas, aislar o identificar microorganismos con varias finalidades: determinar la
existencia de contaminacin de alimentos, medicamentos o cosmticos; diagnosticar alguna
enfermedad, elaboracin de vacunas bacterianas, etc.

Qu microorganismos crecen en el agar y en el caldo


nutritivos?
Bacillus spp.
Colonias medianas, convexas, blanquecinas como cera, forma fusiforme y circular, bordes
redondeados.

Colonias de Bacillus spp en agar nutritivo.

Colonias Grandes, planas, blanquecinas, forma irregular, bordes lobulados, dan la apariencia
de estar secas, tambin se observa una protuberancia en el centro de las colonias lo cual les
da una apariencia de huevo estrellado.

Colonias de Bacillus spp en agar nutritivo.

Proteus mirabilis.
El genero Proteus es bien conocido por su amplia motilidad, esta se puede evidenciar en
medios nutritivos como agar sangre, agar nutritivo, agar BHI, entre otros. Se forman una
especie de ola alrededor de las colonias bacterianas y esta se desplaza de forma radial, a
este fenmeno se le llama efecto de swarming el cual es caracterstico de Proteus sp.
Colonias medianas, convexas, blanquecinas o translucidas, forma circular, bordes
redondeados hay presencia de swarming.

Proteus mirabilis en agar BHI


con un efecto de swarming
tenue.

Proteus mirabilis en agar BHI


se puede observar claramente
el efecto de swarming.

Proteus vulgaris en agar sangre


se observa claramente el efecto
de swarming, lo que evidencia
la gran motilidad de la bacteria.

Enterococcus faecalis
E. faecalis es una bacteria inmvil, anaerobia facultativa y fermenta la glucosa sin producir
gas. No presenta una reaccin con la catalasa en presencia de perxido de hidrgeno,
puede producir una reaccin pseudocatalasa si se cultiva en agar sangre, sin embargo sta
es muy dbil. E. faecalispuede vivir en ambientes extremos que incluyen pH altamente
alcalino de 9,6 y elevadas concentraciones de sal.

Staphylococcus aureus
Los estafilococos crecen rpidamente en casi
todos los medios bacteriolgicos bajo
condiciones aerobias o microaeroflicas. Las
muestras clnicas principalmente se cultivan
en medios de agar enriquecidos con sangre
de carnero. Cuando se trata de una muestra
contaminada, debe ser inoculada primero en
agar Columbia adicionado con clistn y cido
nalidxico o alcohol fenil-etlico.

Clasificacin de los medios de cultivo


Clasificacin
Por su aspecto fsico
Por su uso

Agar nutritivo
Slido
Medios selectivos.

Caldo nutritivo
Lquido
Medios selectivos.

Referencias de informacin:
https://www.ecured.cu/Cultivo_de_microorganismos
Fecha de consulta: Domingo, 18 de Septiembre de 2016.
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/08_Tema_5_Cultivo
.pdf
Fecha de consulta: Domingo, 18 de Septiembre de 2016.
http://microbitosblog.com/2010/06/14/morfologia-colonial-bacteriana/
Fecha de consulta: Domingo, 18 de Septiembre de 2016.
http://perso.wanadoo.es/sergioram1/medios_de_cultivo.htm
Fecha de consulta: Domingo, 18 de Septiembre de 2016.
http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/065ssa13.html
Fecha de consulta: Domingo, 18 de Septiembre de 2016.
http://www.dibico.com/productos.php?t=med&m=d&IdCat=1
Fecha de consulta: Domingo, 18 de Septiembre de 2016.
http://www.dibico.com/fichast/1022.pdf
Fecha de consulta: Domingo, 18 de Septiembre de 2016.
http://www.dibico.com/fichast/1040.pdf
Fecha de consulta: Domingo, 18 de Septiembre de 2016.