Dalam beberapa tahun terakhir, obat-obatan telah terdeteksi dalam

Berbagai macam sampel lingkungan termasuk limbah

limbah, air permukaan, air tanah dan air minum
pada konsentrasi dari ng / l untuk ug / l. Mereka dianggap
sebagai polutan pseudo-persistent, yang terus masuk
lingkungan pada konsentrasi sangat rendah (Valverde,
Garca, Galera et al., 2006).
Di antara kelompok yang berbeda dari obat-obatan, antibiotik
menjadi perhatian khusus: jumlah besar diberikan
untuk manusia dan hewan untuk mengobati penyakit dan infeksi.
Mereka juga digunakan di tingkat sub-terapi untuk mempromosikan
pertumbuhan ternak. Setelah aplikasi, banyak dari mereka yang
diekskresikan tidak berubah atau benar-benar dimetabolisme untuk
senyawa aktif, namun jumlah yang signifikan diekskresikan
metabolit aktif. Efek yang paling menonjol dari
antibiotik di lingkungan adalah pengembangan
strain multi-resisten bakteri (Hirsh, Hernes, Haberer
et al. 1999, Valverde, Gil Garca, Galera, et al. 2006).
Fluoroquinolones dan tetrasiklin yang biasa digunakan dalam
manusia dan kedokteran hewan dan ada bahaya dari
kehadiran mereka dalam lingkungan air (Lindberg,
Jarnheimer, Olsen et al., 2005, Turiel, Bordin dan
Rodrguez, 2005, Brown, Kulis, Thomson et al., 2006).
Tergantung pada sifat kimia dari individu
kelompok antibiotik ekskresi berubah aktif
Senyawa adalah 10-90% (Boxal, Fogg, Kay et al., 2003).
Tetracycline (TC), oxytetracycline (OTC) dan
chlortetracycline (CTC) adalah antibiotik tetrasiklin yang
kelompok sering diberikan kepada hewan ditakdirkan untuk manusia
konsumsi, tidak hanya untuk mencegah dan mengobati tertentu
penyakit tetapi juga untuk mempercepat pertumbuhan (Stockwell dan
Duffy, 2012, Serrano, 2005). Setelah pengobatan, lebih dari
70% dari antibiotik tetrasiklin diekskresikan dan dirilis
di lingkungan dalam bentuk aktif melalui urine dan feses
(Kuldip, Satish, Gupta et al. 2005). fluorokuinolon
residu bisa masuk lingkungan terutama sebagai akibat dari
ekskresi dalam urin manusia dan hewan, seperti
serta perawatan budidaya (Boxal et al., 2003,
Turiel, Bordin dan Rodrguez 2005, Andreu, Blasco dan
Pico, 2007). metode analisis banyak saat ini tersedia untuk
mendeteksi tetrasiklin dan fluoroquinolones di berbagai
sampel termasuk spektroskopi UV-Vis (Galagher dan
Danielson, 1995), fluoresensi (Smirnova, Yu dan
Zhmerichkin, 2005), elektroforesis kapiler (Miranda,

Rodrguez dan Galan-Vidal, 2009), kinerja tinggi

kromatografi cair (Blackwell, Holten Ltzhft, Hai
Ping et al., 2004) dan liquid chromatography-tandem
spektrometri massa (Schneider dan Donoghue, 2002).
Ada banyak data yang literatur yang menggambarkan
persyaratan untuk identifikasi dan kuantifikasi
tetrasiklin dan fluoroquinolones dalam berbagai sampel
menggunakan kromatografi lapis tipis (Belal, Al-Majed dan
Al-Obaid, 1999, Thangadurai, Shukla dan Anjaneyulu,
2002).
Pemisahan, identifikasi dan kuantifikasi
tetrasiklin dan fluoroquinolones yang mungkin pada silika
gel, selulosa dan fase diam poliamida. Sebagian besar
metode diterbitkan memerlukan peresapan dari TLC
piring dengan larutan EDTA sebelum menerapkan sampel pada
piring untuk menghindari pembentukan kompleks
dan karenanya meningkatkan pemisahan (Feng dan Dung 2004,
Naidong, Cachet, Roets et al., 1990, Dong, Xie, Shuang
et al., 1999). Tujuan dari penelitian ini adalah awal
pengujian keberadaan residu tetrasiklin,
oxytetracycline, klortetrasiklin, enrofloxacine dan
siprofloksasin dalam sampel air yang dikumpulkan dari dua
didefinisikan daerah.

CARA KERJA
Asetonitril adalah kelas HPLC (Panreac, Italia) dan
pelarut yang digunakan lain dari P.A. grade (Merk, Jerman).
Tetracycline (TC), oxytetracycline (OTC),
chlortetracycline (CT), enrofloxacin (Enro),
ciprofloxacin (Sipro) yang min. 98% murni (Gambar 1).
solusi saham dari semua antibiotik disusun oleh
melarutkan jumlah akurat dari standar bubuk
dalam 1 ml air murni ultra dan kemudian diencerkan dengan
asetonitril. Konsentrasi massa larutan standar
adalah 500 ug / ml. larutan stok yang disimpan dilindungi
dari cahaya pada 4 C. Bekerja solusi standar dibuat
dengan mengencerkan solusi standar saham dengan asetonitril
sehingga konsentrasi mereka adalah 5 ug / ml. campuran yang
dibuat dengan mencampurkan 1 ml dari masing-masing larutan standar kerja.
EDTA adalah analisis reagen kelas. Air ultra
murni.
Kromatografi piring 10x20cm, Kiselgel 60 F254

(Merck, Darmstadt, Jerman), 20x20 Silica gel H, 25

um, pengikat gratis, Anatech, HPTLC 20x10 silika gel 60
F254, (Merck, Darmstadt, Jerman), yang digunakan untuk
Metode optimasi. Untuk fase padat ekstraksi 6cc / 500
mg Oasis keseimbangan hidrofilik-lipofilik (HLB)
kartrid (Waters, Milford, Massachusetts) yang digunakan.
Persiapan sampel
Sampel air yang digunakan sebagai kosong diambil
hulu dari tempat untuk pengambilan sampel. Kedua, air kosong
dan air untuk analisis dikumpulkan di kaca amber
botol.
Sebelum ekstraksi, air yang digunakan dalam penelitian ini disaring
melalui filter Whatman hitam untuk menghilangkan ditangguhkan
masalah. Sampel disimpan pada suhu 4 C sampai SPE
ekstraksi. Sebelum ekstraksi, konsentrasi total
kalsium dan magnesium ditentukan, diikuti oleh
Selain dari jumlah yang sesuai dari 0,01 M EDTA untuk
mencegah pengikatan antibiotik untuk kalsium dan
magnesium. Sampel air berduri disusun oleh
Selain dari 1 ml larutan standar saham masing-masing
antibiotik untuk 100 mL air. Sebelum ekstraksi
sampel air dan sampel air berduri disaring
melalui P / N 0,2 um 47 mm GHP filter membran. Itu
HLB SPE sebelumnya cartridge digunakan untuk tetrasiklin dan
Penentuan fluorokuinolon dilaporkan dalam literatur,
digunakan (Ternes, Bonerz dan Schmidt, 2001).
Ekstraksi Fasa Padat
Antibiotik diekstraksi dan pra-berkonsentrasi pada
6cc / 500 mg kartrid (Waters) HLB pada peralatan
untuk ekstraksi fase padat. Sebelum aplikasi air,
cartridge dikondisikan dengan 5 ml setiap metanol,
dan pH air 3.0. PH sampel air dan air untuk pengkondisian
dan langkah-langkah cuci disesuaikan dengan 3.0 dengan klorida
AC id. Sampel diterapkan pada cartridge dan
aliran disimpan di 3 mL min-1.
Setelah kartrid ekstraksi dicuci dengan 2 ml
air ultra murni untuk menghilangkan residu dari EDTA dan
dikeringkan di bawah vakum selama 5 menit untuk menghilangkan air
kelebihan. Elusi antibiotik dilakukan dengan 3
ml asetonitril. Filtrat diuapkan di bawah
aliran nitrogen untuk volume 1 ml. 10 ml dari
filtrat diaplikasikan pada pelat kromatografi.

Kromatografi lapis tipis

Analisis dilakukan sesuai prosedur
dijelaskan oleh Dong et al (1999) dengan modifikasi
fase gerak. Sebelum analisis, tiga yang berbeda
kromatografi piring 10x20cm, Kiselgel 60 F254,
20x20 Silica gel H, 25 m, bebas pengikat, HPTLC 20x10
silika gel 60 F254 yang diresapi 24 jam dengan 10%
EDTA solusi pH 9,0 dan kemudian dikeringkan pada ruang
Suhu selama 2 jam, dan dalam oven selama 30 menit pada
105 C. Di piring disiapkan seperti yang dijelaskan sebelumnya,
aliquot dari 10 ml setiap solusi bekerja, campuran,
kosong dan air sampel diaplikasikan dengan mikropipet
dalam bentuk spot.
Lempeng dikembangkan dalam Camag kaca tertutup
ruang dua palung yang mengandung fase gerak
air / metanol / diklorometana (6/35/59) (v / v) dengan
saturasi sebelumnya. Sistem ini dipertahankan sampai
fase gerak naik ke titik 7 cm di atas awal
bintik-bintik. Setelah pembangunan, lempeng udara kering dan
kromatogram divisualisasikan di bawah sinar UV pada
254 nm dan 366 nm.
Permukaan Analisis Sampel Air
metode yang dijelaskan diaplikasikan tekad
tetrasiklin, oksitetrasiklin, klortetrasiklin,
enrofloxacin dan ciprofloxacin dalam sampel air permukaan
dikumpulkan hilir dari dua peternakan ikan. Volume
pra-disaring dan diasamkan (pH 3) sampel air permukaan
adalah 250 ml. Sebelum ekstraksi, jumlah yang tepat
0,01 M EDTA ditambahkan ke sampel air. Itu
sampel yang diterapkan untuk kartrid Oasis HLB.
Antibiotik dielusi dengan 3 mL asetonitril dan
filtrat diuapkan sampai 1 mL. Aliquot dari 10 uL yang
diterapkan pada pelat TLC.
HASIL
Tetrasiklin dan fluoroquinolones memiliki yang sangat kuat
kecenderungan untuk membentuk kompleks dengan jejak logam dalam
adsorben digunakan, yang menyebabkan pemisahan yang lebih rendah
kinerja karena bintik-bintik tailing. Sebelum digunakan,
piring yang tercantum pada bagian Bahan dan Metode, yang
diresapi dengan 10% larutan EDTA pH 9,0.

Analisis dilakukan dengan beberapa tahapan mobile yang

dijelaskan dalam literatur bagi individu
identifikasi tetrasiklin atau fluorokuinolon (Dong et
Al. 1999, Wang, Chen, dan Fan 2001, Feng dan Dung,
2004, Oka, Ito dan Matsumoto tahun 2000, British
Farmakope, 2012).
Pemisahan simultan terbaik dari semua antibiotik adalah
dicapai pada HPTLC piring 20x10 silika gel 60 F254 dengan
seluler fasa air / metanol / diklorometana (6/35/59
v / v / v) dan kondisi ini dipilih untuk analisis
sampel air permukaan. (Gambar 2).
piring kromatografi dievaluasi pada = 254 nm dan
= 366 nm. Identifikasi dilakukan dengan perbandingan Rf
nilai standar antibiotik dan campuran standar
zat (Tabel 1).
SIMPULAN
ekstraksi fase padat diikuti oleh HPTLC-UV
Penentuan telah diusulkan untuk simultan
Identifikasi (skrining) dari tetrasiklin yang,
oxytetracycline, klortetrasiklin, enrofloxacin dan
ciprofloxacin. Identifikasi didasarkan pada nilai-nilai Rf dan
deteksi UV. Batas deteksi metode yang diusulkan
50 ng per spot. Metode yang diusulkan dapat diterapkan untuk
skrining antibiotik diselidiki dalam sampel air
dimana konsentrasi antibiotik sama atau lebih tinggi dari 5
ug / ml.

Dalam farmakologi hewan adalah diskusi singkat tentang

masalah umum ternak dan antibiotik manusia.
Salah menerapkan antibiotik deposito terlihat
residu dalam daging, telur, susu, keju, mentega dan lainnya
produk ternak. Manusia sebagai organisme sasaran non
Obat ini menerima jumlah yang berbeda dari mereka sebagai residu
yang dapat menyebabkan perubahan swasta di usus nya
mikroflora dan penghapusan beberapa bakteri yang berguna
strain.

Bahaya lain dari residu antibiotik menerima adalah

resistensi mikroba dari tubuh mikroflora untuk umum
antibiotik yang dapat menyebabkan masalah serius pada
infeksi mikroba. Ada beberapa masalah untuk tanah
mikroflora yang menerima residu antibiotik pada burung
pupuk kandang (Lee et al., 2000). Non terdeteksi efek ini
masalah dalam masyarakat manusia adalah spektrum yang luas
resistensi terhadap antibiotik sebagai efek kronis.
Hasil dari proses ini adalah kebutuhan untuk baru
antibiotik untuk mengendalikan penyakit menular dari manusia
yang menghasilkan biaya yang besar bagi pemerintah (Kotretsu,
2004). Dalam penelitian ini metode yang sederhana dan cepat adalah
disurvei untuk mendeteksi residu antibiotik pada ayam
jaringan daging. kromatografi lapis tipis adalah sensitif
dan metode yang tepat untuk memantau jumlah rendah
berbeda biologis dan kimia. penerangan
antibiotik terhadap sinar UV membantu sebagai detektor sederhana
untuk ini berarti.
CARA KERJA
Sampling: Sekitar 50 mayat ayam dipilih dari
berbeda rumah potong unggas dan pasar di Sari,
Babol, Amol dan Babolsar (Mazandaran, Iran). mendahului
burung migran yang digunakan sebagai sampel cek.
Antibiotik ekstraksi: 10 gr jaringan yang berbeda dari mayat ayam dalam 10 ml EtOH 96o jatuh dan
diperas baik dalam mortar Cina. pelarut
dipindahkan ke 15 ml tabung falcon centrifuge dan
disentrifugasi pada 7000 rpm selama 10 menit. jelas
supernatan dipindahkan ke tabung kaca segar dan
menguap dalam kontak dengan aliran N2. Setelah pengeringan penuh
deposito diselesaikan dalam 0,2 ml Met-OH. Sampel yang
siap untuk menunjukkan di piring silika (Tajick et al., 2002)
Persiapan pelat silika: piring kaca dicuci di
aseton mandi memiliki 10 20 cm dimensi. Untuk setiap
piring 2 gr dari F256 Silica gel (Merck, Jerman) dicampur dalam
5 ml DW dan dikocok secara menyeluruh untuk menghasilkan pasta halus.
piring kaca bersih dilapisi dengan pasta silika oleh TLC gel
Sistem penyebar (Shandon, Inggris) di 0,25 mm
ketebalan. Piring diaktifkan dalam 120oC selama dua jam
(Boyer, 1993).
Standar persiapan: Untuk perbandingan diekstraksi
residu antibiotik baku antibiotik unggas rutin

disiapkan dengan melarutkan 0,1 gr setiap bubuk di

4 ml metanol (Thangadu et al., 2002).
Menunjuk, berjalan dan deteksi: Sekitar 50 ml
deposito terlarut metanal menunjuk pada silika
piring diperlakukan pelat dipindahkan ke tangki TLC mengandung
aseton-metanol (1: 1) sebagai fase gerak. Setelah menerima
dari pelarut untuk mengakhiri piring, kromatogram
diamati pada sinar UV pada 256 nm (Thangadu et al., 2002).

hasil
Investigasi mayat yang berbeda menunjukkan sebagian besar
sampel memiliki jumlah variabel antibiotik yang
yang diterapkan selama periode pertumbuhan. konsentrasi
cair diekstraksi adalah tahap penting dalam pemantauan
residu. Menunjuk dari disentrifugasi pelarut di piring silika dan terkonsentrasi
pelarut pada berbagai tahap penguapan (3/4, dan 1/4 dari volume awal)
membuat deteksi antibiotik mudah dan lebih mudah. Pada tahap akhir deteksi
terlalu mudah dan segera. Perbandingan sampel cek dengan pasar dan rumah
potong hewan yang dipilih sampel menunjukkan tidak ada tambalan di piring untuk
check tapi setidaknya satu untuk
perawatan. Kesamaan antara Rf patch terdeteksi dari yang diduga sampel dengan
standar mendorong kami untuk yakin ada dekat hubungan dan korelasi antara
mereka. Dalam beberapa jaringan seperti konsentrasi residu hati terlalu tinggi
(sekitar 10 lipatan) dari bagian lain dari mayat.