TUGAS SKRINING FITOKIMIA

Analisis Fitokimia dari Ekstrak Metanol Daun Paullinia

pinnata linn

Oleh:
TIARA ISMIHAYATI KHOIRUNISA
142210101099

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS JEMBER
2016

Tujuan utama dari penelitian ini berusaha untuk menyelidiki keberadaan

senyawa sebagai agen yang mungkin bertanggung jawab atas aktivitas obat dari
daun tanaman P. pinnata dengan melakukan skrining fitokimia dari daun kering
dari tanaman, mengekstraksi dan memfraksinasi daun dan untuk melaksanakan
kromatografi lapis tipis dari fraksi yang berbeda.
PENGUMPULAN DAN PREPARASI BAHAN TANAMAN
Dalam penelitian ini, bagian tanaman dimanfaatkan adalah daun. Daun
dikeringkan pada suhu kamar selama 13 hari dan ketika benar-benar kering,
daun dibuat serbuk menggunakan mortir dan stemper bersih, dan bubuk
tersebut disaring dengan ayakan. Serbuk halus kemudian dikemas dalam wadah
kedap udara untuk menghindari efek kelembaban dan kemudian disimpan pada
suhu kamar.
EKSTRAKSI DAUN TANAMAN
Maserasi
Daun bubuk (100 g) ditimbang dan direndam dalam 350 ml metanol dalam labu
berbentuk kerucut. Labu berisi daun itu dikocok, disumbat dan dibiarkan selama
48 jam pada suhu kamar. Setelah 48 jam, campuran disaring, ekstrak
dikumpulkan dan dipekatkan dengan penguapan sampai kering di pelat
penguap.
Fraksinasi ekstrak metanol
ekstrak metanol (2 g) ditempatkan di bagian atas silika gel (28 g) basah dikemas
dalam kolom kromatografi dan dielusi dengan gradien heksana dan etil asetat
dengan rasio 8 : 2. Sebanyak 20 ml
hasil eluasi dikumpulkan dalam botol kecil dan diberi label 1, 2, 3 sampai 19
secara berurutan. Fraksi yang terkumpul ditotolkan pada lempeng KLT dan
dikembangkan. Lempeng dibiarkan hingga kering dan disemprot dengan asam
sulfat 20% kemudian dipanaskan dalam oven pada suhu 105 C selama 15
menit.
Analisis fitokimia dari Paullinia pinnata
Identifikasi sterol dan triterpen
Tiga gram daun bubuk ditempatkan dalam tabung reaksi dan ditambahkan 10 ml
alkohol 50%, tabung itu kemudian ditempatkan pada water bath dan dipanaskan
selama 3 menit. Hal itu kemudian dibiarkan dingin pad suhu kamar dan disaring.
Filtrat kemudian diuapkan pada pelat penguap sampai kering kemudian
ditambahkan 5 ml petroleum eter pada pelat dan diaduk selama 5 menit. Porsi
petroleum eter kemudian dituangkan dan dibuang. 10 ml kloroform kemudian
ditambahkan dan diaduk selama sekitar 5 menit, yang kemudian dipindah ke
tabung reaksi dan 0,5 mg natrium sulfat anhidrat ditambahkan lalu dikocok

lembut dan disaring, filtratnya kemudian dibagi ke dalam dua tabung reaksi dan
digunakan untuk tes berikutnya.

Reaksi Lieberman-Burchard:
Pada tabung uji I, ditambahkan volume yang sama anhidrida asetat dan
dicampur dengan lembut. Kemudian 1 ml H2S04 ditambahkan ke sisi tabung.
Adanya cincin merah kecoklatan di zona kontak dari dua cairan dan warna
kehijauan di lapisan pemisahan menunjukkan adanya sterol dan triterpen.
Tes Salwoski:
Pada tabung uji II, ditambahkan 2 sampai 3 tetes asam sulfat pekat untuk
membentuk lapisan yang lebih rendah. Warna cokelat kemerahan pada fase
antara menunjukkan adanya cincin steroid.

Identifikasi alkaloid
Daun bubuk (2 g) direbus dalam water bath dengan 20 ml asam sulfat 5%
dalam etanol 50%. Campuran didinginkan dan disaring. Sebagian campuran
dipisahkan. Bagian lain dari filtrat dimasukkan ke dalam corong pisah 100 ml dan
larutan dibuat basa dengan menambahkan dua tetes larutan amonia pekat.
Volume kloroform yang sama ditambahkan dan dikocok lembut untuk membuat
lapisan terpisah. Lapisan kloroform yang lebih rendah mengalir ke corong pisah
kedua. Lapisan amonia disediakan. Lapisan kloroform diekstraksi dengan dua
kuantitas masing-masing 5 ml
dari asam sulfat encer. Berbagai ekstrak kemudian digunakan untuk test berikut:
Tes Mayer:
Pada tabung uji I, 1 ml pereaksi mayer ditambahkan setetes demi setetes.
Pembentukan endapan berwarna kehijauan atau cream menunjukkan adanya
alkaloid.
Tes Dragendoff ini:
Pada tabung uji II, 1 ml reagen dragendoff ditambahkan setetes demi
setetes. Pembentukan endapan coklat kemerahan menunjukkan adanya
alkaloid.
Tes Wagner:
Pada tabung uji III, 1 ml pereaksi wagner ditambahkan setetes demi setetes.
Pembentukan endapan coklat kemerahan menunjukkan adanya alkaloid.
Identifikasi tanin
Dua gram daun diekstraksi dengan 10 ml alkohol 50%, itu kemudian disaring dan
filtrat dibagi menjadi tiga bagian untuk tes berikut.
uji klorida:
Tiga tetes larutan diencerkan dari FeCl3 dan ditambahkan ke dalam tabung
reaksi I, produksi warna biru atau hitam kehijauan yang berubah menjadi
hijau zaitun karena klorida lebih ditambahkan menunjukkan adanya tanin .
Tes air brom:
Tiga tetes air brom ditambahkan ke bagian kedua dari filtrat. Endapan
berwarna mengkilat menunjukkan tanin terkondensasi sedangkan tanin
terhidrolisa tidak terjadi endapan.
Uji penuntun sub-asetat:
Tiga tetes larutan timbal sub asetat ditambahkan ke bagian ketiga.
Terjadinya endapan berwarna menunjukkan adanya tanin.

Identifikasi antrakuinon
Uji Borntrager (untuk derivat antrasena bebas):
Daun bubuk (0,5 g) diambil dalam tabung reaksi dan 5 ml kloroform
ditambahkan lalu dikocok selama 5 menit. Campuran itu disaring dan filtrat
dikocok dengan volume yang sama dari larutan amonia10%. Warna merah
muda, merah atau ungu pada lapisan air setelah dikocok menunjukkan
adanya antrakuinon bebas.
Uji modifikasi Borntrager (untuk derivat antrasena gabungan):
Satu gram daun bubuk direbus dengan 5ml asam klorida 10% selama 3
menit. Larutan panas disaring dalam tabung reaksi, didinginkan dan
diekstraksi dengan lembut dengan 5 ml benzena.
Lapisan atas benzena dipipet dan dikocok lembut dalam tabung bersama
setengah dari volume larutan amonium hidroksida 10%. Warna mawar merah
muda menjadi merah cherry pada lapisan amonia menunjukkan adanya
antrakuinon.
Identifikasi saponin
Tes Buih:
Bubuk daun (0,5 g) ditempatkan pada tabung reaksi dan 10 ml air suling
ditambahkan lalu dikocok dengan kuat selama 30 detik. Campuran itu
kemudian didiamkan selama 30 menit dan diamati. Pembentukan sisir madu
buih menunjukkan adanya saponin.
Uji hemolisis:
Satu gram daun diekstraksi dengan air suling dan 2 ml larutan NaCl encer
ditempatkan dalam
tabung reaksi dan 2 ml filtrat ditambahkan ke dalam tabung reaksi.
Kemudian 3 tetes darah seekor binatang ditambahkan ke dalam tabung
dengan jarum suntik dan dicampur dengan lembut dengan membalik tabung
(tanpa bergetar) dan didiamkan selama 15 menit. Pengendapan bawah dari
sel-sel darah merah menunjukkan adanya saponin.
Identifikasi flavonoid
Dua gram sampel daun bubuk benar-benar detanned dengan aseton. Residu
diekstraksi dengan air hangat setelah menguapkan aseton pada water bath.
Campuran itu kemudian disaring selagi panas, filtrat dibiarkan dingin dan
digunakan untuk tes berikutnya:
Tes Shinoda:
Beberapa keping magnesium ditambahkan ke 3 ml larutan dan 2 tetes asam
klorida encer ditambahkan lalu dihangatkan. Sebuah warna pink atau merah
menunjukkan adanya flavonoid.
Tes natrium hidroksida:
Pada tabung uji II, 2 ml larutan NaOH 10% ditambahkan, laritan kuning
menunjukkan adanya
flavonoid yang mana jika ditambah larutan asam klorida menjadi tak
berwarna.
Uji FeCl3:
Pada tabung uji III, 3 tetes larutan FeCl 3 ditambahkan, produksi warna
kehijauan-hitam menunjukkan adanya inti fenolik.

Kromatografi Lapis Tipis

Parameter yang Digunakan
Penyerap (silica gel) Merck, Jerman ukuran mesh 120, pelarut elusi n-heksana:
etil asetat (8: 2); teknik: ascending; bantu visualisasi: cahaya, asam metanolsulfat dan dipanaskan pada suhu 105 C selama 15 menit.
Pengembang kromatografi lapis tipis untuk ekstrak
Ekstrak diaplikasikan pada pelat sekitar 1,5 cm di atas sisinya dan 0,5 cm dari
batas. Ketika kering, pelat diamati dan disemprot dengan asam metanol-sulfat
kemudian dipanaskan dalam oven pada suhu 105 C selama 15 menit. Pelarut
yang digunakan untuk fase gerak adalah n-heksana dan etil asetat (8: 2).
Kromatografi Kolom Ekstrak
Ekstrak metanol dari daun bubuk ditambahkan ke dalam kolom pra-packed
dengan silika gel. Ini kemudian dijalankan menggunakan n-hexane / etil asetat
(8: 2) dan fraksi yang terpisah dikumpulkan secara terpisah dalam botol.
KLT fraksi
Dengan menggunakan tabung kapiler, berbagai fraksi dikumpulkan dari kolom
kromatografi yang ditotolkan pada lempeng silika gel pra-coated 1.5 cm dari
dasar dan 0,5 cm dari tepi. Setiap lempeng
dibiarkan kering sebelum memasukkannya ke dalam tangki kromatografi yang
berisi sistem pelarut tertentu. Lempeng yang telah dikembangkan disemprot
menggunakan asam metanol sulfat.
HASIL
Berikut ini adalah hasil analisis dari konstituen fitokimia dalam daun P. pinnata.
Identifikasi sterol dan triterpen

Uji Lieberman-Burchard: terbentuk sebuah cincin violet pada zona kontak

dari dua cairan; lapisan atas menjadi hijau yang menandakan adanya sterol.
Uji Salwoski: teramati sebuah warna coklat kemerahan pada interfase yang
ditandai dengan adanya cincin steroid.
Identifikasi tanin
Uji klorida: terbentuk sebuah endapan kehijauan yang menunjukkan adanya
tanin kental.
Uji penuntun sub-asetat: teramati sebuah endapan berwarna yang
menunjukkan adanya tanin.
Uji air brom: teramati endapan mengkilap yang menunjukkan adanya tanin.
Identifikasi alkaloid
Uji Mayer: terbentuk sebuah endapan warna krem mengkilap yang
menunjukkan adanya alkaloid.
Uji Dragendoff: terbentuk sebuah endapan coklat kemerahan yang
menunjukkan adanya alkaloid.
Uji Wagner: terbentuk sebuah endapan coklat kemerahan yang menunjukkan
adanya alkaloid.

Identifikasi flavonoid
Uji klorida: teramati warna hitam kehijauan yang menunjukkan adanya
flavonoid.
Uji NaOH : terbentuk sebuah larutan berwarna kuning yang menunjukkan
adanya flavonoid.
Uji Shinoda: teramati sebuah larutanberwarna merah muda yang
menunjukkan adanya flavonoid.
Identifikasi saponin
Uji buih: terbentuk sebuah buih sisir madu yang berlangsung selama sekitar
10 menit menunjukkan adanya saponin.
Uji hemolisis: sel darah merah menetap dalam tabung tes yang menunjukkan
adanya saponin.
Identifikasi antrakuinon
Uji Borntrager: terbentuk sebuah larutan warna merah muda menunjukkan
adanya derivat antrasena bebas.
Uji modifikasi Borntrager (untuk derivat antrasena gabungan): terbentuk sebuah
warna merah muda pada lapisan amonia yang menunjukkan adanya
antrakuinon.
Kromatografi Lapis
Teknik yang digunakan: Ascending; pelarut elusi: n-hexane: etil asetat (8: 2);
bantuan visualisasi: cahaya, asam metanol-sulfat dan dipanaskan pada suhu 105
C selama 15 menit.
a) Sebelum semprot: Jumlah spot = 3;
Warna: Spot 1 kuning muda, Spot 2 Kuning, Spot 3 hijau.
b) Setelah semprot: Jumlah spot = 6;
Warna: Spot 1 kuning terang, Spot 2 Kuning, Spot 3 merah muda, Spot 4
Hijau, Spot 5 Violet, Spot 6 ungu.
Faktor retensi (Rf) = Jarak pindah Komponen / Jarak pindah oleh pelarut.
Nilai Spot 1 Rf = 1,4 / 7,2 = 0,19
Nilai Spot 2 Rf = 4,6 / 7,2 = 0,64
Nilai spot 3 Rf = 5,7 / 7,2 = 0,79
Nilai Spot 4 Rf = 6,1 / 7,2 = 0,85
Nilai Spot 5 Rf = 6,4 / 7,2 = 0,89
Nilai Spot 6 Rf = 6,9 / 7,2 = 0,96
DISKUSI
Analisis fitokimia dari daun P. pinnata telah berhasil dilakukan, heksana / etil
asetat pada rasio
(8: 2) mampu menjadi sistem pelarut yang baik untuk pemisahan konstituen
aktif dari tanaman dan
dengan menggunakan KLT, pemisahan konstituen ini pada kromatogram dapat
dilakukan. Daun bubuk teruji positif untuk steroid, triterpen, alkaloid, saponin,
tanin, antrakuinon dan flavonoid. Hasil ini sesuai dengan tinjauan literatur pada
tanaman yang menunjukkan adanya kandungan kimia. Kromatogram KLT dari
elusi yang dikumpulkan menunjukkan spot dan warna yang berbeda dari rentang
cukup berwarna hingga warna khas yang terlihat setelah penyemprotan dengan
asam sulfat 20% yang menunjukkan adanya konstituen kimia tersebut.