Cromatografa

1. Introduccin
CONCEPTO DE CROMATOGRAFA.
La cromatografa se define como la separacin de una mezcla de dos o ms
compuestos por distribucin entre dos fases, una de las cuales es estacionaria y la
otra una fase mvil. Varios tipos de cromatografa son posibles, dependiendo de la
naturaleza de las dos fases involucradas: slido-liquido (capa fina, papel o columna),
liquido-lquido y gases-liquido ( fase vapor ). Todas las tcnicas cromatografas
dependen de la distribucin de los componentes de la mezcla entre dos fases
inmiscibles: una fase mvil, llamada tambin activa, que transporta las sustancias que
se separan y que progresa en relacin con la otra, denominada fase estacionaria. La
fase mvil puede ser un lquido o un gas y la estacionaria puede ser un slido o un
lquido. Todos los slidos finamente pulverizados tienen el poder de adsorber en mayor
o menor grado otras sustancias sobre su superficie; y, similarmente, todas las
sustancias pueden ser adsorbidas, unas con ms facilidad que otras. Este fenmeno
de adsorcin selectiva es el principio fundamental de la cromatografa.
CONCEPTO DE R.F.
Rf es el registro y se define como: Rf = distancia que recorre la muestra desde el
punto de aplicacin / distancia que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente El
valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra (tipo de
adsorbente, eluyente, as como las condiciones de la placa, temperatura, vapor de
saturacin, etc.). Tiene una reproducibilidad de 20%, por lo que es mejor correr
duplicados de la misma placa.
CROMATOGRAFA EN CAPA FINA.
En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria manteniendo un
pequeo espesor constante a lo largo de la placa. El eluyente ascender, por
capilaridad, por la placa y arrastrar los componentes a lo largo de sta produciendo
manchas de los componentes. Se usan lminas de: vidrio como soporte del
adsorbente, plstico (ej: acetato) metlicos (ej: aluminio). Los tamaos de la placa
para CCf convencional son: 20 x 20; 10 x 20 y 5 x 2. Hay placas que contienen un
indicador de fluorescencia, para facilitar la identificacin de las muestras. Si no se usa
indicador y los componentes no son coloridos se requerirn tcnicas de revelado.
Eluyentes ms comunes para cromatografa en capa fina. ter de petrleo -tolueno
-dietil-ter, t-butil-ter -diclorometano -acetato de etilo -n-pentano, n-hexano
-ciclohexano -tetracloruro de carbono -ter dietlico -cloroformo -acetona -iso-propanol
-etanol -metanol -cido actico

REVELADORES MS COMUNES PARA CROMATOGRAFA EN CAPA FINA

Las manchas de color son, por supuesto, inmediatamente visibles; las incoloras
pueden revelarse mediante: Luz UV: si la sustancia absorbe luz ultravioleta, se puede
usar una fase estacionaria impregnada con un indicador fluorescente (F254 F366), el
nmero que aparece como subndice nos indica la longitud de onda de excitacin del
indicador utilizado. La introduccin de la placa en vapores de yodo. El roco con una
solucin de agua/H2SO4 1:1 (dentro de un compartimiento especialmente protegido y
bajo una campana de extraccin de gases). Despus calentar
ADSORBENTES MS COMUNES PARA CROMATOGRAFA EN CAPA FINA.
a)
b)
c)
d)

Silica gel (se utiliza en el 80% de las separaciones)

xido de Aluminio Almina (cida, neutra bsica)
Celulosa (Nativa o micro-cristalina)
Poliamidas Para la seleccin del adsorbentes deber tomar las siguientes
consideraciones:
Polaridad
Tamao de partcula a. Dimetro b. rea Superficial
Homogeneidad

FACTORES QUE INFLUYEN EN UNA SEPARACIN POR CROMATOGRAFA DE

CAPA FINA.
a) Temperatura: a menor temperatura las sustancias se adsorben ms en la fase
estacionaria.
b) La cromatografa debe llevarse a cabo en un rea sin corrientes de aire.
c) Limpieza de las placas. Muchas placas estn contaminadas con grasa o agentes
plastificantes o adhesivos. Para el trabajo a pequea escala, stas deben limpiarse
corriendo primero una mezcla de cloroformo y metanol y despus dejar secar
completamente antes de aplicar la muestra.
d) Pureza de los disolventes.

2. Metodologa
Materiales
Refrigerante
Mechero
Baln
Soporte universal

Reactivos
Etanol puro
Ac. Actico glacial (CH3COOH)
Ac sulfrico (H2SO4)
Carbonato de sodio (Na2CO3)
Cloruro de calcio (CaCl2)

3. Procedimiento
PREPARACIN DE ACETATO DE ETILO (FASE MVIL PARA
CROMATOGRAFA)
H+

CH3CH2OH + CH3COOH CH3COOCH2CH3 + H2O

H2O
H2SO4

SE AGREGARA:
Ch3-COOH

120ML

ETANOL 96

140ML

AC.SULFURICO CC.

12ML

Aadir primero el
etanol 96 en un baln,
agregar ac. Actico y tambin
ac. Sulfrico CC.

Se reflujara por una hora se enfriara hasta

que se pueda coger

Modificar el sistema en el cual se

necesitara un temperatura de 75-78C
donde el ac. De etilo viajara hacia el
matraz.

 Se colocara la destilacin en una pera de

decantacin
se agregara carbonato de sodio al 10 % 30

mL 2 veces se agitara asta

expulsar el gas medir el pH
que debe estar neutro o
base

Descartar el agua y quedarse con la

fase orgnica.

Agregar una solucin formada por 20g

CaCl2 en 25 mL de agua.
Agregar Mg2SO

DETERMINACIN DE ALCALOIDES PURINICOS POR TLC

PREPARACIN DE EXTRACTO
1g de droga molida se mezcla vigorosamente con 1 mL de sal de Na2CO3 al
10%.

la
mezcla se le aade
5mL de metanol y se reflujara.
Na CO
Se filtrara y se concentra de acuerdo a la cantidad
total de alcaloides en una droga vegetal de tal modo
que 100 mL de solucin contengan 50-100ug de
alcaloides totales.
2

CUADRO N 1. ALCALOIDES PURNICOS EN DROGAS VEGETALES

Semilla de cacao
Semilla de caf
Hojas de T

0,2%-0,5%
0,3%-2,5%
2,5%- 4,5%

0,35%
1,4%
3,5%

Cafena
Cafena
Cafena

Las muestras aplicadas en TLC deben tener entre 50 y 100ug de alcaloides totales.
Ejm: La droga pulverizada (1g) con un contenido de alcaloides de 0,3%, se extrae con
5 mL de metanol, por el mtodo descrito se tendra 3mg de droga en 5 mL de solucin
metanlica lo cual significa 60ug alcaloides totales por 100uL SOL.

1 g . 100 = 1 g 0,3 =0,003 g .=3 mg .

xg . 0,3
100

60 , ug Alc .
3 mg 3000 ug 60
=
=
=
100 uLSol . M 5 mL 5000uL 100

C ACAO:1 g 0,0035 g Al CA .=

T :1 g 0,035 gALC .=

3,5 mgAlc 3500 ugal. 70ugAl .

=
=
5 mLsol
5000uLsol . 100 ul .

35 mgAlc . 35000 ugAl . 70 ugAl .

=
=
15 mLsol . 15000ulsol . 30 uLsol .

CAFE :1 g 0,014 gAlc .=

14 mg. Alc . 14000 mg. Alc . 84 ug . Alc .

=
=
5 mL . sol .
5000 uL. sol.
30 uL . sol

PREPARACION DEL ESTANDAR

Moler tableta y mezclar con 1mL de metanol (por cada 10mg. de alcaloide), mezclar
por 5 min a 60C .despus de lo, el extracto se aplica directamente a la placa, 10ul.
Corresponden a 100ug. de alcaloides.

CROMATOGRAFA
Con
del
tiene

una regla medir 15mL

final de la placa que
las medidas de 10cm

6cm
Dividir en 4 partes y
Con
una aguja marcar
finamente los puntos donde se
colocara la muestra

Con una micro pipeta

colocar las muestras de (muestra estndar
,t,caf,cacao)

En un beaker colocar en el borde

papel filtro y colocar nuestra placa con las muestras
y colocar la fase mvil tapar con papel film astas
que suba asta maso menos un centmetro antes de
llegas al tope de la placa.

Llevar a la estufa 60C asta

secar

Una es secas colocar en una cartulina y

pinta las placas con los reactivos A y B
para la revelacin llevar a sequedad.
o El reactivo A contiene 1g yodo,1g
yoduro de potasio y alcohol 96 100ml
o
El reactivo B contiene HCl 25% y etanol 96 25mL


Al no observa
los recorridos se
agreg el reactivo
dragendorff

4. Discusin
En la prctica de cromatografa se us dos reveladores A y B con los cuales se debi
ver la cantidad de cafena de cada muestra pero al parecer no se tuvo un resultado
esperado por que el revelador B posiblemente este muy acido lo cual nos llev a usar
el reactivo dragendorff el cual nos dio el resultado esperado .

5. Conclusin
Al trmino de la prctica se llev a la conclusin de que l t tiene ms cantidad de
cafena que las dems muestras