29/09/2016

Tincin de Gram
Una tincin de Gram es un examen utilizado para identificar bacterias. Es una de
las formas ms comunes de diagnosticar rpidamente una infeccin bacteriana en
el cuerpo.
De gran importancia en Microbiologa porque permite diferenciar dos grandes
grupos de bacterias (Gram+ y Gram-), segn se comporten ante esta tincin. El
fundamento radica en la diferente estructura de la pared celular de ambos grupos:
las bacterias Gram+ tienen una gruesa capa de peptidoglicano en su pared,
mientras que las bacterias Gram- tienen una capa de peptidoglicano ms fina y
una capa lipopolisacardica externa. Tras la tincin con el primer colorante (Cristal
violeta) se efecta un lavado con etanol que arrastrar al colorante slo en las
Gram (-), mientras que en las Gram (+) el colorante queda retenido y las clulas
permanecern azules. Las clulas Gram (-) se teirn despus con un colorante
de contraste (safranina) para que puedan observarse.

Color
Primer colorante (cristal violeta): bsico, en contacto con las bacterias cargadas
negativamente reacciona colorendolas.
Solucin mordiente (Yodo de Gram): fija las tinciones y aumenta la afinidad entre
el colorante y las bacterias.
Agente decolorante (alcohol-acetona): disolvente orgnico que se utiliza como
lavado para eliminar colorante no fijado.
Colorante de contraste (safranina): colorante bsico de distinto color al primer
colorante.
Bacterias Gram (+) se tien de prpura por el cristal violeta y retienen la coloracin
por su gruesa capa de peptidoglicanos.
Bacterias Gram (-) perdern la coloracin inicial del cristal violeta por su delgada
capa de peptidoglicanos y se teirn de rojo debido a la safranina.

Navarro Reyna Erendira Sarahi

29/09/2016

Materiales:

Portaobjetos
Agua destilada
Pipeta pasteur, haza, mechero.
Cristal violeta
Lugol
Alcohol acetona
safranina

Metodologa:
Extensin
En un porta bien limpio (con alcohol, papel de filtro y flameado) se
coloca una gota de agua destilada a la que. con el asa de siembra,
previamente esterilizada a la llama, se lleva una pequea cantidad
de suspensin de bacterias o, en su caso, de una colonia.
Con el asa se extiende la gota y las bacterias sobre el porta y se
fija la extensin por el calor, calentando suavemente a la llama del

mechero hasta que se seque.

Navarro Reyna Erendira Sarahi

29/09/2016

Coloracion
1 minuto en cristal violeta de Hucker (colorante inicial)
se lava con agua destilada
1 minuto en lugol (mordiente)
se decolora con alcohol de 95 (decolorante)
se lava con agua destilada
30 segundos en safranina (colorante de contraste)
se lava con agua corriente
se seca suavemente y sin frotar con papel de filtro
Una vez que la preparacin est totalmente seca, poner una gota
muy pequea de aceite de cedro y observar al microscopio con el
objetivo de inmersin.
Observacin
Debe utilizarse el objetivo de inmersin.
Se coloca una gota de aceite de cedro sobre la preparacin. Se
enfoca, preferentemente, con el micromtrico.
Despus de utilizar el objetivo de inmersin debe limpiarse con xilol

Referencias
http://labmicrofarmaciaulat.blogspot.mx/p/tincion-de-gram_20.html
http://www.telmeds.org/atlas/bacteriologia/tecnicas-bacteriologicas/tincionessimples-y-especiales/tincion-de-gram/
https://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Gram

Navarro Reyna Erendira Sarahi

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http://www.slideshare.net/BenRivSil/proceso-tincin-de-gram-15572755

Navarro Reyna Erendira Sarahi